卵母细胞双电极电压钳技术的建立及其记录到的内源性外向电流*

目的：建立卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法：建立双电极电压钳技术平台，并应用此平台，在去除滤泡膜的中国四川牛蛙卵母细胞上，记录内源性的外向离子电流。结果：卵母细胞孵育在正常ND96溶液中，将细胞膜钳制在-80 mV膜电位，给予一系列的去极化刺激可诱发出一个外向电流。在细胞外液中加入10 mM的TEA可阻断该电流80%以上，洗脱后电流幅值恢复至90%左右。将正常ND96溶液替换为无钙ND96溶液后，电流没有变化。结论：成功建立了卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在牛蛙卵母细胞上诱发出的外向电流为钾电流。     

微电极操作过程的电脑控制系统

为实现电生理实验过程的“智能化”,作者设计了“微电极操作过程的电脑控制系统”。其硬件主要为Apple-Ⅱ微机系统及6522VIA。应用软件由主程序和三个子程序构成。经实验表明,本系统具有较高的准确度和效率。     

微电极阵列技术的应用

微电极陈列（MEA）系统适用于培养多种组织系统,包括分离的神经细胞、视网膜、心肌细胞、干细胞、有机培养物和急性分离脑片等。在MEA培养皿上,可以同时记录和刺激多个位点,这大大地扩展了研究的视野,同时又保持了对单细胞的准确记录。在基础生物学和医疗诊断等研究中广泛得到越来越重要的应用。     

利用双电极电压钳检测rs12899798单核苷酸多态性对α7烟碱受体功能的影响

目的 检测α7烟碱受体（α7 nicotinic receptor,nAChR）的一个错义突变（W55G）对受体功能的影响。方法 利用双电极电压钳在非洲爪蟾卵母细胞检测了突变体W55G的功能。首先将nAChR α7亚基的cDNA克隆进入pGEMHE载体中,利用定点突变的方法构建突变体W55G。然后在体外利用T7 RNA聚合酶合成cRNA,并利用显微注射的方法将cRNA注射进入非洲爪蟾卵母细胞中。1~3 d后,利用双电极电压钳检测野生型nAChR α7及其突变体W55G的功能。结果 W55G突变体对乙酰胆碱敏感性降低约6倍,但最大电流（I_max）则显著增加;对胆碱的敏感性降低了约3倍。此外,W55G突变体明显比野生nAChR有更高的时间常数,明显降低了α7烟碱受体的脱敏速率。结论 nAChR α7 突变体功能的改变可能重塑突触后反应,对于脑疾病的发生可能会有较大影响。     

二步式玻璃微电极拉制仪的研制

二步式玻璃微电极拉制仪的研制王士端，胡宏镇，沈杰同济医科大学实验医学研究中心生物医学工程研究室，武汉４３００３０关键词膜片钳；微电极；控制仪中图法分类号Ｒ７６４．９膜片钳技术是目前进行生物医学研究的重要手段之一，近年来在我国的一些实验室已陆续开展起来...     

脑片灌流盒精密恒温控制仪的研制

标本识流富精密恒温控制仪在电生理实验中对生物标本进行恒温控制，提供生物标本生存的温度环境。在生物标本的电生理记录中，特别是细胞内电活动及离子活度的检测，所使用的玻璃微电极及离子选择电极阻抗相当高，与之匹配的放大器输入阻抗达到10”n。由于对交流电和杂波的于扰十分敏感，生物标本和高阻抗输入探头，必须放在接地可靠的屏蔽柜内工作，以防止交流电和电磁杂波对生物记录的影响。对与之配套的恒湿仪除满足精密恒湿仪的各项技术指标外，还提出了特殊的要求，一方面恒温仪本身不能产生干扰波．如出现脉冲波、继电器的电火花等，…     

八肽胆囊收缩素对抗电针对痛反应神经元放电的影响

本文研完结果表明,电针可抑制痛兴奋神经元(PEN)和兴奋痛抑制神经元(PIN)的电活动。脑室注射八肽胆囊收缩素(CCK-8)能取消电针引起的上述PEN和PIN的放电变化,而无硫CCK-8则对上述针刺作用没有影响。脑室注射CCK-8还可同时对抗电针对一个PEN放电的抑制作用和一个PIN放电的兴奋作用,而无硫CCK-8则无此作用。     

