基于微流控芯片分析气滞胃痛片中不同药效组分对炎症细胞GES-1的影响

目的 采用微流控芯片技术,从细胞凋亡坏死和炎症因子等角度研究气滞胃痛片及其不同药效组分对炎症细胞GES-1的影响,明确气滞胃痛片药效物质基础。方法 首先考查脂多糖（LPS）和不同药效组分对 GES-1 细胞存活的影响,筛选出造模剂量和最佳给药剂量,考察炎症因子的表达;同时构建了一种集成有微阀结构的高通量药物筛选芯片,分析炎症细胞GES-1凋亡和坏死情况,结合炎症因子表达和微流控芯片中的细胞死亡结果共同探讨气滞胃痛片及其不同药效组分对炎症细胞GES-1的影响。结果 根据抑制细胞存活的药物浓度梯度考察,得到脂多糖（LPS）IC₅₀值和最佳给药浓度以及最佳造模浓度,结合TNF-α 试剂盒获得各组炎症表达;与此同时对于微流控芯片的适用性进行考察,芯片中细胞生长状态良好,符合实验要求,可进行后续相关实验;通过微流控芯片以及 TNF-α 试剂盒考察气滞胃痛片中不同药效组分对炎症细胞GES-1的作用,发现给药24 h 后,甘草黄酮、延胡索生物碱等6种有效组分均能使促炎症因子明显下降,并且均有明显的抑制炎症细胞GES-1凋亡或坏死的作用。与模型组相比,细胞凋亡坏死率和炎症因子含量差异均有统计学意义（P<0.05）,其中甘草黄酮、延胡索生物碱的差异性最为明显（P<0.01）,药效显著。结论 设计、制作微流控炎症细胞芯片,初步明确了气滞胃痛片对炎症细胞GES-1的药效物质基础;为中药复方中药效组分抗炎作用的快速筛选提供了一种高效低耗的方法。     

用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片构建及培养条件研究

目的设计制作用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片,以海藻酸钙凝胶为细胞支架,基于芯片研究适合的凝胶形成、溶解条件,利用该条件长期培养SMMC-7721细胞并检测其活力。方法利用CDR软件、软光刻技术、模塑法、等离子键合法等设计并制作出微流控芯片并验证其适用性;在芯片中三维培养肝肿瘤细胞SMMC-7721,观察细胞形态,以IPP软件辅助计算细胞在72h的存活率。结果设计制作的微流控芯片适合于肿瘤细胞三维培养;芯片中培养的肝癌细胞72 h内生长状态良好,存活率达(96.1±4.5)%,细胞堆积排列紧密,出现肿瘤细胞聚集体(tumor cell spheroid,TCS)。结论该文设计构建用于肿瘤细胞三维培养的微流控芯片,并用于肝癌细胞SMMC-7721培养,细胞生长状态良好,且细胞生长与聚集状态表现出一定特殊性。利用该芯片进行肿瘤细胞三维培养,可以为肿瘤细胞生长状态研究及抗肿瘤药物筛选提供更有利的方式。     

JNK信号转导通路在黄芩苷诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的探讨黄芩苷对人肝癌Hep G2细胞生长的抑制作用及其对c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法 50、100、150μg/ml的黄芩苷分别与人肝癌Hep G2细胞共同培养24、48和72 h,MTT测定细胞生长抑制率;采用Western blotting方法检测黄芩苷处理72 h后Hep G2细胞JNK和p-JNK的表达变化并观察JNK抑制剂对细胞凋亡的影响。结果黄芩苷对人肝癌Hep G2细胞增殖抑制作用呈时间依赖性,黄芩苷浓度低于100μg/ml其对细胞的抑制作用随浓度升高而增强,超过100μg/ml其对细胞的抑制作用不再增强。在黄芩苷处理后Hep G2细胞pJNK蛋白表达上调,使用JNK抑制剂后,能阻断JNK蛋白的磷酸化,并且降低黄芩苷诱导细胞凋亡的能力。结论黄芩苷通过激活JNK信号通路诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡。     

