RGD肽修饰紫杉醇聚合物纳米粒的制备及其药效学研究

制备靶向肽c(RGDyK)修饰的紫杉醇聚合物纳米粒,并对其体内外药效学性质进行评价。采用透析法制备靶向肽修饰的包载紫杉醇(PTX)的低相对分子质量肝素-全反式维甲酸聚合物(PTX-LHRyK)纳米粒,测定其粒度分布、Zeta电位、载药量和包封率等理化性质,通过体外细胞毒实验和体内药效学实验评价PTX-LHRyK纳米粒的抗肿瘤效果。制得的PTX-LHRyK纳米粒的粒径为(131.7±2.3)nm,Zeta电位为(-27.1±2.3)mV,载药量和包封率分别为(32.03±0.11)%和(84.84±2.63)%。随着孵育时间的延长,PTX-LHRyK纳米粒对B16F10细胞的毒性增加,孵育72 h后对B16F10细胞的IC₅₀为(41.6±7.2)ng/mL,LHRyK载体对B16F10细胞的存活率无显著影响。体内药效学研究显示,PTX-LHRyK纳米粒的抑瘤率达到75.28%,是混合药物溶液组的1.46倍,纳米粒制剂组的小鼠体重和相对脾重均无显著性变化。因此,PTX-LHRyK纳米粒粒径小,载药量高,可明显提高紫杉醇的抗肿瘤治疗效果,且降低药物的不良反应。     

黄芩素PLGA纳米粒的制备及制剂学性质研究

[目的] 优化影响黄芩素聚乳酸/羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒成型工艺参数,并评价优化工艺后所制纳米粒的制剂学性质。[方法] 采用乳化-溶剂挥发法制备黄芩素PLGA纳米粒,以粒径、包封率为评价指标,单因素实验考察了聚乙烯醇（PVA）浓度、PLGA型号、PLGA分子量、PLGA浓度、水相与有机相体积比、丙酮与无水乙醇体积比、药物与PLGA的比例共7个参数对纳米粒成型工艺的作用规律。[结果] 优化处方工艺制备的纳米粒包封率为（95.03±1.33）%、平均粒径为（126.80±4.50） nm、Zeta电位（-21.30±0.23） mV.[结论] 乳化-溶剂挥发法制备的黄芩素PLGA纳米粒圆整,粒径均一。     

装载肝素PLGA纳米粒的制备及体外细胞相容性研究

目的 采用双次乳化法制备装载有肝素的PLGA纳米粒,并评价其体外缓释性能和细胞相容性.方法 ①使用双次乳化法制备PLGA-肝素纳米粒(PLGA-Hep NPs);②对PLGA-Hep纳米粒进行理化分析和体外缓释效果评价,主要指标有:纳米粒径分析、表面形态观察,测定药物载药量和绘制体外缓释曲线等;③采用细胞增殖实验评价PLGA-Hep纳米粒的细胞毒性.结果 ①所制备的PLGA-Hep纳米粒呈球形,纳米粒的粒径、Zeta电位和肝素载药量与初始肝素投入量相关,当肝素投入量为100 mg时,粒径平均大小为(184.8±3.0)nm,Zeta电位为(-20.24±0.83)mV,1mg PLGA-Hep纳米粒装载(48.7±2.3)μg肝素;②体外缓释试验提示:突释阶段肝素释放率在24 h内达(26.6±2.8)％,缓释阶段纳米粒可稳定释放,在14 d时释放达(54.9±1.9)％;③细胞增殖实验提示PLGA- Hep纳米粒对细胞体外生长无不良影响,细胞相容性好.结论 采用双次乳化法制备的PLGA-Hep纳米粒具有良好的缓释效应和良好的细胞相容性,显示了PLGA纳米粒在药物缓释领域的广泛应用前景.     

