Toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因突变型小鼠与野生型小鼠内毒素攻击致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的差异,分析TLR4在ALI中的作用。方法采用TLR4基因突变小鼠(C3H/HeJ品系,TLR4~(-/-)及野生型小鼠(CBA品系,TLR4~( / )),用内毒素攻击复制小鼠ALI模型,用显微病理及肺干湿重比(W/D)分析肺损伤程度,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,探讨损伤差异的可能机制。结果用1,5 mg·kg~(-1)LPS溶液经尾静脉注射复制ALI模型,结果示TLR4突变小鼠肺组织大体及显微病理损伤较野生型小鼠减轻,同时肺组织水肿(W/D)亦较野生小鼠减轻,尤其是在大剂量(5mg·kg~(-1))时,差异有显著性[(4．08±0．1)vs．(4．55±0．2),n=10,t=12．71,P＜0．01]。突变小鼠肺组织PMN浸润水平较野生型低[MPO：1 mg·kg~(-1)组,(20．73±4．58)vs．(39．97±3．66),n=10,t=13．43,P＜0．01];5 mg·kg~(-1)组,[(24．0±3．94)vs．(48．5±4．07),n=10,t=15．33,P＜0．01],且两者均较假手术组高。结论TLR4可能通过介导中性粒细胞肺内聚集而导致ALI的发生发展。     

急性肺损伤肺大鼠组织细胞间黏附分子表达及生脉饮对其影响

目的 探讨肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达与急性肺损伤(ALI)的关系以及中药生脉饮对其影响.方法 注射脂多糖(LPS)复制大鼠ALI模型,根据干预因素不同随机分为四组,即生理盐水对照组、LPS组、生脉饮+LPS组、地塞米松+LPS组.观察肺组织病理形态和ALI生物学标志并测定肺组织ICAM-1 mRNA.结果 肺血管内皮细胞ICAM-1 mRNA表达在LPS组显著高于对照组(P<0.01),生脉饮+LPS组和地塞米松+LPS组显著弱于LPS组(P<0.05,P<0.01);肺湿/干质量比,肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量以及肺血管壁通透性、肺泡通透指数也显著小于LPS组.结论 肺组织ICAM-1 mRNA表达增强参与了ALI发生、发展,生脉饮和地塞米松可使肺组织损伤减轻,其机制可能是抑制了肺组织ICAM-1 mRNA表达.     

细胞间黏附分子-1在大鼠急性坏死性胰腺炎相关性肺损伤中的表达和意义

目的:探讨细胞间黏附分子在大鼠急性坏死性胰腺炎相关性肺损伤中的表达和意义.方法:80只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为两组,假手术组(SHAM)和胰腺炎肺损伤组(ALI).术后6、12、24、48 h分别处死大鼠观察胰腺,肺脏病理学形态改变;检测血清淀粉酶、TNF-α、IL-6含量;称肺干湿重比;检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;荧光定量PCR检测肺组织细胞间黏附分子-1 (ICAM-1) mRNA表达;免疫印迹法检测肺组织中ICAM-1蛋白表达.结果:ALI组各时点肺湿干质量比较SHAM组有显著差异(P＜0.05),MPO活性测定各时点均较SHAM组升高(P＜0.05);ALI组血清淀粉酶、TNF-α、IL-6含量均较SHAM升高(P＜0.05);ALI组ICAM-1 mRNA表达较SHAM组明显升高,并且随时间进展而逐渐增加,12h达高峰,并维持在高水平表达;同时ICAM蛋白表达也逐渐升高,12h达高峰后持续高水平表达;TNF-α与ICAM-1 mRNA及蛋白质表达变化呈正相关趋势.结论:在大鼠急性坏死性胰腺炎肺组织中,ICAM-1在基因及蛋白水平上呈过度表达,并且与肺组织损伤程度密切相关,前炎性因子TNF-α在ICAM-1的过度表达中起到了重要作用.     

