重度寻常型银屑病患者外周血CD8~+T淋巴细胞CCR6及上清液中IL-22、IL-17的表达

目的研究重度寻常型银屑病患者外周血CD8+T细胞表面趋化因子受体CCR6表达及上清液中白细胞介素(IL)-22、IL-17的水平。方法流式细胞仪检测25例重度寻常型银屑病患者外周血中CD8+T淋巴细胞表面趋化因子受体CCR6的表达率,ELISA检测CD8+T细胞培养后上清液中IL-22、IL-17的水平,分别与30例健康对照者进行比较。结果银屑病患者外周血中CD8+T细胞表面CCR6的表达率为(94.76±2.38)%,健康对照组为(72.56±8.33)%,差异有统计学意义(P0.05);经过anti-CD3单克隆抗体和anti-CD28单克隆抗体刺激后,10例银屑病患者外周血CD8+T细胞上清夜中IL-17、IL-22水平分别为(7.17±1.51)pg/m L、(102.42±15.34)pg/m L,健康对照组分别为为(2.68±1.12)pg/m L、(47.39±5.47)pg/m L,2组比较差异有统计学意义(均P0.01)。结论银屑病中CCR6可能促进外周血CD8+T细胞趋化至皮损中;银屑病患者外周血CD8+T细胞在活化的状态下可促进炎症细胞因子的表达增加,加重银屑病的炎症反应。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病患者外周血T细胞CCR6表达的影响

目的评价窄谱中波紫外线(NB-UVB)对寻常性银屑病患者外周血T细胞趋化因子受体-6(CCR6)表达水平的影响。方法采用流式细胞仪检测24例寻常性银屑病患者在NB-UVB治疗前、后外周血T细胞CCR6的表达水平,并与24名健康人正常对照组进行比较。结果治疗前寻常性银屑病患者和正常对照组外周血T细胞CCR6表达率为(42.10±11.08)%和(11.03±1.01)%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗12周后,银屑病患者外周血T细胞CCR6表达为(40.05±4.52)%,与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论寻常性银屑病患者外周血PBMC中T细胞CCR6的表达率明显高于正常人群,这可能与银屑病的发病机制密切相关。但其不随病情而变化,故不作为银屑病病情变化的参考指标。     

β趋化因子CCL20及其受体CCR6mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达

目的探讨β趋化性细胞因子家族中CC趋化因子配体20(CCL20)及其受体CC趋化因子受体6(CCR6)mRNA在寻常性银屑病患者皮损中的表达情况.方法应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测35例寻常性银屑病患者皮损和18例正常人皮肤中CCL20和CCR6mRNA的表达.结果与正常人皮肤相比,寻常性银屑病患者皮损中CCL20与CCR6mRNA的表达水平均明显增高(P＜0.001).结论寻常性银屑病患者皮损中CCL20和CCR6 mRNA表达水平的上调可能与银屑病的发病有关.     

膜联蛋白A2在银屑病中的表达及意义

目的探讨银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)及皮损处膜联蛋白A2(annexin A2)的表达及其在银屑病发病中的意义。方法流式细胞术检测annexin A2在21例寻常型、5例脓疱型、5例关节病型、12例红皮病型银屑病患者及10例正常人PBMC上的表达;免疫荧光染色检测annexin A2在7例寻常型银屑病患者皮损和4例正常人皮肤处表达。结果 annexin A2在寻常型银屑病患者PBMC及皮损部位中表达均较正常对照增高(P<0.05),关节病型银屑病患者PBMC中annexin A2表达也增高(P<0.05),而红皮病型银屑病患者PBMC中annexinA2表达低于正常对照(P<0.01)。结论 annexin A2在寻常型银屑病患者PBMC和皮损处高表达,在关节病型银屑病PBMC中也高表达,而在红皮病型银屑病患者PBMC中低表达。     

窄谱中波紫外线对银屑病患者CCR2 mRNA表达的影响

目的探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗对银屑病患者趋化因子受体CCR2 mRNA的影响。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测36例斑块型银屑病患者NB-UVB治疗前、后皮损部位、外周血淋巴细胞中CCR2 mRNA的表达水平,30例正常人设为对照组,将检测结果与银屑病皮损面积、严重程度指数(PASI)及外周血白细胞中该受体的表达水平与皮损部位的表达水平间的相关性分别进行分析。结果CCR2 mRNA表达水平:银屑病患者治疗前淋巴细胞中为1.87±0.65,明显高于正常人对照组(0.31±0.19,P<0.001)及同组患者治疗后(0.79±0.31,P<0.05);在皮损部位表皮中为1.69±0.26,明显高于正常人对照组(0.89±0.37,P<0.01)与治疗后患者(O.91±0.32,P<0.01),在皮损部位真皮中为1.75±0.43,明显高于正常人对照组(0.79±0.28,P<0.001)及治疗后患者(0.98±0.26,P<0.01)。结论CCR2可能主要通过参与活化、趋化淋巴细胞而在银屑病的发病机制及病理状态的维持中起到重要作用,NB-UVB对银屑病的治疗作用可能通过调节CCR2的表达而实现。     

