3H-甲硝唑控释药膜体内外释放测定

 目的：测定甲硝唑控释药膜在体内外不同时相点甲硝唑释放量。方法：³H标记甲硝唑（放射性比强度5.44×10⁴Bq·mmol^-1，放化纯度≥95%)按原工艺做成控释药膜［每块重(19.0±0.1)mg，含甲硝唑(5.59±0.03)mg]，置于豚鼠牙周部位及放100μl生理盐水的微量板小孔中测定释放量。结果：实验表明该控释药膜能有效地降低过高峰，推迟过早峰，能在预定48h内在龈沟液持续释放相对恒定的有效浓度(200μg·ml^-1)。结论：³H标记甲硝唑能不断释放β射线，通过放射性探测仪器可随时追踪药物在体内的数量与位置，这在药动学和药物示踪研究中值得推广应用。     

生脉散对体外培养肝细胞3H-胸腺嘧啶核苷、3H-尿嘧啶核苷掺入的影响

用显微放射自显影方法,研究不同浓度生脉散对肝细胞核酸代谢的影响,结果显示生脉散浓度不同[CH_3—~3H]胸腺嘧啶核苷、[5—~3H]—尿嘧啶核苷掺入率有明显差别。     

香连丸中8种功效成分在小鼠体内的组织分布＊

目的 研究小鼠口服香连丸（Xianglian Pill，XLP）后其功效成分在体内的组织分布，揭示成分在体内不同组织作用趋势，探讨方药作用机制。方法 小鼠灌胃XLP后于不同时间点采集组织（小肠、大肠、肝、心、肺、肾），样品处理后，UPLC-MS/MS检测XLP中8种功效成分的组织匀浆液含量，ACE Excel 3 C18 column（2.1 mm × 100 mm，3 μm），流动相0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱分析物，正离子模式检测。计算成分在各组织的浓度和分布百分比（Distribution percentage，DP）。结果 建立同时检测组织匀浆液中8种XLP功效成分HPL-MS/MS分析方法，该方法专属性、线性、精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性良好。XLP功效成分在小肠组织具有较高浓度（DP > 25%）。小檗碱、黄连碱、巴马汀和药根碱DP值分别为48.5%、30.3%、28.3%和29.3%，显著高于其他组织。吴茱萸碱和吴茱萸次碱在结肠具有高分布，DP值分别为32.7%和27.5%。木香烃内酯和去氢木香内酯主要分布于肺，DP值分别为40.6%和47.5%。结论 XLP生物碱类成分在肠道组织具有高浓度，内酯类成分在肺肠组织具有高分布，该分布趋向有助于揭示方药肠道抗炎和行气缓急止痛作用。     

3 H-牛膝蜕皮甾酮在小鼠体内组织定量分布与归经关系的研究

目的:探讨3H-牛膝蜕皮甾酮在小鼠体内组织定量分布及药动学和归经的关系.方法:采用氚标记苋科植物牛膝的有效成分牛膝蜕皮甾酮为示踪剂,经小鼠尾静脉注入,测定36 h期间9个不同示踪时相器官组织样品中示踪剂含量.观察3H-牛膝蜕皮甾酮在体内动态定量分布、排泄状况和药动学,并探讨其与归经的关系.结果:同一器官的不同示踪时相和同一示踪时相的不同器官,其示踪剂含量呈现显著性差异(P＜0.01).3H-牛膝蜕皮甾酮较集中分布于肝脏、肾脏、肾上腺、小肠和肺脏等器官.其药-时过程符合二室开放模型特征,符合线性动力学,t1/2β为(778.65±12.36) min.结论:3H-牛膝蜕皮甾酮对器官组织选择性分布的特点与牛膝归经的脏腑络属关系基本一致,实验结果为牛膝的传统归经理论提供了一定的现代科学依据.     

