精神分裂症患者血浆及单核细胞中microRNA表达水平差异的研究

目的 探讨精神分裂症患者血浆和外周血单核细胞内microRNA（miRNA或miR）表达水平的差异.方法 对连续入组60例精神分裂症患者和72例正常对照,使用实时荧光定量PCR技术检测病例组和对照组血浆和外周血单核细胞内9种miRNA（miR-30e、miR-34a、miR-181b、miR-195、miR-346、miR-432、miR-7、miR-132、and miR-212）的相对表达水平.结果 病例组血浆miRNA-132、miRNA-195、miRNA-30e、miRNA-7（5.06± 1.16、2.99± 1.27、1.88±1.62、9.59±1.85）较对照组（5.91±0.93、4.45±1.06、3.56± 1.30、11.8±2.53）显著上调（P＜0.05 ～ P＜0.001）.病例组外周血单核细胞miRNA-212、miRNA-34a、miRNA-30e（0.28±0.54、2.69± 1.10、-4.72± 1.01）较对照组（0.84±0.64、3.97±1.01、-3.55±1.26）同样显著上调（P＜ 0.05～ P＜0.001）.ROC曲线分析显示,miR-30e在血浆和单核外周血中均具有较高诊断价值.从血浆提取的microRNA-30e的AUC是0.767 （95％CI：0.608～0.926）,敏感度90.90％,特异度60.00％;从外周血单核细胞提取的miRNA-30e的AUC是0.756（95％ CI：0.584～0.929）,敏感度81.80％,特异度68.00％.结论 精神分裂症患者外周血血浆及单核细胞中microRNA的表达水平不同,无明显的相关性.miR-30在血浆和单核外周血中具有较高的诊断价值.     

精神分裂症患者血浆中miRNA表达水平与精神症状的关联性评价

目的:探究在精神分裂症患者的病程中,miRNA的差异性表达,评价其与精神症状之间关联性,为临床精神类疾病的治疗提供依据。方法:自我院2015年6月-2016年6月期间收治的均为首发精神分裂症患者,分别测定患者血浆中不同miRNA的表达水平及其与精神症状之间的关系。结果:miR-346与一般精神病理总分呈负相关(P0.05);miR-34a与激活性、攻击性症候群均呈负相关(P0.05);但其与miRNA并无差异性表达(P0.05)。miR-34a高表达的激活性及攻击性症状群评分均显著低于miR-34a低表达组(P0.05)。miR-346高表达组的反应缺乏症状群评分显著低于miR-346低表达组(P0.05)。miR-346与一般精神量表有明显的相关性(P0.05),且miR-34a与激活性、攻击性症候群有明显的关联性(P0.05)。结论:在精神分裂症患者的病程中,miR-346和miR-34a存在差异表达,二者与精神症状之间存在一定的关联性,对患者的病情及预后判断有一定的临床价值。     

MicroRNA-181b和microRNA-130a在冠状动脉粥样硬化性心脏病患者血浆中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-181b（miR-181b）和microRNA-130a（miR-130a）在冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病）患者血浆中的表达及临床意义。方法选取106 例冠心病患者和40 例健康者作为对照组,收集临床资料,行冠状动脉造影检查及Gensini评分,利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测冠心病患者和对照组血浆中miR-181b 和miR-130a 的表达,利用受试者工作特征曲线（ROC 曲线）对血浆中miR-181b 和miR-130a 的相对表达量在评估冠心病患者病程进展中的价值进行分析。结果冠心病患者血浆中miR-181b 和miR-130a 相对表达量与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量低于对照组,而miR-130a 相对表达量则高于对照组,冠心病患者中,中重度组患者血浆miR-181b 相对表达量低于轻度组,而miR-130a 相对表达量则高于轻度组;Pearson 相关分析显示,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量均与Gensini 积分、脂蛋白a（Lp-a）、高敏C 反应蛋白（hs-CRP）呈负相关（r =-0.504、-0.382 和-0.415,p <0.05）,血浆中miR-130a 相对表达量均与Gensini 积分、Lpa 和hs-CRP 呈正相关（r =0.586、0.335 和0.394,p <0.05）;ROC 曲线分析显示,冠心病患者血浆中miR-181b 相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.871（95%CI：0.807,0.936）,敏感性75.0%,特异性82.3%,血浆中miR-130a 相对表达量在评估患者病程进展时,曲线下面积0.931（95%CI：0.887,0.976）,敏感性93.2%,特异性81.2%。结论冠心病患者血浆中miR-181b 表达水平降低,而miR-130a 表达水平升高,且均与患者病情严重程度有关,可作为评估患者病情进展的指标。     

