肇庆地区血小板供者库的建立及应用

目的 建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型.对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序.对3例患者进行HLA-I分型.结果 成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致.HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个.3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者.结论 建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板.     

HPA和HLA已知型的血小板供者库建立及应用

目的 开展血小板同型或配合性输注是预防和治疗免疫性血小板输注无效(PTR)的良策.为此建立一定规模的HPA和HLA已知型血小板资料库,为临床提供匹配的单采血小板,是血小板输注安全有效的保障.方法 对所有供者库单采血小板进行ABO、HLA-A、B及HPA1-6,15基因分型.根据ABO、HPA同型和HLA同型或HLA交叉反应组相同(CREG)配型策略,编制数据库软件,建立上海市单采血小板供者资料库.结果 上海市血小板供者库至今已接受80人/次患者查询,共有78名患者找到合适的供者.HPA和HLA的CREG相同配合率为97.5％.其中50名患者接受了单采血小板的同型(或配合型)输注,47名输注有效(24 h血小板回收率＞20％).其中更有15名患者同型输注疗效明显,24 h回收率＞80％.结论 建立血小板供者HPA和HLA Ⅰ类抗原基因分型资料库,为患者提供HLA和HPA、ABO匹配的单采血小板,可以降低PTR的发生率,是解决免疫性PTR的根本手段.     

太原地区血小板库供者特征及应用评价

目的 建立本地区血小板库供者库,并基于以往献血频率、献血种类区分入库供者,探索提升血小板库应用效率的方法。方法 1)依据献血频率和献血种类对本中心2011～2020年已加入中华骨髓库的献血者筛选归类,分别命名为储备供者、希望供者和活跃供者,按照活跃供者选择条件从2020年所有机采献血人群中收集这类供者,扩充本地区血小板库。2)2020年共筛选出符合活跃供者条件的献血者739例(含已入中华骨髓库活跃供者),收集其静脉血样5 mL,采用HLA高分辨基因分型方法对其进行HLA-A和-B位点检测、Q-PCR基因分型方法进行HPA检测。3)统计2021年本中心3类供者分别提供配型相合血小板的数量。结果 1)构建了由以往不同捐献经历供者组成的太原地区血小板库,其中活跃供者739例、希望供者3840例、储备供者18 715例。通过卡方检验,发现这3类供者ABO血型构成比无差异;性别均男性多于女性。2)2021年,加入血小板库的活跃供者再次捐献血小板的平均量与一般人群常规捐献之比为14.4∶3.98。3)2021年为PTR患者供应的142份相容性血小板中,83.8%来自活跃供者入库后的再次捐献,希望供...     

青岛地区已知HLA和HPA分型血小板供者库的建立及临床应用

目的建立青岛市已知HLA和HPA分型的无偿机采血小板供者库并用于解决血小板输注无效(PRT)患者的血小板输注。方法采用PCR-SSO流式磁珠法和PCR-SSP法分别对青岛地区无偿机采血小板捐献者1 800人进行HLA-Ⅰ类(A,B位点)、HPA-1—-5,-15基因分型,针对不同免疫状态的PTR患者比较3种不同配型法(血小板随机交叉配型法、抗原特异性配合法、抗原阴性选择法)解决血小板输注无效的效果。结果在高致敏(群体反应性抗体PRA>60%)患者中,HLA和或HPA特异性配型效果较好;轻度致敏(PRA<60%)患者随机交叉,抗原阴性选择,抗原特异性配型方案效果相似。不考虑ABO血型的因素1 800名的血小板供者库可以使99%的患者在库中找到至少1例HLA完全相合的供者,理论估算的供者库规模被不同表型的患者库中检索结果证实。结论理论上青岛本地化已知分型血小板供者库规模需达到6 000人左右可以有效解决血小板输注无效患者的血小板输注问题。只有重度致敏的患者需要HLA完全相同的供者,而轻度致敏的患者可以选择随机交叉配合或抗原阴性选择方案。     

