双歧杆菌粘附素对脂多糖和H2O2调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的研究双歧杆菌分泌型粘附素对脂多糖(LPS)和H2O2体外调节肠上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法用3H-TdR掺入法、流式细胞仪和荧光染色等方法观察肠上皮细胞增殖和凋亡的情况。结果100 μg/L LPS对细胞增殖和凋亡均有促进作用,200 μmol/L H2O2可抑制肠上皮细胞增殖,促进凋亡。丫啶橙荧光染色见细胞核染色质致密浓染或裂解成碎片。预先经双歧杆菌分泌型粘附素处理后,LPS组细胞增殖和凋亡率均显著下降,H2O2组细胞凋亡明显减少。结论在体外,双歧杆菌分泌型粘附素能抑制LPS和H2O2对肠上皮细胞的损害作用,维持肠上皮细胞增殖与凋亡的平衡。     

双歧杆菌粘附大鼠肠上皮细胞相关因素的研究

目的 以青春型双歧杆菌粘附大鼠肠上皮细胞株IEC－6为实验模型，探讨影响粘附的相关因素。方法 采用体外定量微生物分析方法观察粘附等指标。结果 双歧杆菌粘附需要一定时间、浓度、温度的作用，且酸性环境有利于粘附，胰蛋白酶能完全抑制其粘附。结论 双歧杆菌能粘附于肠上皮细胞表面，其粘附素成分可能为细胞壁中的蛋白成分和脂磷壁酸。     

双歧杆菌及其表面分子粘附肠上皮细胞的研究

本文采用人结肠腺癌细胞株Ｌｏｖｏ体外培养研究分叉双歧杆菌粘附的性质和机制。结果发现：分叉双歧扦菌的粘附具有时间依赖性和菌量依赖性。静止期菌粘附作用是强。酸性ｐＨ值可以促进其粘附。通过ＷＰＧ．ＬＴＡ、多糖阻断试验及胰酶处理发现,ＷＰＧ、ＬＴＡ、细胞壁蛋白都参与了分叉双歧杆菌对Ｌｏｖｏ细胞的粘附,说明此粘附过程是多种分子共同参与的结果。国家自然科学基金     

双歧杆菌对实验性大肠癌细胞凋亡的影响

我们以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用原位末端标记法、免疫组化法以及电镜检测了移植瘤的凋亡细胞以及ｂｃ１２、ｂａｘ基因的表达水平,旨在探讨双歧杆菌的抑瘤机理。一、材料和方法１．实验动物：ＢＡＬＢ／ｃ（ｎｕ／ｎｕ）小鼠,６～８周龄,雄性,体重约１８～２...     

双歧杆菌对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨双歧杆菌的体外抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法将双歧杆菌体外直接作用于大肠癌LoVo细胞,以MTT法检测双歧杆菌对肿瘤细胞的杀伤作用;用流式细胞仪检测双歧杆菌对肿瘤细胞凋亡的影响。结果双歧杆菌在体外对大肠癌LoVo细胞具有显著的杀伤作用,且浓度越大、作用时间越长,其抑制作用越强,具有浓度和时间依赖性,且双歧杆菌能诱导肿瘤细胞凋亡。结论双歧杆菌对大肠癌LoVo细胞具有生长抑制作用,其机制可能是通过诱导细胞凋亡达到抑制肿瘤生长的作用。     

脂多糖对人脐血内皮祖细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察脂多糖(LPS)对体外培养的人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖及凋亡的影响。方法:以密度梯度离心法获取人脐血EPCs,体外诱导分化并鉴定。实验分对照组及不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0mmol/L)LPS组。四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪测凋亡率及细胞周期。结果:110.0mmol/L组促进EPCs增殖,20.0 mmol/L组抑制EPCs增殖,差异有统计学意义(P<0.05),其余2组对EPCs增殖能力无显著影响,与对照组比差异无统计学意义(P>0.05)。220.0 mmol/L组促进EPCs凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。其余各组对EPCs凋亡率无明显影响,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。310.0、20.0 mmol/L组影响细胞周期,10.0 mmol/L组G0/G1期细胞减少,S和G2/M期增加;20.0 mmol/L组发生S期阻滞,G2/M期细胞减少,与对照组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LPS对EPCs增殖能力及凋亡的影响与其浓度有关,当浓度为20.0 mmol/L时抑制增殖并促进凋亡。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生γ干扰素和白介素2作用的研究

目的:研究双歧杆菌DNA对小鼠肠上皮内淋巴细胞(iIEL)γ干扰素(IFN-γ)和白介素2(IL-2)产生水平的影响,探讨其对小鼠iIEL免疫激活作用.方法:提取双歧杆菌DNA,肌肉注射免疫小鼠,提取小鼠iIEL,以IFNγ和IL-2作为检测指标,测定其变化.结果:DNA免疫小鼠产生IFN-γ和IL-2的水平与对照组相比明显提高(P＜0.01).结论:双歧杆菌DNA明显提高小鼠iIEL产生IFN-γ和IL-2的能力.     