微电极阵列芯片技术研究不同发育阶段C57小鼠心肌细胞的电生理特性

目的:微电极阵列芯片技术研究不同发育阶段C57小鼠心肌细胞的电生理特性。方法:分离13.5~19.5 d胎鼠和2 d乳鼠的心室肌细胞并培养于微电极阵列(Microelectrode arrays,MEA)电极盘中48 h,通过倒置相差显微镜,透射电镜、扫描电镜观察其形态,免疫组化鉴定并用MEA技术研究其电生理特性。并对生后1、7、14、21、28、35、>60 d的意识清醒未麻醉的小鼠行心电图(Electrocardiogram,ECG)和心率变异性(Heart rate variability,HRV)记录。结果:胎鼠心室肌细胞场电位时程(Field poten-tial duration,FPd)随发育而增加(P<0.01),乳鼠的突然明显缩短(P<0.01)。胎鼠心室肌细胞的搏动频率随发育而减慢。出生后小鼠的心律是窦性心律,平均PR、RR、QRS、QT、JT间期随发育逐渐缩短,7 d组比1 d组减少的差异有统计学意义(P<0.01),而14、21、28、35和>60 d之间差异无统计学意义。J-S-T段在1 d小鼠明显抬高,7 d组和14 d组逐渐降低,到35 d则基本回到基线。HRV随发育逐渐增加。结...     

细胞外Li+对双基因内向整流钾通道的作用机制

目的 研究Li^ 对非洲爪蟾卵母细胞表达的双基因内向整流钾通道（IRK1-T）的作用及其机制。方法 采用双微电极电压钳（TEV）法。结果 细胞外K^|浓度为10mmol.L^-1时,细胞外Li^ 可加速IRK1-T内向电流的失活过程;3个指数拟合的分析结果表明：由于细胞外Li^ 对失活过程的时间常数几乎无影响。因此Li^ 对失活过程的作用是通过Li^ 与K^ 在IRK1-T上相互竞争同一结合位点而造成的。细胞外Li^ 对IRK1-T的瞬间内向电流（施加电压后1ms)具有时间依赖性和电压依赖性的易化作用。增加细胞外K^ 浓度与Li^ 浓度的比率,这一易化作用增强,表明Li^ 加速IRK1-T内向电流的失活过程的作用因Li^ 后反转电位几乎不变,所以IRK1-T对Li^ 不通透。结论 Li^ 不仅是一快速通道阻断剂,而且细胞外Li^ 还可以在增大IRK1-T的内向整流作用的同时缩短该电流的时程。     

利用电压钳技术初步研究抗菌肽抗菌机制

目的为了证实电压钳技术测得的电流变化能说明诱导的昆虫离体细胞Tn-5B1产生的抗菌活性肽类物质的抗菌机制。方法将制备的抗菌肽作用于去掉滤泡膜的爪蟾卵母细胞,利用电压钳技术记录的电流研究抗菌肽抗菌机制。结果去掉滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞可作为模式细胞研究离子通道,抗菌肽作用于爪蟾卵母细胞14 min后,检测到了电流的变化,而且表现为外向电流持续升高。结论细胞经抗菌肽作用后产生了离子通道,此离子通道使得阳离子外流,初步证实该抗菌肽通过破坏坏细菌细胞来达到杀菌目的 。     

膜片钳技术研究中钙耐受的心室肌细胞分离方法

目的：探索并建立适合于膜片技术研究的心室肌细胞急性酶分离方法。方法：采用改进的自制的Langendorff心脏灌流系统,用无钙Tyrode液和酶解液逆行主动脉灌流之后,分次剪取心肌组织置于细胞保存液（KB液）中保存以供全细胞膜片钳方式记录膜电位和膜电流。结果：分离所得80%-90%的细胞呈杆状,边缘清楚,表面光滑,纹理清晰,可记录到典型的动作电位。结论：控制好分离心室肌细胞的实验条件以及熟练掌握实验操作的方法,是分离出适合于膜片钳实验的心室肌细胞的重要因素。     

