Dahl高血压大鼠睾丸中eNOS的表达

目的：研究高血压对Dahl高血压大鼠睾丸各细胞eNOS表达及生殖功能的影响。方法：应用免疫组化ABC法及细胞培养检测睾丸细胞中eNOS的表达情况。结果：在Dahl高血压大鼠睾丸中，eNOS定位于Sertoli细胞，Leyaig细胞和部分生精细胞的胞浆，其表达始终高于正常睾丸组织，并随着高血压病程的进展呈逐渐升高趋势。在体外培养的正常及高血压大鼠的Sertoli细胞中eNOS表达量无明显差异。睾酮水平随血压升高而下降。结论：高盐饮食及高血压使大鼠Serxoli细胞和Leydig细胞中eNOS高表达并使睾酮水平下降。两者作用对睾丸的生殖功能产生了影响。     

成人睾丸支持细胞的分离培养及其免疫豁免机制

目的：建立成人睾丸支持细胞的体外培养方法并探讨其免疫豁免机制。方法：依次用胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶及脱氧核糖核酸酶消化制备成人睾丸支持细胞，以SABC染色法检测支持细胞上Fas-L和TGF-β1的表达。将其与成人脾细胞共同培养，用MTT比色法检测其对脾细胞增殖的抑制作用。结果：成人睾丸支持细胞占培养细胞总数的80％以上，活性可达90％。睾丸支持细胞上可表达Fas-L和TGF-β1，体外可抑制共培养的脾细胞增殖。结论：建立了培养成人睾丸支持细胞的方法，其免疫豁免机制可能与Fas-L和TGF-β1的表达有关。     

小鼠睾丸间质细胞体外原代培养方法的建立

背景：组织块培养睾丸生殖细胞对污染不容易控制,胰蛋白酶消化接种培养睾丸生殖细胞可能损伤细胞。 目的：建立一种切实可行的小鼠睾丸间质细胞体外原代培养方法。 方法：小鼠睾丸间质细胞的分离采用胶原酶消化法,纯化采用Percoll等密度梯度离心法,活率鉴定采用锥虫蓝拒染法,纯度鉴定采用3β-羟基固醇脱氢酶染色方法。 结果与结论：小鼠睾丸间质细胞纯度达可达90%以上;体外培养的细胞形态完整、增殖速度快、贴壁生长状态良好。说明实验成功建立了小鼠睾丸间质细胞的体外原代培养模型。     

小鼠睾丸间质细胞分离培养方法的研究进展

小鼠睾丸间质细胞是目前医学研究的常用细胞.高纯度的分离、纯化及体外培养小鼠睾丸间质细胞对于相关研究的开展至关重要.本文对目前常用的几种小鼠睾丸间质细胞分离、纯化和体外培养方法以及各类方法的原理进行了综述.     

体外贴壁和微囊化生长睾丸支持细胞形态与其功能的相关性

背景：细胞体外培养一直是研究活细胞的主要方法,但体外培养细胞的形态和生长环境与体内环境有很大差异,因此,细胞的生物活性是否能准确反映体内该细胞的状态尚不清楚。 目的：观察体外培养细胞的形态与其生理功能间的相关性。 方法：体外培养不同生长状态的小鼠睾丸支持细胞,一种为贴壁生长状态,细胞呈扁平状;另一种为微囊化生长状态,细胞呈立体球状。分别取2种不同形态睾丸支持细胞的培养液,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,获取相应的蛋白质条带,通过蛋白质相对分子质量的计算来确认睾丸支持细胞分泌蛋白质的种类。 结果与结论：贴壁生长的扁平状的睾丸支持细胞培养液中可辨别出14个条带,蛋白质相对分子质量分布在(17~158)×10³之间;微囊化生长的立体球状睾丸支持细胞培养液中可辨别出10个条带,蛋白质相对分子质量分布在(17~58)×10³之间。提示不同形态的睾丸支持细胞在蛋白质分泌数量和种类上都存在着差异,细胞的形态与其生理功能之间存在着明显的相关性。     

