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1.
目的 探讨高压力培养下角膜内皮细胞凋亡的启动机制.方法 原代兔角膜内皮细胞经免疫组织化学鉴定后,在50mmHg(1 kPa =7.5 mmHg)压力条件下,培养lh、2h、24 h,另设正常压力(15 mmHg)作为正常压力组,培养24 h.第一代兔角膜内皮细胞融合达70%~80%后,细胞在加压前lh分别使用浓度均为10-6 mol·L-l抗Caspase-8和抗Caspase-9预处理,然后置于压力装置中,压力设定为50 mmHg,培养24h后检测蛋白Bcl-2和P53表达,并且以无抑制剂处理的50 mmHg压力培养的细胞为对照组.各组培养的细胞均经Western blot检测Bcl-2和P53的表达.免疫荧光染色检测兔角膜内皮细胞胞浆细胞色素C的含量.结果 50 mmHg压力组角膜内皮细胞,加压lh、2h、24 h P53的表达量分别为0.651±0.007、0.805±0.006、0.839±0.011,较正常压力组(0.033±0.004)升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);50 mmHg压力组随着加压时间的延长,角膜内皮细胞中P53蛋白表达量逐渐增加,各时间两两比较,差异均有统计学意义(均为P<0.01).50 mmHg压力组中加压lh、2h、24 h Bcl-2的表达量分别为0.590±0.009、0.724±0.005、0.314±0.016,较正常压力组(0.081±0.013)反应性升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);50 mmHg压力组各时间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.01).实验发现正常压力组培养24h后,细胞核呈蓝色,胞浆中无细胞色素C释放;50 mmHg压力组培养lh可见部分细胞胞浆呈红色,提示细胞色素C释放进入到胞浆内,随着加压时间延长荧光强度增加,加压24 h见胞浆内出现广泛红色强荧光.抗Caspase-9和抗Caspase-8预处理组的角膜内皮细胞P53表达量分别为0.535±0.007、0.703±0.010,较对照组(0.727±0.021)下调,差异均有统计学意义(均为P<0.0I);抗Caspase-9和抗Caspase-8预处理组中Bcl-2的表达量呈抑制性下降,分别为0.312±0.003、0.442±0.011,较对照组(0.501±0.011)下降,差异均有统计学意义(均为P<0.01).抗Caspase-9预处理组的角膜内皮细胞P53和Bcl-2表达量较抗Caspase-8预处理组下降,差异亦均有统计学意义(均为P<0.01),表明抗Caspase-9对高压下角膜内皮细胞凋亡的抑制作用更显著.结论 Caspase-9抑制剂可有效阻断高压力对角膜内皮细胞的促凋亡作用,高压力对角膜内皮细胞的损伤主要是触发了线粒体细胞色素C的释放,激活了Caspase-9参与的内源性酶联反应性凋亡途径. 相似文献
2.
目的探讨青光眼急性高眼压对角膜内皮细胞的损伤机制。设计实验性研究。研究对象体外培养的角膜内皮细胞。方法采用后弹力层撕除联合酶消化法获取角膜内皮细胞,免疫组化法鉴定细胞。实验分两组:A组:急性压力增高组,压力为6.67kPa;B组:压力仿生培养,压力为2.0kPa。倒置显微镜定期观察细胞形态及生长规律;HE染色观察细胞形态结构变化;台盼兰一茜素红染色观察高压对细胞的损伤作用;流式细胞术分析细胞活性;免疫荧光检测细胞胞浆中细胞色素C(CytC)的表达。主要指标角膜内皮细胞形态结构、凋亡率及胞浆中CytC的表达。结果获取的细胞经免疫法证实为角膜内皮细胞表型。两组细胞分别培养24hr后,流式细胞术分析显示,高压力组的早、晚期细胞凋亡率分别为(16.40±0.95)%和(41.37±1.29)%;而正常压力组早、晚期细胞凋亡率分别为(1.07±0.40)%和(0.70±0.00)%,差异有统计学意义(P=0.000)。免疫荧光检测到高压力组角膜内皮细胞胞浆CytC呈阳性表达。结论高压力对角膜内皮细胞损伤呈时间敏感性,细胞的凋亡启动是其角膜内皮细胞损伤的机制之一。f眼科,2011,20:155-159) 相似文献
3.