姜黄素固体脂质纳米粒的制备及表征

目的：制备姜黄素（Cur）固体脂质纳米粒（SLN）。方法：用薄膜超声法制备Cur-SLN,以m_cur︰m_{单硬脂酸甘油酯}、m_{单硬脂酸甘油酯}︰m_卵磷脂、聚山梨酯-80质量浓度、超声时间为考察因素,以包封率为指标,用正交试验优选处方,并考察其粒径分布、Zeta电位。结果：当m_cur︰m_{单硬脂酸甘油酯}=1︰3、m_{单硬脂酸甘油酯}︰m_卵磷脂=1︰2.5、聚山梨酯-80质量浓度2.5%、超声时间12 min时,所制得的Cur-SLN平均粒径为（145.6±5）nm,Zeta电位为（－31.9±1.5）mV,包封率为（97.42±0.39）%,载药量为(7.92 ± 0.05)%。结论：采用薄膜-超声法制备Cur-SLN可行,为开发姜黄素新型给药系统提供试验依据。     

硫酸长春新碱聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及其体外性质评价

目的制备硫酸长春新碱（VCR）聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒（NPs）,研究其理化性质以及体外抗肿瘤活性。方法采用改良的复乳溶剂挥发法制备负载硫酸长春新碱的PLGA纳米粒,以透射电子显微镜观察纳米粒的形态,以激光粒度仪测定纳米粒的粒径和Zeta电位,以透析袋法研究其体外释放规律,以人乳腺癌细胞（MCF-7）为细胞模型,通过MTT试验考察载药纳米粒的细胞毒性。结果制备的VCR-PLGA NPs外观呈球形,平均粒径为（145.81±4.72）nm,Zeta电位为（-17.50±1.92）mV,包封率为（56.81±3.17）%,载药量为（2.79±0.18）%,体外释放规律符合双相动力学方程：Q=100-（72.19e-0.164 3 t＋29.26e-0.002 971 t）（R2=0.996 8）。载药纳米粒与原药相比可以增加细胞摄取而引起细胞毒性。结论初步建立了负载硫酸长春新碱的PLGA纳米粒系统,为体内抗肿瘤活性研究提供了依据。     

两种叶酸偶联物的合成及体外靶向性研究

合成叶酸偶联物并将其应用于叶酸靶向脂质体制备，考察其在体外肝癌HepG2细胞中的靶向性。通过酰胺反应将叶酸、胆固醇琥珀酸单酯与两种不同相对分子质量的聚氧乙烯二胺材料连接，合成两种两亲性的叶酸-聚乙二醇-胆固醇琥珀酸单酯（Folate-PEG₂₀₀₀-CHEMS和Folate-PEG₄₀₀₀-CHEMS），并利用核磁共振氢谱（¹H NMR）和超高分辨率复杂体分离鉴定质谱系统对其进行了结构表征。选取钙黄绿素为模型药物，采用薄膜分散法分别利用Folate-PEG₂₀₀₀-CHEMS和Folate-PEG₄₀₀₀-CHEMS制备了钙黄绿素脂质体FA-PEG₂₀₀₀-L与FA-PEG₄₀₀₀-L。利用激光粒度仪检测FA-PEG₂₀₀₀-L与FA-PEG₄₀₀₀-L的粒径、Zeta电位；利用流式细胞仪和激光共聚焦扫描显微镜，考察了脂质体FA-PEG₂₀₀₀-L与FA-PEG₄₀₀₀-L在HepG2细胞体外摄取实验中的药物递送效果。结果显示，钙黄绿素脂质体的平均粒径为（205.8 ± 10.2） nm，经电位测试脂质体的Zeta电位为-（1.19 ± 0.31） mV。FA-PEG₄₀₀₀-L靶向脂质体的荧光强度分别约为普通脂质体、FA-PEG₂₀₀₀-L的3.6和3.1倍（P < 0.01），FA-PEG₄₀₀₀-L在HepG2细胞中的递送效率明显高于FA-PEG₂₀₀₀-L与非靶向组，说明Folate-PEG₄₀₀₀-CHEMS可应用于脂质体制备，并可促进体外HepG2细胞对脂质体的摄取。     