柔红霉素对HL-60敏感细胞miRNA-21等5种miRNA表达的影响

目的：通过观察柔红霉素（DNR）作用后急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株HL‐60敏感细胞中miRNA‐21、miR‐NA‐181d、miRNA‐125b、let‐7f和miRNA‐27a5种miRNA的表达变化，探讨他们与HL‐60细胞耐药性形成的相关性及其潜在的临床意义。方法常规培养HL‐60和HL‐60/A细胞。设置实验组、对照组1和对照组2，实验组使用小剂量DNR持续作用于HL‐60敏感细胞。对照组1和2分别是HL‐60/ADNR耐药细胞和不接受DNR持续作用的HL‐60敏感细胞。采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测DNR对HL‐60细胞增的影响。采用实时荧光定量PCR（RT‐PCR）检测miRNA‐21等5种miRNA的表达量。结果MTT实验结果：随着小剂量DNR持续作用时间的延长，DNR对HL‐60敏感细胞的抑制作用减弱，并于加药后第10天左右，抑制率逐渐进入平台期。RT‐PCR检测结果：与对照组2比较，对照组1耐药细胞中的miRNA‐181d、miRNA‐27a和let‐7f的表达下调（P＜0．05），而实验组敏感细胞中这些miRNA的表达于加药后的第7天开始下调（P＜0．05）。相反，对照组1中的miRNA‐21和miRNA‐125b表达上调（P＜0．05），而实验组敏感细胞中这2种miRNA的表达则于加药后的第7天开始上调（P＜0．05）。结论miRNA‐21、miRNA‐125b、miRNA‐181d、miRNA‐27a和let‐7f5种miRNA表达的改变可能与HL‐60细胞耐药性有关。     

外周血中miRNAs表达水平对精神分裂症的诊断价值

目的:探讨外周血中miRNAs的表达水平对精神分裂症的诊断价值.方法:选取40例精神分裂症患者作为观察组,40例健康体检者作为对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)鉴定精神分裂症患者外周血液中miRNAs表达情况.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价miRNAs的诊断效能.采用可视化和集成发现数据库(DAVID)工具对miRNAs靶基因进行基因功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果:两组受试对象外周血miR-30d-5p、miR-181b-3p、miR-652-5p、miR-193a-3p、miR-181b-5p、miR-346、miR-572、miR-7-5p、miR-564、miR-548d-3p和miR-30a-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p表达水平高于对照组(P<0.05);miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p的ROC曲线下面积(AUC)值分别为0.763,0.659和0.725,三者联合检测的AUC值为0.802.miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p靶基因与突触结构和神经功能密切相关,三者共同靶基因SATB2和PER2在精神分裂症患者中异常表达(P<0.05).结论:miR-34a-5p、miR-449a和miR-22-3p在精神分裂症中异常表达,三者及其靶基因结合有望作为精神分裂症诊断规范和治疗监测的生物标记物.     

精神分裂症患者血清差异 microRNA 谱的检测

目的：目前精神分裂症的临床诊断缺乏统一的标准。文中研究精神分裂症患者血清中差异miRNA表达谱,为该病的临床诊断提供依据。方法采用FlashTag TM Biotin RNA芯片技术和SAM软件筛选精神分裂症患者与健康受试者血清中差异表达的miRNA,用实时荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）进行验证。结果筛选出3个差异表达的miRNA,其中hsa-miR-1281上调,表达倍数变化为1．50881;hsa-miR-2861、hsa-miR-638下调,表达倍数变化分别为0．64193和0．51624。实时定量PCR结果证实,精神分裂症患者较健康受试者hsa-miR-2861与hsa-miR-638表达下调,分别为[（0．037±0．037） vs （3．159±2．761）,χ2＝4．089, P＜0．05]及[（0．006±0．006） vs （0．689±0．314）,χ2＝4．083, P＜0．05],hsa-miR-1281在精神分裂症患者组呈高表达[（1．221±0．041） vs （0．145±0．036）,χ2＝5．333,P＜0．05）。结论精神分裂症患者血清中存在差异表达的miRNA谱,miR-1281、miR-2861和miR-638可作为诊断精神分裂症的一个新的血清标志物。     