目的 探讨体外压力仿生培养系统下不同梯度压力对角膜内皮细胞形态和功能的调控作用。设计 实验性研究。研究对象 兔角膜内皮细胞。 方法 将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为五组:A组为无压力常规培养(空白对照),B组为正常压力仿生培养(15 mmHg),C组为压力波动组,将压力设为15mmHg、25 mmHg、20 mmHg、10 mmHg,D组30 mmHg压力培养,E组50 mmHg压力培养。细胞均培养24h,免疫法鉴定原代角膜内皮细胞,HE染色和电镜观察细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞活性。主要指标 角膜内皮细胞的形态、存活率。 结果 获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。五组细胞分别培养24h后,经HE染色和电镜检测发现正常压力微环境培养的角膜内皮细胞排列紧密,六边形细胞居多,细胞表面微绒毛丰富,细胞核染色质丰富,而高压力培养的角膜内皮细胞活性差,细胞间隙加大。经流式细胞术分析显示,正常压力组、30 mmHg组、压力波动组、50 mmHg组的角膜内皮细胞培养24 h后细胞存活率分别为(98.16±0.45)%、(78.83±1.65)%、(70.2±3.54)%、(41.33±0.25)%(P=0.016)。高压力培养组中随着压力的升高和持续时间延长,细胞活性显著下降。结论 正常压力微环境培养对角膜内皮细胞形态和功能具有正向调节作用,而高压力对角膜内皮细胞具有损伤性,并随时间延长而加重。(眼科,2017,26: 56-60) 相似文献
4.
siRNA沉默CTCF基因对牛角膜内皮细胞p27蛋白表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨RNA干扰技术沉默结缔组织生长因子(CTGF)基因表达对p27蛋白表达的影响.方法 实验研究.设计并合成CTGF特异性小干扰RNA(siRNA),用脂质体转染入培养的牛角膜内皮细胞,正常对照组仅加入培养基而未进行siRNA转染.逆转录聚合酶链反应法观察基因沉默效果,免疫印迹法观察1.00μg/L转化生长因子β2作用下角膜内皮细胞内p27蛋白表达.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 CTGF siRNA成功转染入培养的牛角膜内皮细胞并有效沉默CTGF mRNA表达,转染24、48及72 h CTGF mRNA表达分别为正常对照组的17.3%、24.4%及41.7%,与正常对照组比较,差异有统计学意义(F=389.9,P<0.05).在转染36 h时,p27蛋白表达明显下降(F=299.3,P<0.05).结论 CTGF特异性siRNA能有效沉默细胞内CTGF mRNA表达,下调角膜内皮细胞p27蛋白的表达. 相似文献
5.
目的:研究Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞的保护作用。方法:采用4℃湿房保存方法保存离体兔眼球,设立房水对照组、Optisol中期保存液房水置换组,每组10只眼球。于低温保存开始前、保存后24,48及72h检测角膜厚度、角膜内皮细胞密度及形态,保存后72h取下角膜行胎盘蓝-茜素红染色,检测角膜内皮细胞存活率。结果:4℃湿房保存开始前两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05)。保存后24h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异没有统计学意义(P>0.05);保存后48h及72h两组平均角膜厚度、角膜内皮细胞密度及六角形细胞比率差异有统计学意义(P<0.05)。保存后72h房水对照组角膜内皮细胞存活率为(55±5.81)%,Optisol中期保存液房水置换组角膜内皮细胞存活率为(87.16±3.64)%,两组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论:Optisol中期保存液房水置换对角膜内皮细胞活性有保护作用,可以提高湿房保存法的效率,延长有效保存时间至72h。 相似文献
6.
