龟鹿二仙膏助阳药理作用研究

目的：观察龟鹿二仙膏助阳的药理作用。方法：测定去势大鼠性腺器官指数及皮质激素阳虚模型小鼠的自主活动增加及常压耐寒冷环境中的存活时间。结果：龟鹿二仙膏能显著增加去势大鼠前列腺及精囊腺指数，使腺细胞增生、扩大、萎缩明显改善；龟鹿二仙膏还能明显提高肾阳虚小鼠自主活动，显著延长在寒冷状态下存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好助阳作用。     

阿胶益寿晶补气养血作用研究

目的：研究阿胶益寿晶的补气养血作用。方法：采用血虚模型，小鼠负荷游泳时间及密闭环境存活时间试验方法。结果：阿胶益寿晶对血虚模型有较好的治疗作用，可明显延长小鼠负荷游泳时间及小鼠在密闭环境中的存活时间。结论：阿胶益寿晶有良好的补血作用及提高耐力作用。     

龟鹿二仙膏方证探讨及临床应用

目的：探讨龟鹿二仙膏的方证思想和临床应用价值。方法：选取2012年1月-2013年7月大学附属医院妇科收治的围绝经期综合征患者96例进行分析,采用龟鹿二仙膏治疗,观察临床疗效及治疗前后临床症状评分。结果：龟鹿二仙膏治疗痊愈64例,好转26例,无效6例,总有效率为93.75%,治疗后中医临床症状评分较治疗前明显下降,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：龟鹿二仙膏具有补气养血、补精益髓的功效,能够有效提高围绝经期综合征的疗效,缓解患者的临床症状,效果显著。     

两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用＊

目的 探究两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠的干预作用。方法 32只8周龄SD大鼠，体质量200 g-220 g，随机分4组，分别为空白组（Control）、模型组（Model）、龟鹿二仙胶饮片膏组（GLEX_T）、龟鹿二仙胶颗粒膏组（GLEX_G），每组8只；空白组灌胃等体积蒸馏水，其余4组给与腺嘌呤混悬液灌胃，连续灌胃30天；从31天起，空白组及模型组灌胃等体积蒸馏水，龟鹿二仙胶饮片膏组予龟鹿二仙胶饮片膏灌胃，龟鹿二仙胶颗粒膏组予龟鹿二仙胶颗粒膏灌胃，连续灌胃至60天。每日灌胃剂量10 mL?kg^-1。给药完毕后处死，检测血清性激素（T、E2、FSH、LH）、精液参数（精子活力、活率、密度）和睾丸HE染色实验。结果 龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏组都能调节性激素分泌、改善大鼠精液参数（P < 0.01，P < 0.05），且在干预效果上无显著差异（P > 0.05）；龟鹿二仙胶饮片膏组与龟鹿二仙胶颗粒膏都对大鼠睾丸组织有保护作用。结论 两种剂型龟鹿二仙胶对于腺嘌呤诱导肾阳虚型少弱精子症大鼠有干预作用且疗效相近，可能与其对下丘脑-垂体-睾丸轴的调控、内分泌激素的改变，睾丸组织的保护有关。     

龟鹿二仙膏加味治疗老年性记忆障碍症26例

龟鹿二仙膏由龟板、鹿角、党参、枸杞四味药组成，具有温肾益精、补气养血作用。近年来，笔者以龟鹿二仙膏加味治疗26例老年性记忆障碍症患者，取得了较好的疗效，现总结如下。     

龟鹿二仙膏的药理学研究

龟鹿二仙膏为古方 ,明代 ( 1569年 )王三才著《医便》记述详细[1] ,为胶剂。 194 9年后 ,本方仍以胶剂收入《中国药典》1963年版一部。 1990年 ,载入《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册 ,为煎膏剂。最近 ,龟鹿二仙膏被列入第一批国家非处方药目录。本品具有温肾益精 ,补气养血作用。临床用于久病肾虚、腰酸膝软、精血不足 ,遗精阳萎[2 ] 。其药理学研究文献报道不多 ,现就手边资料参考国内文献综合概述如下。1　龟鹿二仙胶加减方药理学研究近年来 ,国内医药科技工作者将龟鹿二仙胶原方加减研制成龟鹿二仙胶丸[3] 、龟鹿补肾丸[4 ] 、龟鹿…     