蜜桑白皮的体内降脂作用研究＊

目的 考察蜜桑白皮的体内降脂减肥作用。方法 建立小鼠高脂肥胖模型，随机分为正常对照组、肥胖模型组、蜜桑白皮灌胃组、阳性对照组，记录小鼠体重，测定肾周脂肪指数和附睾脂肪指数，及血清中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平。此外，通过Autodock模拟蜜桑白皮中主要成分与脂质代谢关键酶——羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGR）及羧酸酯酶I（hCES1A）的相互作用，预测其调节血脂作用机制。结果 蜜桑白皮组可显著减缓小鼠体重增加，并有效降低LDL-C水平，其效果优于阳性奥利司他药物组。经Autodock分子对接发现，主要成分桑色素及桑根酮C可分别通过氢键与HMGR的催化活性中心Asp-767、及hCES1A关键氨基酸Cys-389产生较强的相互作用。结论 蜜桑白皮具有良好的减肥降脂作用。     

~3H七宝美髯丹在小鼠的体内过程

本文采用氚标记法测定~3H—七宝美髯丹在小鼠的体内过程。结果表明:小鼠对口服该药吸收快,体内放射性分布广,以胃肠最高,皮肤、肝、脾及肾次之,口服72h后,粪尿放射性总排泄率分别为21.1％和24.4％。根据血药浓度-时间曲线,确定该药的药代动力学特性是符合开放型二室模型,测得药代动力学参数为t1/2(β)45h,t1/2(α)0.44h,Ke0.72h~(-1)K_(21)0.033h~(-1)K_(12)0.8092h~(-1)     

基于功效成分体内过程的中药复方配伍及方证相应研究＊

中药及其复方多成分、多靶点和多途径对疾病的治疗，与功效成分的吸收、分布、代谢和排泄等体内过程密切相关。通过功效成分体内过程研究，结合其药理作用，可以揭示复方“增效减毒”配伍规律及“方证相应”理论，进一步加深对中药复方作用机理的认识。     

免疫放疗制剂35S-MAbSZ39在荷瘤鼠体内药代动力学研究

目的建立     

中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

中药灌肠1号对小鼠结肠炎CD4+ CD25+免疫作用的研究

目的：探讨CD4⁺CD25⁺调节性T细胞(Tregs)在2，4-二硝基氯苯(DNCB)和醋酸 (AA)复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎中的变化规律及中药灌肠1号治疗的作用机制。方法：建立DNCB＋AA复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎模型，设立正常对照、模型对照、柳氮磺氨吡啶(SASP)和中药灌肠1号治疗共4组，用流式细胞仪检测各组外周血、肠系膜淋巴结CD4⁺CD25⁺ Tregs细胞的变化以及结肠组织病理学改变。结果：建模后1～2周，模型组外周血和肠系膜淋巴结的CD4⁺CD25⁺ Tregs细胞数量较正常组明显下降，而使用SASP和中药灌肠Ⅰ号治疗后该细胞亚群明显高于模型组。结论：具有较强免疫抑制作用的CD4⁺CD25⁺Tregs细胞亚群在小鼠实验性溃疡性结肠炎的发病及病情转归中可能具有重要免疫调节作用，中药灌肠1号通过调节Tregs细胞的数量对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。     

葫芦茶苷体内抗鸭乙型肝炎病毒及保肝作用研究＊

目的 考察葫芦茶苷对鸭乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)的体内抑制作用及其保肝作用。方法 以广西麻鸭为实验动物，建立感染鸭乙肝病毒的鸭乙肝动物模型，随机分为模型组、拉米夫定阳性对照组和葫芦茶苷低、中、高剂量组，每组10只，每日灌胃给药1次，连续给药14天，模型组每天灌服等体积的生理盐水。采用ELISA法检测鸭血清乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)和鸭血清乙型肝炎E抗原(DHBeAg)的含量。采用实时荧光定量PCR法检测鸭血清鸭乙肝病毒DNA的含量。并检测鸭血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的变化，检测肝组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。苏木精-伊红染色法(HE)观察鸭肝组织病理学变化。结果 与模型组比较，葫芦茶苷各剂量组能显著降低血清DHBsAg和DHBeAg的滴度以及DHBV DNA的含量(P < 0.05或P < 0.01)。而且能降低鸭血清ALT、AST活性和MDA含量，增加肝组织SOD、GSH-PX活性和GSH含量。病理学检查结果提示葫芦茶苷能显著减轻肝细胞损伤程度。结论 葫芦茶苷对鸭乙型肝炎病毒具有体内抑制作用，对DHBV引起肝损伤具有保护作用。     