咖啡因对胎鼠及乳鼠睾丸生殖细胞数量和PCNA表达的影响

为了深入了解咖啡因对胎儿、新生儿生殖细胞数量及其ＰＣＮＡ（增殖细胞核抗原）表达的影响，本实验采用低（０．３ｍＭ），中（０．６ｍＭ）、高（１．２ｍＭ）浓度Ｃａｆ．体外培养ＳＤ孕１８天胎鼠、０天及４天乳鼠睾丸组织块，培养时间分别为１周、２周、３周、观察Ｃａｆ．对睾丸内生殖细胞数量及其表达ＰＣＮＡ的影响。结果如下：（１）１８天胎鼠睾丸培养组织内生殖细胞数量受Ｃａｆ．影响最小，０天乳鼠次之，４天习受影响较     

类固醇生成因子-1对青春期小鼠睾丸中睾酮生成及精子发生的调节

目的 探讨类固醇生成因子-1(SF-1)对青春期小鼠睾丸内分泌功能及精子发生过程的调节作用，并推测其可能机制。方法 用免疫组织化学方法定位SF-1在不同年龄小鼠睾丸中的细胞分布，进一步分离有SF-1阳性表达信号的青春期小鼠Leydig细胞在体外进行培养，用反义转染方法抑制细胞内SF-1蛋白质的表达，检测细胞的睾酮分泌量及睾酮生成酶P450scc的mRNA水平变化。结果 1．SF-1在青春期Leydig细胞核有表达；反义抑制细胞内SF-1蛋白质的表达，则细胞的睾酮分泌量及P450scc mRNA水平均显著下降；2．SF-1在青春期小鼠睾丸B型精原细胞及细线期、偶线期、粗线期的初级精母细胞核中也有表达。结论 1．SF-1参与调节青春期睾丸Leydig细胞中P450scc基因的转录，影响睾酮分泌；2．SF-1作为一种核受体，可能也是生精过程中重要的转录调控因子，调节B型精原细胞向初级精母细胞分化及初级精母细胞第1次减数分裂过程中特异表达的基因转录过程，从而影响青春期小鼠精子发生过程。     

吗啡依赖对小鼠睾丸组织的影响及其相关机制分析

为了解吗啡依赖对小鼠睾丸发育及其功能的影响 ,研究了吗啡依赖对睾丸生精细胞凋亡的影响及其可能机制。以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡成瘾小鼠模型 ,用纳洛酮催促戒断 ,观察戒断症状 ,采用原子吸收、放射免疫分析和原位缺口平移 (ISNT)技术观察睾丸细胞锌和钙调素 (CaM)含量、睾丸超氧歧化酶 (SOD)、还原型谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活性和睾丸组织中凋亡细胞数目。结果表明 ,与对照组相比 ,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组躯体运动神经功能和植物神经功能亢进 ,睾丸锌和CaM含量减少 ,睾丸SOD、GSH Px活性降低 ,睾丸组织中生精细胞凋亡数目明显增多 (P <0 0 5或P <0 0 1)。吗啡依赖小鼠可诱导睾丸组织中细胞凋亡 ,这种变化可能与睾丸组织中锌和CaM含量减少、睾丸SOD和GSH Px活性降低有关。     

睾丸支持细胞免疫豁免研究进展及其应用

由于独特的免疫豁免能力和有效的固有免疫调控作用,哺乳动物的睾丸拥有特殊的免疫环境。睾丸免疫豁免功能使具有免疫原性的生殖细胞免受免疫系统攻击,而局部固有免疫则在抵御病原微生物感染中发挥作用。睾丸免疫稳态遭到破坏可引起睾丸炎症,甚至男性不育。拥有复杂三维结构的睾丸支持(Sertoli)细胞是睾丸的重要组成细胞,除参与组建精原细胞生长微环境,还通过分泌多种细胞因子和免疫抑制因子调节免疫反应以维持免疫稳态。Sertoli细胞的免疫豁免特性为细胞、组织和器官的替代治疗提供了新思路。文章综述了Sertoli细胞免疫豁免机制的研究进展及其应用。     

BrdU标记在大鼠睾丸支持细胞体外培养中的应用

目的:探讨大鼠睾丸支持细胞原代培养5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)的最佳标记时间、剂量.方法:大鼠睾丸支持细胞进行体外原代培养;以终浓度分别为5、10、15、20 μmol/L的BrdU检测睾丸支持细胞的最佳标记剂量;在细胞培养的12、24、36、48 h掺入BrdU,使终浓度为15 μmol/L,测定BrdU的最佳标记时间;免疫细胞化学法跟踪观察大鼠睾丸支持细胞在体外培养中的分化发育情况和BrdU标记率.结果:免疫组化检查提示最终浓度为15lμmol/L和孵育36 hBrdU标记率均>90%,并且连续传3代均可检测到.结论:终浓度15 μmoL/L及孵育36 h为BrdU标记睾丸支持细胞的最佳剂量及时间,表明BrdU标记可用于睾丸支持细胞体内后的存活、生长的动态观察.     

睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

目的　探讨睾丸支持细胞 (SC)对体外培养神经元生长发育的促进作用。　方法　将SCs制备成饲养层和SCs条件培养液 (SCM)后与神经元共培养 ,观察培养细胞的存活数和突起数 ,并应用图像分析仪观察细胞的面积。　结果　SCs饲养层及SCM培养神经元的存活数、突起数和胞体面积明显高于对照组 (P <0 0 1)。　结论SCs对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。     

原位缺口平移法检测睾丸组织中凋亡细胞的应用

目的：研究原位缺口平移技术在显示睾丸细胞凋亡的应用。方法：采用原位缺口平移技术检测大鼠睾丸组织中ＤＮＡ断裂，显示细胞凋亡。结果：在睾丸组织中出现阳性标记细胞，在１０μｍ厚的切片上，每条精曲小管可见０～３个阳性标记细胞。结论：该方法可用于不同生理和病理条件下睾丸细胞凋亡的研究。     

大鼠出生前后睾丸间质细胞的形态学观察和计量分析

对大鼠睾丸间质细胞出生前后的发育进行了形态学观察和计量分析。睾丸经戊二醛固定，树脂包埋，半簿切片。用点取截距法求得间质细胞核和平均体积，用点计数法求得间质细胞在睾丸的体积密度和细胞的核质比。依据核的平均体积和核质比计算出细胞的平均体积。在计算睾丸的间质细胞总数时考虑了组织收缩的影响。文内对出生前后间质细胞的形态及数量变化的意义进行了讨论。     

睾丸活检的病理组织学分析

目的探讨睾丸活检在男性不育诊治中的临床及病理意义。方法镜检观察36例男性不育者的睾丸活检组织,依据睾丸生殖病理进行诊断分类。结果36例男性不育患者:生殖功能低下12例,占33.3%;支持细胞综合征5例及曲细精管透明变性型5例,各占13.8%;生精细胞脱落和排列紊乱4例及混合损害型4例,各占11.1%,生精阻滞3例,占8.3%;未成熟型睾丸2例,占5.6%;正常或基本正常的睾丸组织1例占2.8%。结论睾丸活检是诊断无精子症或少精症的最直接的方法,并对治疗及预后判断有实用价值。     

胎儿睾丸组织发育过程中c-fos的表达

目的:研究原癌基因c-fos在胎儿睾丸组织发育过程中的表达变化。方法:H-E染色、免疫组化和图像分析。结果:c-fos在胎儿睾丸组织间质细胞(Leydig cell,LC)、生精细胞、管周肌样细胞均呈阳性反应。支持细胞未见阳性表达。c-fos在12周胎儿睾丸组织中已有阳性表达,16周可明显区分阳性间质细胞与生精细胞,24周达到高峰,此后逐渐减弱,以后间质细胞几乎不可见。结论:c-fos在胎儿睾丸的组织发育中有不同的表达,表明c-fos在睾丸发育过程中可能起着重要的作用。     

多聚酶链式反应检测睾丸妇性化综合征患者的Y染色体

采用ＤＮＡ体外扩增技术对１例睾丸女性化综合征患者进行了研究。结果显示：ＰＣＲ技术能快速，准确地检出Ｙ染色体，可代替或辅助细胞遗传学检查。这对此征的研究及检测方法学的探讨具有重要意义。     

大鼠发育中睾丸巨噬细胞的免疫组化观察

用显示溶菌酶的免疫组化方法，对大鼠睾丸巨噬细胞的出现时间及分布进行了观察。睾丸巨噬细胞出现于胚胎发育的第１６天。睾丸巨噬细胞散在于睾丸索之间及白膜下。随着发育，细胞密度增加，但生后细胞密度一度下降。胚胎１７天至生后１天，睾丸纵隔和附睾结合部集中了大量的巨噬细胞。     

