基质金属蛋白酶-3在病毒性心肌炎中的表达及福辛普利的干预作用

目的探讨基质金属蛋白酶-3(MMP-3)在病毒性心肌炎(VM)小鼠中的表达及福辛普利的干预作用。方法鼠龄4~6周Balb/c纯种雄性小鼠57只随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、假干预组(C组)、福辛普利组(D组)。B~D组小鼠腹腔接种0.1mL柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VM模型。C、D组于注射CVB324h后分别予生理盐水、福辛普利灌胃治疗,d14断颈处死小鼠,心脏石蜡切片HE染色计算病理积分,免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-3mRNA表达。结果B、C组心肌MMP-3表达显著上调,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原增生显著与A组比较(P<0.05);D组心肌MMP-3表达显著下调,与B组比较心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原增生显著减少(P<0.05)。结论MMP-3参与VM小鼠病理过程,福辛普利能明显下调MMP-3mRNA表达,显著减少心肌胶原增生。     

基质金属蛋白酶对新生鼠窒息后心肌重塑的影响

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织基质金属蛋白酶(MMPs)表达对心肌重塑的影响。方法将7~10日龄Wistar小鼠60只,随机分成窒息A、B、C 3组(分别为窒息复氧后1、7、14 d,各组15只)、对照组(D组,n=15)。模拟新生鼠常压窒息模型。免疫组织化学法测定心肌组织MMP-3、MMP-9活性;氯胺T法测定心肌胶原水平。结果心肌组织MMP-3活性为一过性增高,以B组最高(P<0.05),且MMP-3活性表达早于MMP-9;MMP-9活性窒息后逐渐增高(P<0.05);心肌胶原水平窒息后逐渐增高,d14时最高;MMP-3、MMP-9与胶原水平呈正相关(r=0.482,0.679 P均<0.05)。结论新生鼠窒息后心肌MMP-3、MMP-9激活,继发胶原水平增高,可能是导致心肌间质重塑的因素之一。     

病毒性心肌炎小鼠心肌基质金属蛋白酶-9的动态变化及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在病毒性心肌炎（VMC）小鼠发病过程中的动态变化及意义。方法：以柯萨奇病毒 B3 感染 BALB/C 小鼠建立 VMC 模型,腹腔注射 0.1 mL不含病毒的培养液的小鼠作为对照组。造模后 7 d、14 d、21 d、28 d取心肌组织作石蜡切片,行苏木精-伊红和 Masson 染色观察病理改变,免疫组化（SABC法）检测心肌MMP-9及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达。结果：模型组 MMP-9 于 7 d 可见表达,14 d 达高峰（P<0.05）,各时间点 MMP-9 表达均高于对照组（P<0.05）;Ⅰ型胶原于 21 d 表达上调,28 d 表达最高（P<0.05）,21 d 和 28 d 表达高于对照组（P<0.05）;Ⅲ 型胶原于28 d 表达上调并高于对照组（P<0.05）;MMP-9 与心肌病理积分呈正相关（r=0.832,P<0.05）,与 Ⅰ 型胶原呈负相关（r=-0.791,P<0.05）。结论：VMC 小鼠心肌 MMP-9 在早期即表达增高;MMP-9 可能通过介导 Ⅰ 型胶原的降解代谢而参与 VMC 的病理过程,是导致 VMC 胶原重构和心肌纤维化的重要因素之一。     

基质金属蛋白酶活性与新生鼠窒息后心肌损害的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶3、9(MMP-3、MMP-9)与新生鼠窒息后心肌损害的相关关系。方法建立新生鼠常压窒息模型,观察心肌组织病理改变、免疫组化法测定心肌组织MMP-3、 MMP-9的活性及氯胺T法测定心肌胶原含量。结果窒息后心肌组织MMP-3、MMP-9的活性表达较对照组明显增高(P均<0．05),MMP-3活性以7 d时为最高,MMP-9的活性则逐渐增高。窒息组心肌胶原含量于7、14 d逐渐增高(P均<0．05)。MMP-3、MMP-9的表达与心肌病理积分、胶原含量均呈正相关(P均<0．05)。结论新生鼠窒息后心肌组织MMP-3和MMP-9被激活,与心肌病理损害密切相关,继发胶原含量增高,可能是导致心肌间质的重构、影响心功能的因素之一。     