H2O2和细胞凋亡

细胞凋亡（apoptosis）又称程序性细胞死亡（Programmed Cell Death）．是指为维护体内稳态,由基因控制的细胞自主有序性死亡,它在正常组织的发育更新、稳态维持和疾病防治中都起重要作用。这种死亡细胞具有与坏死细胞不同的形态特征,包括线粒体损伤,质膜及核膜出泡,染色质凝集,DNA片段化和凋亡小体的形成等。     

内毒素脂多糖对培养肾小管上皮细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察肾小管上皮细胞（Tubular epithelia cell,TEC）在含内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）微环境中细胞凋亡功能改变,探讨LPS直接损害肾小管的机制。方法 在含内毒素LPS的介质中体外培养肾小管上皮细胞,检测不同时相细胞凋亡增殖能力及分泌肿瘤坏死因子-a(Tumor necrosis factor a,TNF-a）能力的变化。结果 LPS有明显的抑制TEC增殖,促进TEC分泌TNF-a,且随着LPS浓度的增大,其作用更为明显;LPS还具有明显促细胞凋亡作用,呈剂量依赖性;相关分析表明,细胞凋亡与LPS促TEC分泌TNF-a的量有明显正相关。结论 LPS可抑制TEC增殖,促进细胞凋亡,可能是通过TNF-a而起作用,这可能是LPS导致脓毒症性肾衰或急性间质性肾炎小管间质损害的机制之一。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡保护作用的实验研究

目的 探讨白藜芦醇对过氧化氢(H2O2)诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡损伤的保护作用.方法 取健康SD大鼠透明晶状体60只,随机分为5组,每组12只,分别给予高、中、低剂量(5、10、20μmol/L)的白藜芦醇和100 μmol/L H2O2,利用透射电镜观察超微结构变化并测定凋亡因子caspase-3及caspase-9的表达.结果 伴随白藜芦醇给药浓度的增加,透射电镜下鼠晶状体上皮细胞损伤的程度减轻,此外,白藜芦醇对caspase-3及caspase-9的表达具有抑制作用.结论 白藜芦醇可以抑制H2O2诱导的晶状体上皮细胞的凋亡,对氧化损伤性白内障具有预防作用,为寻求有效防治白内障药物提供了可靠的实验依据.     

过氧化氢诱导鼠晶状体上皮细胞凋亡中 Caspase-2的表达及意义

目的探讨过氧化氢诱导鼠白内障形成过程中晶体上皮凋亡细胞中半胱氨酸天冬氨酸酶-2(Cas-pase-2)的表达及意义。方法大鼠晶状体器官离体培养后，用免疫组织化学方法检测晶体上皮细胞Caspase-2的表达。结果随过氧化氢损伤时间的处长，晶体上皮细胞Caspase-2的表达逐渐增强，与晶体混浊程度正相关。结论过氧化氢可以诱导鼠晶体上皮细胞Caspase-2的表达，后者可能参与晶体上皮细胞凋亡和白内障的形成。     

葛根素对过氧化氢诱导 ARPE－19细胞活力损伤和凋亡的影响

目的：探讨葛根素对过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞（ ARPE－19 cells ）活力损伤和凋亡的影响。方法用200μmol／L过氧化氢（ H2 O2）诱导氧化应激,不同浓度葛根素作用于ARPE－19细胞24 h,应用WST－1法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果过氧化氢明显降低人视网膜色素上皮细胞活力,葛根素能剂量依赖性的减少这种降低;过氧化氢明显增加人视网膜色素上皮细胞的凋亡,葛根素能剂量依赖性的减少这种增加。结论葛根素能明显减少过氧化氢诱导的人视网膜色素上皮细胞活力的损伤和细胞凋亡。     

双歧杆菌黏附素对应激大鼠肠黏膜炎性反应的影响

目的研究双歧杆菌黏附素对应激大鼠肠黏膜炎性反应的影响。方法将48只实验大鼠随机分成应激组、应激＋黏附素组,每组24只,以束缚为应激条件,在应激组和应激＋黏附素组大鼠建立应激模型,造模后进入实验期,实验8 d。两组大鼠每日给予相同热量、氮量（热量125.4 kJ/kg,氮量0.2 g/kg）的肠内营养,应激＋黏附素组大鼠每日喂养肠内营养加双歧杆菌黏附素（5 mg/kg）,应激组大鼠每日喂养肠内营养加等量的生理盐水（5 mg/kg）,测定造模前、造模后、实验第3天和第8天两组大鼠肠黏膜和血浆白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）。结果与造模前比较,造模后应激组和应激＋黏附素组肠黏膜和大鼠血浆IL-6、TNF-α、IFN-γ水平浓度明显升高;实验第3天和第8天,应激组大鼠肠黏膜和血浆IL-6、IFN-γ、TNF-α明显高于造模前。与造模后和应激组比较,实验第3天和第8天,应激＋黏附素组大鼠肠黏膜和血浆TNF-α、IL-6和IFN-γ水平明显降低,而IL-10水平明显升高。结论双歧杆菌黏附素可下调肠黏膜炎性反应,减轻肠黏膜应激损伤。     