不同染色剂对兔眼角膜内皮细胞影响的研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 观察并比较荧光素钠、吲哚靛青绿,台盼蓝,亚甲蓝,龙胆紫5种不同的前囊膜染色剂对兔眼角膜内皮细胞的影响。方法 新鲜离体兔眼角膜内皮滴入各实验试剂,0.25%台盼蓝,0.2%茜素红双重染色,光镜下观察角膜内皮细胞的活性,计数内皮细胞的死亡数,透射电镜检查,观察角膜内皮细胞超微结构的变化。结果 1%亚甲蓝组角膜内皮细胞失去正常的六边形结构,可见较多着色死亡细胞,细胞的死亡率与对照组相比,有统计学差异(P〈0.01)。电镜下,1%亚甲蓝组可观察到内皮细胞的胞膜不完整,胞浆内有空泡形成等变化。结论 1%亚甲蓝溶液对兔眼角膜内皮细胞的损伤作用。 相似文献
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应用共焦显微镜观察Fuch角膜内皮营养不良患者的病变形态学特征 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨应用共焦显微镜观察我国Fuch角膜内皮营养不良患者角膜各层的活体形态学特征。方法对19例(38只眼)Fuch角膜内皮营养不良患者的中央部角膜进行活体共焦显微镜检查,分为有症状组(19只眼)和无症状组(19只眼),并选取30只眼作为正常对照组,应用NAVIS软件测量、分析角膜各层组织细胞形态和密度,以及滴状赘疣和角膜神经的直径。结果 (1)有症状组:19只眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,直径20-60 μm,内皮细胞密度与正常对照组比较差异有显著意义(t=18.74,P<0.01);9只眼后弹力膜增厚;14只眼角膜后基质层有长条形暗区结构;19只眼角膜基质反光普遍增强;17只眼Bowman膜有局灶性高反光区域;19只眼基底上皮细胞形态大致正常;10只眼显示正常的角膜神经结构;后、前基质细胞密度,与正常对照组比较差异无显著意义(t=0.854、1.173,P=0.38、0.24)。(2)无症状组:19只眼的角膜内皮层均见到滴状赘疣,数目较有症状组者少,直径15-40μm;内皮细胞密度,与正常对照组比较,差异无显著意义(t=1.998,P=0.053);角膜其余各层未见异常。有症状组与无症状组的内皮细胞密度计数比较,差异有非常显著意义(t=8.352,P<0.01)。结论活体共焦显微镜检查有助于Fuch角膜内皮营养不良患者的诊断,特别适用于角膜水肿、角膜内皮镜无法成像的患者。( 相似文献
8.
目的利用激光共聚焦显微镜观察配戴夜戴型角膜塑形镜2年以上患者的角膜组织有无变化。方法回顾性病例研究。选择2009年1月至2012年12月于南京军区总院眼科就诊且配戴夜戴型角膜塑形镜2年的患者30例(60眼)作为戴镜组,未配戴任何形式角膜接触镜的角膜正常患者30例(60眼)作为对照组。对2组对象进行角膜中央部激光共聚焦显微镜观察(观察组摘镜2~3 h后)。数据采用独立样本t检验进行分析。结果配戴角膜塑形镜后角膜形态可发生明显变化,上皮至前基质层可见皱褶,上皮下神经丛疏密不均、扭曲,基质神经及内皮细胞形态正常。上皮下神经丛的分布比对照组稀疏,戴镜组的上皮细胞计数为(4818±148)cells/mm2,前基质细胞计数为(1345±154)cells/mm2,后基质细胞计数为(799±76)cells/mm2,内皮细胞计数为(3025±193)cells/mm2,与对照组相比2组差异无统计学意义。结论长期配戴夜戴型角膜塑形镜对上皮下神经丛数量及眼表形态有影响,对内皮细胞及基质细胞无明显影响。 相似文献
9.
中老年高度近视患者中央角膜厚度和角膜内皮细胞的测定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:应用非接触式自动角膜内皮计定量分析中老年高度近视眼患者中央角膜厚度和内皮细胞形态.方法:对56例(64眼)高度近视眼患者及65例(77眼)对照组患者按年龄分为≤60岁和>60岁两组,高度近视组再按眼轴长度分为≤29mm和>29mm两组,应用SPSS11.0统计分析软件对各组角膜内皮细胞的平均面积(AVE)、平均密度(CD)、变异系数(CV)、六角型细胞比率(6A)及中央角膜厚度(CCT)进行独立样本t检验,并将内皮细胞各参数与组内中央角膜厚度做pearson检验.结果:高度近视眼患者角膜内皮细胞平均面积增大、密度减低、变异系数增大、六角形细胞比率降低,与正常对照组比较均有显著性差异(P<0.05),眼轴长度≤29mm和>29mm两组间各内皮参数无显著性差异(P>0.05),中央角膜厚度各组间均无显著性差异(P>0.05).高度近视眼患者角膜内皮细胞面积与其中央角膜厚度成正相关(r=0.340,P<0.01,y=0.64x 46.99),细胞密度与其中央角膜厚度呈负相关(r=-0.338,P<0.01,y=-4.2x 4862.5),细胞变异系数与眼轴呈正相关(r=0.247,P<0.05,y=0.98x 11.84).对照组内皮细胞各参数与其中央角膜厚度均无相关性.结论:高度近视对中老年角膜内皮细胞各形态参数均产生较大影响,且中央角膜越厚、眼轴越长,可能预示其"愈合储备"能力越差. 相似文献
10.