合肥地区HPA、HLA高分辨基因型血小板供者库的建立及库容分析

目的 建立合肥地区HPA、HLA高分辨已知基因型血小板供者资料库,并分析合适的库容水平,为免疫性血小板输注无效患者提供数据基础。方法 采用多重荧光PCR方法对1 157名合肥地区无偿献血者进行HPA-1～6,-10,-15,-21基因分型并计算其频率;采用PCR-SSO方法对合肥地区1 115名无偿献血者进行HLA-A,-B高分辨基因分型,使用最大期望值计算HLA-A,-B高分辨基因频率和单体型频率。结果 根据对合肥地区人群HPA、HLA高分辨基因多态性分析,建立合肥地区血小板供者资料库,在1 157份已知HPA-1～6,-10,-15,-21基因型供者库中,约有91%的患者可以找到HPA基因型全匹配供者;1 115份已知HLA-A,-B高分辨基因型血小板供者库中,找到至少1例相同供者的概率约为60%。结论 建立了适合合肥地区人群HPA、HLA已知基因型血小板供者资料库,经分析合肥地区血小板供者库基本满足免疫性血小板输注无效患者找到适配的血小板需求。     

稀有血型库和血小板供者资料库的研究进展

红细胞稀有血型抗体可引起急性或迟发性输血反应,当患者产生此类抗体时如不能及时得到相应抗原阴性的血液,将危及生命健康.当临床上患者危急需要输注人类白细胞抗原(HLA)、血小板特异性抗原(HPA)配型相合的血小板时,无法及时找到血源库存或供者,可能会耽误临床输血和治疗,甚至造成血液输注无效或者患者死亡等严重后果.血小板输注...     

陕西地区血小板HLA/HPA基因供者库的建库评估及应用策略

目的 探讨陕西地区血小板HLA/HPA基因供者库合适的库容水平及匹配概率,为本地区血小板供者库的建设、维护及应用提供数据支持。方法 以11 755名中华骨髓库陕西分库造血干细胞志愿捐献者、401名和249名陕西地区无血缘关系多次单采血小板捐献者为对象,分别进行HLA基因多态性分析、HPA基因分型和CD36抗原检测,应用Arlequin 3.5.2.2软件计算HLA、HPA基因频率及单体型频率,并根据表型频率计算找到HLA、HPA全匹配供者概率,评估库容水平。结果 获得了陕西地区HLA-A、-B及HPA1-6、10、15、21表型群体多态性资料,在249例健康捐献者中检测到CD36抗原Ⅰ型和Ⅱ型缺失频率均为0.40%(1/249);计算推导得到当血小板供者库库容为194人时,患者有95%的把握能在该库中找到至少1名HPA1-6、10、15、21全匹配供者;1个1 500人的血小板供者库有95%的概率可以找到1名HLA-A-B表型频率>0.002或单体型频率>0.001的相同供者,而找到任何1个交叉反应组(CREG)匹配的供者概率应在44.95%～97.57%之间;当供者数为8...     

中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库的建立模式与库容

本研究探讨建立中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库的模式和合适的库容水平。研究方法为合并分析公开发表的中国16个省份的汉族血小板献血者人群人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）分布多态性群体调查数据。对HPA多态性群体调查数据进行Hardy—Weinberg平衡检验。结果表明,HPA．1、-4、石、-10未检出bb纯合子,HPA-7-9,11-14、-16未检出b基因。HPA1-16系统相互独立存在于血小板表面。中国汉族人群中发现了648种HPA组合,其中42种频率高于0．001的组合的累积频率达0．9763,频率最高（0．2012）的组合为：HPA-（7-8-9-11-12-13-14—16）aa-（1-4-5-6-10）aa-2aa-3ab-15ab。HPA对偶抗原不配合概率高于0．1的系统有HPA．15、-3和-2,对偶抗原不配合概率介于0．01—0．1的系统有HPA-1、-5和-6。中国汉族人群供受者间随机输血HPA1—16系统对偶抗原全匹配概率为0．3195。根据库容（N）随频率（F）变化的曲线,推导得到在P=95％时的回归方程LogN=-0．4394x Ln（F）＋0．4324。使用该公式椎测综合频率（HPA和AB0的频率乘积）为0．005的库容至少需要为576．07人。结论：中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库应采用单库容600名供者的区域多中心联合建库模式,它既能解决当地主要的HPA—15、3和2系统不配合造成的血小板输注无效（platelet transfusion refractoriness,PTR）,还可以在遗传背景相近的区域有效地扩大建库规模以解决HPA低频抗原的不配合问题。在评估HpA分型血小板供者库容时不仅要考虑HPA的频率还同时要考虑ABO血型分布频率对库容的影响。     

血细胞分离机采集单个供者血小板的临床应用

据统计,反复输注血小板的患者约50%以上产生同种免疫抗体[1],30%～70%产生血小板输注无效(PTR)[2],严重影响血小板的使用效果及推广,故如何提高输注血小板的治疗效果,成为临床亟待解决的问题.笔者就血细胞分离机采集单个供者血小板(SDP)对供者的影响、如何提高血小板收集效率和产量及其临床输注效果等进行分析探讨,报告如下.     

