用合成多肽制备抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的研究

目的建立以合成的小分子肽胰蛋白酶原激活肽制备单克隆抗体(mAb)的技术路线.方法以合成多肽TAP与载体KLH交联的偶联物为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立能稳定分泌抗TAP mAb的杂交瘤细胞株.结果共获得10株能稳定分泌TAP mAb的杂交瘤细胞株,经稳定性试验,对其分泌的mAb进行效价测定、中和抑制试验、特异性鉴定,均表明所制备的杂交瘤细胞株稳定性好,其所分泌的mAb效价高、特异性好.结论利用合成多肽TAP成功制备了抗TAP单克隆抗体.     

抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗胰蛋白酶原激活肽(TAP)单克隆抗体(TAPMcAb),并进行初步鉴定。方法将人工合成的TAP与血蓝蛋白(KLH)交联作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合,有限稀释法筛选出能稳定分泌TAPMcAb的杂交瘤细胞株,并对单克隆抗体进行鉴定。结果细胞融合率85.03%,经4次克隆化后获得10株能稳定分泌TAPMcAb的杂交瘤细胞株,经免疫球蛋白亚类鉴定,除1株为IgG1外,其余9株均为IgM类;染色体数目为92~101条;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测杂交瘤细胞培养上清效价为1∶20~1∶160,腹水效价为1∶3200~1∶25600;特异性试验表明,抗TAP单克隆抗体与牛血清白蛋白(BSA)、人白蛋白、胰蛋白酶、淀粉酶均无交叉反应;中和抑制试验表明,培养上清及腹水中的抗体能明显被合成多肽TAP及为急性胰腺炎患者尿液所中和;对其中5株细胞株进行相对亲和力分析结果表明,2C3>8C6>6H7>6F7>8B10。结论成功制备了抗TAP单克隆抗体,为建立敏感、特异的TAP免疫检测方法奠定了基础。     

用合成多肽制备抗胰蛋白酶原激活肽单克隆抗体的研究

目的 建立以合成的小分子肽胰蛋白酶原激活肽制备单克隆抗体(mAb)的技术路线。方法 以合成多肽TAP与载体KLH交联的偶联物为免疫原，免疫BALB／c小鼠，应用细胞融合技术建立能稳定分泌抗TAP mAb的杂交瘤细胞株。结果 共获得10株能稳定分泌TAP mAb的杂交瘤细胞株．经稳定性试验．对其分泌的mAb进行效价测定、中和抑制试验、特异性鉴定，均表明所制备的杂交瘤细胞株稳定性好．其所分泌的mAb效价高、特异性好。结论 利用合成多肽TAP成功制备了抗TAP单克隆抗体。     

胰蛋白酶原及其激活肽在急性胰腺炎中的意义

自ＣＨＩＡＲＩ 1896年提出早期发生的肠道外激酶前体激活导致了急性胰腺炎 (ａｃｕｔｅｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ,ＡＰ)的组织病理学改变以来 ,经过 10 0多年的研究 ,虽然ＡＰ的发病机制尚未完全阐明 ,但大多数学者认为 ,异常的酶激活导致胰腺自身消化仍然是ＡＰ的主要致病因素。在酶的异常激活过程中 ,胰蛋白酶原发挥着重要作用[1] 。1　胰蛋白酶原1 1　胰蛋白酶原的结构、代谢及生理功能胰蛋白酶原 (ｔｒｙｐｓｉｎｏｇｅｎ)是胰蛋白酶前体 ,产生于胰腺腺泡细胞中 ,由肠激酶激活 ,是一种分子量为 2 5ＫＤ的蛋白酶 ,由两种同工酶组成 ,包…     

胰蛋白酶原激活肽在急性胰腺炎早期诊断中的应用

急性胰腺炎发病机理的中心环节是胰腺组织受胰蛋白酶的自身消化作用 ,对其周围组织的消化 ,从而继发一系列的器官功能障碍。胰蛋白酶原激活肽 (TAP)是胰蛋白酶原激活后释放出来的短肽 ,可以很快进入腹膜、血液及尿液。检测体液TAP浓度 ,可以特异地反映胰蛋白酶原激活情况以及早期预测急性胰腺炎患者病情严重程度 ,在临床诊断方面有很好的应用前景     