Toll样受体4在失血性休克小鼠肺组织HO-1表达中的作用

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在失血性休克并发急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达中的作用.方法 采用小鼠失血性休克复苏模型,48只TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ和野生型小鼠C3H/HeN随机分为2组:①假手术组;②失血休克复苏组.分别于失血性休克复苏后6 h、24 h和48 h取颈动脉血行血气分析,检测肺组织HO-1蛋白和mRNA的表达、肺组织IL-6含量及髓过氧化物酶(MPO)活性.采用方差分析进行数据统计.结果 失血休克复苏后24 h C3H/HeN和C3HL/HeJ的肺组织中HO-1 mRNA和蛋白含量的表达、IL-6含量、MPO活性与假手术组比较显著增加(P＜0.01或P＜0.05);与C3H/HeN鼠比较,休克复苏后24 h C3H/HeJ鼠的HO-1mRNA和蛋白含量、IL-6含量和MPO活性明显降低(P＜0.01或P＜0.05).C3HL/HeN鼠休克复苏后24 h并发ALI并且PaO2/FiO2＜300 mmHg.结论 TLR4受体激活在失血性休克致ALI肺组织HO-1的表达中扮演重要角色.     

重组白细胞介素-10/Fc融合蛋白对内毒素诱导急性肺损伤小鼠的实验干预作用

目的 探讨重组白细胞介素-10(rIL-10)/Fc融合蛋白对内毒素诱导的急性肺损伤(ALl)小鼠炎症调控作用及其机制.方法 向气管内注射脂多糖(LPS)制成ALl动物模型;rIL-10/Fc融合蛋白采用腹腔内给药方式.132只小鼠被随机均分为正常对照组、rIL-10/Fc对照组、ALl模型组、rIL-10/Fc治疗组.每组选择25只小鼠观察24 h存活率;其余用于检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中自细胞数量,肿瘤坏死因子-a(TNF-a)和IL-1β水平,以及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、肺组织湿/干重(W/D)比值;光镜下观察肺组织病理学改变.结果 注射LPS后4 h可引起BALF中TNF-a和IL-1β显著升高(P均＜0.01),rIL-10/Fc治疗组较ALI模型组有所降低,但差异无统计学意义;但在8 h和12 h,rIL-10/Fc融合蛋白能显著抑制BALF中TNF-a产生,在12 h抑制IL-1β产生;并明显改善LPS注射24 h后实验动物的存活率(P＜0.01).rIL-10/Fc对LPS诱导的ALI小鼠BALF中白细胞数量、肺组织MPO活性、肺组织W/D比值无显著改变.注射LPS 24 h后,肺组织出现了明显的炎性改变,但在rlL-10/Fc融合蛋白干预后没有出现显著的差异.结论 rIL-10/Fc融合蛋白能显著抑制LPS诱导的ALI小鼠肺促炎细胞因子产生,改善预后.     

降钙素基因相关肽对内毒素急性肺损伤的保护作用

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP),对内毒素急性肺损伤(ALI)的保护作用.方法:应用内毒素(LPS,6 mg/kg,iv)复制大鼠ALI模型.选用SD大鼠24只,随机分成盐水对照组(NS,n=8)、ALI模型组(LPS,n=8)、CGRP干预组(n=8).CGRP干预组按2μg/kg经腹腔注入CGRP,30 min后再经颈静脉注入LPS;LPS组以生理盐水代替CGRP;NS组中,CGRP和LPS均以等量生理盐水代替.各组大鼠均于注射LPS或生理盐水6 h后测定动脉血氧分压(PaO2)、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)及白介素-8(IL-8)含量,随后处死动物,观察肺病理改变,测定肺湿/干重比(W/D)及肺组织匀浆髓过氧化物酶(MPO)浓度.结果:注射LPS 6 h后,W/D、肺组织匀浆MPO、血清TNF-α、IL-8含量较对照组均有显著升高(P＜0.01),PaO2显著降低;而预先给予CGRP(2μg/kg)干预可显著缓解上述变化,PaO2改善,MPO含量较ALI模型组降低(P＜0.05),肺组织病理改变明显减轻.结论:小剂量CGRP能改善大鼠ALI时气体交换功能,抑制炎症介质的释放,对内毒素诱导的ALI有保护作用.     