中山地区血小板供者HLA基因分型资料库的建立

目的 建立血小板供者HLA基因分型资料库,探讨HLA-A、B基因频率及单体型频率,为临床患者提供HLA匹配的血小板,解决血小板输注无效(PTR)患者的血小板输注.方法 采用聚合酶链反应-序列特异寡核苷酸探针杂交技术 (PCR-SSOP)对568名中山地区单采血小板捐献者进行HLA-I类(A、B位点)基因分型并形成数据库,根据HLA表型群体资料,使用最大数学预期值算法(EM)计算HLA-A、B单体型频率.结果 HLA-A位点共检出17种等位基因,HLA-B位点共检出29种等位基因,单体型数153种.结论 血小板供者HLA分型资料库的建立可以为PTR患者迅速寻找到HLA相合血小板,提高血小板输注效果.     

Comparison of platelet antibody screen,crossmatching and HLA antibody testing in patients refractory to platelet transfusions

Patients undergoing recurrent platelet transfusions can become refractory to these transfusions. Platelet antibody screens (Immucor), platelet crossmatching assays (Immucor), and HLA antibody testing are commonly used to test these patients. The relative effectiveness of these tests has not been determined. A higher incidence of strongly positive screen results that did not predict crossmatch results was anecdotally noted. Therefore, the results of the platelet antibody screens and crossmatches were systematically compiled over a 12-year period from 2010 to 2021. Of note, the Immucor Capture-P Ready Screen (platelet antibody) had a recall in March 2013 after which the performance of the test appears to have changed. The positivity rate of the platelet antibody screen increased over the course of the study, and this was statistically significant when analyzing year as a continuous variable and when grouping years by four-year periods (2010–13,2014–17,2018–21). In contrast, platelet crossmatch reactivity decreased slightly throughout this period. During the 2018–21 period, HLA antibody testing was commonly performed and correlated well with the crossmatch testing but not with the screen. These results suggest that the drastic increase in positivity we observed in the platelet antibody screen over this period is due to increased analytic sensitivity (with possible reduced specificity) of the screen and not a change in our patient population. Based on these results, the platelet antibody screen has little clinical utility and directly performing platelet crossmatching or HLA antibody testing is recommended for patients suspected to be refractory to platelet transfusions due to alloimmune-mediated factors.     

Problem of bacterial contamination in platelet concentrates

Bacterial contamination of blood is being recognized more frequently now and is one of the serious complications of transfusion. Use of integrally attached collection systems and strict standards for skin preparation, collection and storage of blood and components have reduced but not eliminated the risk of bacterial contamination. As bacteraemia may be part of acute or sub acute infections, strict donor selection is warranted. The longer the storage time, the greater is the number of organisms and amount of endotoxin present in the unit and associated with transfusion reactions. Importance of haemovigilance system and awareness among clinicians on the potential complications will go a long way in reducing patient morbidity. New approaches for detection of bacterial contamination, pathogen reduction and developments in the field of platelet biology will increase blood safety.     

冰冻血小板临床输注疗效分析

目的掌握输注冰冻血小板的临床疗效.方法将65例患者分成输冰冻血小板组(n=30)和输新鲜血小板组(n=35),比较冰冻血小板与新鲜血小板输注前、后Plt、PT、APTT的变化和组间的差异、两组输注后的临床止血效果和输注无效情况.结果(1)两组患者分别输注冰冻和新鲜血小板后凝血指标及Plt均有显著差异(P＜0.001),而组间无显著差异(P＞0.05);(2)临床止血有效率分别为冰冻血小板86.67%,新鲜血小板85.7%;(3)两组血小板输注无效情况基本相同.结论输注冰冻血小板与输注新鲜血小板临床疗效相同,冰冻血小板可广泛应用于临床.     

