脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF及PEDF的影响

目的观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,探讨脂联素对糖尿病肾病的保护作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:常糖组、高糖A组、B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L,其中以高糖B组作为脂联素干预的对照组);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次分别为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),作用24 h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)测定各组细胞VEGF mRNA、PEDFmRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF、PEDF蛋白的含量。结果与常糖组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达升高(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达降低(P﹤0.05);与高糖B组相比,脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达降低(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达升高(P﹤0.01)。结论高糖可上调大鼠肾系膜细胞VEGF表达,抑制PEDF的表达;脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达并提高其对PEDF的表达。     

早产儿视网膜病变小鼠模型视网膜PEDF的表达和血清PEDF水平的变化及其意义

目的:研究高氧诱导早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)小鼠模型视网膜中色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)的表达和血清PEDF水平变化及其意义.方法:选择7日龄健康C57BL/6J新生小鼠112只,按照随机数字表分为2组,每组56只.模型组在75％高氧密闭容器中饲养5d,然后返回到空气环境中饲养;对照组始终在空气环境中饲养.采用ADP酶组织化学法观察小鼠视网膜铺片中血管形态的改变;采用HE染色法计数视网膜切片中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数目,定量观察视网膜血管增生情况;采用免疫组织化学法检测小鼠视网膜PEDF蛋白的表达;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测小鼠血清PEDF水平.结果:模型组在生后第12天的视网膜铺片显示中央大片无灌注区,在生后第17天的视网膜铺片显示大量新生血管形成.模型组小鼠在生后第17天和第22天时可见较多突破内界膜长入玻璃体的血管内皮细胞核,与对照组比较差异有统计学意义.第17天时:(69.4±9.3)比(1.5±1.2);第22天时:(76.0±8.4)比(1.3±1.1),P均＜0.01).模型组第12天时视网膜PEDF阳性细胞率显著高于对照组[(11.5±4.5)％比(4.4±2.4)％,P＜0.01],第17天时则显著低于对照组[(6.1±4.0)％比(14.1±5.8)％,P＜0.01].模型组小鼠血清PEDF水平较低,第17天和第22天时显著低于对照组[第17天时:(148.9±71.9) ng/L比(232.2±84.2) ng/L,P＜0.05;第22天时:(66.1±9.3)ng/L比(163.8±41.5) ng/L,P＜0.01].结论:ROP模型小鼠视网膜PEDF在高氧时过度表达,低氧时表达减少.ROP模型小鼠血清PEDF水平的变化滞后于视网膜PEDF的改变,不能更早地预测ROP的发生.     

通心络对再灌注心肌细胞凋亡的影响

背景传统中药对心肌缺血-再灌注的治疗作用日益受到重视,以虫类药物为主的中成药通心络在临床抗心肌缺血的治疗中取得了明显的疗效.目的探讨中药通心络对抗缺血再灌注诱发的心肌细胞凋亡的作用.设计随机对照观察.单位中山大学附属第一医院中医科.材料各项实验于2002-11/12在中山大学分子医学研究中心进行,选择72只雄性昆明种小鼠.方法72只昆明小鼠随机分成6组,每组12只.通心络2g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络1.0g/kg组(每天灌胃1次,第5天灌药1 h后用垂体后叶素和硝酸甘油联用复制心肌缺血再灌注模型方法进行造模)、消心痛组(剂量为3.9 g/kg,余处理办法同上)、模型组和空白对照组(用生理盐水代替各药物).实验结束时取小鼠的心肌,观察小鼠缺血再灌注模型心肌组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平,分析心肌细胞凋亡指数和凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达水平.主要观察指标[1]各组小鼠超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平比较.[2]各组小鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的比较.结果72只小鼠实验过程中状态符合实验要求,无死亡.[1]超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络2 g/kg组的超氧化物歧化酶活性升高(1.37928±140.03),(1 223.91±109.02),(1 789.19±155.20),(2 267.79±216.04),(2 387.55±229.71)nkat/L、丙二醛的水平降低(16.58±2.59),(20.40±2.66),(12.73±1.98),(9.65±2.03),(7.56±1.67)nmol/L,而且随着剂量的增大其效率进一步增强.[2]心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5 g/kg组、通心络2 g/kg组的心肌细胞凋亡指数和Bax蛋白表达指数明显降低[(13.84±1.97)%,(11.56±1.43)%,(3.34±0.96)%,(0.82±0.12)%,(0.42±0.06)%;(17.44±6.18)%,(15.45±3.72)%,(10.85±2.73)%,(6.46±1.88)%,(5.57±1.49)%],Bcl-2蛋白表达指数明显升高[(6.22±0.50)%,(8.73±0.63)%,(11.38±1.38)%,(16.22±2.36)%,(19.45±2.92)%],且呈量效关系.结论通心络胶囊具有抗氧自由基损伤、抗细胞凋亡保护缺血后再灌注心肌细胞的作用,而且呈剂量依赖性.     