胃癌组织中miR-181a和miR-27a高表达及意义

目的：分析miR-181a与miR-27a两种miRNAs在胃癌中的表达及其与胃癌l临床病理特征的关系。方法：选取广州市第一人民医院胃癌外科手术切除的胃癌标本50例和对应的距离胃癌病灶5cm以上的癌旁组织,以及25例慢性浅表性胃炎黏膜为对照,采用实时荧光定量-PCR（qRT—PCR）对miR一181a和miR一27a作定量分析。结果：相对于自身癌旁组织和他人的慢性浅表性胃炎组织,miR-181a和miR＋27a在胃癌组织中表达上调,差异有统计学意义（P〈0．05）。胃癌者的性别、年龄、病例分型和淋巴结转移与miR-181a和miR-27a表达无显著相关性。结论：miR-181a和miR-27a在胃癌组织中显著表达,可能参与胃癌的发生过程。     

microRN A-34a在大鼠膝骨关节炎模型中的功能研究

目的：探讨微小RNA‐34a（miR‐34a）在碘乙酸钠所致大鼠膝骨关节炎模型中的表达变化,并初步明确其功能。方法选取30只雄性Wistar大鼠,左侧膝盖不注射碘乙酸钠作为对照组,右侧膝盖注射碘乙酸钠作为模型组;造模完成后检测两组大鼠关节液内miR‐34a表达水平的变化;分离两组大鼠的膝关节软骨细胞并进行原代培养,敲低miR‐34a后,使用流式细胞仪测定细胞凋亡情况。结果模型组M akin评分为（5．09±1．35）分,对照组为（1．27±0．64）分,差异有统计学意义（ P＜0．05）。与对照组比较,模型组中miR‐34a在关节液和关节软骨细胞内的表达均升高,差异均有统计学意义（P＜0．05）。将miR‐34a用它的反义互补片段敲低后,模型组大鼠关节软骨细胞的凋亡受到明显抑制（P＜0．05）。结论 miR‐34a在碘乙酸钠所致大鼠膝骨关节炎的关节液中表达升高,并且抑制miR‐34a的表达会降低关节炎大鼠的关节软骨细胞凋亡率。     

当归挥发油对自发性高血压大鼠心肌组织中微小RNA差异表达谱的影响

目的：探讨当归挥发油对自发性高血压大鼠（SHRs）心肌组织中微小RNA（miRNA）表达谱的影响,阐明当归挥发油发挥作用的可能机制。方法：将SHRs分为模型组、卡托普利组和当归组,取同周龄的正常Wistar大鼠作为对照组,采用无创套尾法测定大鼠尾动脉收缩压,给药4周后,采用Affymetrix miRNA 4.0 芯片测定心肌组织中miRNA表达谱,采用京东基因与基因组百科全书（KEGG）富集法分析差异表达的miRNA靶基因。结果：给药前模型组大鼠收缩压明显高于对照组（P < 0.05）,连续服药1~4周后,卡托普利组和当归组大鼠收缩压明显低于模型组（P < 0.05）。与模型组比较,当归组大鼠差异表达的miRNA29个,其中表达上调的miRNA13个（Ratio>2.0,P < 0.05）,表达下调的miRNA16个（Ratio<0.5,P < 0.05）。KEGG富集分析,miR-19a、 let-7i和miR-181c与胰岛素信号通路有关联（P < 0.05）,let-7i 、miR-181a和miR-455与血管内皮生长因子（VEGF）信号通路调控有关联（P < 0.05）,miR-122、miR-181a、miR-200b、miR-181c、let-7i和miR-19a与细胞凋亡有关联（P < 0.05）。结论：当归挥发油可降低SHRs血压 ,对SHRs心肌组织中miRNA表达谱产生影响,可能通过调节胰岛素信号通路及VEGF信号通路相关miRNA发挥血压调节作用。     