线粒体靶向性肽SS-31对H2O2诱导人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用

目的 研究线粒体靶向性肽SS-31在H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞凋亡中的保护作用及其分子机制.方法 体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01/04,选取相同代次的SRA01/04细胞进行实验,应用100 μmol/L H₂O₂ 构建凋亡模型,随机分为正常对照组、H₂O₂处理组、3个不同浓度的SS-31预处理组.应用MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Western blotting检测各组凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase-3的表达.结果 H₂O₂处理24 h后,细胞存活率降低,凋亡率升高,促凋亡蛋白Bax的表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达降低,Bax/Bcl-2比率升高,Cleaved-Caspase-3的表达升高.SS-31预处理能明显提高细胞的存活率,且与浓度呈正相关.同时,SS-31还能减少细胞的凋亡率,下调Bax的表达,上调Bcl-2的表达,减少Cleaved-Caspase-3的激活,从而发挥抗凋亡作用.结论 SS-31能在H₂O₂诱导的人晶状体上皮细胞凋亡中有效地发挥保护作用,但能否应用于白内障治疗有待深入研究.     

姜黄素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡及衰老的影响

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬、凋亡及衰老的影响.方法 体外培养HUVECs,分为对照组(只给予培养基),模型组(给予60 μmol/L H2O2),姜黄素组(给予60μmol/L H2O2+ 10 μmol/L姜黄素),3-MA组[(给予60 μmol/L H2O2+ 10μmol/L姜黄素+1 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine)],培养4d后,DCFH-DA法检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老程度,Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平.结果 与对照组相比,模型组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),而LC3-Ⅱ/Ⅰ比值差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,姜黄素组ROS含量、凋亡率及SA-β-gal阳性率及p62水平降低(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05).与姜黄素组比较,3-MA组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低(P＜0.05).结论 姜黄素可减轻H2O2诱导内皮细胞凋亡及衰老,其机制与提高内皮细胞自噬有关.     

葡萄糖调节蛋白75基因对H2O2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤有保护作用

目的:研究葡萄糖调节蛋白75(grp75)基因对H2O2诱导的C6胶质瘤细胞氧化应激性损伤的保护作用.方法:以grp75基因瞬时转染C6胶质瘤细胞,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型,运用MTT、LDH、苔盼兰拒染、细胞周期流式细胞术(FCM)和凋亡小体方法观察grp75对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤的影响.结果:grp75转染组C6细胞在H2O2(0.1 mmol/L,24 h)刺激后MTT增加、LDH活性降低,细胞凋亡明显抑制,与空载体转染组相比有显著差异.结论:grp75基因对H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤有保护作用.     

锰超氧化物歧化酶过表达对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响

目的 揭示锰超氧化物歧化酶（MnSOD）在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用及机制。方法 转染人正义和反义MnSOD基因的PC12细胞,用50 mmol H2O2攻击已转染的细胞系,并采用MTT法、流式细胞术和 Hoechst染色方法研究H2O2的细胞毒作用。结果 转染正义MnSOD的细胞比原细胞的MnSOD酶活性提高1.3倍,而转染反义MnSOD细胞的酶活性降低67%。结论 H2O2对PC12细胞毒作用是通过诱发PC12细胞凋亡作用来实现的;MnSOD具有抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡作用,涉及线粒体的损伤,导致氧化还原失衡继而诱发细胞凋亡。     

盐酸右美托咪定对H2O2诱导的库普弗细胞氧化应激和炎性反应的影响

目的：观察α2肾上腺能受体激动剂盐酸右美托咪定能否抑制过氧化氢(H2O2)诱导的库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)氧化应激和炎性反应。方法：分离和培养KCs,分别用盐酸右美托咪定或育亨宾处理24 h后,以H2O2作用30 min建立细胞氧化损伤模型,应用MTT比色法检测H2O2诱导的损伤细胞的存活率;用相应的试剂盒测定各组细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)释放量。结果：盐酸右美托咪定显著抑制H2O2诱导的KCs的损伤,提高细胞的存活率,抑制上清液中LDH,MDA,TNF-α释放,这种作用可以被α2受体拮抗剂育亨宾完全拮抗,而育亨宾本身对细胞的氧化损伤和炎性反应没有影响。结论：盐酸右美托咪定可以减轻H2O2诱导的KCs的氧化应激和炎性反应,其可能是通过α2肾上腺能受体发挥作用。