己酮可可碱对大鼠内毒素性急性肺损伤iNOS和NO的影响

目的 :探讨己酮可可碱 (PTX)对大鼠内毒素性急性肺损伤 (ALI)iNOS和NO的影响。方法 :采用大鼠内毒素ALI模型。 2 4只SD大鼠随机分为生理盐水对照组 (CON)、内毒素组 (LPS)和PTX组 ,每组 8只。观察PTX对氧合指数 (PaO2 /FiO2 )、支气管肺泡灌洗液 (BAL)中蛋白含量、肺组织iNOS、NO3- /NO2 - 、髓过氧化物酶 (MPO)活性的影响 ,计算肺湿 /干比值(W /D)并行肺组织病理学检查。结果 :PTX组自 2h起各时间点PaO2 /FiO2 均高于LPS组 (P <0 0 5 ) ,W /D、BAL中蛋白含量、肺组织iNOS、NO含量和MPO活性均较LPS组显著降低 (P <0 0 5 )。病理学检查显示PTX组肺组织损伤程度较LPS组减轻。结论 :PTX对内毒素性ALI的保护作用可能与其抑制肺组织iNOS活性和减少NO生成有关。     

急性肺损伤大鼠肺组织肝脏X受体α表达的研究

目的 观察内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肝脏X受体α(LXRα)的改变,探讨LXRα在ALI发病中的作用机制.方法 将48只Wistar大鼠随机均分为两组.采用尾静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg复制大鼠ALI模型,对照组静脉注射生理盐水2.5 ml/kg.于致伤后1、2、4和8 h取大鼠动脉血进行血气分析及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测;取肺测定肺湿/干重(W/D)比值、髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学改变;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织LXRα mRNA、TNF-α mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量变化;用免疫组化法观察肺组织LXRα蛋白表达情况.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点动脉血氧分压(PaO2)均显著降低,肺W/D比值、MPO活性均显著升高(P均<0.05);病理观察显示肺组织受损;肺组织LXRα mRNA表达下降,TNF-α mRNA表达升高(p均<0.05),肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α亦显著升高,4 h达高峰.免疫组化显示对照组肺组织表达较高水平LXRα蛋白,ALI组在LPS致伤后可见LXRα蛋白表达较对照组显著下降(P均<0.05).结论 正常大鼠肺组织可表达LXRα,LPS可引起ALI大鼠肺组织LXRα的基因和蛋白表达下降,这可能与ALI发病有关.     