克氏综合征睾丸体积大小与性激素的相关性及睾丸组织超微结构的研究

目的探讨克氏综合征睾丸体积大小与性激素的相关性及造成克氏综合征男性不育的发病机理。方法对20例克氏综合征患者和10例正常对照组血清进行性激素测定，同时作睾丸组织活检进行病理切片及电镜超薄切片观察。结果克氏综合征与正常对照组睾丸体积、生精小管直径和管壁厚度及血清FSH、LH、T之间均有极显著的差异（P〈0．001），患者睾丸体积大小与FSH和LH值呈负相关性，与T值呈正相关性；睾丸组织超微结构观察结果表明生精小管界膜有不同程度的显著异常变化，主要表现为界膜增厚及纤维化增生，基膜增厚及纤维化增生，肌样细胞的空泡状变性或去分化增生。支持细胞病理变化呈现多样性特征，胞质内有大量内质网呈空泡状变性，部分线粒体扩张。间质内血管壁明显增厚及血管内皮细胞肿胀，基膜及血管腔内大量胶原纤维增生。结论推导出患者睾丸体积大小与FSH、LH、T的多重相关回归方程；同时认为克氏综合征睾丸组织结构发生严重的纤维化增生，促使其生精细胞形成过程发生早期的、程度严重的障碍和病理学变化，这是造成其男性不育的主要原因。     

高原地区藏绵羊与小尾寒羊睾丸细胞外基质组织分布特征比较

目的探索细胞外基质相关蛋白在高原地区藏绵羊与小尾寒羊睾丸的分布及组织化学特征。方法应用组织化学方法、Image-Pro Plus(IPP)图像分析技术及电子显微镜,观察比较藏绵羊(4只)与小尾寒羊(5只)睾丸组织化学特点及层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)的分布特征。结果与小尾寒羊睾丸相比,藏绵羊生精小管基膜及间质组织内胶原纤维及网状纤维丰富;过碘酸-雪夫(PAS)及阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色显示,藏绵羊睾丸间质血管及生精小管固有膜阳性反应更为丰富。免疫组织化学显示,ColⅣ在藏绵羊及小尾寒羊生精小管上皮均呈阳性表达,LN在藏绵羊Sertoli细胞及管周肌样细胞呈弱阳性表达,而在小尾寒羊Sertoli细胞、Leydig细胞及管周肌样细胞为中等阳性表达;HSPG在藏绵羊及小尾寒羊肌样细胞均呈强阳性表达,而在Sertoli细胞及Leydig细胞均为弱表达。免疫组织化学图像分析结果显示,藏绵羊睾丸组织中ColⅣ和LN的分布显著低于小尾寒羊睾丸组织(P0.01),HSPG检测结果则显著高于小尾寒羊睾丸组织(P0.01)。电子显微镜下观察,藏绵羊及小尾寒羊生精小管固有膜可见发育良好的生殖上皮基膜以及1层明显的Ⅰ型胶原纤维,藏绵羊固有膜胶原纤维层丰富且Leydig细胞内脂滴明显。结论高原环境下藏绵羊睾丸固有膜及间质结缔组织较为丰富,在一定程度上影响了生精上皮发育;藏绵羊睾丸间质血管壁及生精小管固有膜AB-PAS阳性反应增强与Leydig细胞分泌功能相关,小尾寒羊睾丸组织LN表达显著增加及HSPG显著降低与生精上皮发育程度关系密切。     

IL—1对输精管结扎大鼠睾丸间质细胞功能影响的体外研究

本文观察ＩＬ－１对正常和输精管结扎大鼠睾丸间质细胞（Ｌｅｙｄｉｇｃｅｌｌｓ，莱迪希细胞）细胞功能的影响，结果表明：在人绒毛膜促性腺激素（ｈｕｎａｎｃｈｏｒｉｏｍｉｃｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎｈＣＧ）的作用下，正常和输精管结扎大鼠睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞培养上清中睾酮和ｃＡＭＰ的含量均明显高于相应的对照孔，且两组比较无明显差异，说明输精管结扎后睾丸Ｌｅｙｄｉｇ细胞对垂体激素的反应性并无改变，两组细胞受ＩＬ