血管内皮生长因子对胎鼠肺组织基质金属蛋白酶2及基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对胎鼠肺组织基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响及调控作用.方法:取孕龄16 d清洁SD大鼠30只,随机分为3组,生理盐水对照组(对照组)、VEGF低剂量组和VEGF高剂量组,每组10只.VEGF低剂量组每只孕鼠给予VEGF0.5 μg,VEGF高剂量组每只孕鼠给予VEGF 1μg,对照组给予生理盐水1 mL/kg,术后置于清洁笼中常规喂养.于用药后3 d,剖宫取出胎鼠.应用免疫组织化学和半定量RT-PCR方法分别检测胎鼠肺组织MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA的表达情况.结果:对照组MMP-2蛋白和mRNA的表达相对值分别为120.23±10.93和0.33±0.08;MMP-9蛋白和mRNA的表达相对值分别为113.07±8.11和0.21±0.04.VEGF低剂量组MMP-2蛋白(138.17±12.32)、mRNA(0.65±0.15)和MMP-9蛋白(130.22±11.12)、mRNA(0.60±0.09)表达有一定程度的增高(P＜0.05);VEGF高剂量组的各项表达量均明显增高(P＜0.01).结论:VEGF可上调胎鼠肺组织中MMP-2和MMP-9蛋白及mRNA的表达水平,可促进胎鼠的肺部发育.     

通心络胶囊对不稳定性心绞痛患者C反应蛋白的影响

目的 探讨通心络胶囊对不稳定性心绞痛(UA)患者C反应蛋白(CRP)水平的影响.方法 66例UA患者随机分为对照组(n=34)和通心络组(n=32),对照组予阿司匹林、氟伐他汀、美托洛尔或地尔硫卓口服8周,通心络组在上述治疗的基础上联合通心络胶囊,分别在治疗前、治疗2周、4周和8周后,应用速率散射比浊法测定血清CRP浓度.结果 2组患者在治疗2周、4周和8周后,血清CRP浓度均明显低于治疗前(P＜0.05.P＜0.01,P＜0.001),其中,在治疗4周和8周后.2组患者CRP浓度无差异,但在治疗2周后,通心络组明显低于对照组(P＜0.05).结论 uA患者早期联合通心络胶囊有助于降低血清CRP水平,改善预后.     

通心络对急性冠状动脉综合征患者血浆C-反应蛋白和内皮素-1的影响

目的 探讨通心络胶囊对急性冠状动脉综合征(ACS)患者血浆C-反应蛋白(CRP)和内皮素-1(ET-1)的影响.方法 将100例ACS患者随机分为常规组和通心络组(常规治疗+通心络胶囊),观察治疗前及第7、14天血浆CRP和ET-1的变化.结果 与治疗前相比,第7、14天通心络组血浆CRP和ET-1水平均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01);而常规组仅第14天有显著变化,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.05).通心络组CRP和ET-1水平与常规组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通心络可能通过抑制CRP和ET-1减少血管内膜的炎症反应等途径改善血管内皮功能,从而达到对血管内皮的保护作用.     