阿维A对寻常性银屑病患者CCL2和CCR2水平的影响

目的探讨阿维A治疗对寻常性银屑病患者血清CC趋化因子配体2(CCL2)、CC趋化因子受体2(CCR2)浓度及皮损CCR2 mRNA表达的影响,进一步阐明阿维A对寻常性寻常性性银屑病的作用机制。方法采集30例健康人(正常对照组)及80例阿维A治疗前、后寻常性寻常性银屑病患者(进展期48例,稳定期32例)的外周血和皮肤组织样本,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清CCL2和CCR2浓度,通过荧光实时定量PCR检测正常皮肤和皮损CCR2 mRNA表达。治疗前及治疗后8周根据皮损面积及严重度指数(PASI)评分观察阿维A疗效,并对治疗前寻常性银屑病患者血清CCL2和CCR2浓度与PASI评分进行相关性分析。结果阿维A治疗寻常性银屑病有效率为78.75%。银屑病组治疗前处于稳定期、进展期的患者血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达均显著高于正常对照组(P0.01),进展期患者血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达稳定期患者升高(P0.01)。银屑病组治疗前血清CCL2,CCR2浓度与PASI评分呈正相关(P0.05)。银屑病组治疗后4和8周时血清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达明显低于其治疗前(P0.01),且治疗后8周时血时清CCL2,CCR2浓度及皮损CCR2 mRNA表达较治疗后4周时降低(P0.05)。结论 CCL2,CCR2与寻常性性银屑病发生发展密切相关,降低CCL2,CCR2表达可能是阿维A治疗寻常性银屑病的重要机制。     

Tregs细胞CCR4的表达变化在复发性生殖器疱疹患者发病中的意义

目的探讨复发性生殖器疱疹(RGH)患者趋化因子受体CCR4在外周血Tregs细胞的表达和皮损局部的表达及其意义,并分析其与血清内趋化因子CCL17和CCL22水平的关系。方法应用流式细胞术、免疫组织化学法和ELISA法检测RGH和正常对照外周血Tregs细胞的水平和其表面CCR4受体表达的情况,局部皮损中Foxp3和CCR4的表达及血清中趋化因子CCL17和CCL22的浓度。结果 RGH患者外周血Tregs细胞及其上表达的趋化因子受体CCR4的百分数比正常对照高,差异有统计学意义(P0.05);趋化因子CCL17和CCL22的血清水平也高于正常对照,差异有统计学意义(P0.05);组织中Foxp3和CCR4表达也较正常对照差异有统计学意义(P0.05)。在临床指标中,趋化因子受体CCR4与RGH患者的HSV-2 DNA有明显相关关系。结论外周血和局部皮损的Tregs细胞趋化因子及其受体水平的表达可能和RGH疾病病情发展有关。     

窄谱中波紫外线对寻常性银屑病患者趋化因子受体CCR6mRNA水平的影响

目的:探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)对银屑病患者趋化因子受体CCR6 mRNA水平的影响.方法:分别记录30例寻常性银屑病患者NB-UVB照射治疗前后患者皮损面积和严重程度指数(PASI)评分.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测其前后外周血单一核细胞CCR6 mRNA的表达水平,并与30例正常对照比较.结果:30例寻常性银屑病患者光疗15次后PASI分值显著降低(P ＜ 0.01).银屑病患者CCR6 mRNA的表达水平显著高于正常对照(P ＜ 0.01),而光疗后CCR6 mRNA的表达水平显著降低(P ＜ 0.01).结论:降低CCR6水平可能是NB-UVB治疗银屑病的机制之一.     