新藤黄酸纳米脂质载体制备及其药剂学性质研究

目的 制备新藤黄酸纳米结构脂质载体并表征其药剂学性质。方法 采用乳化蒸发-低温固化法制备新藤黄酸纳米脂质载体（GNA-NLC）,正交试验设计优化最佳工艺处方,并对其包封率、平均粒径及Zeta电位等性质进行考察。结果 优化后处方制备的GNA-NLC多为圆整、实体的类球形,平均粒径为（144.07±1.44）nm,多分散系数为0.24±0.01,Zeta电位为（?28.03±0.29）mV,包封率为（84.65±0.98）%,载药量为（4.21±0.05）%;DSC显示GNA纳米粒确已形成,并且GNA以非晶态分布在基质中。结论 乳化蒸发-低温固化法能成功制备GNA-NLC,工艺简单,易于控制。     

几种辅料对葛根素液晶纳米粒粒径、电位、包封率的影响

[目的] 为探讨几种辅料（油酸、油酸钠、十八胺、维生素E醋酸酯、吐温80）对葛根素液晶纳米粒粒径、电位、包封率的影响并择最优辅料提高液晶纳米粒的稳定性。[方法] 采用薄膜-分散法制备葛根素液晶纳米粒,以粒径、Zeta电位、pH、包封率为指标筛选最适宜的稳定剂,并考察其对制剂稳定性的影响。[结果] 维生素E醋酸酯最适合作为液晶纳米粒的稳定剂,得到制剂的粒径半径为（94.62±3.18）nm,电位为（-37.47±1.550）mV,体系pH是8.70,包封率可达到92.14%±0.3827%,并且可使周内包封率保持90%以上。[结论] 维生素E醋酸酯可显著提高液晶纳米粒的稳定性,使纳米粒分散良好,粒径均匀。     

载吲哚菁绿与阿霉素靶向纳米粒用于视网膜母细胞瘤体外成像的实验研究

目的：制备一种靶向叶酸受体的载吲哚菁绿（indocyanine green,ICG）及阿霉素（adriamycin,ADM）的相变型多功能脂质纳米粒（ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM）并研究其基本性质,检测其靶向能力、光热效应、超声及光声双模态显像能力,为视网膜母细胞瘤的诊断提供新策略。方法：采用双乳化法制备ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,透射电镜观察纳米粒形态,马尔文粒径分析仪检测粒径及电位,紫外分光光度计检测纳米粒的包封率、载药量;流式细胞术量化及激光共聚焦显微镜下观察纳米粒表面叶酸表达情况和体外寻靶能力;CCK-8法检测ICG/FA/Pct-PFPNP纳米粒的生物安全性;近红外激光（808 nm）激发ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,检测其超声/光声双模态显像能力。结果：成功制备了ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,其外观呈球形,平均粒径为（374.40±23.48） nm,平均电位（-28.0±4.5） mV。测得ICG包封率为（91.85±2.98）%,载药量为（9.19±0.29）%;ADM包封率为（62.04±5.10）%,载药量为（6.20±0.51）%。流式细胞术和激光共聚焦显微镜结果均显示纳米粒表面叶酸表达情况良好,靶向组与Y79细胞连接率为（96.57±3.17）%,与非靶向组、抗体封闭组相比差异具有统计学意义（F=1537.6,P＜0.05）。CCK-8结果显示ICG/FA/Pct-PFPNP纳米粒没有明显的细胞毒性。ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒经激光辐照后能发生液气相变,增强超声显影并能使局部温度上升至60.8 ℃。光声信号随纳米粒浓度升高而增强,具有良好的线性关系。结论：成功制备了载吲哚菁绿与阿霉素的靶向相变型纳米粒,其靶向能力好,光热效应佳,增强超声及光声显像效果好,可以用于视网膜母细胞瘤的诊断。     