间充质干细胞上清液调控腺苷酸活化蛋白激酶保护脂多糖诱导的急性肺损伤北大核心CSCD

目的研究脐带间充质干细胞上清液对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的保护作用及机制。方法选择6周龄C57BL/6雄性小鼠共40只,随机数字法分为假手术(sham)组,LPS模型组,LPS+人脐带间充质干细胞上清液(HucMSC-cm)(LPS+cm)治疗组,LPS+HucMSC-cm+Compound C(LPS+cm+cc)干预组,每组10只。通过气管内注射LPS 5 mg/kg构建ALI模型,4 h后予以气管内注射HucMSC-cm 50μL/只构建治疗组;干预组在LPS及HucMSC-cm前30 min予腹腔注射Compound C 15 mg/kg;72 h后留取小鼠外周血检测中性粒细胞比例,并处死小鼠留取肺组织。通过苏木精-伊红染色检测小鼠肺组织病理学改变,Western Blot及免疫组化法分析肺组织中IL-6、ICAM-1、VCAM-1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phosphate AMP-activated protein kinase,p-AMPK)的表达。体外培养人肺微血管内皮细胞(HuLEC-5a),将细胞分为三组:control组、LPS组(10μg/mL)、LPS+HucMSC-cm组。处理24 h后,Western Blot检测p-AMPK及AMPK蛋白表达水平,RT-PCR检测IL-6及IL-8的mRNA表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组比较采用Tukey法检验。结果与sham组相比,LPS组小鼠肺组织充血水肿加重,肺间隔增厚和炎性细胞浸润增多,肺组织IL-6(P=0.003)、ICAM-1(P<0.001)及VCAM-1(P=0.001)蛋白水平明显上升,p-AMPK蛋白水平表达下降(P=0.013),外周血中性粒细胞比例上升(P<0.001),LPS+HucMSC-cm组肺组织充血水肿及病理学损伤较LPS组得到改善,肺组织中IL-6(P=0.003)、ICAM-1(P=0.001)及VCAM-1(P=0.006)蛋白水平下降,p-AMPK蛋白水平表达上升(P=0.002),外周血中性粒细胞比例下降(P<0.001),而LPS+cm+cc组肺组织病理学损伤较LPS+HucMSC-cm组再次加重,肺组织IL-6、ICAM-1及VCAM-1蛋白水平明显上升,p-AMPK蛋白水平表达下降,免疫组化法得到与蛋白相一致的结果。体外实验中,LPS处理后,IL-6(P<0.001)及IL-8(P=0.027)的mRNA表达较control组上升,且p-AMPK蛋白水平下降(P=0.005);LPS+HucMSC-cm组较LPS组IL-6(P=0.003)及IL-8(P=0.002)的mRNA表达下降,p-AMPK蛋白水平上升(P=0.003)。结论人脐带间充质干细胞上清液通过激活AMPK活性改善LPS诱导的ALI。     

内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织中氧化指标的变化

目的:观察内毒素性急性肺损伤过程中氧化指标的变化,了解急性肺损伤的发病机制.方法:尾静脉注射脂多糖(LPS)(10mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型,观察大鼠一般状态及肺组织病理学变化,测定各组各时相点肺湿/干重比(W/D)、肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平改变.结果:静脉注射LPS后大鼠反应强烈,肺组织出现程度不一的弥漫性炎症改变;模型组(LPS组)各时相点急性肺损伤病理学评分、肺W/D及肺组织匀浆中MPO、MDA含量均高于对照组(NS组),并在6 h达高峰.LPS组肺组织SOD含量低于NS组,在6 h含量最低.结论:内毒素性急性肺损伤过程中出现的氧化应激,尤其是ROS的产生,可能是内毒素肺损伤的重要机制.     

Burn-induced acute lung injury requires a functional Toll-like receptor 4

The role of the Toll-like receptor 4 (TLR4), a component of the innate immune system, in the development of burn-induced acute lung injury (ALI) has not been completely defined. Recent data suggested that an intact TLR4 plays a major role in the development of organ injury in sterile inflammation. We hypothesized that burn-induced ALI is a TLR4-dependent process. Male C57BL/6J (TLR4 wild-type [WT]) and C57BL/10ScN (TLR4 knockout [KO]) mice were subjected to a 30% total body surface area steam burn. Animals were killed at 6 and 24 h after the insult. Lung specimens were harvested for histological examination after hematoxylin-eosin staining. In addition, lung myeloperoxidase (MPO) and intercellular adhesion molecule 1 immunostaining was performed. Lung MPO was measured by an enzymatic assay. Total lung keratinocyte-derived chemoattractant (IL-8) content was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Western blot was performed to quantify phosphorylated IκBα, phosphorylated nuclear factor κB p65 (NF-κBp65), and high mobility group box 1 expression. Acute lung injury, characterized by thickening of the alveolar-capillary membrane, hyaline membrane formation, intraalveolar hemorrhage, and neutrophil infiltration, was seen in WT but not KO animals at 24 h. Myeloperoxidase and intercellular adhesion molecule 1 immunostaining of KO animals was also similar to sham but elevated in WT animals. In addition, a reduction in MPO enzymatic activity was observed in KO mice as well as a reduction in IL-8 levels compared with their WT counterparts. Burn-induced ALI develops within 24 h after the initial thermal insult in our model. Toll-like receptor 4 KO animals were clearly protected and had a much less severe lung injury. Our data suggest that burn-induced ALI is a TLR4-dependent process.     