基质金属蛋白酶活性与新生鼠窒息后心肌损害的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶3、9（MMP-3、MMP-9）与新生鼠窒息后心肌损害的相关关系。方法建立新生鼠常压窒息模型，观察心肌组织病理改变、免疫组化法测定心肌组织MMP-3、MMP-9的活性及氯胺T法测定心肌胶原含量。结果窒息后心肌组织MMP-3、MMP-9的活性表达较对照组明显增高（P均〈0．05），MMP-3活性以7d时为最高，MMP-9的活性则逐渐增高。窒息组心肌胶原含量于7、14d逐渐增高（P均〈0．05）。MMP-3、MMP-9的表达与心肌病理积分、胶原含量均呈正相关（P均〈0．05）。结论新生鼠窒息后心肌组织MMP-3和MMP-9被激活，与心肌病理损害密切相关，继发胶原含量增高，可能是导致心肌间质的重构、影响心功能的因素之一。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶B mRNA表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)mRNA表达的影响。方法Balb/c小鼠100只随机分为6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1mL灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为VM对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预VM组,分别以生理盐水、1%、3%、9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT-PCR半定量检测心肌CBmRNA表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20)vs45%(9/20),χ2=6.14P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组比较CBmRNA表达水平及心肌病变积分在F组显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对VM小鼠CBmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制CB表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

单核细胞趋化蛋白-1在病毒性心肌炎小鼠心肌中表达及意义

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在实验性小鼠病毒性心肌炎(VM)发病中的作用。方法 80只小鼠随机分为2组,VM组(n=70)腹腔接种0.1 ml柯萨基病毒B3(CVB3)建立VM动物模型;对照组(n=10)腹腔接种0.1 ml Eagle's液。VM组于接种后3、7、15、30 d处死,对照组于30 d处死,采用RT-PCR、免疫组织化学染色检测心肌MCP-1 mRNA及蛋白表达,HE染色检查心肌病理变化,并对MCP-1蛋白表达与心肌病变积分进行相关性分析。结果 VM组各时点心肌MCP-1 mRNA及蛋白表达均显著高于对照组(P0.05或0.01),MCP蛋白表达与心肌病变积分呈正相关(r=0.76,P0.05)。结论 MCP-1过度表达可能在VM发病机制中起重要作用。     

基质金属蛋白酶在小鼠病毒性心肌炎中的表达及肾素-血管紧张素系统阻断后的变化

目的探讨基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在病毒性心肌炎（VM）小鼠中的作用及肾素一血管紧张素系统抑制剂（RASI）的治疗效果。方法100只Balb／c小鼠随机分为对照组（A组）、模型组（B组）、假干预组（C组）、福辛普利组（D组）和缬沙坦组（E组）5组,每组20只。B～E组小鼠腹腔接种0．1ml的柯萨奇病毒B3（CVB3）悬液建立VM模型,A组腹腔注射不含CVB3的0．1mlHep-2细胞冻溶液作对照组。C组、D组及E组于注射CVB324h后分别予生理盐水、福辛普利、缬沙坦灌胃,第14天处死小鼠,心脏切片HE染色计算病理积分,氯氨T法测定心肌胶原含量,RT—PCR法检测心肌MMP．3、TIMP-1mRNA的表达。结果与A组比较,B组、C组心肌MMP-3表达明显上调,TIMP-1表达明显下调,心肌胶原含量显著增高（P均〈0．05）;与B组比较,D组、E组心肌MMP-3表达明显下调,TIMP-1表达明显上调,心肌胶原含量显著减少（P均〈0．05）。结论MMP-3／TIMP-1参与VM小鼠的心肌病理过程,可能是导致心肌胶原重构的重要因素之一。福辛普利及缬沙坦能明显下调MMP-3的表达、上调TIMP-1的表达,逆转心肌胶原重构。     