miRNA在HPV阳性和阴性宫颈癌组织之间的差异分析

目的探讨分析微小RNA（miRNA）在人乳头状瘤病毒（HPV）阳性和阴性宫颈癌组织之间的差异。方法将2011年3月-2013年3月80名宫颈癌患者根据HPV是否阳性分为两组,对照组HPV阴性,观察组HPV阳性。对比组间miRNA含量差异。结果 对照组miR222、miR21和miR221显著低于观察组,miR、miR-10b、miR-15a、miR著高于观察组（P〈0．05）。结论miRNA在HPV感染（阳性）和非HPV感染（阴性）宫颈癌组织中的含量存在明显区别,可用来测定宫颈癌患者是否感染HPV。     

miRNAs在甲状腺乳头状癌中的表达及临床病理意义

目的：探讨甲状腺乳头状癌（PTC）中特征性的miRNA表达谱以及临床病理意义。方法对52例PTC及7例良性甲状腺肿瘤手术切除标本采用基因芯片技术及RNA印迹杂交法检测miRNA的表达,对过表达的miRNA表达水平与PTC临床病理特征之间的关系进行分析。结果（1）用基因芯片技术筛检发现 PTC 组织中5例过表达的 miRNAs（miR-375、miR-34a、miR-146b、miR-222、miR-31）。（2）RNA印迹杂交法验证芯片结果及检测其他miRNAs结果显示：miR-34a、miR-146b、miR-31、miR-21和miR-221在PTC组织中的表达水平较癌旁正常甲状腺组织显著升高（P＜0.05）。MiR-146b和miR-221在PTC组织中的过表达率较良性甲状腺肿瘤组织显著升高（P＜0.01）。PTC患者中包膜侵犯组、淋巴结转移组、TNM分期III- IV期组及AGES系统评分≥5分组miR-221的表达水平均明显高于相应对照组（P＜0.05或0.01）;而男性PTC患者的miR-146b表达水平明显高于女性PTC患者（P＜0.05）。结论 miR-146b、miR-221、miR-21和miR-31的过表达与PTC的发生、发展有关;过表达的miR-221和miR-146b与PTC的预后不良有关。     

miRNA在小鼠着床前胚胎的表达

目的:研究小鼠发育过程中miRNA表达水平的变化,探讨miRNA对着床前胚胎发育过程的作用。方法:建立小鼠超排、交配系统,收集着床前胚胎提取低分子量RNA;采用miRNA特异RT引物进行反转录,采用SYBR Green实时定量PCR技术,研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠着床前胚胎发育过程中表达水平的变化。结果:着床前胚胎发育的各阶段均表达miR-125a、miR-295和miR-181b;随着胚胎发育进程,miR-295的表达呈逐渐上升的趋势;miR-125a在卵母细胞到2细胞发育阶段呈下降趋势,以后随发育进程呈逐渐上升趋势。结论:小鼠着床前胚胎中表达miRNA,着床前胚胎的发育和分化过程可能受到miRNA的调控。     

坐骨神经缺损1周背根神经节组织中microRNA的表达变化

目的：研究大鼠坐骨神经缺损后背根神经节中microRNA（miRNA）的表达变化。方法：采用miRNA芯片检测神经缺损0 d（对照组）和7 d（实验组）背根神经节组织中miRNA的表达情况,应用Real time Taqman PCR对芯片结果进行验证。结果：实验组与对照组比较发生上调1.4倍和下调〉1%以上的miRNA分别有13个和5个,Real time TaqmanPCR检测的4个miRNA的表达变化与芯片一致（上调：miR-21,miR-221;下调：miR-500,miR-551b）。结论：大鼠坐骨神经缺损1周后背根神经节组织中miRNA的表达谱发生改变。     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的 分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法 利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-Time PCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431*、miR-550*、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b*和miR-638。Real-Time PCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论 胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