神经降压素对内毒素诱导的急性肺损伤的保护作用及机制

目的探讨神经降压素在内毒素（LPS）所诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）中的保护作用,并明确其在炎症反应中的作用。 方法100只健康无特异病原级性C57BL/6小鼠（雄性50只,雌性50只）,体质量（20~25 g）,由上海南方模式实验动物中心提供。所有小鼠随机分为以下5组：①正常对照组：60 μl无菌磷酸缓冲盐溶液（PBS）滴鼻处理小鼠;②急性肺损伤模型组：60 μg/只LPS滴鼻处理;③20 mg/kg神经降压素组：先使用LPS诱导肺损伤,诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予20 mg/kg神经降压素处理;④40 mg/kg神经降压素给药组：先使用LPS诱导肺损伤,诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予40 mg/kg神经降压素处理;⑤80 mg/kg神经降压素给药组：先使用LPS诱导肺损伤,诱导后1 h通过尾静脉注射的方式给予80 mg/kg神经降压素处理。每组20只。肺损伤诱导后24 h,检测不同处理组小鼠肺损伤程度、髓过氧化物酶（MPO）活性、炎症细胞的浸润、肺水肿程度以及肺泡灌洗液中促炎症细胞的分泌水平。 结果与正常对照组相比,LPS的滴鼻处理显著提高了小鼠肺组织的损伤程度,包括MPO活性、炎症细胞的浸润、肺泡灌洗液内促炎症细胞因子［肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素（IL）-6、IL-1b以及单核细胞趋化因子（MCP）-1］的分泌等（P<0.05）;与内毒素诱导的急性肺损伤模型组相比,神经降压素的给药处理明显减轻了小鼠肺组织损伤的程度,包括MPO活性、炎症细胞的浸润、肺泡灌洗液内促炎症细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1b以及MCP-1）的分泌等（P<0.05）,且这种保护性作用呈现剂量依赖性。 结论神经降压素能够有效减轻由内毒素诱导的ALI,其机制可能是通过封闭由速激肽所介导的炎症反应信号通路,进而减轻内毒素引起的炎症反应对肺组织所造成的炎症损伤来实现。     

阻断toll样受体对脂多糖致急性肺损伤的保护作用

目的：本文旨在探讨阻断toll样受体（TRL4）对脂多糖（LPS）致急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法将60只健康雄性清洁级SD大鼠分为正常组、损伤组和阻断组,每组20只。损伤组大鼠采用尾静脉注射LPS（6mg/kg）复制ALI模型;阻断组同时注射TLR4抗体（10mg/mL）;正常组给予等容积生理盐水。3h后处死大鼠,采用凝胶滞留法检测核因子-κB（NF-κB）活性;Westernblot印记分析法检测抑制蛋白（IκB-α）水平;检测肺组织匀浆肿瘤坏死因子α细胞因子（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平。结果与正常组相比,损伤组和阻断组肺组织湿质量/干质量比值增高,NF-κB活性升高,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平升高（P＜0．05）,而IL-10水平降低（P＜0．05）。而比较损伤组与阻断组发现,阻断组肺组织湿质量/干质量比值降低,NF-κB活性降低,IκB-α、TNF-α、IL-1β水平明显低于损伤组（P＜0．05）,IL-10水平高于损伤组（P＜0．05）。结论采用抗TLR4单克隆抗体阻断TLR4介导的信号传导可明显降低NF-κB活性和IκB-α、TNF-α、IL-1β水平,同时提高IL-10水平阻断TLR4,对LPS致ALI有一定的保护作用。     

p38 MAPK抑制剂对急性肺损伤的治疗作用

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580对LPS诱导的兔急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制.方法 用大肠杆菌内毒素(LPS)制备兔ALI模型;测定不同时间点的动脉血气分析、血清TNF-α和ICAM-1浓度;测量肺干/湿质量比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变.结果 动物注射内毒素1 h后P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显升高(P＜0.05),肺D/W下降(P＜0.05);应用SB203580治疗后,P_(A-a)O_2、血浆TNF-α和ICAM-1水平、肺损伤评分均明显下降(P＜0.05),肺D/W升高(P＜0.05).结论 本研究结果 表明,p38 MAPK抑制剂SB203580对内毒素诱导的ALI,可以明显减轻低氧血症、减轻肺水肿、改善组织病理学和减轻炎症反应.     

