HBsAg阳性产妇血清与乳汁HBV-DNA载量分析

目的：通过检测HBsAg阳性产妇的血清及乳汁HBV-DNA载量,探讨产妇血清和乳汁HBV-DNA的相关性,以指导母乳喂养。方法：选取2006-05～2010-11在产科住院分娩的HBsAg阳性产妇220例,采用荧光定量PCR检测产妇血清和乳汁HBV-DNA载量。结果：①220例HBsAg（＋）产妇中135例HBV-DNA阳性,阳性率为62.3%;220例中85例HBV-DNA阴性产妇的初乳、半月乳及满月乳HBV-DNA均阴性;135例HBV-DNA阳性产妇的初乳HBV-DNA检测26例阳性,阳性率为19.3%;余109例HBV-DNA阳性产妇复检半月乳HBV-DNA阳性47例,阳性率为43.1%;再余62例HBV-DNA阳性产妇复检满月乳HBV-DNA阳性35例,阳性率为56.5%;135例HBV-DNA阳性产妇中27例的初乳、半月乳及满月乳HBV-DNA均阴性,阴性率为20.0%。②半月乳及满月乳分别与初乳比较,HBV-DNA阳性率均显著增高（P〈0.01）;半月乳（54.1%）及满月乳（80.0%）分别与初乳（19.3%）比较,HBV-DNA累计阳性率均显著增高（P〈0.01）。结论：血清HBV-DNA阴性产妇的乳汁是相对安全的,HBV-DNA阳性产妇乳汁中大多有HBV的存在,应避免母乳喂养,以防止传染。检测HBsAg阳性产妇乳汁HBV-DNA载量,可以直接反映产妇传染性的强弱,对指导母乳喂养提供了可靠依据。     

HBV感染产妇血清和乳汁中HBV-M与HBV-DNA检测

目的检测HBV感染产妇乳汁中HBV-M和HBV-DNA,以评价母乳喂养的安全性。方法采用ELISA静置式与振动式孵育法定性检测乳汁HBsAg,同时采用荧光定量PCR法检测血清和乳汁HBV-DNA。结果 144例产妇血清HBV-DNA阳性率52.1%（75/144）,乳汁阳性率34.7%（50/144）,乳汁HBsAg静置式孵育法阳性66例（45.8%）,振动式孵育为75例（52.1%）。结论应尽可能同时检测乳汁的HBsAg和HBV-DNA以提高母乳喂养的安全性。无HBV-DNA检测条件的实验室在检测乳汁中HBsAg时应采用振动式孵育以提高阳性检出率。     

草仙乙肝胶囊治疗慢性乙型肝炎临床疗效观察

目的观察草仙乙肝胶囊治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法将260例慢性乙型肝炎患者，伴有HBV-DNA阳性、HBeAg阳性及ALT为2UL～5UL随机分成治疗组（草仙乙肝胶囊治疗）和对照组（乙肝解毒胶囊治疗）各130例，疗程6个月，观察两组的HBsAg、HBeAg、HBV-DNA（PCR法，结果〈1．0×10^3copies／ml为阴性）阴转率以及草仙乙肝胶囊对不同载量HBVDNA的影响。结果治疗组HBsAg阴转率、HBeAS阴转率、HBeAg／HBeAb转换率和HBV-DNA阴转率分别为11．5％、33．1％、19．2％和40．0％，高于对照组0.8％、16．1％、2．3％、12．3％（P均〈0．05），对低载量患者HBV-DNA的转阴效果好。结论草仙乙肝胶囊治疗慢性乙型肝炎，是一种安全有效的治疗方法，值得临床推广应用。     

