人破骨细胞抑制因子基因的克隆和表达

目的　克隆、表达和鉴定人破骨细胞抑制因子(OPG) .方法　从培养的人胚肺成纤维细胞 (WI- 38)中提取总 RNA,经 RT- PCR获得人破骨细胞抑制因子基因 .将该基因克隆到 p GEM3zf-载体中 ,测序鉴定 .继而将 OPG基因插入 TNFHis融合表达载体中 ,4 2℃诱导表达 4～ 5 h,做 SDS-PAGE分析 .以免疫印迹法鉴定 TNFHis OPG融合蛋白的表达 .结果　 DNA测序证明 ,获得了 OPG基因 ,其序列与国外文献报道不完全一致 .SDS- PAGE分析表明 ,TNFHis OPG融合蛋白获得表达 ,其 Mr为 7.1× 10 4 ku,表达量约占菌体总蛋白的 10 % .免疫印迹法鉴定显示 ,该融合蛋白可与抗 TNF-α单抗产生阳性反应 .结论　 OPG基因的克隆和表达均获得了成功 .     

凋亡抑制因子Livin在喉鳞癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡抑制因子Livin在喉鳞癌中的表达及临床意义.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测40例喉癌患者喉鳞癌组织及外周血细胞中Livin的表达,并以声带息肉患者和正常人外周血作对照.结果在40例喉鳞癌标本中,Livin α在26例(65%)癌组织中表达阳性,在17例(42.5%)外周血细胞中表达阳性;Livin β在喉癌组织及外周血细胞和声带患者中均不表达.Livin α的阳性表达率与喉癌患者的年龄、性别、肿瘤部位、分化程度无相关性(P>0.05),与临床分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05).结论凋亡抑制因子Livin α在喉鳞癌组织和血液中高表达且与喉癌淋巴结转移、临床分期密切相关.     

宫颈癌组织细胞分化抑制因子-1表达及其意义

目的 了解细胞分化抑制因子-1 (Id-1) mRNA和蛋白在人宫颈癌组织中的表达及其意义.方法 分别应用荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应和免疫组织化学方法,检测Id-1 mRNA和蛋白在6例人正常宫颈、6例宫颈上皮内瘤样变(CIN)和24例宫颈癌组织中的相对表达定量,分析Id-1表达与宫颈癌病理参数间的相关性.结果 Id-1蛋白在正常宫颈组织未见阳性表达,在CIN组织中有少量表达,在宫颈浸润癌组织中呈明显的阳性表达,宫颈浸润癌组织Id-1蛋白阳性面积百分比和阳性染色吸光度均显著高于CIN组织(t=7.80、3.15,P＜0.05).正常宫颈组织、CIN组织和宫颈癌组织Id-1 mRNA相对定量依次增高,差异有显著性(F=3 030.30,q=17.78、95.04,P＜0.01).宫颈癌组织中Id-1 mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.89,P＜0.01).Id-1表达和宫颈癌组织分级及FIGO分期呈正相关(r=0.67、0.58,P＜0.01、0.05).结论 检测Id-1表达有助于宫颈癌的辅助诊断.     

不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子mRNA表达的研究

目的　研究白血病抑制因子 (LIF)mRNA在黄体功能不全、不明原因不孕及输卵管原因不孕患者子宫内膜的表达 ,了解其与各种不孕症的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)测定不孕患者和正常妇女黄体中期子宫内膜LIFmRNA的表达水平。结果　LIFmRNA在正常妇女 (对照组 )黄体中期子宫内膜的表达水平为 1.12± 0 .45 ,黄体功能不全患者子宫内膜的表达量为 0 .6 4± 0 .41,两者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;不明原因不孕组表达量为 0 .5 2± 0 .41,与对照组之间差异有显著性 (P <0 .0 1)。输卵管原因不孕组LIF水平为 0 .99± 0 .35 ,与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　LIFmRNA在黄体功能不全和不明原因不孕患者子宫内膜中表达量降低 ,因此 ,LIF基因表达缺失可能与不孕症的发病有关。输卵管原因不孕与LIF无关     

白血病患者白细胞中分化抑制因子Id2 mRNA的表达

目的：探讨分化抑制因子Id2基因在白血病白细胞中的表达状况。方法：应用RT-PCR半定量分析16例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）,10例慢性粒细胞白血病（CML）白细胞中Id2的mPNA表达水平。结果：Id2基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达水平均增高,有统计学意义（P〈0．05）,但两者间比较无统计学意义。结论：Id2基因在白血病细胞中的表达明显增高,可能与白血病的发病有一定相关性。     

分化抑制因子Id1基因在白血病细胞中的表达及意义

目的:研究分化抑制因子-1(inhibitors of differentiation,Id1)在白血病白细胞中的表达,探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性,为白血病的诊断、治疗提供参考.方法:应用KT-PCR.方法,检测Id1在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况.结果:与健康自愿者相比,Id1基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低,有统计学意义(P<0.05),而后两者比较无统计学意义.结论:Id1在白血病细胞中的表达明显降低,与白血病的发病有一定相关性.     