寻常性银屑病患者外周血中性粒细胞中趋化因子受体的表达

目的:了解趋化因子受体在寻常性银屑病外周血中性粒细胞活化及趋化中的作用,探讨寻常性银屑病的发病机制。方法:应用反转录(RT)-PCR检测33例进行期斑块状银屑病患者及其中16例患者治疗后外周血中性粒细胞中趋化因子受体CXCR1～3及CCR1、5mRNA的表达水平,并设30名正常人作对照。将检测结果与银屑病皮损面积严重度指数(PASI)进行相关性分析。结果:寻常性银屑病患者治疗前中性粒细胞中CXCR1、CXCR2与CCR1mRNA表达水平分别为1.36±1.19、1.45±0.87与1.43±1.28,明显高于正常对照及治疗后的患者[正常对照分别为0.55±0.37(P<0.01),0.74±0.58(P<0.001),0.68±0.37(P<0.001);治疗后分别为0.46±0.33(P<0.001),0.63±0.58(P<0.01),0.73±0.86(P<0.05)],其中CXCR1、CXCR2与PASI呈显著正相关。结论:CXCR1、CXCR2与CCR1在寻常性银屑病患者外周血中性粒细胞中表达异常增高,它们可能参与了中性粒细胞的活化及趋化,进而参与了银屑病的发病。     

红细胞趋化因子受体在寻常性银屑病患者外周血中性粒细胞中的表达

目的研究红细胞趋化因子受体(ECKR)在寻常型银屑病患者外周血中性粒细胞中的表达情况,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法应用流式细胞仪和特异性FITC标记的鼠抗人ECKR抗体检测寻常型银屑病患者和正常人外周血中性粒细胞表面ECKR蛋白的表达水平。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测28例寻常型银屑病患者以及30例正常人外周血中中性粒细胞内ECKRmRNA的表达。并将结果与患者皮损面积及严重程度指数(PA-SI)进行了相关性分析。结果寻常型银屑病患者外周血中性粒细胞膜ECKR阳性率明显低于正常人,进行期患者较稳定期患者显著降低,且患者中性粒细胞膜ECKR的阳性率与其PASI评分呈负相关。患者外周血中性粒细胞内ECKRmR-NA的表达水平明显高于正常人,而进行期患者ECKRmRNA的表达又高于稳定期患者。结论ECKR在银屑病发病过程中发挥一定的作用,其表达水平与疾病的进展密切相关。     

Homing receptor and chemokine receptor on intraepidermal T cells in psoriasis vulgaris

Intraepidermal T lymphocytes found in psoriatic skin lesions are involved in the development and maintenance of lesional pathology. It has become clear that differential expression of homing and chemokine receptors determines the specific migration of T cells to distinct tissues and microenvironments, including psoriasis lesions. The aim of the present study was to clarify expression of homing (CLA, VLA-4, and LFA-1) and chemokine (CCR4, CCR6, CCR7, and CXCR3) receptors on intraepidermal T cells in psoriatic lesions using flow cytometry. The vast majority of intraepidermal T cells in psoriatic lesions expressed CLA and LFA-1, whereas 58% of CD4+ and 85% of CD8+ T cells expressed VLA-4. The majority of CD4+ T cells and about half of the CD8+ T cells expressed CCR4 and CCR6, whereas less than one-third of CD4+ and CD8+ T cells expressed CXCR3 or CCR7. In patients with psoriasis the percentages of T cells expressing CLA, CCR4, and CCR6 were much higher in the epidermis of psoriatic plaques than in the peripheral blood. Thus, CLA, CCR4, and CCR6 may play a more important role in the migration of T cells to psoriatic epidermis.     

CC chemokine receptor 4 expression on peripheral blood CD4+ T cells reflects disease activity of atopic dermatitis

Recent studies indicate that Th1 and Th2 cells differ in their chemokine receptor expression and their responsiveness to various chemokines. Therefore, selective Th2 cell recruitment in Th2-predominant inflammatory diseases such as atopic dermatitis may be under the influence of some chemokines. It is reported that CC chemokine receptor (CCR) 4 is selectively expressed on Th2 cells whereas CXC chemokine receptor (CXCR) 3 is selectively expressed on Th1 cells. In this study we examined CCR4 and CXCR3 expression on peripheral blood CD4+ and CD8+ T cells obtained from adult atopic dermatitis subjects, and compared the results with those from patients with psoriasis vulgaris and healthy controls. CCR4 was preferentially expressed on CD4+ T cells from atopic dermatitis subjects and CXCR3 was preferentially expressed on CD4+ T cells from psoriasis vulgaris subjects. This CCR4 expression was prominent especially in severe atopic dermatitis subjects. CCR4 expression on CD4+ T cells in severe atopic dermatitis subjects decreased on improvement of disease activity. CD25 was preferentially expressed on CCR4+CD4+ T cells but not on CXCR3+CD4+ T cells in atopic dermatitis subjects. Cutaneous lymphocyte-associated antigen was also preferentially expressed on CCR4+CD4+ T cells but not on CXCR3+CD4+ T cells in atopic dermatitis subjects. CD4+ T cells in atopic dermatitis skin lesions were predominantly CCR4+ cells. Taken together, this study strongly indicates that CCR4+CD4+ T cells reflect disease activity and suggests that CCR4 expression is important for T cell infiltration into atopic dermatitis lesions. Thus, CCR4 may be a possible target for therapy of atopic dermatitis in the future.     