骨性关节炎患者血管内皮生长因子的表达

目的 检测骨性关节炎(OA)关节软骨中血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法 应用SYBRGreen Ⅰ实时定量聚合酶链反应(PCR)检测20例OA和10例外伤患者关节软骨中VEGF mRNA表达,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定关节软骨组织VEGF含量.结果在OA和对照组患者软骨组织中都存在VEGF121、VEGF165和VEGF189 3种亚型的mRNA表达,但OA的VEGF121和VEGF165表达高于对照组.ELISA定量显示,OA患者的软骨组织分泌VEGF较对照组明显升高[(31.27±7.81)ng/g总蛋白、(5.15±2.69)ng/g总蛋白,P＜0.01)].结论 VEGF在OA的发病过程中起重要的作用.     

脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞表达血管性血友病因子裂解酶的研究

目的 从剂量-效应和时间-效应关系探讨脂多糖(LPS)对大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用组织贴块法培养Wistar大鼠的RAECs,1周后按1∶3传代至第4～5代,将细胞分为空白对照组和0.01、0.1、1、5 μg/ml LPS刺激组,分别于12、24、48、72 h用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定内皮细胞ADAMTS-13 mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液内ADAMTS-13蛋白水平.结果 空白对照组有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达.随着LPS刺激浓度增加和刺激时间延长,ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达逐渐下降.与空白对照组(25.22±1.41)比较,0.01μg/ml LPS刺激48 h时ADAMTS-13 mRNA表达(18.78±0.86)即明显下降(P＜0.01);0.1μg/ml和1μg/ml LPS刺激24 h时ADAMTS-13 mRNA表达(23.43±0.63、22.41±0.76)即明显下降(P＜0.05和P＜0.01);5μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13 mRNA表达(20.01±2.47)即明显下降(P＜0.01).与空白对照组[(115.76±2.36)ng/ml]比较,0.01 μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13蛋白表达[(113.43±1.07)ng/ml]即明显下降(P＜0.05);至5 μg/ml LPS刺激72 h时ADAMTS-13蛋白表达[(7.63±2.64)ng/ml]降至最低(P＜0.01).结论 RAECs有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达;不同浓度LPS刺激内皮细胞不同时间后ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达降低,具有剂量依赖性和时间依赖性.     

通心络对再灌注心肌细胞凋亡的影响

背景：传统中药对心肌缺血-再灌注的治疗作用日益受到重视,以虫类药物为主的中成药通心络在临床抗心肌缺血的治疗中取得了明显的疗效.目的：探讨中药通心络对抗缺血再灌注诱发的心肌细胞凋亡的作用.设计：随机对照观察.单位：中山大学附属第一医院中医科.材料：各项实验于2002-11/12在中山大学分子医学研究中心进行,选择72只雄性昆明种小鼠.方法：72只昆明小鼠随机分成6组,每组12只.通心络2g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络1.0g/kg组（每天灌胃1次,第5天灌药1 h后用垂体后叶素和硝酸甘油联用复制心肌缺血再灌注模型方法进行造模）、消心痛组（剂量为3.9 g/kg,余处理办法同上）、模型组和空白对照组（用生理盐水代替各药物）.实验结束时取小鼠的心肌,观察小鼠缺血再灌注模型心肌组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平,分析心肌细胞凋亡指数和凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达水平.主要观察指标：[1]各组小鼠超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平比较.[2]各组小鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的比较.结果：72只小鼠实验过程中状态符合实验要求,无死亡.[1]超氧化物歧化酶活性、丙二醛水平：与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5g/kg组、通心络2 g/kg组的超氧化物歧化酶活性升高（1.37928&;#177;140.03）,（1 223.91&;#177;109.02）,（1 789.19&;#177;155.20）,（2 267.79&;#177;216.04）,（2 387.55&;#177;229.71）nkat/L、丙二醛的水平降低（16.58&;#177;2.59）,（20.40&;#177;2.66）,（12.73&;#177;1.98）,（9.65&;#177;2.03）,（7.56&;#177;1.67）nmol/L,而且随着剂量的增大其效率进一步增强.[2]心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白：与模型组和消心痛组比较,通心络1 g/kg组、通心络1.5 g/kg组、通心络2 g/kg组的心肌细胞凋亡指数和Bax蛋白表达指数明显降低[（13.84&;#177;1.97）%,（11.56&;#177;1.43）%,（3.34&;#177;0.96）%,（0.82&;#177;0.12）%,（0.42&;#177;0.06）%;（17.44&;#177;6.18）%,（15.45&;#177;3.72）%,（10.85&;#177;2.73）%,（6.46&;#177;1.88）%,（5.57&;#177;1.49）%],Bcl-2蛋白表达指数明显升高[（6.22&;#177;0.50）%,（8.73&;#177;0.63）%,（11.38&;#177;1.38）%,（16.22&;#177;2.36）%,（19.45&;#177;2.92）%],且呈量效关系.结论：通心络胶囊具有抗氧自由基损伤、抗细胞凋亡保护缺血后再灌注心肌细胞的作用,而且呈剂量依赖性.     