Id1和Id3在原发性胃癌的表达

目的 探讨分化抑制因子（Id）1（Id1）和3（Id3）表达与胃癌细胞分化、增殖、侵袭转移和预后的关系.方法 免疫组织化学染色图像分析Id1和Id3在176例胃癌组织中的表达,并行生存率的logrank检验.结果 Id1和Id3蛋白表达强度与胃癌患者的性别、年龄、发生部位、肿瘤细胞分化、增殖、侵袭以及术后生存率未见明显相关性（P＞0.05）;Id1蛋白表达与胃癌淋巴结转移呈负相关（P＜0.05）;Id3蛋白表达在不同组织起源的胃癌之间差别有统计学意义（P＜0.05）.结论 Id1在胃癌淋巴结转移的预测中有一定的应用价值;不同组织起源的胃癌Id3呈差异性表达.     

MIF在小鼠同种皮肤移植排斥过程中的表达

目的：通过对巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在小鼠同种皮肤移植排斥前后脾组织和移植皮片中的相对表达量分析，探讨MIF表达与小鼠同种皮肤移植排斥的关系。方法：利用小鼠同种皮肤移植模型，对皮肤移植后不同时间的小鼠脾细胞和移植皮片进行RNA提取及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，以β肌动蛋白(β-actin)作为对照，比较移植前后MIF的相对表达量。结果：移植后的移植皮片中MIF的相对表达量有明显变化，移植后第1、7、14天，逐渐升高，在排斥高峰期第14天达到最高，第21天皮片完全排斥后下降，但仍比移植前水平高。在移植过程中，脾细胞MIF相对表达量无明显变化。结论：在移植排斥过程中，移植物局部MIFmRNA表达增强，提示MIF可能参与了小鼠同种皮肤移植的局部排斥反应。     

酵母双杂交筛选与分化抑制因子Id1′相互作用的蛋白

目的 筛选成人肺组织文库中与分化抑制因子Id1′相互作用的蛋白。方法 构建重组诱饵质粒pHybLex／Zeo-Id1′，转化入酵母细胞EGY48／pSH18．34，检测重组质粒有无非特异激活报告基因；通过筛选成人肺组织文库，获取真阳性文库质粒，进行测序和同源性比较，获得真阳性克隆。结果 经测序证实，重组诱饵质粒pHybLex/Zeo-Id1′构建成功；将重组质粒转化入酵母细胞：EGY48／pSH18-34，经检测无非特异激活功能。进一步通过对文库进行筛选，获得一个真阳性克隆，通过测序和同源性比较证实该阳性克隆是酪氨酸蛋白激酶Fyn。结论 分化抑制因子Id1′与Fyn在酵母细胞中存在相互作用。     

分化抑制因子Id1与恶性肿瘤血管生成的研究进展

分化抑制因子Id1属于HLH蛋白家族,其4种同源系列Id1、Id2、Id3及Id4均可与碱性HLH蛋白（basichelix-oop-helix,bHLH）作用,阻碍bHLH和DNA的结合,影响特异蛋白的表达、抑制细胞的分化,故又被称为DNA结合抑制因子（inhibitors of DNA binding）。近年来研究显示Id1蛋白作用于多种信号途径而参与人类恶性肿瘤的发生发展,特别是与一些下游效应分子结合而具有潜在癌蛋白属性,尤其是Id1蛋白“缺失／获得”的研究有人已经将其列为准癌基因。     