基于标准YY0505-2012的监护类医疗器械患者耦合电缆传导抗扰度测试方法分析

射频场感应的传导骚扰抗扰度试验是医用电气设备的一项重要检验项目,基于YY 0505-2012对GB/T 17626.6中条款进行的修改和补充,本文旨在研究传导抗扰度试验中监护类医疗器械患者耦合电缆单根试验布置和成束试验布置的差异,为患者耦合电缆传导抗扰度试验探究可靠的试验布置方法。文中对传导骚扰抗扰度试验的标准和原理作了概述,分别对监护类医疗器械患者耦合电缆的单根试验布置和成束试验布置进行传导抗扰度测试,文中所选受试设备在两种测试布置状态下均出现不能通过测试的结果,测试现象存在差异。通过对两种试验布置结果进行分析和总结,综合考虑临床使用的风险性和试验结论的可靠性,本文建议监护类医疗器械的患者耦合电缆在传导抗扰度试验时两种试验布置均要进行测试,以确保患者耦合电缆在最不利的状态下试验。本文通过试验数据的分析和总结,为患者耦合电缆的传导抗扰度试验布置方法提供了规范性参考。     

跨上皮电位差对蛙直肠上皮顶膜氯通道的作用

氯离子跨紧密上皮转运主要采取细胞通路,其转运调控的关键部位是上皮细胞顶膜氯通道。应用上皮电压钳技术、高钾除极化技术和Ｕｓｓｉｎｇ上皮组织灌流系统结合测定氯离子通量,观察跨上皮电位差对氯离子跨蛙直肠上皮转运的影响。实验结果表明跨上皮电位差对氯离子跨蛙直肠上皮吸收是必不可少的。跨上皮电位差作为转运驱动力外,还能激活蛙直肠上皮细胞顶膜的氯通道。     

正己烷接触者神经电生理检测研究

目的：探讨神经电生理检查对早期发现正己烷接触亚临床患者神经系统损害的作用。方法：对26例正己烷接触者及26例正常对照者进行神经传导及针电极肌电图检测,每位受检者均常规检测四肢周围神经,包括运动神经传导（CMAP）、感觉神经传导（SNAP）、针电极肌电图（EMG）。结果：神经传导检测中正己烷接触者左尺神经CMAP、SNAP波幅均较正常对照组降低;右正中神经、双侧尺神经、腓肠神经SNAP速度均减慢,差异均有统计学意义;EMG中正己烷接触者组肢体远端肌均可见高波幅运动单位,近端所检肌运动单位形态基本正常。结论：神经电生理检查可以早期发现正己烷对神经系统的损害,对临床及时应用药物干预及治疗以提高患者生活质量有重要指导作用及意义。     

微波技术在肝切除的应用（附70例报告）

应用WBD—Ⅰ、Ⅱ型微波刀行肝切除70例,微波刀有良好的组织凝固及止血性能,术中失血量较传统切肝方法明显减少,平均每例失血量249ml,输血量295ml,30例术中不需输血。全组无手术并发症及死亡。详细介绍了手术操作方法及注意事项,对微波刀的工作原理及操作过程中的一些问题进行讨论。     

食管信号平均窦房结电图在部队伤病员中的应用

探讨无创性经食管信号平均直接记录窦房结电图（SNE）的技术.在8只犬进行了系列实验研究的基础上,又对1289例食管电生理检查窦房结传导时间（SACT）和窦房结恢复时间（SNRT）均在正常范围的部队伤病员,男968例、女321例,年龄47.6±12.6（10-86）岁进行检测,其中256例进行了心内有创SNE的记录.采用自制三导心电微电位检测仪将食管导联的信号放大（增益达到100uV/cm）、滤波（0.1-50Hz）,16位模/数（ND）转换,系统采样频率2 kHz,对信号进行叠加,1108例（86%）记录到食管SNE.所测信号平均食管SNE为P波前的低幅、低频波,可见有两种形态：园顶型（62%）和上斜型（38%）.所测窦房传导时间为83.6±26.5 ms,与有创心导管记录的窦房结传导时间（80.4±18.1 ms）相一致,分布范围为23-118ms;波幅为3.5-27.7uV;dv/dt为0.43-1.93mV/s.结论为在适当的滤波、高增益和抗基线漂移技术条件下,利用经食管信号叠加技术,大多数窦房结功能正常的患者可直接记录到食管SNE.     

浅谈如何正确运用课堂语言

课堂语言是既不同于口头语言又不同于书面语言的一种特殊语言形式，本从课堂教学的实际出发，谈一谈如何正确运用课堂语言，来达到较好的教学效果。