色素上皮细胞衍生因子与胶质瘤侵袭的相关性

目的 评价色素上皮细胞衍生因子(PEDF)对胶质瘤侵袭的抑制作用.方法 将PEDF(100 ng/ml)加入胶质瘤细胞U87中(U87PEDF),以未加PEDF蛋白的胶质瘤细胞作对照组(U87con),同时在U87PEDF中加入0.25μg/ml的促血管生成因子(VEGF,U87PEDF+VEGF).细胞迁徙实验检测PEDF抑制胶质瘤细胞侵袭性;实时荧光定量逆转录(RT)-PCR检测层粘连蛋白Laminin-8表达.结果 迁徙实验结果表明,对照组胶质瘤细胞穿透数明显多于PEDF处理组细胞,加入VEGF后,胶质瘤细胞迁徙率的抑制率仍减少38%;实时荧光定量RT-PCR结果显示,U87对照组 Laminin-8α4、β1、γlmRAN表达分别为(1.043±0.090)、(0.823±0.012)、(0.762±0.005)拷贝/μl,明显高于U87PEDF组[(0.633±0.004)、(0.442±0.005)、(0.424±0.002)拷贝/μl,P＜0.05].结论 在VEGF存在的条件下,PEDF能有效抑制胶质瘤细胞的迁徙,表明其可能由下调Laminin-8基因的表达所致.     

丙戊酸钠联合三氧化二砷对NB4细胞株血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)联合三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1表达的影响.方法 实验分空白对照组、As2O3组、As2O3+VPA组,采用反转录聚合酶链反应方法检测VEGF、Flt-1 mRNA的表达,应用蛋白印迹法(Western-blot)检测VEGF、Flt-1蛋白的表达.结果 NB4细胞在As2O3作用下VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白表达水平明显增高,分别为VEGF mRNA 0.426±0.026 vs 0.268±0.023,VEGF蛋白0.648±0.027 vs 0.588±0.031,Flt-1 mRNA 0.922±0.032 vs 0.766±0.030,Flt-1蛋白0.520±0.032 vs 0.320±0.036(P<0.05或<0.01).As2O3+VPA组VEGF mRNA、VEGF蛋白、Flt-1 mRNA和 Flt-1蛋白比对照组和As2O3组均明显降低(均P<0.01).VEGF mRNA表达水平降至0.129±0.028,VEGF蛋白表达水平降至0.328±0.029,Flt-1 mRNA表达水平降至0.522±0.025,Flt-1蛋白表达水平降至0.124±0.024.结论 As2O3诱导NB4细胞VEGF、Flt-1表达增高,VPA可下调As2O3引起的VEGF、Flt-1表达增高.     

槐耳清膏对结肠癌SW480细胞生长抑制作用及机制研究

目的:探讨槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞生长抑制作用及其作用机制。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测槐耳清膏对SW480生长抑制作用并探求最佳作用浓度;体外培养SW480细胞48 h,随机分为常氧组(NC组)、低氧组(HC组)和低氧槐耳组(HH组)。半定量RT-PCR检测SW480细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果:槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1mg/ml时抑制率最大(66.7%),与5-FU组(浓度为10μg/ml)相比无统计学意义。HH组和HC组VEGF mRNA表达均显著高于NC组4.71±0.07,4.54±0.02和1.19±0.03(P0.05),但HH组与HC组比较差异无统计学意义。HC组VEGF蛋白表达显著高于NC组0.66±0.03和0.38±0.02(P0.05),HH组较HC组VEGF蛋白表达均显著下降0.37±0.03和0.66±0.03(P0.05)。结论:槐耳清膏可抑制SW480细胞生长,1 mg/ml时抑制率最大。机制为槐耳清膏下调SW480细胞内VEGF蛋白表达抑制肿瘤。     