173例寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体水平与PASI相关性分析

目的：探讨寻常型银屑病患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体的水平变化及临床意义。方法：对173例银屑病患者进行PASI评分,采用流式细胞仪及全自动酶标仪对患者组和150例正常人外周血T淋巴细胞亚群、IgM、IgG、IgA及补体C3、C4的表达水平进行检测和分析。结果：寻常型银屑病患者外周血CD8^＋T细胞数量显著高于对照组（P〈0．05）,且与患者PASI呈正相关（r=0．845,P〈0．01）;补体C3较对照组显著降低（P〈0．05）,且与患者PASI呈负相关（r=0．699,P〈0．01）。而CD3^＋及CD4^＋T细胞、IgG、IgM、IgA及补体C4水平与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：寻常型银屑病患者外周血免疫功能处于紊乱状态,CD8^＋T细胞百分率及补体C3水平与银屑病患者的病情密切相关。     

凋亡抑制蛋白c-FLIP在银屑病患者外周血和皮损中的表达

目的 探讨凋亡抑制蛋白c-FLIP在寻常性银屑病患者外周血和皮损中的表达和分布情况。方法 采用流式细胞仪检测30例寻常性银屑病患者和20例正常人对照组外周血T细胞和B细胞内c-FLIP蛋白表达阳性率，采用免疫组化方法检测c-FLIP蛋白在其皮损中的表达。结果 进行期银屑病患者外周血T细胞内c-FLIP表达（6.32% ± 1.17%）明显高于恢复期患者（2.64% ± 0.74%，P < 0.01）和正常人对照组（2.28% ± 0.54%，P < 0.05）。而其在外周血B细胞内的表达3组间差异无统计学意义，3组分别为0.78% ± 0.16%，0.71% ± 0.32%，0.69% ± 0.18%，P值均 > 0.05。c-FLIP蛋白在进行期银屑病患者皮损中的表达（89.73 ± 5.24）明显高于恢复期（117.40 ± 7.50，P < 0.05）和正常人对照组（121.58 ± 7.93，P < 0.01），恢复期患者和正常人对照组之间差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 凋亡抑制蛋白c-FLIP在进行期银屑病患者的外周血T细胞和皮损内明显高表达，可能参与银屑病患者T细胞的增殖。     

活化抗原CD69、HLA-DR在寻常性银屑病外周血单一核细胞和皮损中的表达

目的 探讨活化抗原CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞和皮损中的表达变化。 方法 流式细胞仪检测20例寻常性银屑病患者和20例健康对照外周血CD3+T细胞中CD69和HLA-DR的表达,同时采用免疫组化的方法检测15例寻常性银屑病患者和10例健康对照皮损组织中HLA-DR的表达并进行对比。两组统计学分析采用双侧t检验。 结果 CD69和HLA-DR在寻常性银屑病患者外周血CD3+T细胞中的表达率分别为（4.70 ± 1.90）%、（8.97 ± 1.79）%,比健康对照组［（1.56 ± 0.95）%、（3.02 ± 1.15）%］明显升高（均P < 0.01）。Pearson相关性分析发现,CD3+HLA-DR+细胞百分比与银屑病皮损和严重程度评分指数（PASI）评分呈正相关（r = 0.5626,P < 0.05）。与健康对照组比较,寻常性银屑病患者皮损真皮中HLA-DR表达升高,但表皮中HLA-DR表达降低（均P < 0.05）,HLA-DR在健康人主要分布在血管周围,而在寻常性银屑病患者则广泛表达于真皮组织。 结论 寻常性银屑病患者外周血CD3+T淋巴细胞及皮损中的炎症细胞存在异常活化,外周血CD3+HLA-DR+细胞与疾病严重程度存在相关性。     

寻常型银屑病患者外周血髓系树突状细胞CD47的表达

目的：检测寻常型银屑病患者外周血髓系树突状细胞（mDCs）表面整合素相关蛋白（CD47）的表达水平。方法：流式细胞仪检测寻常型银屑病患者和健康对照者外周血mDCs表面CD47及CD4+调节性T细胞（Treg）表达水平；Luminex液相芯片技术检测上清液IL-23、IL-17和TNF-α浓度。结果：共检测46例患者和46名健康对照，患者组mDCs细胞CD47表达水平为32.8低于对照组的63.6，差异有统计学意义（P<0.05）。患者组mDCs细胞CD47表达水平与银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）负相关（r=-0.651, P<0.05）；患者组Treg细胞比例显著低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；IL-23、IL-17和TNF-α浓度显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：银屑病外周血mDCs表面CD47及Treg细胞表达下降。     