聚乙烯亚胺载基因纳米颗粒的制备及其相关特性的研究

目的 制备聚乙烯亚胺载基因纳米颗粒并研究其理化性质和体外转染活性.方法 通过自由基聚合法制备出聚乙烯亚胺空载纳米粒后,用绿色荧光蛋白(PEGFP-C1)质粒做报告基因,以静电吸附的方式将PEGFP-C1质粒DNA和聚乙烯亚胺结合形成聚乙烯亚胺裁基因纳米粒,用透射电镜观察其形态特征,激光粒度分析仪测定其粒度分布、表面电位(Zeta电位),MTT试验检测聚乙烯亚胺纳米载体HepG2和L-02的细胞毒作用,用体外基因转染实验评价纳米粒的转染活性,用流式细胞仪测定转粢效率.结果 聚乙烯亚胺与聚甲基丙烯酸甲酯形成表面带正电荷的纳米粒,呈单分散球形,平均粒径为102.62 nm,Zeta电位为+46.2 mV.当PEGFP-C1质粒DNA与纳米粒的N/P为3.2:1以上时,两者方可完全结合形成复合物.PEI纳米粒可携带质粒DNA进入COS7细胞,并突破吞噬小泡释放质粒于细胞质,最终质粒聚集于细胞核内进行表达.结论 聚乙烯亚胺纳米粒可以用作基因递送的非病毒栽体系统,值得进一步研究.     

PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体的制备和体外评价

[目的] 制备一种有长循环效果的聚乙二醇（PEG）修饰的紫草素纳米结构脂质载体,并对其进行理化表征和体外抗肿瘤效果评价。[方法] 采用乳化蒸发-低温固化法制备紫草素纳米结构脂质载体,通过超速离心法检测包封率;通过粒径、多分散指数（PDI）、Zeta电位、透射电镜、差示扫描量热、X射线等对制剂进行表征。采用CCK-8法考察乳腺癌MCF-7细胞的活性,以香豆素-6和Hoechst 33342为荧光探针定量考察细胞摄取行为。[结果] PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体粒径为（19.68±1.25）nm,多分散指数为（0.28±0.68）,Zeta电位为[-（20.27±1.27）]mV。平均包封率为98%,制剂外观圆整,分布均匀。紫草素以无定型物包载于制剂中。紫草素的抗肿瘤作用呈现浓度依赖性,中、高剂量的PEG修饰制剂组抗肿瘤活性明显高于未修饰制剂组和溶液组。细胞摄取实验结果与细胞毒性实验结果一致。[结论] 实验制备的PEG修饰的紫草素纳米结构脂质载体包封率较高,粒径小,体系稳定,具有良好的体外抗肿瘤和细胞摄取效果。     

红景天苷壳聚糖纳米粒的制备及其体外释放性能研究

目的 以壳聚糖为载体制备红景天苷壳聚糖纳米粒（SA-CS-NPs）,并考察其体外释药特性。方法 采用溶剂扩散-离子交联法制备SA-CS-NPs,考察其粒径分布和形态,并对SA-CS-NPs的包封率、载药量及其体外释药特性进行研究。结果 所制得的SA-CS-NPs呈球形或类球形,平均粒径为（247.5±23.8）nm（n＝3）,Zeta电位为（23.4±2.7）mV（n＝3）,多分散指数（PDI）为0.265±0.071（n＝3）;平均包封率为（70.15±1.60）%,平均载药量为（14.03±0.32）%（n＝3）;24 h累积释放率达85%以上。结论 溶剂扩散-离子交联法制备SA-CS-NPs具有合适的粒径和包封率,并能达到缓释效果。     

藤黄酸纳米结构脂质载体的制备及抗肿瘤作用初步评价

[目的]制备抗肿瘤药物藤黄酸（GA）纳米结构脂质载体（GA-NLC）,考察其理化性质,并对其抗肿瘤作用进行初步评价。[方法]采用乳化-固化法制备,以粒径、Zeta电位、包封率为评价指标考察其理化性质,并用差示扫描量热法（DSC）进行验证。采用CCK-8法测定GA-NLC对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用。[结果]制备的GA-NLC粒径分布在20 nm左右,Zeta电位为-（5.86±0.64）mV、包封率为（99.46±0.23）%。DSC结果表明GA以无定型的形式存在于藤黄酸纳米结构脂质载体中。[结论]通过乳化-固化法制备出的GA-NLC,粒径较小、分布均匀,包封率高,与GA溶液相比,GA-NLC具有更强的抗肿瘤活性。     

