苦参碱抑制大鼠肺成纤维细胞增殖及其机制

目的观察苦参碱(Mat)对大鼠肺成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响.方法体外培养新生Wistar大鼠的肺成纤维细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期;免疫荧光测定FN的蛋白含量.结果不同浓度苦参碱处理36 h后,细胞MTT-OD值呈递减趋势,S期细胞百分率下降,G0/G1期百分率上升,FN的表达下降,且成剂量依赖性,与空白组相比,差异有显著性(P＜0.01).结论苦参碱可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,其作用与降低FN表达有关.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔皮肤成纤维细胞增殖的作用

目的：评价碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔皮肤或成纤维细胞增殖的影响。方法：在培养的兔皮肤成纤维细胞中添加浓度为10^-1-10^2μg/L的bFGF，应用甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞增殖情况。结果与结论：10^-1－10^2μg／L的bFGF对兔皮肤成纤维细胞增殖有促进作用，且以50μg／L浓度作用最佳。     

氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究激素对体外培养的成纤维细胞增殖及分泌功能的影响,初步探讨其治疗瘢痕的作用机制.方法:采用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法,观察氢化可的松对体外培养的皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响.结果:氢化可的松(0.1 g/L)能够抑制体外培养成纤维细胞增殖(MTT值0.523±0.051 vs 0.347±0.036,P<0.05)及分泌胶原的功能[3H-脯氨酸掺入量(248±6) Bq vs (181±6) Bq,P<0.05],并呈剂量依赖性(r=-0.8208).结论:氢化可的松可通过抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成,从而达到治疗瘢痕的作用.     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用。方法用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖。结果AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用。结论HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用。     

肝细胞生长因子抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖和胶原合成

目的 检测肝细胞生长因子(HGF)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞(CFbs)增殖和胶原合成的影响,探讨其在高血压心室重构中的作用.方法 用消化法培养CFbs,以HGF和(或)AngⅡ刺激CFbs,以蛋白免疫印迹方法分析CFbsⅠ型胶原蛋白合成,MTT法检测CFbs的增殖.结果 AngⅡ促进CFbs增殖和Ⅰ型胶原蛋白的合成,HGF可抑制这些作用.结论 HGF能抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFbs增殖和心肌胶原沉积,从而减少AngⅡ引起的高血压心室重构,实现保护心脏的作用.     

异丙酚抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制.方法 使用4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)中含有1％(w/v)胰蛋白酶、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1％胶原酶的酶混合物,将切碎的心室心肌连续消化,将分离的细胞混合物在培养箱中预铺板1 h,以分离成纤维细胞.将培养细胞分为对照组、诱导组、异丙酚处理组和抑制剂组.通过5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入测定法检测细胞增殖;通过使用WST-1测定法测量细胞活力;通过发光素增强化学发光法测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和活性氧(ROS)活性;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化和激活蛋白-1(AP-1)、内皮素-1(ET-1)mRNA相对表达水平;Western blot分析蛋白激酶B(Akt)、一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 第24、72小时,诱导组较对照组细胞增殖能力增强,异丙酚处理组较诱导组减弱(P<0.05).与对照组比较,诱导组细胞凋亡率降低,细胞活力升高;与诱导组比较,异丙酚处理组细胞凋亡率升高,细胞活力降低(P<0.05).诱导组NADPH、ROS活性较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).诱导组ERK、AP-1和ET-1 mRNA相对表达水平较对照组升高,异丙酚处理组较诱导组降低(P<0.05).异丙酚处理组Akt、eNOS表达水平较诱导组降低,抑制剂组较异丙酚处理组升高(P<0.05).结论 异丙酚可通过干扰ROS的生成来抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖.     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 ,从而发挥有效的抗心肌纤维化作用     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