天麻对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞保护作用的研究

目的 研究天麻对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞的保护作用.方法 将Balb/c小鼠分为正常对照组,VMC对照组,天麻低、中、高干预组共5组,分析各组小鼠生存率、心肌病理积分以及脑钠肽(BNP)、超声主动脉血流峰值流速(Vp)、主动脉流速积分(Vi)等心功能指标.结果 高剂量天麻干预组与VMC对照组相比,小鼠死亡率明显降低,病理积分、BNP、Vp、Vi等指标的差异均有统计学意义(P均＜ 0.05),而中、低剂量组与VMC对照组相比,上述指标差异均无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 天麻对VMC小鼠心肌细胞有保护作用.     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌柯萨奇病毒受体基因表达的影响

目的　探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎 (VM)小鼠心肌柯萨奇 腺病毒受体 (CAR)基因表达影响。方法　Balb/c小鼠 1 0 0只 ,分为 6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液 ,分为正常对照组 (A组 ,1 0只 ,以羧甲基纤维素钠 0 .1mL灌胃 7d)、9%黄芪甲甙对照组 (B组 ,1 0只 ,9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d) ;余 80只小鼠以柯萨奇病毒 (CVB3)腹腔无菌注射制作病毒性心肌炎模型 ,VM小鼠随机分为心肌炎对照组和 1 %、3 %、9%黄芪甲甙干预心肌炎组 ,分别以生理盐水、1 %、3 %、9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d(分别为C、D、E、F组 ,每组 2 0只 )。 1 4d后处死一小部分鼠并取其心脏。采用RT PCR检测心肌CARmRNA表达水平。结果　F组小鼠死亡率较C组明显降低 (1 0 %与 45 %比较 ) ,(χ2 =6 .1 4　P <0 .0 5) ,B组无小鼠死亡 ;与C组相比较 ,CARmRNA表达水平以心肌病变积分在F组显著下降 ,而 1 %、3 %黄芪甲甙对心肌炎小鼠CARmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论　 9%黄芪甲甙可抑制CAR表达 ,提高心肌炎小鼠生存率 ,减轻心肌损害 ,安全有效 ,对VM有良好的治疗作用。     

新生鼠窒息后心肌基质金属蛋白酶活性与心肌损害的相关性

目的探讨新生鼠窒息后心肌组织心肌基质金属蛋白酶（MMPs）表达与心肌损害的相关性。方法60只7—10日龄Wistar鼠,随机分成对照组（D组）、窒息组（A、B、C3组,分别为窒息复氧后1、7、14d）,每组15只。窒息组模拟新生鼠常压窒息模型,测定cTnI水平;心肌组织MMPs-3、9活性;心肌病理积分及胶原含量。结果cTnI（ng／m1）A组（0．3680±0．40）明显高于D组（0．0783±0．06）P〈0．05,B组下降（0．1889-i-0．15）P仍〈0．05,C组降至正常（0．1338±0．07）P〉0．05;心肌组织MMPs-3活性A组（0．1847±0．04）,B组最高（O．2780±0．05）,C组（0．2014±0．05）,与D组（0．1213±0．03）比较P均〈0．05;MMPs-9活性A、B、C组逐渐增高（0．1502±0．01、0．1715±0．01、0．1868±0．03、P均〈0．05）;心肌胶原含量A、B、C组逐渐增高（35．59±1．09、38．94±0．67、40．69±0．75ng／ml分别为P〉0．05、P〈0．05、P〈0．05）;MMPs-3、9表达与心肌病理积分呈正相关（r分别为0．669、0．667,P均〈0．05）,与胶原含量呈正相关（r分别为0．482、0．679,P均〈0．05）。结论新生鼠窒息后心肌MMPs-3、9过度激活,继发胶原含量增高,MMPs-3、9活性与心肌病理损害密切相关。提示MMPs参与了窒息后心肌损害,可能是心肌间质重塑的因素之一。     

Bcl-2和Bax基因产物在小鼠柯萨奇病毒性心肌炎心肌组织中的表达

目的　探讨Bc1 2和Bax基因在病毒性心肌炎进展中的作用。方法　柯萨奇病毒B3 (CVB3 )感染12 5只雄性Balb/c小鼠 ,分别于d7、10、14、2 1、2 8随机取 2 0只实验组小鼠和 5只对照组小鼠处死 ,采用免疫组织化学方法检测CVB3 病毒性心肌炎小鼠不同时期心肌组织中Bcl 2和Bax蛋白表达情况。结果　病毒性心肌炎发病率为 86 % ,其中 80 %小鼠为轻、中度病变。正常对照组心肌中 ,无Bc1 2蛋白表达。在实验组中Bc1 2蛋白表达的动态变化与心肌病变积分呈显著正相关 (r =0 .93　P <0 .0 1) ,感染后 7～ 14d ,实验组小鼠心肌组织中Bax蛋白表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 )。少数心肌浸润淋巴细胞表达Bc1 2和Bax。结论　Bc1 2和Bax基因参与病毒性心肌炎细胞凋亡的调控。     