流式细胞仪法用于血小板相关抗体检测和血小板交叉试验

目的 应用流式细胞仪(FCM)进行血小板相关抗体检测和血小板交叉试验。方法 利用血小板抗体阳性、阴性血清探寻FCM法实验条件,血小板经血清致敏,洗涤后,加入荧光标记鼠抗人IgG反应,由FCM获取和分析。52人次正常人血清经FCM法检测后,统计界定正常值范围。1份阳性血清经9个稀释度倍比稀释,分别用FCM法和固相ELISA抗体筛选法检测。31名临床血小板输注无效患者分别用FCM法和抗原捕获酶免分析法(MACE)进行102人次血小板交叉配合试验。结果 FCM法检测正常值为荧光强度比值R<1.156,9个稀释度的阳性血清检测表明,FCM法最高可检稀释度为86.67,固相ELISA法最高可检稀释度为56.34(抗-HPA)和67.25(抗-HLA)。102人次血小板交叉结果显示,FCM法和MACE法无显著性差异(P>0.05)。结论 FCM法可用于血小板相关抗体检测和血小板交叉配血,是一种快速、灵敏的新方法。     

Establishment of platelet donor registry improves the treatment of platelet transfusion refractoriness in Guangzhou region of China

Platelet transfusion refractoriness (PTR) is the major complication of long‐term platelet supportive care. To improve the effectiveness of platelet transfusion therapy in PTR patients, we aimed to establish a platelet donor registry in our region (Guangzhou, China) by typing the human leukocyte antigen (HLA) and human platelet antigen (HPA). Blood donors (n = 864) from our population were genotyped for HLA‐A, HLA‐B and HPA systems by polymerase chain reaction amplification with sequence‐specific primer(PCR‐SSP) techniques. Using this cohort, we compared the results of platelet transfusions (matched vs. random) in 23 patients with PTR. Matched platelets were selected either by HLA antigen matching or by HLA antibody matching, as predicted by antibody specificity prediction (ASP) analysis. Significantly higher platelet recovery (PPR) values were obtained with HLA‐matched platelets in comparison with random platelets. No significant difference in PPR was observed between HLA matching and ASP methods. In two patients, platelet‐specific alloantibodies (alloabs) (anti‐HPA‐3b and anti‐HPA‐5b) were detected besides HLA class I alloabs. Transfusion with HLA‐ and HPA‐compatible platelets in both the patients resulted in significantly higher PPR when compared with HLA‐compatible platelet transfusion alone. In this study, we demonstrated that the establishment of an HLA‐ and HPA‐typed platelet aphaeresis donor registry is useful to improve the treatment outcome of PTR patients and to maintain a long‐term platelet transfusion strategy.     

血小板输注无效患者血小板同种抗体及血小板特异性糖蛋白抗体表达的研究

目的 探讨血小板输注无效与血小板同种抗原或血小板特异性抗原的相关性.方法 选择65例临床确诊血小板输注无效患者作为研究对象,应用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测血清、血小板洗脱液中血小板特异性抗体;应用HLA抗体特异性检测试剂盒,对组合反应性抗体(PRA)阳性的患者进行HLA抗体特异性分析;用HPA分型试剂盒检测8个血小板同种抗原系统HPA-1、2、3、4、5、6、9、15;用HLA分型试剂盒对HLA-A/B抗原进行基因分型.结果 65例患者HLA-A/B抗原,HPA-1、2、4、5、6、9、15抗原的基因频率分布与健康献血员比较差异无统计学意义.HPA-3a、3b抗原频率分别为0.65、0.35,与健康献血员比较差异有统计学意义(P＜0.05).65例患者中HLA抗体单独阳性24例(36.9%),HLA抗体和血小板特异性糖蛋白抗体共同阳性14例(21.5%);HLA抗体和血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性6例(9.2%),血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体阳性13例(20%),HLA抗体、血小板特异性糖蛋白抗体及血小板洗脱液特异性糖蛋白抗体共同阳性4例(6.2%);HLA-A/B特异性抗体中,HLA-A*9抗体占全部抗体的46.2%,HLA-B*40抗体占33.6%.血清血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa为主(26.2%),其次为GP Ⅰa/Ⅱa(21.5%),血小板洗脱液中,血小板特异性抗体以GPⅡb/Ⅲa和GP Ⅰb/Ⅸ为主(41.5%).对2例患者进行了遗传学调查,发现产生的血小板特异性糖蛋白抗体和HLA抗体与父母血小板抗原及HLA抗原不相合呈密切相关.结论 血小板输注无效患者中,HLA抗体占主要地位,其次为血小板特异性糖蛋白抗体.     