中药马勃对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘 要］ 目的：中药马勃作用于体外培养大鼠皮肤的成纤维细胞,观察大鼠成纤维细胞增殖及胶原合成的能力,探讨马勃有效组分在细胞水平上促皮肤患处愈合的作用机制。方法：运用体外细胞培养技术对新生大鼠乳鼠皮肤的成纤维细胞进行培养,实验分为对照组（不给药组）和马勃有效组分37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L组;实验组于传代培养24 h后加入不同浓度的药物,继续培养24、48、72 h后收集细胞。采用MTT比色法测定细胞增殖,生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定细胞胶原含量。结果：与对照组比较,37.5、75.0、150.0及300.0 mg/L实验组的成纤维细胞增长率和成纤维细胞胶原合成能力均显著性升高（P＜0.01）。在药物作用时间方面,与对照组比较,在24、48和72 h观察细胞增殖率和胶原合成能力均显著增强,72 h最强,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：在不同剂量马勃有效组分作用下,大鼠成纤维细胞活化增殖,胶原合成的能力增强。     

Matrine inhibits proliferation of mouse skin fibroblasts induced by platelet—derived growth factor—BB

Abstract Objective:To study the effect of matrine on proliferation of mouse skin fibroblasts induced by platelet-dervied growth factor-BB(PDGF-BB).Methods:Mouse skin fibrolasts were obtained from newborn I-CR mice and propagated in vitro.Proliferation of cell was analyzed by mitochondrial reduction of tetrazolium salt MTT and actual cell count .Results:Matrine (50 to 500μg/mg)Caused dose-dependent reduction of serum-stimu-lated cell growth.Growth inhibition was totally reversed after removal of the drug.Matrine also inhibited PDGF-BB induced cell growth dose-dependently.Conclusion:matrine exhibits potent anti-proliferation effect on mouse skin fibroblast.This effect appears to be mediated by decrease of PDGF-induced growth.These results suggest that matrine might have preventive and therapeutic implicaiton in skin fibrosis.     

牛磺酸抑制血小板衍生生长因子诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌

目的：观察牛磺酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的影响，并探讨其作用的可能机制。方法：体外传代培养的大鼠系膜细胞，经一定量的牛磺酸和（或）PDGF作用48h后，用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期，ELISA检测细胞外基质（Ⅳ型胶原及层粘连蛋白）含量，免疫细胞化学方法检测C－jun,C-fos的表达。结果：与对照组比较，10，20ng/ml PDGF可明显促进系膜细胞增殖，影响细胞周期，使G0－G1期细胞减少，S期细胞增加，并能明显促进细胞外基质的分泌及C-jun,C-fos的表达（P＜0．01），而20或40mmol/L牛磺酸作用于系膜细胞后，可明显抑制PDGF（20ng/ml)诱导的细胞增殖，细胞外基质分泌及C-jun,C-fos的表达。结论：牛磺酸对PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌有显著抑制作用，其机制可能与牛磺酸抑制C-jun,C-fos表达有关。     

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的　观察血小板源性生长因子 (PDGF)对人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)增殖和移行能力的影响 .方法　将体外培养的第 46代人视网膜色素上皮细胞分为DMEM组(改良型Eagle培养液 )和含有 2 0mL·L-1小牛血清的DMEM组(2 0 g·L-1DMEM ) ,每组分别加入不同浓度 (0 .1,1,5 ,10 ,5 0和 10 0 μg·L-1)的PDGF ,然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用 ;应用hRPE损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察PDGF对hRPE移行的影响 .结果　①增殖作用 :0 .110 0 μg·L-1的PDGF均能促进hRPE的增殖 ,DMEM组 10 μg·L-1时促增殖作用最明显 ,增殖率达15 3% ;2 0 g·L-1DMEM组 5 0 10 0 μg·L-1的增殖率为 174% ,作用最强 .②移行作用 :PDGF能够显著促进hRPE的移行 ,并呈剂量依赖性 ,5 0 10 0 μg·L-1时促移行能力最强 ,DMEM组移行率为 5 10 % ,2 0mL·L-1FBS +DMEM组达 6 40 % .结论　PDGF能够促进hRPE的增殖和移行 ,有血清时可以加强这种作用 ,提示它在PVR的发病过程中可能发挥了重要作用     

The role of calcineurin in the lung fibroblasts proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor

Objective To investigate the role of calcineurin (CaN) in the lung fibroblast proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor (bFGF).Methods We used Western blot and immunohistochemical methods for investigating the content and distribution of calcineurin in the lung tissue. Calcineurin activity in different tissues was measured using 32P-labelled substrate. In the primary culture of lung fibroblasts, 3H-thymidine (3H-TdR) and 3H-proline incorporation methods were used to study the effect of cyclosporin A (CsA), an inhibitor of calcineurin, on the lung fibroblast DMA and collagen synthesis stimulated by bFGF.Results We found that calcineurin was expressed in lung tissue and has phosphatase activity (7.1±2.0 pmol Pi/mg pr/min). CsA (10~(-8)-10~(-6) mol/L) inhibited lung fibroblast 3H-TdR incorporation induced by bFGF in a dose-dependent manner, with the inhibitory rates by 20% , 46% and 66% (P< 0.01). CsA (10~(-7) -10~(-6) mol/L) inhibited 3H-proline incorporation in lung     

猪血小板衍生生长因子的提取和纯化

目的 :建立简单、有效的猪血小板衍生生长因子 (p PDGF)纯化方法。方法 :采用超声裂解、酸醇抽提、离子交换色谱、凝胶色谱等方法提纯 p PDGF,用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量 ,并检测其生物学活性。结果 :纯化的 p PDGF相对分子质量为 (2 .879～ 3.0 78)× 10 4,纯化倍数为 75 82倍 ,活性回收率为 3% ,比活性为 3.41176× 10 5 U/ mg。 结论 :提取和纯化 p PDGF的方法简单 ,且达到较好的结果 ,为进一步研究 PDGF的理化性质及生物学特性打下基础。     

猪血小板衍化生长因子的提取和纯化

目的 建立一种简单、经济的血小板衍化生长因子（PDGF）的纯化方法。方法 血小板衍化生长因子（PDGF）具有耐酸性（pH2.5）,耐热（100℃）以及耐受2%SDS的特性。采用酸醇提取、热处理、离子交换层析、分子筛等蛋白分离和纯化技术从猪血小板中提取和纯化PDGF。结果 猪血小板衍化生长因子（pPDGF）纯化倍数达7582倍,活性回收率为3%。结论 本方法简单、经济,纯化的猪血小板衍化生长因子(pPDGF）具有明显的生物学活性。     

丝裂霉素C抑制人结膜囊成纤维细胞生长及增殖

目的　观察丝裂霉素 C( MMC)对培养人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的作用 .方法　用 MTT比色法、3H- Td R掺入法及流式细胞仪检测细胞增殖周期观察 MMC对培养的人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的影响 .结果　 0 .4 g· L- 1MMC作用 5 min后 ,可使成纤维细胞 MTT比色 A570 nm值 7d内无显著变化 ( P>0 .0 5 ) ,3H- Td R掺入实验 CPM第 1日较对照组降低了 72 .5 % ,至第 7日时仍低于对照组 86.2 % ( P<0 .0 1) .细胞增殖周期中 ,MMC组 S期细胞的百分比明显低于对照组 .结论　临床使用剂量 MMC可使结膜囊成纤维细胞增殖能力下降 ,处于增殖抑制状态 ,而不引起明显的细胞死亡 .     

益肝康的药物血清对大鼠HSCs增殖及PDGF基因表达的影响

目的探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制.方法给正常大鼠灌服益肝康,提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学法检测PDGF-BB蛋白表达.结果益肝康药物血清显著抑制肝星状细胞的增殖,可使细胞生长周期延长,细胞增殖、活力受抑,并明显抑制PDGF-BB蛋白表达.结论益肝康可抑制肝星状细胞增殖,对PDGF-BB表达的抑制作用可能是该方抗肝纤维化的主要机制之一.     

粟米草三帖皂苷对PDGF诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究粟米草三帖皂苷(MPTS)在体外对血小板源生长因子(PDGF)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响及其机制.方法 原代培养大鼠血管平滑肌细胞,PDGF或PDGF与不同浓度MPTS(1～27μmol/L)共同作用后,以MTT法检测细胞活力;western-blot检测细胞pERK1/2表达变化.结果 成功培养血管平滑肌细胞;10ng/mL的PDGF促进VSMCs的增殖,而不同浓度MPTS作用后均可抑制PDGF诱导的VSMCs增殖(P<0.05);并且,MPTS对PDGF诱导的pERK1/2活化有抑制作用(P<0.05).结论 MPTS对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用,其部分机制可能与下调pERK1/2活性有关.