3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对HepG2细胞体外抑制作用研究

目的探讨3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞体外抑制作用及其作用机制。方法采用MTT法考察药物对肝癌细胞Hep G2、宫颈癌细胞He La、结肠癌细胞HT-29、心肌细胞H9C2、犬肾上皮细胞MDCK和血管内皮细胞HY926的细胞毒性,利用细胞染色法观察不同浓度3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞形态的影响,流式细胞术评价该化合物诱导Hep G2细胞的凋亡。结果 3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯具有较好的抑制Hep G2细胞增殖活性作用,其半数有效抑制浓度(IC50)为8.28μmol/L,明显强于甘草次酸的活性(IC5050μmol/L)。3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯及其合成原料甘草次酸、3-甲氧基肉桂酸对非肿瘤细胞MDCK、HY926、H9C2细胞毒性较弱(IC5024μmol/L)。3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯浓度在12.5μmol/L时,对MDCK、HY926、H9C2细胞抑制率分别为17.05%、16.08%、4.66%,与对Hep G2细胞的抑制效果相比差异明显。不同浓度3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯对Hep G2细胞Giemsa染色、H33342染色的细胞形态有明显差异。随着3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯浓度的升高,早期凋亡率逐渐增加,而晚期凋亡率无明显变化,提示3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯可以有效地诱导细胞早期凋亡,并呈现一定的量效关系。结论 3-O-(3-甲氧基肉桂酰)-甘草次酸酯具有良好的抗肿瘤作用,对Hep G2细胞抑制效果最好,对非癌细胞MDCK、HY926、H9C2没有明显抑制效果,该作用主要通过诱导Hep G2细胞凋亡,且呈现一定的量效关系。     

曲古抑菌素诱导HepG2细胞凋亡中Wnt/β-catenin信号转导通路的作用

目的研究Wnt/β-catenin信号通路在曲古抑菌素(TSA)诱导Hep G2细胞凋亡中的作用。方法取对数生长期Hep G2细胞,设不同质量浓度药物诱导组,同时设空白对照组,用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Western Bolt法检测Hep G2细胞β-catenin的表达。结果 CCK-8法检测结果显示,曲古抑菌素对肝癌Hep G2有明显的增殖抑制作用并呈浓度和剂量依耐性;流式细胞术细胞周期检测结果显示,药物组G0/G1期细胞数量明显增多(P<0.05),(G2+M)和S期细胞数量明显减少(P<0.05),提示曲古抑菌素可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期;细胞凋亡检测结果显示,空白对照组凋亡率为(3.82±0.23)%,250 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(23.00±0.65)%,500 nmol/L曲古抑菌素组凋亡率为(37.85±0.87)%,提示TSA具有促进Hep G2细胞凋亡的作用,且呈浓度依赖性;Western Bolt检测结果显示β-catenin表达水平均明显升高。结论曲古抑菌素有诱导Hep G2细胞凋亡的作用,Wnt/β-catenin信号通路在此过程中起重要作用。     

杨黄总黄酮对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究杨黄总黄酮对人肝癌Hep G2细胞凋亡的影响。方法:制备杨黄总黄酮并进行定性、定量分析。以5-氟尿嘧啶(50μg/ml)与不同质量浓度杨黄总黄酮(10、20、40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞24 h后,采用MTT法测定细胞活力以计算抑制率与半数抑制浓度(IC50)。以不同质量浓度杨黄总黄酮(40、80、100μg/ml)作用于Hep G2细胞72 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果:杨黄总黄酮含量为464.5 mg/g。10、20、40、80、100μg/ml杨黄总黄酮对细胞的抑制率分别为(6.46±1.74)%、(8.19±1.08)%、(23.19±2.77)%、(42.09±1.46)%和(58.18±1.89)%,抑制率与其质量浓度呈正相关,IC50为93.9μg/ml。40、80、100μg/ml杨黄总黄酮作用于细胞72 h后细胞凋亡率增加,并与质量浓度呈正相关。随着杨黄总黄酮质量浓度增加,S+G2期细胞比例增加。结论:杨黄总黄酮可诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与将细胞阻滞于S+G2期有关。     