RGD脂肪醇与17-AAG脂质体的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-苯丙氨酸-脂肪醇(Arg-Gly-Asp-Phe-fatty alcohol,RGDFOC12)与17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG)的脂质体(RGDFOC12liposomes-loaded 17-AAG,RLAs)。方法采用薄膜分散-探头超声法制备;采用激光纳米粒度仪、透射电镜和扫描电镜测定粒径,Zeta电位和外观形态;采用动态透析法测定药物释放;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察其对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;通过瘤质量、存活数、体质量、脏器指数比评价其在小鼠体内抗肿瘤效果。结果制备得到的RLAs的粒径为(130.6±0.6)nm,Zeta电位为(-28.37±1.67)m V,外观形态为球形,包封率为80%以上。RLAs在p H 5.4环境的累积释放百分数大于在p H 7.4环境的累积释放百分数。RLAs在血浆中可稳定存在,12 h累积释放百分数为(15.85±0.71)%。RLAs对5种肿瘤细胞有抑制增生作用。RLAs对接种S180腹水瘤的ICR小鼠有抑制肿瘤生长作用。结论本研究制备了一种新的RLAs,制备方法简单、包封率高,具有较好的抗肿瘤活性。     

姜黄素纳米脂质载体的制备及大鼠体内药代动力学

采用熔融-乳化法制备姜黄素(Cur)纳米脂质载体(Cur-NLC),并考察其形态、粒径、Zeta电位、包封率和载药量等理化性质,同时以透析法研究制剂的体外释药特性。测定Cur-NLC和Cur原料的混悬液经大鼠灌胃后的体内药代动力学行为,并通过DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果显示,透射电镜观察Cur-NLC呈较规则类球体,平均粒径为(187.5±4.67)nm,Zeta电位为(-23.65±2.86)mV,包封率、载药量分别为(98.33±0.40)%和(4.59±0.19)%;Cur-NLC和Cur混悬液体外释药行为分别符合一级方程和Peppas方程,Cur-NLC在HCl(pH 1)和PBS(pH 6.8)中的36 h累积释放量分别为24.3%和19.2%,Cur混悬液的36 h累积释放量分别为90.2%和84.2%,说明Cur担载于纳米脂质体后具有明显的缓释特性。经大鼠灌胃后,Cur-NLC和Cur混悬液的AUC0-∞分别为(621.14±179.92)ng.h/mL和(32.49±3.55)ng.h/mL,cmax分别为(92.81±38.52)ng/mL和(5.39±0.13)ng/mL,Cur-NLC的AUC0-∞和cmax分别提高了19.12倍和17.22倍。因此,Cur-NLC对Cur起到很好的保护作用,避免了药物的渗漏,载药量和包封率均较高,能显著增强Cur在胃肠道的吸收,提高Cur的口服生物利用度。     

丹参酮I固体脂质纳米粒的制备及评价

[目的] 制备丹参酮I固体脂质纳米粒(TSI-SLN)并对其性质质量进行考察。[方法] TSI-SLN的制备方法选用乳化固化法,并以制剂的粒径、电位和包封率为考察指标。对TSI-SLN冻干品进行差式扫描量热法(DSC)检测。[结果] TSI-SLN的平均粒径为(128±2.00)nｍ,电位为(-9.35±0.12)mV;TSI的包封率为(74.03±1.32)%。DSC结果表明丹参酮I包裹在纳米粒中。[结论] 采用乳化固化法安全可靠,简单易行;该方法下制备的SLN具有较小的粒径和较高的包封率;且理化性质稳定,为后续实验提供了依据。     