前S1抗原在乙型肝炎诊断中的作用

目的：分析乙型肝炎病毒前S1抗原（PreS1）与乙型肝炎病毒（HBV）复制的关系。方法：采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法对364例乙型肝炎不同标志物的患者血清进行PreS1测定并与用荧光定量聚合酶链反应对HBV—DNA进行含量测定，然后做对比分析。结果：364例乙型肝炎患者中，167例HBsAg、HBeAg、抗HBc^＋阳性组中PreS1叶。144例（86．2％），HBVDNA阳性147例（88．0％），这组患者病毒高度复制，PreS1和HBVDNA两者间差异无显著意义，P〉0．05。122例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性组中PreS1^＋38例（31．1%），HBVDNA阳性43例（35．2％），表明HBeAg阴性患者仍有病毒复制，两者间差异无显著意义，P〉0．05。65例HBsAg和抗HBc阳民生组中PreS1^＋17例（26．2％），HBVDNA^＋20例（30．7％），表明病人仍有病毒在复制。10例HBsAg、HBeAg阳性组中PreS1^＋7例（70．0％），HBVDNA＋9例（90．0％），表明病人病毒在复制。结论：乙肝病毒前S1抗原是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

乙肝病毒前S1抗原与乙肝病毒血清标志物联合检测的临床意义

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1-Ag）与乙肝病毒血清标志物（HBV-M）联合检测在临床应用中的意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定328例乙型肝炎患者血清中PreS1-Ag和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）5项HBV血清标志物。结果 PreS1-Ag在HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）组和HBsAg（＋）、HBeAg（＋）组的阳性率显著升高,分别为87.3%和80.0%;在HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）组和HBsAg（＋）、HBcAb（＋）组及HBsAg（＋）组的PreS1-Ag阳性率分别为47.5%、63.9%和25.0%;PreS1-Ag在HBeAg（＋）组的阳性率为86.2%,明显高于在HBeAg（-）组的52.1%（χ2=21.33,P〈0.01）;328例乙型肝炎患者中,PreS1-Ag阳性率为61.9%,HBeAg阳性率为28.7%（χ2=73.098,P〈0.01）。结论 PreS1-Ag能较好地反映HBV的复制情况,且对HBV感染的早期诊断和判断治疗效果具有重要的临床意义。     

初治肺结核患者合并乙肝病毒感染临床分析

目的分析初治肺结核患者合并乙肝病毒感染情况。方法回顾分析841例初治肺结核患者乙肝病毒感染情况：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）、e抗体（HBeAb）、核心抗体（HBcAb）。结果841例初治肺结核患者中HBsAg阳性率[包括HBsAg（＋）,HBsAg、HBcAb（＋）,HBsAg、HBcAb、HBeAb（＋）,HBsAg、HBcAb、HBeAg（＋）]占5.7％,低于普通人群。结论初治肺结核患者乙肝病毒感染HBsAg阳性率低于普通人群携带率。     

组合乙肝标志物联合ALT对判断肝损害和HBV-DNA复制状态789例调查分析

目的调查789例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性人群的肝损伤及外周血中乙型肝炎病毒复制情况。方法用统计学方法分析HBsAg阳性者789例,同时进行的乙肝标志物五项、ALT和HBV-DNA检验结果分布。结果HBsAg阳性者中ALT异常率为27.8%,而HBV-DNA复制率为49.3%。乙肝标志物组合间的ALT异常率和HBV-DNA复制率存在差异。HBeAg阳性且ALT异常时,HBV-DNA复制率达到93.1%。结论组合乙肝标志物配合ALT可较好地了解肝损伤和HBV-DNA复制情况,有助于判断病情。     

昆明地区67例HBs Ag阴性HBe Ag阳性乙型肝炎患者血清学调查

HBsAg阴性HBeAg阳性是乙型肝炎患者血清HBVM（乙型肝炎标志物）中的少见模式。我们在对昆明地区58752例患者血清标本进行HBVM检测时，发现了67例HBsAg阴性HBeAg阳性的乙型肝炎病例，现报告如下。     