供血者性别对血小板激活标志物含量的影响

目的 探讨浓缩血小板保存过程中血小板激活的性别差异。方法 采用PRP法制备浓缩血小板,并于常规条件下保存5天,间隔取样,分别用RIA、ELISA方法检测血小板表面P-selectin分子数及血浆中可溶性P-selectin(sP-se-lectin)含量。结果 血浆中sP-selectin含量在保存1天后即明显升高,而血小板表面P-selectin分子数在保存3天后明显升高,二者与保存前比较均有显著性差异(P<0.05)。在保存期内,男女供血者的血小板表面P-selectin分子数之间比较无统计学差异(P>0.05),而女性供血者血浆中sP-selectin含量明显高于男性(P<0.05)。结论 在相同刺激因素影响下,女性供血者之血小板更易释放sP-selectin,因此在应用sP-selectin作为浓缩血小板质控指标及临床疾病的诊断时,应考虑供血者性别差异。     

血小板输注无效患者的血小板抗体筛查与配合性输注

目的分析血小板输注无效（PTR）的主要原因,为患者选择适用的血小板,用以提高输注疗效。方法对多次输血患者于输血前后监测血小板计数值,并计算1h和24h血小板增高指数（CCI值）,对判断为血小板输注无效者,采用简易致敏血小板血清学技术（SEPSA）进行血小板抗体筛查,并进行血小板交叉配型,对配合性输注效果进行分析。结果278例多次输血患者发生PTR共88例（31．7％）;88例PTR患者中血小板抗体阳性67例（76．1％）;67例抗体阳性患者,血小板交叉配型成功37例,血小板输注有效32例,有效率达86．5％。结论血小板抗体的产生是导致血小板输注无效的主要免疫性因素,血小板配合性输注能显著提高血小板输注效果。     

The clinical characteristics of patients with acute leukemia or stem cell transplantation exhibiting immune based platelet refractoriness

BackgroundTo investigate the related factors influencing immune platelet transfusion refractoriness (PTR) in acute leukemia (AL) from induction to consolidation and compare management for immune PTR, so as to improve the Platelet increment in AL.MethodsThe primary analysis included 890 patients with AL, 225 of whom were the immune PTR (25 %).They are patients in our center from induction to consolidation or transplantation in the past 10 years. Flow cytometry, karyotype characteristics and other basic information were compared between the immune PTR vs control (no-PTR) groups. We analyzed the treatment outcomes of immune PTR including matched platelets, intravenous immunoglobulin (IVIG), increasing apheresis platelet does. Results: Immune PTR is more likely to occur in patients with poor prognosis in acute lymphoblastic leukemia (ALL) (P = 0.01).There is a relation between NPM1 mutation and occurrence of immune PTR (P = 0.029).The incidence of PTR at 35-59Y was higher than that at <35Y(OR = 0.68, 95 % CI = 0.48-0.96) and ≥60Y(OR = 0.49,95 % CI = 0.28-0.83), and the difference was statistically significant(P = 0.03, P = 0.01).The Platelet increment with 1 unit (u) was 47.12 %, 2 u increased to 71.14 %, and the matched 2 u (75.11 %) had the best effect. IVIG improved the Platelet increment, but there was no difference between 0.4 g/kg IVIG and 1 g/kg IVIG. Immune PTR is more likely to occur in the ages of 35–60 years.ConclusionThere are specific AL patient characteristics which predispose to the phenomenon of immune based PTR. Meanwhile, increasing the IVIG dose could not improve Platelet increment obviously.     

HPA配型在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的探讨以HPA配型解决免疫性血小板输注无效的方案。方法 1)建立PCR-SSP方法检测HPA-1～5基因型检测方法,建立机采血小板供者库;2)采用微柱凝胶法和Capture-P法对32名血小板输血无效患者作血小板同种抗体筛查,并对2种方法比较;3)对血小板同种抗体筛查阳性患者采用已知HPA基因型的标准谱血小板作抗体鉴定并采取HPA基因型同型输注的原则寻找供者。结果 1)采用PCR-SSP方法成功检测出HPA-1～5基因型,并对1 000名血小板供者的HPA-1～5基因型定型;2)32例血小板输注无效病例中,微柱凝胶法检测血小板同种抗体阳性率为50%,Capture-P法血小板抗体阳性检出率为40%;3)32例血小板输血无效病例中2种方法同时血小板抗体阳性13例,其中2例鉴定为抗-HPA,分别为抗-HPA-5b(P=1/84)、抗-HPA-1a(P=1/55)。结论对抗-HPA引起的血小板输注无效患者采用HPA基因型相合的方法寻找供者是有效的。