前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达

目的：检测前列腺癌患者及对照者外周血单个核细胞前列腺特异性抗原(PSA）mRNA表达,并探讨其临床意义。方法：选择39例前列腺癌患者,12例健康体检者作为对照,取5 mL静脉血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞,RT-PCR检测PSA mRNA表达。结果：①39例前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA表达阳性检出率66.7%（26/39）,其中血清PSA＞20.0 μg·L^-1者23例,PSA mRNA表达阳性检出率87.9%（20/23）;血清PSA≤20.0 μg·L^-1者16例,PSA mRNA表达阳性检出率37.5%（6/16）。对照组未见阳性表达。②16例血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者PSA mRNA阳性表达的Gleason评分为：1~4分0/3,5~7分1/8,8~10分5/5,6例阳性者均为中、低分化癌。 结论：外周血单个核细胞PSA mRNA的检测在血清PSA＞20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者中具有较高的敏感度,是一种可靠的检测方法。血清PSA≤20.0 μg·L^-1的前列腺癌患者外周血单个核细胞PSA mRNA的检测可以预示微转移的发生。     

环氧化酶-2mRNA在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌组织中COX-2mRNA的表达与乳腺癌发生、发展及预后的关系.方法以β-action基因为内参照,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测35例乳腺癌组织、相应癌旁组织、正常乳腺组织中COX-2mRNA的表达,应用Gene Tools from SynGene软件,对RT-PCR产物电泳带进行半定量分析.结果35例癌组织中,29例COX-2表达明显增高(0.83),相应6例癌旁组织COX-2有不同程度的表达(0.17),正常乳腺组织表达很弱或无表达,后二者与癌组织中COX-2表达差异均有显著意义(P<0.05).COX-2表达同年龄、原发肿瘤大小、TNM分期及术前化疗与否无关(P>0.05),而与淋巴结转移状况有关(P<0.05).结论乳腺癌组织中COX-2的表达明显高于相应癌旁组织、正常乳腺组织,且其表达与淋巴结转移状况有关.     

两种冻存方法在肿瘤微转移检测中的运用

目的 建立科学的外周血有核细胞的冻存方法,为肿瘤的微转移逆转录ＰＣＲ检测打好基础。方法 分离１５例ＣＥＡ分泌性肿瘤患者外周血有核细胞,分别用两种方法冻存,设为两组。对细胞进行总结ＲＮＡ的抽提,测定ＲＮＡ ＯＤ值并行１％琼脂糖凝胶电泳,进一步逆转录ＰＣＲ反应、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析最终产物。结果 经两种方法冻存的细胞,其总ＲＮＡ ＯＤ值差异无显著性,电泳均见竹节样带。两组逆转录ＰＣＲ结果一致,阳性率     

Id2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠SVZa神经干细胞,正义Id2、反义Id2真核表达质粒转染SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Id2作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。采用Western blot检测不同浓度的骨形成蛋白2(bonemorphogenenticprotein2,BMP2)诱导下Id2蛋白的表达变化。结果正义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例小于空白对照组,反义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;随着BMP2浓度的增加,Id2的表达增加。结论Id2抑制体外培养的P0SVZa神经干细胞向神经元方向分化,BMP2可以促进SVZa神经干细胞Id2的表达,它们共同参与调控SVZa神经干细胞向神经元分化的过程。     

细胞分化抑制因子与肿瘤

分化抑制因子（1d）是一组对碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）转录因子活性起负调节作用的转录因子。哺乳动物含四种Id。自1990年发现Id分子以来，有关该分子在细胞发育成熟、增殖、分化、死亡和肿瘤发生等方面的作用已进行了广泛而深入的研究。作者重点针对Id与肿瘤发生、发展关系的研究进展作一综述。     

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达

目的 体外培养人牙囊细胞,探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征,是否可作为牙骨质再生的种子细胞。方法 酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达,RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞,行Von kossa染色检测体外矿化形成情况。结果 免疫组化结果:牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达;RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节,von Kossa染色阳性。结论 牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性,体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力,可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。     

体外培养的人牙囊细胞矿化相关标志物的表达

目的体外培养人牙囊细胞，探讨牙囊细胞是否具成骨、成牙骨质细胞表型特征，是否呵作为牙骨质再生的种子细胞。方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞，免疫酶细胞化学染色技术检测其Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的表达．RT-PCR技术检测细胞的骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶的表达。矿化诱导并连续培养牙囊细胞，行Von kossa染色检测体外矿化形成情况。结果免疫组化结果：牙囊细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、骨桥蛋白、骨粘连蛋白呈不同程度的阳性表达：RT-PCR结果显示骨涎蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶表达。经矿化诱导后的牙囊细胞在20d时可形成矿化结节，von Kossa染色阳性。结论牙囊细胞具有成骨细胞、成牙骨质细胞的部分特性，体外培养的人牙囊细胞具有分泌合成矿化组织的能力，可试将其作为牙周组织再生的种子细胞。