胰蛋白酶原激活肽在急性胰腺炎早期诊断中的应用

急性胰腺炎发病机理的中心环节是胰腺组织受胰蛋白酶的自身消化作用，对其周围组织的消化，从而继发一系列的器官功能障碍。胰蛋白酶原激活肽(TAP)是胰蛋白酶原激活后释放出来的短肽，可以很快进入腹膜、血液及尿液。检测体液TAP浓度，可以特异地反映胰蛋白酶原激活情况以及早期预测急性胰腺炎患者病情严重程度，在临床诊断方面有很好的应用前景。     

血浆胰蛋白酶原激活肽水平与重症急性胰腺炎胰腺坏死的相关性研究

目的 探讨血浆胰蛋白酶原激活肽（trypsinogen activation peptide,TAP）水平与重症急性胰腺炎（severeacute pancreatitis,SAP）胰腺坏死的关系。方法 2008年6月1日—2008年12月31日,采用ELISA法测定本院的35例SAP患者血浆TAP水平,并与胰腺增强CT扫描结果作对比,分析血浆TAP水平与胰腺坏死的关系,以及SAP无胰腺坏死组与SAP胰腺坏死组血浆TAP水平的差异。结果 入院时血浆TAP水平预测胰腺坏死的最佳截值点是10.43 nmol/mL,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为75%、73.9%、60%、15%,阳性比为2.87,阴性比为0.338。入院第1天血浆TAP水平预测胰腺坏死的最佳截值点是6.91 μmol/L,其敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为90.9%、65.2%、55.6%、6.3%,阳性似然比为2.61,阴性似然比为0.001。SAP胰腺坏死组入院时、入院第一天血浆TAP水平高于SAP无胰腺坏死组（P〈0.05）。结论 血浆TAP水平变化与SAP病情变化密切相关,病程早期检测血浆TAP水平有助于SAP患者胰腺坏死的预测     

抗卵巢上皮癌单克隆抗体的制备和鉴定

以人的浆液性卵巢上皮癌细胞系ＨＯ－８９１０为抗原，制备分泌抗卵巢癌单克隆抗体的杂交瘤，经间接免疫荧光组化鉴定证实。制备的单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与ＨＯ－８９１０呈强阳性反应，与其他肿细胞系则无反应或反应极弱。在冰冻切片中，单克隆抗体ＯＣ１Ｃ３与卵巢恶性肿瘤呈强阳性反应（７／８），与绒癌有部分交叉反应（１／２），与正常卵巢和胚胎组织无反应。结果表明ＯＣ１Ｃ３是卵巢恶性肿瘤的一种特异性抗原的单克隆抗体。为     

抗P-gp单克隆抗体的制备和鉴定

ｍｄｒ１基因的表达产物Ｐ糖蛋白（Ｐ１７０,Ｐｇｐ）作为一种外排泵,在ＡＴＰ的参与下,可将细胞内的药物运到细胞外,从而使细胞产生多药耐药（ＭＤＲ）。我们利用杂交瘤技术制备了一株抗Ｐｇｐ单抗,并初步探讨了其在临床上的应用前景。材料和方法１细胞系ＨＬ...     

家蚕表达重组α型干扰素单克隆抗体的制备和鉴定

本文报道在抗原来湖困难地情况下制备了３株家蚕表达的重组α型干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞系：１Ｙ，２Ｙ和３Ｙ，琼脂免疫双扩散结果显示１Ｙ，２Ｙ和３Ｙ均分泌ＩｇＭ类抗体。ＥＬＩＳＡ－加成试验结果表明：１Ｙ和２Ｙ，３Ｙ和３Ｙ识别不同表位，１Ｙ和３Ｙ识别相同表位。     

氧化低密度脂蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)单克隆抗体(Ox-LDL mcAb)。方法以Ox-LDL为抗原,免疫Balb／c小鼠,用杂交瘤技术建立稳定分泌抗Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞,用protein A柱亲和层析法纯化腹水中mcAb,用ELISA,western- blot等鉴定其生物学活性。结果获得2株能稳定分泌Ox-LDL mcAb的杂交瘤细胞(6E9D,7G3C),均为IgG1亚型;染色体数目为100-106条;腹水效价为105;western-blot分析和ELISA检测证实2株mcAb均与Ox-LDL有较高的特异性。结论本实验成功制备了2株抗Ox-LDL特异性的mcAb,可用于Ox-LDL免疫检测方法的建立。     