槐耳清膏对结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制探讨

目的：探索槐耳清膏对体结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）比色法检测槐耳清膏对SW480细胞增殖能力的作用,并探求最佳作用浓度;将体外培养细胞随机分为常氧组（NC组）、低氧组（HC组）和低氧槐耳组（HH组）,逆转录聚合酶链反应（RT PCR）检测各组血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果：槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1 mg/mL时抑制率最大（66.7%）,与氟尿嘧啶组（浓度为10μg/mL）相比无统计学意义。HH组和HC组VEGF mRNA表达均显著高于NC组,分别为4.71±0.07,4.54±0.02和1.19±0.03（P〈0.05）,但HH组与HC组比较差异无统计学意义。HC组VEGF蛋白表达显著高于NC组,分别为0.66±0.03和0.38±0.02（P〈0.05）,HH组较HC组VEGF蛋白表达均显著下降,分别为0.37±0.03和0.66±0.03（P〈0.05）。结论：槐耳清膏可抑制SW480细胞增殖,1 mg/mL时抑制率最大。其机制为槐耳清膏下调细胞内VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤生长。     

黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的影响

[目的]探讨黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因与蛋白表达的影响.[方法]Balb/C小鼠50只随机分5组（每组10只）,A组空白对照组：腹腔无菌注射不含病毒的Eagle＇s培养基0.1 mL,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;B组病毒性心肌炎对照组：小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含50%组织感染率（TCID50） 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7 d;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组（分别为C、D、E组）,在腹腔注射0.1 mL内含TCID50 为1×10^5的CVB3病毒Eagle＇s培养基,30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/（kg·d）]0.1 mL灌胃,共7 d.采用缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.[结果]与A组比较,B组心肌细胞凋亡发生率增高（0.57±0.16vs 0.06±0.02,P〈0.01）;抑制凋亡因子Bcl-2基因（0.52±0.12 vs 0.76±0.11,P〈0.01）及蛋白（6.08±1.15 vs 12.38±3.05, P 〈0.01）表达下降,而促进凋亡因子Bax基因（0.79±0.12 vs 0.61±0.14, P 〈0.01）及蛋白（6.21±1.52 vs 3.01±0.75, P 〈0.01）表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低（0.58±0.14vs0.87±0.12,P〈0.05）.与B组比较,E组CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数（0.09±0.03vs 0.57±0.16,P〈0.05）降低,Bcl-2基因（0.74±0.12 vs 0.52±0.12,P〈0.05）及蛋白水平（11.82±2.96 vs 6.08±1.15, P 〈0.05）表达增强,Bax基因（0.63±0.13 vs 0.79±0.12,P〈0.05）及蛋白（3.15±0.72 vs 6.21±1.52,P〈0.05）水平表达下降.[结论]黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进抑制凋亡基因Bcl-2表达,而抑制促凋亡Bax基因表达.     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶的影响

目的观察N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理对心脏移植缺血再灌注损伤（IRI）时基质金属蛋白酶（MMP）的影响,并探讨其可能的机制。方法健康雄性Lewis大鼠60只,随机分为3组。对照组：摘取供体心脏前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射生理盐水0.5 ml;供体预处理组：摘取供心前30 min经供体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg;受体预处理组：受体于移植前30 min经受体大鼠腹腔静脉注射NAC 300 mg/kg。供心冷藏于4℃组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（HTK）18 h后建立大鼠腹腔异体异位心脏移植模型。移植后24 h光镜下观察心肌胶原含量的变化;免疫组织化学法检测心肌组织中MMP2/9蛋白表达;采用实时PCR检测MMP2和基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）mRNA表达。结果 NAC供体/受体预处理组心肌胶原含量明显低于对照组（4.49±0.62/5.88±0.96 vs.10.43±0.93,P〈0.01）;免疫组织化学法半定量评分显示NAC供体/受体预处理组MMP2/9蛋白含量明显低于对照组（1.60±0.22/2.13±0.23,1.63±0.18/2.78±0.16 vs.3.00±0.15/3.78±0.15,P〈0.01）,受体预处理组心肌组织中MMP2 mRNA明显低于对照组（1.45±0.72vs.2.77±1.62,P〈0.05）,而供体预处理组TIMP2 mRNA明显高于对照组（2.59±2.12 vs.0.63±0.50,P〈0.05）。结论在大鼠心脏移植中NAC对供心IRI具有保护作用,可能是通过NAC直接抑制活性氧所致的MMP2/9升高,激活TIMP2,减轻了心肌IRI。     