龟鹿二仙膏的质量标准研究

龟鹿二仙膏由龟甲、鹿角、党参、枸杞子4味中药组成。具有温肾益精、补气养血之功效。用于久病肾虚，腰酸膝软。精血不足。遗精阳萎等症。原方始载于1569年《医便》中。1764年《兰台轨范》更有详尽记述。本方以龟鹿二仙胶收载于《中国药典》1963年版一部，以龟鹿二仙膏收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第二册(WS3-B-0287—90)。为控制龟鹿二仙膏质量，保证临床用药安全有效，本文对其质量标准进行了研究。     

龟鹿二仙膏的质量标准研究

龟鹿二仙膏由龟甲、鹿角、党参、枸杞子4味中药组成,具有温肾益精、补气养血之功效,用于久病肾虚,腰酸膝软,精血不足,遗精阳萎等症.原方始载于1569年<医便>中,1764年<兰台轨范>更有详尽记述.本方以龟鹿二仙胶收载于<中国药典>1963年版一部,以龟鹿二仙膏收载于<中华人民共和国卫生部药品标准>中药成方制剂第二册(WS3-B-0287-90)[1].为控制龟鹿二仙膏质量,保证临床用药安全有效,本文对其质量标准进行了研究.     

龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠诱导的大鼠软骨细胞bax、bcl-2表达的影响

目的：比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠（SNP）诱导后软骨细胞bax、bcl-2表达的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机理。方法：取第三代4周龄SD大鼠关节软骨细胞,经SNP诱导凋亡后,采用免疫组化染色法及Realtime-PCR观察龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞bax、bcl-2表达的影响。结果：龟鹿二仙胶及其拆方各组均可引起bcl-2表达升高及bax下降,与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,龟鹿二仙胶与龟板、鹿角比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：龟板、鹿角、人参、枸杞均具有抑制软骨细胞凋亡的作用,而4味药同用,人参、枸杞并无显著加强龟板、鹿角的抑制凋亡作用。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

基于肾脑相关的龟鹿二仙膏抗阿尔茨海默病作用及其机制

目的 基于“肾脑相关”理论,探讨龟鹿二仙膏对氢化可的松联合β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型的作用及其机制。方法 采用腹腔注射氢化可的松并脑室注射Aβ诱导大鼠AD模型,龟鹿二仙膏不同浓度进行干预。测定大鼠的海马、肾脏和肾上腺指数;采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清样品中皮质酮（CORT）及睾酮（T）水平;液相色谱-质谱联用（LC-MS）代谢组学技术采集和分析模型大鼠血清代谢数据;利用中药系统药理学数据库及分析平台（TCMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）和中医药综合数据库（TCMID）收集龟鹿二仙膏活性成分及相应靶点;利用人类基因数据库（GeneCards）和在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）检索得到的AD相关靶标信息;构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络,进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）代谢通路富集分析、基因本体论（GO）富集分析;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）的表达水平。结果 与模型组比较,龟鹿二仙膏高、中、低剂量组海马指数、肾脏指数和肾上腺指数均显著升高,其中龟鹿二仙膏高剂量组升高最为显著（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、低剂量组大鼠穿越平台次数均显著增加（P<0.05,P<0.01）,Ⅲ象限路程（%）和Ⅲ象限时间（%）均显著延长（P<0.05,P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠血清CORT含量均显著降低（P<0.01）;龟鹿二仙膏高、中、低剂量组大鼠海马组织中IL-6表达水平均显著降低（P<0.01）。代谢组学技术共鉴定了24个与AD相关的血清差异代谢物;网络药理学方法共筛选出50个治疗AD的高频共性化合物,高频共性靶点187个,得出磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路在AD复杂的病理机制网络中起到重要作用。结论 龟鹿二仙膏可显著改善氢化可的松并Aβ诱导的AD模型大鼠认知功能障碍,降低血清CORT,抑制海马组织炎症因子IL-6表达,并调节AD模型大鼠的代谢水平,为其临床应用提供依据。     