谷氨酰胺对脓毒症幼年大鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响

目的 探讨谷氨酰胺对脓毒症大鼠心肌胶原的保护机制。方法 选健康18日龄Wistar大鼠121只,每个时间点随机取11只按腹腔注射药物不同分为：（1）生理盐水对照组（0h）;（2）内毒素（LPS）;（3）谷氨酰胺治疗（Gln）组。后两组又分为2、4、6、24及72h时点。在各时点分离心脏,8只用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定基质金属蛋白酶组织抑制因子3（TIMP-3）mRNA表达,另3只用于石蜡切片,用免疫组化方法测定金属心肌基质蛋白酶3（MMP-3）及其TIMP-3,以及用原位杂交方法测定MMP-3mRNA表达。结果 （1）LPS组各时点MMP-3及其mRNA表达较0h组增强,在6h达高峰,到72h虽然有所下降仍高于对照组,P〈0．01;Gln组各时点MMP-3mRNA及其蛋白质表达也较0h组增强,但较LPS组各时点为弱,最高点在24h,P〈0．01;（2）LPS组各时点TIMP-3以及mRNA表达较0h组明显减弱,在6h最低,P〈0．01;Gln组各时点TIMP-3以及mRNA表达也较0h组减弱,但较LPS组为强,最低点在24h,P〈0．01。（3）脓毒症组比Gln组心脏,超微结构改变明显。结论 （1）在脓毒症时MMP-3及其mRNA表达增强,而TIMP-3及其mRNA表达受抑制。（2）谷氨酰胺可以减轻这种影响,而且使这种损伤作用时间向后推迟。     

病毒性心肌炎不同时点血管内皮细胞生长因子mRNA的表达

目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)在BALB/c小鼠感染柯萨奇病毒B3(CVB3)所致病毒性心肌炎(VM)病程中的作用.方法 取BALB/c小鼠70只,随机分为VM组60只,腹腔感染CVB3,分别于实验第3、7、10、14、18、21天取心肌组织;正常组10只,于实验第21天取心肌组织.用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测其心肌组织VEGF mRNA的表达.结果 病毒性心肌炎小鼠心肌VEGF mRNA表达较正常组高,且在感染病毒后表达渐增高,14 d达最高峰,其后表达降低,但仍维持一较高水平,与正常组比较仍有统计学意义(P<0.01).VEGF mRNA表达与心肌病理损害程度密切相关.结论 VEGF可能参与BALB/c小鼠病毒性心肌炎的病理生理过程.     

TRAIL及其受体DR5在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中的表达和意义

目的 研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体5(DR5)在病毒性心肌炎小鼠心肌组织中病变不同时期的表达及与细胞凋亡的关系.方法 建立病毒性心肌炎小鼠模型,于注射病毒后第7、10、14、21、28天取心肌组织,HE染色做心肌病理积分,TUNEL法检测凋亡细胞百分率,免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织中TRAIL和DR5蛋白及mRNA的表达.结果 病毒感染组小鼠和正常对照组小鼠心肌组织中均存在TRAIL和DR5蛋白和mRNA的表达.病毒感染后第14天,病毒感染组小鼠心肌组织中TRAIL蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.05)和第7天病毒感染组(P<0.05),组间比较差异有统计学意义(F=9.17,P<0.01).病毒感染后第10、14、21天,病毒感染组小鼠DR5蛋白表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=13.32,P<0.01).且TRAIL和DR5蛋白的表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡率密切相关(P<0.05).病毒感染组第10天TRAIL mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=10.86,P<0.01).病毒感染组第10、14天DR5 mRNA表达高于同期正常对照组(P<0.01)和第7天病毒感染组(P<0.01),组间比较差异有统计学意义(F=22.75,P<0.01).结论 病毒性心肌炎小鼠发病中期,TRAIL及其受体DR5在心肌组织中出现高表达,且与病理积分、心肌细胞凋亡率成正相关,TRAIL及其受体DR5可能通过调控心肌细胞凋亡参与病毒性心肌炎的病理过程.     