氯通道阻滞剂NPPB对培养牛角膜内皮细胞增殖的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察氯离子通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸[5-nitro-2-(3-phenyl-propylamino)-benzoic acid,NPPB]对培养牛角膜内皮细胞增殖的作用。方法实验设5组,对照组,0.1%二甲基硫氧化物DMSO(di mathyl sulfoxide)组,50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1NPPB组。应用MTT比色分析法观察细胞增殖情况,计算细胞存活率。采用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数。结果NPPB使培养牛角膜内皮细胞MTT光吸收值和细胞存活率较对照组均显著降低,并具有浓度和时间依赖性。经100μmol·L-1NPPB处理48h后,与对照组相比,细胞出现明显的凋亡峰,G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,增殖指数明显下降。结论NPPB能浓度依赖性抑制培养牛角膜内皮细胞的增殖,并使细胞停滞于G1期。 相似文献
11.
目的 观察波动的压力对角膜内皮细胞的影响。方法 将体外培养的第一代兔角膜内皮细胞分为两组:A组为压力波动组(压力设置为:15mmHg~25mmHg~20mmHg~10mmHg,每个压力持续6h;1kPa=7.5mmHg);B组为30mmHg压力组;C组为无压力组。三组细胞分别培养24h。免疫细胞化学染色法鉴定原代角膜内皮细胞形态;台盼蓝-茜素红联合染色检测细胞活性,HE染色观察细胞形态;Western-blotting检测细胞中Bcl-2和P53蛋白的表达水平。结果 获取的所有细胞证实为角膜内皮细胞表型,无角膜上皮细胞及基质细胞污染。三组细胞分别培养24h后,经台盼蓝-茜素红染色和HE染色证实:两个压力培养组的细胞活性较无压力培养组明显下降,其中压力波动组的细胞活性低于30mmHg压力组。同时无压力组、30mmHg压力组和压力波动组细胞中P53蛋白的相对表达量分别为0.150±0.005、0.253±0.014、0.670±0.019,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 证实了高压力及非生理性波动的压力对角膜内皮细胞均具有损伤作用。 相似文献
12.
目的观察静态压力变化对大鼠视网膜微血管内皮细胞(RMECs)形态、增生活性及分泌血管活性物质内皮素-1(ET-1)和一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法体外培养并鉴定大鼠RMECs,分为A(1.33kPa)、B(2.67kPa)、C(5.33kPa)和D(10,67kPa)组和未加压对照组。用倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,常规方法进行细胞计数,锥虫蓝染色检测活细胞比例。用Griess硝酸还原酶法检测NO代谢产物NO2^-/NO3^-的含量,放射免疫法检测培养细胞的ET-1蛋白表达;用RT-PCR法半定量研究RMECs中ET-1、eNOS、iNOS mRNA的表达。结果B、C、D组RMECs细胞核膨大,胞体拉长,可见少量悬浮细胞;静态压力促进RMECs增生(F=12.205,P〈0.01),C组和D组细胞数量高于对照组、A组和B组(P〈0.01);静态压力升高造成各组细胞损伤,拒染率降低(F=11.180,P〈0.01),B、C、D组细胞拒染率低于对照组(P〈0.05)。B、C、D组ET-1浓度较对照组增加(P〈0.01)。C组和D组RMECs培养液中NO2^-/NO3^-浓度高于对照组(P〈0.01)。B、C、D组RMECs中ET-1 mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义(P〈0.01);C组和D组RMECs中eNOS mRNA和iNOS mRNA表达较对照组升高,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论高静态压力可直接导致RMECs的结构损伤,高静态压力下RMECs合成ET-1、NO增多可能是高眼压眼底病变的机制之一。 相似文献
13.
目的 探讨青光眼患者眼压与角膜感觉阈值(CST)的相关关系。方法 分别采用气流式非接触角膜感觉仪及T0pconCT.60型非接触性眼压计检测87例(105眼)青光眼术前患者的角膜感觉阈值及眼压,然后进行相关分析。结果 当眼压〉2.93kPa时,CST开始正常值增高,当眼压在5.33~8.00kPa范围内时,眼压与CST二者的相关系数为0.5371(P〈0.01)。结论 眼压增高时,角膜感觉阈值也明 相似文献
14.