尿液中miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p检测在前列腺癌中的诊断及临床意义

目的:建立尿液miRNA检测板,作为诊断前列腺癌（PC）的无创性生物标志物。方法:采用miRNAs芯片分析对照1组（6名）及PC1组（18例）中miRNAs表达,并进一步利用qRT-PCR对20名对照2组及59例PC2组（GS2 6组22例,GS2 7组19例,GS28组18例）尿液、血清标本进行差异基因的进一步验证。应用受试者工作特征（ROC）曲线分析组合诊断模型的准确真实性。结果:获得在PC1组中20个miRNAs差异表达谱,与对照1组相比,miRNA-24-3p及miRNA-222-3p显著表达下调（T=5.79、4.59,均P＜0.05）,用于PC诊断检测。在扩大样本量的PC患者尿液及血清样本中,根据GS分组的GS26、GS27及GS28组中,与对照2组相比,miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p表达水平也都显著下调（t=3.89,P＜0.05）,ROC分析联合诊断模型具有较高的准确度（曲线下面积为0.93,OR=1.37,95% CI:0.92~1.76,P＝0.02）。结论:在尿液、血清样本中建立了miRNA-24-3p联合miRNA-222-3p组合模型,可作为诊断PC的无创性生物标志物。     

胃癌组织miRNA差异表达的初步分析

目的分析胃癌组织特异性微小RNA（miRNA）表达谱,为深入研究miRNA与胃癌发生和发展的关系以及寻找新的胃癌分子标志物奠定基础。方法利用miRNA芯片就21对胃癌和癌旁配对正常组织的miRNA表达谱进行检测和初步生物信息学分析,Real-TimePCR验证miRNA芯片检测结果。结果 miRNA芯片检测发现,在胃癌及其癌旁配对正常组织中共有88个差异表达miRNA,其中上调最明显的是miR-21、miR-196b、miR-301a、miR-431＊、miR-550＊、miR-18a和miR-135b;下调最明显的是miR-139-3p、miR-628-3p、miR-596、miR-99b＊和miR-638。Real-TimePCR对其中2个上调（miR-181、miR-19b）和2个下调（miR-134、miR-31）miRNA的验证结果与芯片检测所示具有较好的一致性。结论胃癌组织具有特异性的miRNA表达谱,这些差异表达的miRNA有可能成为新的胃癌分子标志物。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4＋T淋巴细胞中miRNAs表达谱分析

目的 通过基因芯片技术筛选系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞中miNRAs的表达情况,寻找SLE与健康者外周血CD4＋T淋巴细胞中差异表达的miNRAs,探讨CD4＋T淋巴细胞参与SLE的发病机制.方法 采集43例SLE患者作为实验组,23例健康者作为对照组,取受试者外周静脉血,用磁珠分选法分离外周血CD4＋T淋巴细胞,提取RNA进行芯片分析,筛选差异表达的miRNAs.其筛选结果通过荧光实时定量PCR在43例重度活动期SLE患者和23例健康者中进行验证.结果 与对照组相比,SLE患者外周血CD4＋T淋巴细胞中有13个miNRA表达差异具有统计学意义（P＜0.05）,其中上调基因8个,下调基因5个.进一步通过荧光实时定量PCR检测了miR-NAs的表达情况,最终确定miR 410与miR-181在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显下调,miR-31在SLE患者外周血T淋巴细胞中明显上调.结论 CD4＋T淋巴细胞中的miRNA很可能参与了SLE患者的病情活动.     

微小RNA对血管新生的调控机制研究进展

微小RNA（miRNA）是一类重要调控因子,在转录后水平调控细胞增殖分化、凋亡、分裂以及器官的发育.据估计,miRNA调节着人类细胞大约1/3的蛋白质表达,进而参与几乎所有生命体的生理及病理过程.大量研究证实,内皮特异miRNA参与调控血管新生过程各个环节,在血管新生的调控方面发挥着非常关键的作用.miR-126、miR-210、miR-424、Let-7等具有促进血管新生作用;miR-221/miR-222、miR-34a、miR-217等则具有抑制血管新生作用.并且miRNA合成过程中两个关键性酶Dicer和aDrosha也在血管新生中占居重要地位.因此,miRNA可能成为一种新的心血管疾病诊断和靶向治疗的生物学标志物.