免疫放疗制剂35S-Mab SZ39在荷瘤鼠体内药代动力学研究

 目的:建立³⁵S-MAb SZ39药代动力学模型,求取药代动力学参数,设计合理用药方案。方法:以药代动力学程序包处理³⁵S-MAb SZ39给药后荷瘤鼠各时间点的血药浓度,进行药代动力学研究;以³⁵S-nI gG及³⁵S为对照组,了解³⁵S-MAb SZ39的荷瘤鼠体内分布特点。结果:³⁵S-MAb SZ39在荷人脑胶质瘤裸小鼠体内药代动力学符合三室线性模型,总药时方程为c_t=1.764e^-349t+1.106e^-05t+0.025e^-0.017t,t_1/2α为0.23h,t_1/2β为1.46h,t_1/2γ为42.9h。体内分布研究表明,³⁵S-MAb SZ39可特异性浓聚于胶质瘤,在正常组织中无明显蓄积,发挥了单抗导向的高选择性作用,在给药后第5天,与³⁵S-nI gG及³⁵S相比,特异指数分别为4.1和4.87,具有显著优越性(P<0.05)。结论:³⁵S-MAb SZ39有望作为一种高效低毒的导向放疗制剂应用于胶质瘤治疗,以一周间隔多疗程治疗方案为佳。     

SDF-1α/CXCR4生物轴促进静脉移植HUCMSCs在MCAO小鼠体内的迁移和功能恢复＊

目的 探讨静脉移植HUCMSCs通过SDF-1α/CXCR4生物轴参与改善脑缺血的作用机制，明确中药通心络胶囊干预后的影响。方法 采用随机法将小鼠分组，共4组，每组18只，分别为假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、静脉移植组（Vein组）、静脉移植+通心络组（Vein+TXL组）。小鼠MCAO模型采用改良线栓法制作；假手术组仅暴露、分离小鼠右侧颈部血管，不做其他操作；其余各组造模方法相同。小鼠脑缺血再灌注72 h通过尾静脉移植1 × 10⁵个HUCMSCs，采用灌胃给药方式，静脉移植+通心络组小鼠每天的给药体积为10 mL·kg^-1，模型组和假手术组给予等量的生理盐水。在移植后1、3、7天对各组小鼠进行取材，参照Longa评分法对小鼠进行神经功能评分，使用TTC染色法测定小鼠脑梗死面积。使用ELISA方法检测SDF-1α的表达，使用Werstern blot方法检测CXCR4的表达。最后采用SPSS 23.0统计软件对实验数据进行分析。结果 ①移植后的第1、3、7天，和Model组相比较，Vein组、Vein+TXL组小鼠神经行为学评分、梗死面积均降低，尤其是移植后第7天，与Model组比较，Vein组、Vein+TXL组神经功能评分、梗死面积差异有统计学意义（P < 0.05）。②移植后第1、3、7天，与模型组相比较，静脉移植组、静脉移植+通心络组SDF-1α表达在移植后第1、3天升高，在第7天略降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；移植后第1、3、7天，与Model组相比，Vein组、Vein+TXL组CXCR4表达在移植后第1、3天升高，在移植后第7天略降低，中药通心络干预后具有促进作用。结论 静脉移植HUCMSCs可明显降低小鼠神经功能评分、减少脑梗死面积，上调SDF-1、CXCR4的表达，促进移植HUCMSCs向缺血组织迁移，修复神经功能缺损；静脉移植HUCMSCs可能通过SDF-1α/CXCR4生物轴参与改善脑缺血，中药通心络干预后具有促进作用。