干酪乳杆菌细胞壁成分诱导小鼠自身免疫性心肌炎肾上腺髓质素的表达

目的探计肾上腺髓质素(AM)mRNA和蛋白在干酪乳杆菌细胞壁成分(LCWE)诱导小鼠自身免疫性心肌炎动物模型心肌组织中的表达水平和意义。方法4～6周Balb/c雄性小鼠45只,随机分为实验组30只,对照组15只。实验组于d0、3、5、10经腹部皮下注射LCWE,对照组以磷酸盐缓冲溶液(PBS)代替LCWE。于实验d14、21、28分别留取血清和心肌标本。采用RT-PCR及免疫组织化学方法检测小鼠心肌组织AMmRNA及蛋白表达水平,并检查心肌组织病理变化。ELISA法检测小鼠血清抗肌凝蛋白抗体。结果实验组小鼠心肌炎性细胞浸润及心肌细胞变性坏死较明显,对照组心肌组织正常。实验组血清存在高浓度抗肌凝蛋白抗体。免疫组织化学显示,实验组AM表达水平显著高于对照组(P<0.05),与病变积分呈显著正相关(r=0.81P<0.01)。RT—PCR结果显示,实验组小鼠心肌AMmRNA表达水平高于对照组(P<0.05),与病变积分呈显著正相关(r=0.71P<0.01)。结论AM参与LCWE诱导小鼠自身免疫性心肌炎,心肌AM表达水平可作为判断心肌炎性损伤程度的客观指标。     

结缔组织生长因子在病毒性心肌炎心肌组织中的变化

目的 观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在病毒性心肌炎( viral myocarditis,VMC)小鼠心肌组织中的表达情况.方法 实验选取BALB/C小鼠100只,分为对照组、VMC组各50只.应用柯萨奇B3病毒(coxsackie virus B3,CVB3)感染小鼠建立VMC模型.在CVB3感染后第4、7、14、21天各随机抽取8只采集心脏标本,行HE染色测定心肌病理积分,应用Masson染色法观察小鼠心肌胶原纤维分布,测量胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF),检测血清CK-MB水平,应用免疫组织化学方法检测转化因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、CTGF蛋白在小鼠心肌中的分布;应用RT-PCR方法检测小鼠心肌组织TGF-β1、CTGF mRNA的相对表达量;并作相关性分析.结果 (1)VMC组小鼠CK-MB水平于第7天达高峰,后逐渐下降(各时间点分别为455.45±37.95,606.95±35.64,573.62±42.90,308.60±20.49),其中第4、7、14天时高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为6.144,12.558,11.182,P均＜0.01);(2)VMC组小鼠第14、21天时CVF明显高于对照组(CVF值分别为8.22±1.95,9.46±1.87,t值分别为4.486,5.552,P均＜0.01);(3)免疫组织化学法检测VMC组小鼠各时间点心肌CTGF蛋白(各时间点分别为171.50±10.25,141.70±10.863,110.35±11.051,81.05±10.190)及TGF-β1蛋白(184.90±11.480,150.25±9.915,103.50±10.455,84.15 ±9.848)阳性表达均较对照组高(P均＜0.01);(4)VMC小鼠心肌组织中CTGF mRNA(0.4728±0.0328,0.5750±0.0439,0.6228±0.0458,0.7265±0.0469)及TGF-β1mRNA(0.5757 ±0.0426,0.6922 ±0.0408,0.7447±0.0510,0.8513±0.0505)表达随病毒感染时间延长而增强(P均＜0.01);(5)VMC小鼠心肌组织中CTGF的表达与TGF-β1的表达呈显著正相关(r=0.987,P＜0.01);VMC小鼠心肌组织中CTGF的表达与CVF密切相关(r=-0.901,P＜0.01),但CTGF的表达早于心肌纤维化的出现.结论 CTGF的表达伴随VMC的心肌纤维化程度而增加,提示CTGF的异常表达可能参与了VMC中心肌纤维化的发展过程.