龟鹿二仙胶对去势大鼠骨骼肌Akt蛋白表达的影响

目的:探讨龟鹿二仙胶对去势大鼠骨骼肌Akt蛋白表达的影响。方法:40只6月龄SD大鼠随机分为假手术、模型组、龟鹿二仙胶组、雌激素组各10只,假手术组、模型组灌胃生理盐水,龟鹿二仙胶组给予龟鹿二仙胶颗粒剂灌胃,雌激素组给予戊酸雌二醇。治疗12周后活体骨密度(BMD)检测,同时检测骨骼肌Akt蛋白、mRNA表达。结果:模型组BMD明显低于假手术组(P0.05),龟鹿二仙胶组和雌激素组高于模型组(P0.05);模型组蛋白Akt、p-Akt表达量明显低于假手术组(P0.05);而龟鹿二仙胶组和雌激素组高于模型组(P0.05);模型组Akt1 mRNA表达量明显低于假手术组(P0.05),而龟鹿二仙胶组和雌激素组明显高于模型组(P0.05)。结论:龟鹿二仙胶对去势大鼠有明显的治疗作用,能改善BMD,提高骨骼肌Akt蛋白和基因的表达量。     

Comparative Analysis of Amino Acid Composition between Granules and Traditional Paste of Guilu Erxian JiaoFormula and Their Effect on Serum Levels of Immunoglobulin in Rats

目的 对比龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏中的13种氨基酸类成分以及二者对大鼠血清免疫球蛋白的影响。方法 采用柱前衍生-UPLC法分析19批龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏样品，建立二者的指纹图谱，并采用标准品对照，对其中氨基酸成分进行定性分析，并取其中含量最高的几种成分进行定量分析。建立大鼠阳虚型模型，分别采用龟鹿二仙胶配方颗粒膏与传统饮片膏进行干预，检测各组大鼠血清中IgA、IgG、IgM免疫球蛋白的含量。结果 成功建立龟鹿二仙颗粒膏与饮片膏的指纹图谱，发现19批膏方的相似度接近（P > 0.99），采用标准品确定其中13种氨基酸成分，其中各批次中成分含量较高的4种氨基酸，L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸含量无明显差别。且二者对阳虚型大鼠血清免疫球蛋白的影响也基本相似（P > 0.05）。结论 龟鹿二仙胶配方颗粒膏较与传统饮片膏比较，氨基酸类成分的定性与主要氨基酸类成分的定量分析均无明显区别，其基本的药理作用也较为接近。但配方颗粒成膏技术较传统成膏技术更加简便与高效，具有巨大的市场潜力与发展前景，值得深入研究     

龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白多糖合成的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖合成的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机制。方法:体外培养豚鼠膝关节软骨细胞,免疫组化染色检测龟鹿二仙胶及其拆方对软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响,Alcian Blue染色检测软骨细胞蛋白多糖合成。结果:龟鹿二仙胶促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达极显著(P<0.01),龟板和鹿角均能显著提高Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达(P<0.05),但药效显著低于龟鹿二仙胶(P<0.05);人参和枸杞对Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达均无明显促进作用。结论:龟鹿二仙胶可显著促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达,这是其保护软骨细胞,延缓软骨退变的作用机制之一。龟鹿二仙胶发挥此作用的主要药物是龟板和鹿角;人参和枸杞本身并不能促进Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达,而与龟板和鹿角配合,可明显增强龟板和鹿角的促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的作用。     

高效液相色谱法测定加味龟鹿二仙膏中甜菜碱含量

目的:建立HPLC测定加味龟鹿二仙膏中甜菜碱含量的方法。方法:采用薄层色谱法鉴别加味龟鹿二仙膏的龟甲、甘氨酸;采用HPLC对制剂中甜菜碱进行含量测定,色谱柱:GL Inertsil ODS-SP色谱柱(150mm×4.6mm,5μm);柱温:25℃;检测波长:196nm;流动相:乙腈-0.1%三乙胺溶液(磷酸调PH值至7)(80:20);流速:0.8 mL/min。结果:龟甲、甘氨酸的薄层鉴别斑点清晰、专属性强;甜菜碱在10.4606~104.6064μg之间呈良好的线性关系(r=0.9997,n=6),平均回收率为97.57%,RSD%为1.41%(n=9)。结论:所用方法操作简单、重现性好、灵敏度高、结果准确可靠,能有效控制加味龟鹿二仙膏的质量。     

龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制研究

目的:研究龟鹿二仙胶对成骨细胞I型胶原及TGF-β表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、龟鹿二仙胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨化三醇组,每天灌胃1次,持续7 d,末次给药2 h后腹主动脉采血,制成含药血清作用于大鼠成骨样细胞ROS17_2.8株。用MTT法及活细胞形态观察含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响。用各组含药血清条件培养基培养成骨细胞,应用Western Blot法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-β蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-βmRNA的表达。结果:(1)MTT结果显示:龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖。骨化三醇组的成骨细胞有明显增值(P<0.05)。细胞染色提示:骨化三醇组及龟鹿二仙胶组的成骨细胞无显著的凋亡。(2)RTPCR法结果显示:骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组COL1A1及COL1A2mRNA的水平均有增加(P<0.01);龟鹿二仙胶中、高剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加较明显(P<0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加不明显(P>0.05);骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平无明显变化(P>0.05);龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平均有增加(P<0.01);且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2mRNA水平增加差异无统计学意义(P>0.05)。(3)Western blot结果提示:第24 h,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.05)。第48 h,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.01);龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P>0.05);第24、48 h,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);在24 h,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P<0.01),龟鹿二仙胶低剂量和中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);48 h,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P<0.01)。龟鹿二仙胶高中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。结论:龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症机制可能通过调节细胞因子TGF-β,促进I型胶原的表达,为探讨中药促胶原形成治疗骨质疏松提供细胞及分子生物学依据。     

龟鹿二仙胶对铅鼠海马CA_1区长时程增强损伤的修复作用

目的探讨龟鹿二仙胶对发育期铅暴露大鼠海马CA1区突触可塑性的影响。方法在出生当天将仔鼠随机分为正常组、正常+龟鹿二仙胶组、铅组及铅+龟鹿二仙胶组。仔鼠出生后饮用0.2%的醋酸铅溶液,建立铅鼠模型,采用石墨炉原子吸收光谱法测血铅,用液态等离子质谱法测定海马铅水平,在位电生理记录海马CA1区的场电位。结果和正常组相比,铅鼠血铅、海马铅水平明显升高,长时程增强(LTP)的幅度显著下降,均有显著性差异(P<0.01);而同期铅+龟鹿二仙胶组海马铅水平比铅组显著下降(P<0.01),其LTP幅度明显高于铅组大鼠(P<0.05)。结论龟鹿二仙胶对发育期慢性铅暴露大鼠LTP幅度的下降有修复作用。     

龟鹿二仙膏治疗虚劳证100例临床疗效观察

运用由龟版、鹿角、党参、枸杞子组成的龟鹿二仙膏,对１００ 例中医诊断为气虚、血虚、肾阴虚、肾阳虚患者进行疗效观察。结果：显效６１ 例,有效３３ 例,无效６ 例,总有效率９４％ 。     

基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接探讨龟鹿二仙胶治疗少、弱精子症（AS）的物质基础及作用机制。方法 运用TCMSP数据库筛选龟鹿二仙胶中枸杞子、人参的活性成分及靶标，检索文献及BATMAN-TCM、DrugBank、ETCM、化学专业数据库获取鹿角胶、龟板胶活性成分及靶标；运用GeneCards、OMIM、DrugBank、TTD、DisGeNET数据库筛选AS靶标；运用R语言软件映射得到龟鹿二仙胶治疗AS靶标，运用Cytoscape平台构建龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标及龟鹿二仙胶-药物活性成分-靶标-AS间的互作网络图；运用STRING平台构建治疗靶标间互作网络图；运用ClueGo插件对治疗靶标行GO生物功能分析，R语言软件行KEGG通路富集分析；并运用ZINC、RCSB PDB数据库，AutoDock、PyMOL软件对药物有效活性成分与关键靶标作分子对接。结果 从龟鹿二仙胶中共获得83个有效活性成分，得到53个龟鹿二仙胶治疗AS的潜在靶标，这些靶标主要涉及氧化应激、脂质沉积负调节等生物学过程，并主要富集在PI3K/Akt，HIF-1等信号通路上；分子对接验证显示对接得分 < -5 kcal·mol^-1占82.5%，即大部分靶标与成分的结合活性较好。结论 通过网络药理学及分子对接证实了龟鹿二仙胶多成分、多靶标、多途径的作用特点，预测了龟鹿二仙胶可能通过PI3K/Akt，HIF-1等途径，从而调控氧化应激、脂质代谢等生物学过程治疗AS的可能作用机制，为进一步研究其活性成分和作用机制提供理论依据。     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。