干扰素联合茵莲清肝颗粒治疗慢性乙型肝炎的临床研究

目的研究在病毒性慢性乙型肝炎（CHB）的治疗中,采用干扰素（IFN）α-2b联合茵莲清肝颗粒治疗的临床疗效。方法选取94例病毒性慢性乙型肝炎患者为研究对象,随机分为3组,分别采取单纯的护肝药物治疗、IFNα-2b（肌注）,及IFNα-2b联合茵莲清肝颗粒治疗,三组疗程均为24周。观察血清HBV-DNA及HBsAg、HBeAg的阴转情况。结果联合组的HBV-DNA下降程度及HBsAg阴转率则高于IFN-α2b组（P〈0.05）;完全应答率和部分应答率比较,IFN-α2b组和联合组均高于对照组（P〈0.05）;联合组则高于IFN-α2b组（P〈0.05）。结论干扰素联合茵莲清肝颗粒治疗慢性乙型肝炎,可发挥协同抗病毒作用,提高治疗效果。     

乙肝病毒感染几项复制指标的相互关系

目的：探讨HBV感染复制指标间相互关系。方法：回顾性分析了1446例儿童和322例成人HBsAg滴定度与HBeAg和HBV-DNA（PCR）阳性率间关系。结果：随HBsAg和HBV-DNA（PCR）阳性率亦明显升高，但低滴定度时仍有部分被检者后两项呈阳性，而高滴定度时后两项的阳性性率仅略高于70%。结论：单纯凭某项或几项检测指标判断HBV的复制能力具有很大片面性，需动态监测并密切结合临床。     

Fulminant hepatitis B

Fulminant hepatitis, or fulminant hepatic failure, is defined as a clinical syndrome of severe liver function impairment, which causes hepatic coma and the decrease in synthesizing capacity of liver, and develops within eight weeks of the onset of hepatitis. Several independent factors influence the survival of patients: age, the cause of liver disease, the degree and the duration of encephalopathy in relation to the onset of the disease, and the prevention of complications. Over the years many intensive treatments have been practiced. Liver transplantation is expensive, and patients who survive transplantation require life-long immunosuppression, clinical care and complications management. Without transplantation fulminant hepatitis and hepatic failure might be completely recovered spontaneously, and the patient could expect a normal life. Two cases of fulminant B hepatitis with intensive care treatment, and their survival despite unfavorable prognosis are presented in this paper. The management of patients with fulminant hepatitis required intensive monitoring and therapeutic measures, including corticosteroids. The prognosis for survival without transplantation in fulminant hepatitis is limited by the measures of medical treatment and new specific therapeutic modalities which must be developed through basic research.     

不同基因型HBx对乙型肝炎病毒复制的影响

目的探讨A、B、C和D四个基因型乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis Bvirus Xprotein,HBx）对乙型肝炎病毒（hepatitis Bvirus,HBV）复制的影响。方法构建含A、B、C和D四种基因型HBx的真核表达载体和提前终止HBx表达的突变型单倍体HBV表达系统,共转染至人肝肿瘤细胞系HepG2细胞,利用荧光素酶报告系统检测不同基因型HBx对HBV核心启动子的激活作用,利用酶联免疫法（ELISA）检测培养上清中HBV表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）的表达情况,利用特异性引物PCR方法检测细胞中HBV前基因组RNA（pgRNA）和总RNA（pgRNA,2.2kb和0.8kbRNA）的转录情况。结果 A、B、C和D四种基因型HBx的表达均可显著激活HBV核心启动子活性,但不同基因型HBx的激活作用不同。除C基因型外,A、B和D三种基因型HBx均可显著增强HBsAg和HBeAg的胞外分泌水平。检测HBV复制中间产物发现,C基因型HBx对HBVpgRNA和总RNA转录水平的影响显著低于A、B和D基因型。结论不同基因型HBx对HBV复制的影响不同,为进一步研究HBV基因型与HBV复制能力以及临床病理表现的关系打下基础。     