六种支原体单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备针对临床常见的六种支原体的特异性单克隆抗体，为临床支原体感染检测提供工具。方法 用灭活的支原体颗粒免疫BALB／c小鼠，通过传统杂交瘤技术制备抗支原体单克隆抗体，采用6种支原体蛋白以酶联免疫吸附试验（ELISA）进行交叉筛选，并用免疫印记法（WB）对其特异性进行鉴定。结果 获得针对生殖支原体、梨形支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、肺炎支原体、穿透支原体的特异性单克隆抗体各1株，经ELISA检测证实具有较好的反应特异性，其中，单抗Mg6H1、Mpri ZW1和Mpe6G4在WB中也同时分别与生殖支原体、梨形支原体和穿透支原体呈特异反应。结论 获得针对6种人体常见感染支原体的不同单克隆抗体，它们在ELISA检测中具较好的反应特异性，有望应用于支原体感染检测。     

人5型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人5型腺病毒(HAdV5)六邻体(Hexon)蛋白的单克隆抗体并对其进行鉴定。方法用纯化的Hexon蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗HAdV5的Hexon蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。纯化获得单克隆抗体,使用ELISA和Western blot鉴定单克隆抗体的敏感性和特异性。结果 ELISA和Western blot结果表明这4株单克隆抗体与HAdV5的Hexon蛋白可以特异性结合。单克隆抗体株4A9-HRP标记和8D6建立的ELISA夹心法具备较高灵敏度和特异性。结论获得4株抗HAdV5的Hexon蛋白的单克隆抗体,为HAdV5相关的疫苗研制和HAdV5感染性疾病的早期快速诊断奠定了基础。     

免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体检测结核分枝杆菌菌群方法学评价

目的 用免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体快速检测和诊断结核分枝杆菌结核菌群的方法学评价。方法 共收集20株临床标本分离菌株、11株参考菌株和1株结核分枝杆菌标准菌株，应用免疫色谱法检测在培养基上生长的细菌，并和传统鉴定方法、实时荧光探针定量PCR法（FQ-PCR）作比较研究。结果 用免疫色谱法检测1株标准菌株为阳性，检测11株参考菌株发现用该法能完全区分结核和非结核分枝杆菌。对20株临床分离的标本用免疫色谱检出11株结核菌菌群，检出率为55％；用传统鉴定方法检出10株，其中未能检出的一株为混合菌感染；用FQ-PCR法检出10株，其中未能检出的一株为牛结核菌。免疫色谱法能检测到的最低菌浓度为10^5CFU／ml。免疫色谱法、FQ-PCR法和传统鉴定方法的平均耗时分别为15min，1～2d和30d。结论 免疫色谱法是一种简便、快速、准确、敏感和特异性鉴别结核和非结核分枝杆菌的方法，适合在临床推广使用。     

抗人和肽素单克隆抗体的研制

目的制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄球菌蛋白A亲和层析柱纯化腹水中的单克隆抗体(单抗),完成抗体亚类鉴定,用间接ELISA鉴定其活性,初步应用于免疫细胞化学检测。结果获得了3株特异性抗人和肽素单抗2h7、5b10及5e7,均属于IgG1亚类,2h7针对的抗原表位在和肽素C端,而5b10及5e7针对的抗原表位在和肽素N端。间接ELISA检测证实3株单抗均特异性识别人和肽素,其中2h7和5b10可应用于免疫细胞化学分析。结论成功制备出抗人和肽素单抗,能特异识别和肽素C端和N端,可应用于细胞免疫化学检测,为人和肽素的进一步研究提供依据。     

抗人甘露聚糖结合凝集素单抗的制备、鉴定及应用

目的　制备抗人甘露聚糖结合凝集素单克隆抗体及建立应用方法。方法　用亲和层析法自人血清中提取甘露聚糖结合凝集素 (MBL) ,免疫Balb/c小鼠 ,通过细胞融合的方法 ,得到 3株稳定分泌抗人MBL单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株。建立检测MBL的ELISA。结果　本组mAb识别相对分子质量 (Mr)为 310 0 0的MBL分子 ,与MBL作用后可明显抑制MBL 甘露聚糖复合物的抗补体效应。用ELISA检测 186例健康人血清中MBL水平为 2 6 9± 1 5 8mg/L。结论　成功地获得了抗MBL的mAb并用于建立ELISA。     

抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定。方法取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性。结果筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体。病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应。结论获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础。