N-辛基-N-季铵化壳聚糖/CMCNa复合胶束的制备、表征及安全性评价

制备N-辛基-N-季铵化壳聚糖(NTMC)胶束,并用羧甲基纤维素钠(CMCNa)对胶束进行包覆以获得安全、稳定的复合胶束制剂。由辛基化和季铵化反应合成NTMC,并考察其临界胶束浓度;通过超声-透析法制备NTMC胶束,测定胶束的包封率和载药率;使用CMCNa对NTMC胶束进行包覆,考察包覆前后胶束的形态、粒径、Zeta电位以及细胞毒性和溶血性的变化。所制得的NTMC的辛基取代度为(37.5±3.6)%,季铵基取代度为48.4%,具有较低的临界胶束浓度(35.6μg/mL)。NTMC胶束粒子呈球形,粒径为(224.6±8.4)nm,Zeta电位为+(44.7±4.5)mV,对紫杉醇的载药率高达(40.2±2.2)%,包封率为(34.4±1.7)%。NTMC/CMCNa复合胶束粒子较不规则,略呈球形,粒径为(302.4±27.3)nm,Zeta电位为-(37.4±6.2)mV。与NTMC胶束相比,NTMC/CMCNa复合胶束的细胞毒性及溶血性大大降低。结果表明:NTMC胶束对难溶性药物(如紫杉醇)有很好的增溶效果,通过CMCNa包覆,可以屏蔽NTMC胶束的强烈正电荷,显著提高制剂的安全性。     

重组人血管内皮抑素壳聚糖纳米粒的制备及体外评价

采用离子凝胶法制备重组人血管内皮抑素(商品名:Endostar)壳聚糖纳米粒,并对纳米粒的载药量、包封率、粒径、形态、体外释放、体外活性及Endostar结构的完整性进行考察。制得的Endostar壳聚糖纳米粒载药量为(10.5±1.1)%,包封率为(81.3±1.8)%;平均粒径为137 nm,为球形结构;体外释放10 d累积释放达到80%。凝胶电泳实验说明Endostar结构完整,制备与释放过程结构均未被破坏;人脐静脉内皮细胞增殖实验说明Endostar纳米粒仍保留原有的生物活性。结果表明壳聚糖作Endostar的载体,制得的纳米粒具有合适的粒径及包封率,并能达到缓释作用,不会破坏Endostar的结构,同时保留原有的生物活性。     

叶酸靶向修饰载新藤黄酸纳米结构脂质载体的研究

[目的]构建叶酸（FA）修饰的载新藤黄酸纳米结构脂质载体（FA-GNA-NLC）,提高新藤黄酸（GNA）的生物利用度,增强其在肿瘤部位的蓄积,降低全身毒副作用,并对该制剂进行理化表征和体内外药效学评价。[方法]通过乳化蒸发-低温固化法构建包载GNA的纳米结构脂质载体（GNA-NLC）,通过聚乙二醇（PEG）链将FA连接到NLC表面,对制剂的粒径、Zeta电位和外观形貌进行初步表征。以小鼠乳腺癌4T1细胞和人乳腺癌MDA-MB-231细胞为体外模型评价其对FA-NLC的摄取能力,以4T1细胞为体外细胞模型评价FA-GNA-NLC对肿瘤细胞的增殖抑制作用。构建乳腺癌小鼠模型,进行组织分布和体内抗肿瘤药效实验。[结果]制备得到形貌圆整、粒度均一、粒径为（16.01±0.03）nm、电位为（-6.8±0.59）mV、包封率为99%的FA-GNA-NLC。细胞毒性实验及体内抗肿瘤实验表明FA-GNA-NLC具有良好的抗肿瘤效果,细胞摄取实验及组织分布实验表明FA-NLC具有更好的靶向性,增强了药物在靶细胞、靶组织的蓄积。[结论]构建的FA-GNA-NLC增强了GNA的抗肿瘤活性,提高了GNA在肿...