通心络胶囊对脑梗死大鼠脑皮质血管新生和皮层神经元凋亡的影响

目的:探讨通心络胶囊对大鼠脑梗死皮层血管新生与神经元凋亡的影响。方法:M C A o大鼠分成通心络干预组与对照组,于梗死后第4天处死大鼠,免疫组化检测脑缺血皮质V E G F、V III因子及凋亡蛋白酶caspase-3表达,W estern blot半定量检测V E G F、caspase-3蛋白表达情况,TU N E L法检测梗死皮层神经元凋亡。结果:通心络干预组缺血皮质血管密度和V E G F阳性细胞数量均较对照组为高(P均<0.01)。W estern blot显示脑缺血皮层同侧V E G F121、V E G F165有明显表达,而缺血对侧表达很少;与对照组相比,通心络组缺血侧V E G F121、V E G F165蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.01)。caspase-3免疫组化显示通心络组缺血侧阳性细胞数量较对照组为低;两组大鼠缺血侧与对侧皮层W estern blot均可显示出pre-caspase-3和活化的caspase-3两条带,以活化的caspase-3分析,对照组缺血侧caspase-3含量明显增高,而通心络组caspase-3含量明显降低,与对侧等其他各组间没有明显差异;TU...     

长春新碱环磷酰胺序贯治疗对狼疮肾炎患者外周血B淋巴细胞活化因子表达的影响

目的 观察长春新碱序贯环磷酰胺治疗对狼疮肾炎患者外周血单个核细胞(PBMC)B淋巴细胞活化因子(BAFF)的影响,为序贯治疗提供理论依据.方法 狼疮肾炎患者20例,随机分入激素十环磷酰胺组(传统组,n=10,环磷酰胺600～800mg,静脉滴注,每3周1次)和激素十长春新碱十环磷酰胺组(序贯组,n =10,长春新碱1 mg静脉滴注后24小时再滴注环磷酰胺400 mg,每3周1次),两组患者均同时口服泼尼松1 mg/kg.共治疗24周.另选10例健康志愿者作为正常对照组.各组治疗前后常规行狼疮疾病活动性计分(SLEDAI)评估,检测尿蛋白定量、补体C3、丙氨酸转氨酶(ALT)、抗双链DNA抗体浓度(抗ds-DNA)、血常规等指标,并留静脉血提取单个核细胞(PBMC)应用蛋白质印迹(western blot)和反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测BAFF蛋白及mRNA的表达.结果 传统组和序贯组患者治疗前SLEDAI、尿蛋白、抗ds-DNA、BAFF蛋白及mRNA表达均较正常对照组升高;SLEDAI( 17.2±5.2)分、(18.4±5.4)分vs (0.1±0.1)分;尿蛋白(4.01±1.870)g/d、(3.94±1.73)g/d vs(0.11±0.01) g/d;抗ds-DNA (2.27±0.61) OD、(2.55±0.48)OD vs(0.25±0.09)OD; BAFF蛋白0.28±0.04,0.27±0.04 vs 0.08±0.01 ;BAFF-mRNA 0.23±0.04、0.22±0.02 vs 0.07±0.01(均P＜0.01),而补体C3较正常对照下降(0.65±0.22)g/L、(0.61±0.26)g/L vs(1.45±0.21)g/L( P＜0.05).与传统组比较,治疗后序贯组SLEDAI、BAFF蛋白及mRNA、抗ds-DNA、24小时尿蛋白定量下降更明显(P＜0.01),C3上升更明显(P＜0.05).ALT及外周血白细胞计数差异无统计学意义(P＞0.05),两治疗组间不良反应差异无统计学意义.结论 长春新碱序贯环磷酰胺治疗狼疮肾炎能使BAFF在PBMC的表达明显下降,抗免疫紊乱效果优于单用环磷酰胺,且两者联用不良反应无明显增加.     