我国患者多重耐药乙肝病毒感染的基因型和表型特点

目的分析我国大样本来源的慢性乙肝病毒(HBV)感染患者多重耐药HBV的基因型和表型特点。方法回顾性分析11 800例慢性乙肝患者血清中HBV反转录酶(RT)区与核苷(酸)类似物耐药相关的突变类型及频率,采用PCR产物直接测序法和克隆测序法(≥20个克隆/样本)对其中的46例多重耐药HBV突变株进行鉴定。采用体外表型耐药分析法检测核苷类与核苷酸类联合处理对多重耐药HBV的抑制效果。分析临床治疗方案在多重耐药HBV感染的发生及控制中的作用。结果在11 800例慢性HBV感染者中,共3658例(31.0%)检出核苷(酸)类耐药相关突变,其中拉米夫定(LAM)耐药突变2592例(70.9%),阿德福韦酯(ADV)耐药突变665例(18.2%),恩替卡韦(ETV)耐药突变293例(8.0%),替比夫定(LdT)耐药突变62例(1.7%),同时针对核苷类和核苷酸类的多重耐药(MDR)突变46例(1.3%)。对46例多重耐药感染样本的克隆测序显示,40例样本在同一病毒基因组上检出MDR突变,其他6例样本的MDR突变则存在于不同的HBV基因组中。基因型分析显示共有15种病毒变异形式,同时耐LAM(或LdT)和ADV,以及同时耐ETV和ADV的MDR株分别为10种和5种。体外表型耐药分析结果显示,ETV(或LAM)和ADV联合用药可有效抑制HepG2细胞内MDR HBV的复制,但对野生株无类似效果。临床用药方案分析显示,多重耐药HBV感染常出现在LAM(或)LdT、ADV、ETV序贯治疗的患者,以LAM→ADV(22例)和LAM→ADV→ETV(10例)最多见,发生多重耐药后大多出现病毒学和(或)生化学突破。LAM+ADV或ETV+ADV联合挽救治疗可成功将大多数多重耐药HBV的DNA复制控制在检测不到的水平。结论我国MDR HBV株具有多样性和复杂性,表型分析和临床观察均证实核苷与核苷酸类似物联合使用可有效控制MDR HBV复制。多重耐药HBV感染的发生与临床长期应用核苷(酸)类似物序贯治疗有关,密切监测病毒应答及耐药突变对于临床尽早制定最优的抗病毒策略具有重要意义。     

乙型肝炎免疫发病机制研究进展

介绍了人体免疫细胞T细胞、B细胞以及树突状细胞（dendritic cell，DC）在急性和慢性乙肝病毒感染后的免疫发病机制及其发展规律中的作用研究进展，并阐述了它们在乙肝慢性化机制中的作用。     

乙型肝炎患者不同血清标志物HBV DNA的表达及意义

 目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的相关性.方法血清HBV DNA定量检测采用PCR ELISA法,HBVM采用ELISA法.结果在HBVM阳性的366例血清中,有199例HBV DNA阳性,占54.4%.血清HB-/ml占65.2%;HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者HBV DNA-HBc阳性者HBV DNA阳性率占95.2%,≥106 copiessAg、HBeAg、抗阳性率占29.1%,≥106 copies/ml占17.6%.结论血清HBVM阳性患者中约55.0%的血清HBV DNA阳性,且HBeAg阳性患者中HBV DNA含量及阳性率均明显高于抗-HBe阳性者;在抗-HBs、抗-HBc阳性或HBsAg阴性者血清内也有HBV DNA阳性者.     