目的:研究水通道蛋白-1在牛角膜内皮细胞中的表达及在角膜内皮液体转运中的作用.方法:用免疫组织化学方法,检测水通道蛋白-1在培养的牛角膜内皮细胞中的表达,并用水通道蛋白阻滞剂对氯汞苯磺酸酯(pCMBS)处理培养的牛角膜内皮细胞,观察处理前后角膜内皮细胞的渗透性水通透率(Pf)改变.结果:培养的牛角膜内皮细胞中有水通道蛋白-1的表达,主要位于细胞膜上.汞剂处理前后的角膜内皮细胞Pf分别为(0.044±0.005)cm/s(n=15)和(0.017±0.003)cm/s(n=15),其差异有统计学意义(P<0.01).结论:水通道蛋白-1在牛角膜内皮细胞液体转运中起着重要作用,其表达的改变会导致角膜水肿和功能改变. 相似文献
15.
目的:研究两种新型培养基-内皮细胞培养基(endothelial cell medium,ECM)和无动物成分培养基(animal compoundfree medium,ACF)在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的应用效果。方法:将大鼠角膜密闭保存于ECM和ACF培养基中4wk,再经葡聚糖T500脱水2d。以含低浓度牛血清的MEM基础培养基作为对照。计数保存前后角膜内皮细胞密度,检测保存结束大鼠角膜内皮层中胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)的表达水平,评估内皮细胞层的屏障功能。结果:保存结束后,MEM+20mL/L FBS对照组大鼠的角膜内皮细胞密度值最低,ECM+20mL/L FBS组则高达2250±202个/mm2,ECM和ACF组结果与ECM+20mL/LFBS组接近,细胞死亡率也较低,组间差异有统计学意义(F=28.965,P=0.000)。冰冻切片显示ZO-1在保存后大鼠角膜内皮层成功表达。RT-PCR检测表明ZO-1mRNA在各组的表达趋势与内皮细胞密度结果一致(F=592.751,P=0.000)。结论:无血清ECM和ACF培养基可以很好地保持器官培养法保存角膜内皮细胞的活性和紧密连接的屏障功能。 相似文献
16.
碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对角膜中期保存液保存人角膜内皮细胞的影响 总被引:10,自引:0,他引:10
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)对中期保存角膜内皮细胞活性的影响。方法角膜中期保存液保存人角膜环,对照组为角膜中期保存液,实验组分为A、B、C、D组,分别为角膜中期保存液中加入bFGF(5ng/ml)、bFGF(20ng/ml)、EGF及bFGF+EGF,在保存角膜第3、7、14天后分别取保存角膜环复温观察,锥虫蓝茜素红联合染色检测角膜内皮活细胞率,电镜检测细胞超微结构的改变。结果保存角膜环第14天角膜内皮活细胞率,对照组为(10.35±1.32)%,A组为(62.18±1.56)%,B组为(92.57±0.90)%,C组为(71.01±2.67)%,D组(82.59±1.45)%,与对照组比较,各保存时间各实验组活细胞率均高,差异有统计学意义(P<0.01)。保存第14天,对照组保存的角膜环明显水肿、混浊不透明、内皮细胞形态结构不完整,超微结构显示角膜内皮细胞Y型连接断裂;而实验B、D组,保存的角膜环轻度水肿、后弹力层皱褶少、角膜透明度高、内皮细胞形态结构完整,超微结构显示保存角膜内皮细胞连接紧密,Y型连接无明显断裂,细胞表面可见较丰富的微绒毛,胞体大,核突起明显。结论bFGF和EGF在角膜中期保存液中均有促进细胞增殖、保持角膜细胞活性的作用,以bFGF作用更明显。 相似文献
17.
AIM: To investigate the expression of aquaporins-1 (AQP-1) in cultured bovine corneal endothelial cells and to explore the role of AQP-1 in corneal endothelial fluid transport.
METHODS: The bovine corneal cells were cultured in DMEM containing 200mL/L neonate bovine serum. AQP-1 expression in the bovine corneal endothelial cells was detected with immunohistochemistry method before and after treatment of the cells with aquaporin inhibitor,p -chloromercuribenzene sulfonate. The osmotic water permeability was determined by monitoring volume changes of cultured bovine corneal endothelial cells.
RESULTS: Positive staining was used to reveal the AQP-1 expression in the membrane of cultured bovine (in brown color). The reading of osmotic water permeability of the cultured bovine corneal endothelial cells before treatment with p -chloromercuribenzene sulfonate was 0.044±0.005cm/s, which significantly decreased to 0.017±003cm/s after treatment (n =15).
CONCLUSION: AQP-1 expressed in the membrane of cultured bovine corneal endothelial cells may play an important role in fluid transport of corneal endothelial cells. Alteration of the AQP-1 expression may cause abnormal corneal function and corneal edema. 相似文献
18.
Amano S Mimura T Yamagami S Osakabe Y Miyata K 《Japanese journal of ophthalmology》2005,49(6):448-452