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在db/db鼠肝脏组织中的表达及意义

目的 观察富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic rich in cysteine,SPARC)在具有2型糖尿病表型的db/db鼠(10周龄)肝脏组织中的表达情况.方法 选择10周龄的db/db鼠(C57BL/KSJ)与其同窝野生对照型各6只,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝脏组织中SPARC mRNA的表达水平,免疫荧光染色方法检测肝脏组织中SPARC蛋白的表达水平.结果 SPARC在db/db鼠肝脏组织中呈现高表达(36.91±1.91vs 15.31±0.31)(P＜0.01).结论 SPARC在db/db鼠肝脏组织中呈现高表达,其可能与糖尿病有关的脂肪肝病变有关.     

平喘固本合剂对哮喘小鼠气道慢性炎症及重塑的影响及其作用机制

目的 探讨平喘固本合剂对哮喘小鼠的气道慢性炎症及重塑的作用及其相关作用机制.方法 24只昆系小鼠建立哮喘小鼠模型,按随机数字表法分为3组：正常对照组、哮喘模型组、平喘固本合剂治疗组,每组各8只.对各组支气管肺泡灌洗液（BALF）中各种细胞进行分类并计数,肺组织病理切片行HE染色后观察气道重塑情况并检测气道管壁厚度,采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）、核转录因子κB（NF-κB）的表达情况.结果 （1）肺组织形态学变化：HE染色显示平喘固本合剂治疗组较哮喘模型组炎症细胞浸润、平滑肌肥厚及黏膜气道组织水肿、上皮细胞脱落等表现明显减轻.（2）各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞分类计数：哮喘模型组嗜酸性粒细胞计数[（2.15 ±0.44）×108/L]、气管壁厚度[（16.66±1.52） μm2/μm]、气道上皮组织中NF-κB、VEGF表达水平（36.01±4.78、35.87±4.92）明显高于正常对照组嗜酸性粒细胞计数[（0.03 ±0.03）×108/L]、气管壁厚度[（6.61±1.14） μm2/μm]、气道上皮组织中NF-κB、VEGF表达水平（12.78±1.47、11.57±1.64）,两组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.平喘固本合剂治疗组BALF中嗜酸性粒细胞数[（0.35±0.12）×108/L]、气管壁厚度[（11.57±1.26） μm2/μm]及NF-κB（29.13±1.92）、VEGF （28.28±2.02）明显低于哮喘模型组,两组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）.结论 平喘固本合剂可以下调哮喘模型小鼠气道组织中NF-κB和VEGF的表达,达到抑制哮喘气道慢性炎症及重塑的作用.     

螺内酯对肝星状细胞表达基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的研究螺内酯干预肝星状细胞（HSCs）后基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、MMP-13和其组织抑制剂1（TIMP-1）的变化。探讨螺内酯对胶原代谢影响的机制。方法应用不同浓度螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-7）mol／L干预HSCs 48小时,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测MMP-2、MMP-9、MMP-13 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达。结果①螺内酯组的MMP-13基因表达强度上调,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-5）mol／L浓度组MMP-13基因表达强度（0．91±0．13、0．80±0．01、0．67±0．15）均明显高于对照组（0．53±0．10）（P〈0．01）。1×10^-4mol／L浓度组MMP-13基因表达强度接近对照组的2倍。②螺内酯干预HSCs48小时后,TIMP-1基因表达减少,螺内酯（1×10^-4）mol／L-（1×10^-6）mol／L浓度组（0．15±0．05、0．28±0．15、0．37±0．03）明显低于对照组（0．47±0．04）（P〈0．01或〈0．05）。③螺内酯不同浓度干预HSCs 48小时后,HSCs MMP-2、MMP-9基因表达无明显变化（P〉0．05）。结论螺内酯可抑制HSCs TIMP-1基因的表达,增加间质胶原酶MMP-13 mRNA的含量。螺内酯可能通过对MMPs及TIMP-1影响而促进胶原降解。