The protective effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cell (BMSC) on LPS-induced acute lung injury via TLR3-mediated IFNs,MAPK and NF-κB signaling pathways

The study attempted to clarify the protective role of bone marrow-derived mesenchymal stem cell (BMSC) transplantation on LPS-induced acute lung injury (ALI) of rats. BMSC were obtained from bone marrow of rat, cultured and proliferated in vitro. Rats of ALI were established through lipopolysaccharide (LPS) administration. Male rats were allocated to control group, ALI group and BMSC, transplantation group. Rats were sacrificed after BMSC injection after 12 h, 24 h and 48 h. Here we investigated the role of BMSC in LPS-induced alveolar macrophages to further demonstrate the mechanism of BMSC to lung injury. TLR3, a member of Toll-like receptor family, has been found in macrophages and the cell surface. In our study, first BMSC successfully reversed LPS-induced lung injury by hematoxylin-eosin (H&E) staining, ameliorated apoptosis via TUNEL and flow cytometer analysis, as well as improved cell structure. And then, western blot, quantitative real-time PCR, immunohistochemistry and immunofluorescence analysis were used to confirm that TLR3 was significantly down-regulated for BMSC treatment. Subsequently, TRIF and RIP1, down-streaming signals of TLR3, were inhibited greatly, leading to TRAF3, MAPK as well as NF-κB inactivity. Our results indicated that BMSC transplantation group displayed inhibitory effects on interferon (IFNs) levels via TLR3 in LPS-induced ALI and preventive effects on inflammation response via TLR3-regualted MAPK and NF-κB signaling pathway in LPS-induced lung injury. The present study indicated that BMSC could display protective effects on LPS-induced ALI and provide an experimental basis for clinical therapy.     

FLT3信号通路介导常规树突状细胞启动和调节急性肺损伤早期炎症反应的机制研究

目的 明确FLT3信号通路依赖的肺常规树突状细胞(cDCs)对急性肺损伤(ALI)早期炎症反应和肺损伤的影响及其调控机制.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只按随机数字表法分为正常对照组、ALI组、FLT3L预处理组、来他替尼预处理组和DMSO对照组,分别给予FLT3L、来他替尼预处理5d后采用LPS气道内滴入复制ALI模型,6h及24h后处死小鼠留取肺组织,采用流式细胞术检测CD11c+ CD11b+双阳性细胞比例评价肺cDCs的数量,检测肺cDCs的MHCⅡ及CD80表达比例评价肺cDCs的成熟程度;ELISA检测IL-6、TNF-α评价肺部炎症反应的强度;计算肺湿质量/体质量比(LWW/BW)评价肺水肿程度;肺组织HE染色行组织病理学检查评价肺损伤程度;比色法检测肺MPO活性评价中性粒细胞的浸润;qRT-PCR检测转录因子T-bet及GATA-3mRNA的表达比例评价辅助性T细胞Th1/Th2亚群漂移;ELISA检测IFN-γ及IL-4表达评价Th1/Th2细胞因子的平衡.结果 肺cDCs聚集及成熟程度高峰出现于ALI成模后6h(P＜0.05).FLT3L预处理显著增加肺cDCs的聚集和成熟程度(P＜0.05),上调肺部炎症反应并加重肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著上升(P＜0.05).来他替尼预处理显著抑制肺cDCs的聚集和分化成熟(P＜0.05),下调肺部炎症反应并减轻肺损伤,同时肺MPO活性、T-bet/GATA-3的表达比例和肺IFN-γ水平均显著下降(P＜0.05).结论 肺cDCs可通过FLT3信号通路调节中性粒细胞的浸润和Th1/Th2免疫反应的平衡,进而启动和调节ALI早期炎症反应和肺损伤.     

Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度;取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高;与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高;与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高;与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达;调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.     

Mechanism of TLR4 mediated immune effect in transfusion-induced acute lung injury based on Slit2/Robo4 signaling pathway

BackgroundTransfusion-related acute lung injury (TRALI) is the infusion of blood or blood system.ObjectiveTo explore the mechanism of TLR4-mediated T cell immune effect in TRALI.MethodsIn this animal study, a mouse model of LPS-induced TRALI was established. Sixty adult C57/BL6 mice (wild-type, WT) were randomly divided into 5 groups: 1) normal WT type, 2) LPS control group of WT type lipopolysaccharide, 3) WT type TRALI group (LPS + MHC-I mAb), 4) (TLR4 antibody) lipopolysaccharide LPS control group, 5) (TLR4 antibody) TRALI group (LPS + MHC-I mAb). Mice were injected with LPS (0.1 mg/kg) and MHC-I mAb (2 mg/kg) into the tail vein. H&E staining was performed to detect pathological features. The myeloperoxidase (MPO) activity and the level of inflammatory cytokines in lung tissue homogenate supernatant were measured. Blood, spleen single-cell suspension, and bronchoalveolar lavage fluid were collected to detect the ratio of Treg and Th17 cells by flow cytometry. RT-PCR and WB were used to detect mRNA or protein expression.ResultsTLR4 mAb treatment alleviated the pathogenesis of LPS-induced TRALI in vivo, the MPO activity, and the level of proinflammatory factors in lung tissues. TLR4 exerted its function by changing of Treg/Th17 ratio via the SLIT2/ROBO4 signaling pathway and downregulating CDH5 and SETSIP.ConclusionTLR4 mediates immune response in the LPS-induced TRALI model through the SLIT2/ROBO4 signaling pathway.     

高迁移率族蛋白B1在失血性休克致急性肺损伤中的作用

目的 探讨高迁移率族蛋白 B1(high mobility group box1,HNGB1)在失血性休克(hemarrhag-ic shock,HS)所致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠体内的变化和意义.方法健康雄性BALB/c小鼠42只,随机分为对照组、HS致ALI组和抗HMGB1抗体干预组.心脏穿刺抽血复制小鼠HS致ALI模型,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织IL-1β,TNF-α,Westemblot检测肺组织HMGB1,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺脏病理变化.统计学采用方差分析及LSD-t检验.结果 HS后2 h即可见肺血管通透性增高,肺脏出现弥漫件炎细胞侵润.肺绀织IL-1β和TNF-α在HS诱导的ALI早期(4 h)升高[IL-1β(333.83±31.18)vs.(284.83±30.49),P=0.014;TNF-α(805.00±114.67)vs.(584.17±181.17),P=0.023];肺组织HMCB1在ALI 16～48 h显著升高[HMGB1/β-actin(0.99±0.16)vs.(0.50±0.18),P=0.003].ALI组小鼠肺MPO及EBD水平显著增高,分别于ALI 4 h和24 h达峰值[MPO(38.33±3.88)vs.(8.00±0.89),P<0.01;EBD(20.05±2.79)vs.(4.63±0.43),P<0.01];抗HMGB1抗体干预组肺组织MPO及EBD峰值显著下降[MPO(25.67±1.63)vs.(38.33±3.88),P<0.01;EBD(5.68±0.53)vs.(20.05±2.79),P<0.01],抗体干预组小鼠肺组织病理切片见肺部弥漫性炎细胞浸润减轻,抗体干预24 h组尤为明显.结论 HNGB1是HS所致ALI的晚期炎症介质,HNGBl拮抗治疗能减轻小鼠HS所致ALI病理牛理改变.