PCR检测乙肝病人肝组织和血中HBVDNA

有用聚合酶链反庆（ＰＣＲ）结合地高辛素标记的乙肝病毒ＤＮＡ探针（ＨＢＶＤＮＡ－Ｄｉｇ）杂交技术检测了４９例乙型肝炎患者的肝组织标本和４６份血清标本中的ＨＢＶＤＮＡ。结果表明：ＰＣＲ检出乙肝病人肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率比为杂交高（Ｐ〈０．０５）。在２１例同时检测了肝组织和血清中ＨＢＶＤＮＡ的病人中，肝组织ＨＢＶＤＮＡ一率为５７．１％；血清阳性率为６１．３％；两者总阳性率为８０．９％，说明ＰＣ     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

慢性HBV感染血清HBV DNA五项指标及肝病理之间的相关性分析

用ＰＣＲ检测了ＨＢＶ标志不同状态１０２例，均经肝活检诊断，其中慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）７４例，慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）２１例，肝组织正常７例。结果：ＨＢｓＡｇ阳性率ＣＡＨ为８５．７％，显著高于ＣＰＨ４７．３％（Ｐ〈０．０１）；抗－ＨＢｓ阳性率ＣＰＨ为１８．９％，明显高于ＣＡＨ４．７％。ＰＣＲ血清ＨＢＶ ＤＮＡ总阳性率分别为ＣＰＨ８３．８％、ＣＡＨ８５．７％。在抗－ＨＢｅ阳性的血清ＨＢＶ ＤＮＡ检出     

应用聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液中的乙肝病毒

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了４５例肺科病人的支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中乙肝病毒（ＨＢＶ），同时对其中２４例作血清ＨＢＶ检测，发现ＢＡＬＦ中ＨＢＶ阳性率为２６．６７％（１２／４５）、血清ＨＢＶ阳性率为４１．６７％（１０／２４）；血清ＨＢＶ阳性者其ＢＡＬＦ方有可能检出ＨＢＶ、血清ＨＢＶ阴性者其ＢＡＬＦ不能检出ＨＢＶ，ＢＡＬＦ中ＨＢＶ脱氧核糖核酸（ＨＢＶ－ＤＮＡ）可以复制、有传染性。     

聚合酶链反应检测脐血及乳汁中乙型肝炎病毒DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对乙肝病毒（ＨＢＶ）血清学指标一项或多项阳性的产妇检测其脐血及乳汁中乙肝病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ－ＤＮＡ）。３１名产妇共采集脐血标本２０份，乳汁标本３１份，有脐血标本者同时有乳汁标本，另１１人仅有乳汁标准。检测结果：脐血中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性８例，阳性率４０％；乳汁标本中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１１例，阳性率３５．５％；脐血、乳汁双阳性４例，占２０％。其中抗原阳性组检出率脐血     

乙型病毒性肝炎的基因诊断

对１２０例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ用ＰＣＲ技术进行检测，结果表明，ＰＣＲ法的敏感性阳性检出率７５．８％，明显高于ＥＬＩＳＡ法（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＣＡｂ）的阳性率分别为６１％、３８％和６２％）；ＰＣＲ检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢＡｂ一血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为２６％、５２％和２４％，ＰＣＲ检测三者均为阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为１００％慢性迁延肝炎、慢性活动性肝炎     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关，而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

聚合酶链反应检测重型肝炎患者血清HBVDNA

采用ＰＣＲ法检测４８例重型肝炎患者血清中ＢＨＶＤＮＡ存在情况，并与斑点杂交检测进行比较，结果表明：ＰＣＲ检测３９例阳性，检出率为８１．３％（３９／４８）．ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）组ＰＣＲ检测均阳性（８／８），ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（－）组阳性率为８８．０％（２２／２５），抗体阳性组检出率为７２．７％（８／１１），检测灵敏度为１．０ｆｇ；斑点杂交检测１５例阳性，阳性率３０．２％（１５／４８），各组斑点杂交阳性率均低于ＰＣＲ法．提示：（１）大多数重型肝炎患者血清中存在低滴度的病毒颗粒，对重肝发病有一定作用；（２）大部分ＨＢｅＡｇ阴性，抗体阳性的重型肝炎患者血清仍有传染性，应考虑抗病毒治疗．     

HBV逆转录酶mRNA在乙型病毒性肝炎病人 PBMCs中的表达

①目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）逆转录酶mRNA在乙型病毒性肝炎病人外周血单个核细胞（PMBCs）中的表达及临床意义。②方法 选择30例乙型病毒性肝炎病人，分别提取其PMCs中的总RNA，逆转录合成cDNA，设计引物进行PCR扩增以检测HBV逆转录酶mRNA的表达情况。③结果 30例乙型病毒性肝炎病人PBMCs中HBV逆转录酶mRNA的表达阳性率为13.3%（4 /30),慢性乙型病毒性肝炎病人表达阳性率为16.0%（4/25），其中慢性轻度，中度和重度乙型病毒性肝炎病人表达的阳性率分别为11.1%（1/9）、16.7%(1/6)、20.0%(2/10)，5例急性乙型病毒性肝炎病人表达均阴性。④结论 HBV逆转录酶mRNA在PBMCs中的表达与乙型病毒性肝炎的慢性及重症化有关。     