寻常性银屑病患者Thl/Th2平衡偏移的研究

目的观察辅助性T细胞亚群(Th)在寻常性银屑病发病机制中的作用。方法选择32例寻常性银屑病患者和15名健康人为研究对象,采用流式细胞技术检测外周血T淋巴细胞中CD4+CCR5+和CD4+CD30+细胞,以其各自百分比和平均荧光强度(MFI)作为反映Thl/Th2免疫应答强度的指标。结果银屑病组CCR5+细胞的百分比高于对照组(P<0.05),MFI与皮损面积和严重指数(PASI)呈正相关;银屑病进行期CD30+细胞的百分比较正常人明显下降(P<0.05)。结论银屑病患者体内Th细胞亚群应答模式与正常人群存在一定的差异;Th2向Th1细胞的漂移与银屑病的发病有一定关系。     

miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T细胞的调控研究

目的 研究miRNA-146a对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,探讨miRNA-146a在寻常性银屑病发病中的作用。 方法 收集寻常性银屑病患者和健康对照各30例。采用实时定量PCR检测外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a表达水平,ELISA检测血浆干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-4表达水平。免疫磁珠法分选外周血CD4+ T淋巴细胞,将分离的细胞分为对照组、miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组,分别转染阴性对照miRNA、miRNA-146a模拟物和miRNA-146a抑制物后进行细胞培养,流式细胞仪检测Th1和Th2细胞数量,蛋白免疫印迹法和实时定量PCR分别检测IFN-γ受体α（IFN-γRα）、T细胞表达T盒（T-bet）、GATA-3蛋白和mRNA的表达,ELISA检测细胞培养液上清液IFN-γ、IL-4水平。 结果 寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞miRNA-146a［（243.81 ± 94.32）％］与血浆IFN-γ水平［（27.69 ± 7.64） ng/L］较健康对照组［分别为（105.74 ± 22.93）％和（9.75 ± 2.81） ng/L］升高,差异均有统计学意义（t值分别为6.653和4.237,均P < 0.01）,且miRNA-146a的表达与血清IFN-γ呈正相关（r = 0.837,P < 0.01）。体外CD4+ T淋巴细胞培养结果显示,与对照组比较,miRNA-146a组Th1数量、T-bet蛋白和mRNA表达、培养上清液IFN-γ水平均显著增加,IFN-γRα蛋白表达降低,差异均有统计学意义（均P < 0.01）;但是,与对照组比较,miRNA-146a组和miRNA-146a抑制物组Th2细胞数量、GATA-3蛋白、GATA-3 mRNA表达以及上清液中IL-4水平差异无统计学意义（均P > 0.05）。结论 miRNA-146a可能通过影响Th1细胞的分化和功能参与对寻常性银屑病患者外周血CD4+ T淋巴细胞的调控,在银屑病发病过程中发挥一定的作用。     

Absence of CD26 expression on skin-homing CLA+ CD4+ T lymphocytes in peripheral blood is a highly sensitive marker for early diagnosis and therapeutic monitoring of patients with Sézary syndrome

Patients with Sézary syndrome (SS) show clonal expansion in the peripheral blood of skin-homing CD4+ T-helper cells expressing cutaneous lymphocyte antigen (CLA). However, an increase of CLA+ CD4+ T cells can also be observed in various inflammatory dermatoses. To facilitate early diagnosis and therapeutic monitoring of SS using flow cytometry, we evaluated the expression of CD7 and CD26 on the CLA+ CD4+ lymphocyte subset. Peripheral lymphocytes from 7 patients with SS, 16 patients with mycosis fungoides (MF) and 11 healthy controls were analysed by flow cytometry for the expression of CD4, CD7, CD26, CLA and CCR4. In addition, a longitudinal study was performed over 16 months in two patients with SS. Absence of CD7 and CD26 on CLA+ CD4+ T cells was highly specific for SS. Importantly, the absence of CD26 on CLA+ CD4+ T cells was very sensitive for SS, at 100% in our patient cohort. The number of CD26- CLA+ CD4+ T cells closely correlated with therapeutic interventions in the longitudinal analysis of two patients over more than 1 year. We conclude that the absence of CD26 expression on skin-homing CLA+ CD4+ T-helper cells is a very sensitive and highly specific parameter for early diagnosis and therapeutic monitoring of patients with SS.