女性乙型肝炎病毒携带者卵巢颗粒细胞中乙型肝炎病毒感染情况与临床检测结果分析

目的分析女性乙型肝炎病毒(HBV)携带者卵巢颗粒细胞中HBV感染情况与临床检测结果。方法选取自2014年1月至2016年1月于自贡市第三人民医院接受辅助生育治疗的40例女性患者作为研究对象,其中,20例患者为HBV携带者(携带组),20例患者为非HBV携带者(非携带组),分离患者卵泡液中的颗粒细胞并制成涂片。应用经地高辛标记的特异性HBV DNA探针,通过原位杂交对颗粒细泡涂片进行检测;应用碱性磷酸酶系统进行显色反应。结果携带组患者的颗粒细胞涂片显示,5例可见200个成簇的颗粒细胞,细胞核中检测出20个HBV DNA阳性细胞;6例患者可见220个片状、单层的颗粒细胞,细胞核中检测出8个HBV DNA阳性细胞;9例患者可见180个成簇的颗粒细胞,细胞核中检测出4个HBV DNA阳性细胞。非携带组患者的颗粒细胞涂片为阴性。显色10 min时,患者未出现阳性信号;显色20 min时,4例患者出现阳性信号;显色30 min时,3例患者背景着色较深,阳性信号不易辨认,忽略不计。因此,20 min为显色的最佳时间。结论女性HBV携带者卵巢颗粒细胞中具有HBV DNA,可通过生殖细胞向子代传播乙型肝炎。因此,应加强对HBV携带孕产妇的健康宣传教育,并采取有效措施进行阻断。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV全长序列分析及复制力评价

目的 分析乙型肝炎患者HBV全长基因组序列并对其复制力进行评价.方法 从慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV病毒DNA,PCR扩增HBV全长基因组,克隆到pGEM-Teasy载体中,每个样品挑选5～10个克隆测序,分析基因型以及全长基因组耐药相关的突变位点,并对个别位点进行定点突变.将克隆到pGEM-Teasy载体中的全长HBV基因组经BspQ Ⅰ/Sca Ⅰ双酶切后,转染入肝癌细胞系HepG2、Huh7.转染3d后榆测上清HmAg表达量及细胞内HBV复制中间体核心颗粒DNA载量,分析全长HBV基因组的复制力(1.0倍HBV复制模型).结果 从2份慢性乙型肝炎患者血清中成功获得5条HBV全长克隆,来自同一份血清的克隆核苷酸,其一致性为98%～100%,提示HBV存在准种特性.测序结果 表明5条HBV全长基因均为C型.通过定点突变又获得3个全长克隆.经序列分析发现,HBV反转录酶区存在A181V/S、L229M、V84M、M204I氨基酸位点的突变,前C/C区存在T1753C、A1762T、G1764A和G1896A核苷酸位点的突变.复制力分析提示上述位点突变后病毒复制力均有不同程度下降,L229M还可以进一步降低A181V突变株的复制力.结论 自行建立的无载体1.0倍HBV复制模型可在细胞内分泌抗原蛋白以及装配子代病毒,完成生活周期,这为下一步分析HBV的耐药表型打下了基础.此外,还可指导临床制定更加合理的抗病毒策略,筛选针对已出现或将来可能出现的耐药突变的新型抗病毒药物.     

慢性乙肝患者石蜡包埋肝组织中HBV cccDNA定量检测方法的建立

目的建立慢性乙肝患者微量石蜡包埋肝组织共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)定量检测方法。方法以37例慢性乙肝患者甲醛固定石蜡包埋肝组织为研究对象,提取肝组织HBV DNA,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)消化后,利用滚环扩增加跨缺口实时荧光PCR扩增技术检测肝组织中HBV cccDNA含量,以β-actin为内参照。通过已知浓度的模板DNA进行梯度稀释鉴定该方法的灵敏度,并对该方法进行批内和批间重复性检测。应用该方法分析37例慢性乙肝患者肝组织HBV cccDNA与血清总HBV DNA、肝组织总HBV DNA的关系,以及肝组织HBV cccDNA和HBV DNA与血清HBeAg表达之间的关系。结果成功建立了微量石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的定量检测方法,该方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。HBeAg阳性者肝组织中cccDNA含量明显高于HBeAg阴性者,HBV cccDNA水平与血清总HBV DNA水平(R2=0.48,P=0.042)及肝组织总HBV DNA水平(R2=0.63,P=0.001)呈正相关。结论该方法可特异灵敏地定量检测微量石蜡包埋组织切片中的HBV cccDNA。