乙型肝炎患者血清丁型肝炎病毒标志的研究

目的 研究ＨＤＶ重叠ＨＢＶ感染对乙型肝炎患者病情和血清学指标的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＤＶ血清标志ＨＤＡｇ、抗ＨＤ、抗ＨＤＩｇＭ和ＨＢＶ血清标志ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｃ、抗ＨＢｃｌｇＭ,ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 ３１６例乙型病毒性肝炎中６０例重叠ＨＤＶ感染,重叠感染率为１８．９８％;ＣＨ和ＦＨ组ＨＤＶ感染率显著高于ＡＨ,ＦＨ组ＨＤＶ复制指标阳性率显著高于ＣＨ及ＡＨ     

乙型肝炎病毒DNA聚合酶活力测定及临床意义

采用特异性免疫沉淀法检测血清中HBV DNAP活力216例,结果:HBeAg和抗-HBcIgM阳性组的HBV DNAP检出率和活力水平明显高于阴性组(P<0.01);且随HBsAg的滴度升高而升高。在各类乙型肝炎病人中DNAP检出率依次为;重症肝炎和急性肝炎>肝硬化和慢性潘动性肝炎>慢性迁延性肝炎和携带者。抗-HBe阳性组和HBeAg、抗-HBe均阴性组各有25％、54.71％可测到DNAP活力。证明HBV DNAP活力测定是乙型肝炎早期诊断、病毒在体内复制及是否具有传染性的灵敏指标。     

地高辛标记寡核苷酸探针对慢性乙肝患者前C基因突变的检测

目的　研究慢性乙肝患者乙肝病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变情况。方法　用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针Ｍ０（野毒株）、Ｍ１（１８９８位变异株）、Ｍ２（１８９８／１９０１位变异株）对１６５例慢性乙肝患者前Ｃ区突变情况进行检测。结果　其中１２例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（＋）,抗ＨＢｅ（－）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１００％,突变株检出率为８．３％。１５３例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（－）,抗ＨＢｅ（＋）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为１６．３％,突变株总检出率为８４％。结论　前Ｃ基因突变株主要存在于抗ＨＢｅ阳性的慢性乙肝患者体内,ＰＣＲ结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术,操作简便快捷,利于临床推广应用。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

成人病毒性肝炎患者柯萨奇病毒感染研究

目的 :探讨成人病毒性肝炎患者中柯萨奇病毒B组 (CoxsackievirusB ,CVB)散发性感染状况。方法 :用ELISA法测定病毒性肝炎患者血清中抗CVB -IgM抗体 ,同时应用荧光定量PCR方法测定HBVDNA及HCVRNA含量。结果 :4 5 7例病毒性肝炎患者中抗CVB -IgM阳性 13例 ,其中CVB单独感染者 1例。CVB感染组与阴性对照组在临床表现、肝功能试验、HBVDNA含量等方面相比无明显差异。结论 :病毒性肝炎患者中CVB感染率为 2 .84 % ,其肝炎病原学意义有待进一步研究     

原发性肝细胞癌中乙型肝炎病毒基因整合的突变分析

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)整合序列中基本核心区突变与乙肝病毒相关肝癌发生的相关性。方法应用Alu-PCR和基于接头的LM-PCR方法扩增40对乙肝相关性肝癌组织和配对癌旁组织中整合的HBV序列,PCR产物纯化后以ABI公司3700测序仪进行全自动测序,测序结果使用Pub Med BLAST软件和Bio Edit软件进行分析。结果 65.0%的肝癌组织检测到整合HBV病毒序列(26/40),共检出37个不同的HBV整合序列。67.5%的癌旁组织中检测到整合HBV病毒(27/40),共检出68个不同的整合序列。平均每例肝癌组织中HBV整合序列检出数为1.42个,而癌旁组织为2.52个,癌组织低于癌旁组织。整合HBV序列发生A1762T/G1764A双突变在肝癌中的检出率高于癌旁组织,差异无统计学意义。结论 HBV感染相关肝癌组织及癌旁组织中都检测到整合HBV序列,再次表明整合是肝癌发生中的一个早期事件;而肝癌组织中整合HBV序列有更高的A1762T/G1764A突变检出率,从一个新的侧面表明这些突变在病毒的致癌过程中具有重要作用。     

达乌尔黄鼠类乙型肝炎的初步研究

通过对中国北方达乌尔黄鼠的免疫血清学、血清电镜及肝脏的免疫组化检查,发现部分黄鼠自然感染类乙型肝炎病毒—即达乌尔黄鼠肝炎病毒(GSdHV)。该病毒与人的乙型肝炎病毒的表面抗原和核心抗体有交叉反应,与人的乙型肝炎病毒的DNA可以杂交,提示两者核酸有同源序列存在。用人的乙型肝炎试剂盒染色,部分黄鼠肝细胞显示表面抗原阳性,说明病毒在肝脏内复制。在有明显肝脏病变的黄鼠中,69.2％的黄鼠血清为GSdHV阳性,其部分肝脏病变与人的乙型肝炎相似,故认为:GSdHV可能为此肝炎的病因。然而70.6％GSdHV血清阳性的黄鼠,其肝脏未见病变,表明多数黄鼠为病毒携带状态。