喜树碱及其衍生物对肝癌细胞HepG2增殖抑制与凋亡的研究

目的探讨喜树碱(CPT)及其衍生物10-羟基喜树碱(HCPT)、7-乙基喜树碱(SN22)、7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)在体外对肝癌细胞Hep G2增殖抑制与凋亡的影响。方法取对数期生长的HepG2细胞,分为对照组以及实验组,将4种药物配成浓度梯度0.01、0.1、1、10、100μmol/L的药物溶液。将不同浓度的药物溶液作用于肝癌细胞48 h,MTT法测定Hep G2细胞的增殖情况,Anexin V-PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 MTT法显示,4种药物对肝癌细胞Hep G2的增殖具有抑制作用,在一定范围内随着药物浓度的增加,对Hep G2细胞增殖的抑制作用逐渐增强,呈量效依赖关系,其中7-乙基-10-羟基喜树碱抑制效果最好,10-羟基喜树碱、7-乙基喜树碱次之,喜树碱抑制效果最差。不同浓度的喜树碱及衍生物处理肝癌细胞HepG2,与对照组比较差异有统计学意义,随着药物浓度的变化,细胞凋亡也呈现梯度变化,结构修饰后的SN38比SN22、HCPT及CPT作用更强。结论喜树碱及衍生物对肝癌细胞HepG2有抑制作用,并且能够诱导细胞凋亡。     

基于高内涵筛选技术研究生首乌和制首乌醇提物的肝毒性机制

目的应用高内涵筛选技术研究生首乌醇提物(RPM)和制首乌醇提物(RPMP)的肝毒性及其可能机制。方法 RPM(终浓度10,25,50,100,200和300 mg·L~(-1))和RPMP(终浓度10,50,100,300,600和1200 mg·L~(-1))作用于Hep G2细胞3~24 h。采用Cell Titer-GloTM荧光细胞活性检测试剂盒检测Hep G2细胞存活率;应用高内涵筛选技术进行Hep G2细胞计数,并检测线粒体内活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、转录激活因子4(ATF4)水平及细胞凋亡和细胞周期阻滞;Western蛋白质印迹法验证Hep G2细胞SOD2和ATF4蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,RPM 300 mg·L~(-1)作用24 h使Hep G2细胞存活率下降约48%(P<0.01),而相同浓度RPMP对细胞存活率无显著影响;RPM和RPMP均能降低MMP(P<0.05),并升高GSH,ROS,SOD2和ATF4水平(P<0.05)。与细胞对照组相比,RPM 200 mg·L~(-1)作用3 h SOD2水平显著升高(P<0.05),6 h ATF4水平显著升高(P<0.05);RPMP 300 mg·L~(-1)作用6 h ATF4水平显著升高(P<0.05),24 h SOD2水平显著升高(P<0.05)。结论 RPM和RPMP均具有一定的细胞毒性,RPM的细胞毒性强于RPMP,两者的肝毒性可能主要与氧化应激和内质网应激导致的细胞凋亡有关。     

血根碱通过诱导活性氧促进HepG2细胞凋亡的机制研究

目的研究血根碱对Hep G2细胞中活性氧(ROS)调控细胞凋亡途径的影响。方法采用血根碱干预Hep G2细胞,MTT法检测血根碱对细胞活性的影响;DCFH-DA和DHE染色观察血根碱作用Hep G2细胞12 h后细胞内ROS的变化;Hoechst 33342和Annexin V/PI染色检测细胞凋亡;Rho123染色检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果随着血根碱药物浓度的增加,Hep G2细胞活力明显被抑制;血根碱可以明显提高Hep G2细胞内的ROS含量,并且降低线粒体膜电位,促进细胞凋亡;Western blot检测发现血根碱促进Bax、cleaved-caspase-3和细胞质Cyt-C的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达。结论血根碱通过升高细胞内ROS的含量,激活线粒体凋亡途径,进而促进Hep G2细胞发生凋亡。     

异莲心碱对HepG2细胞周期和凋亡的影响

摘要：目的:研究异莲心碱对人肝癌Hep G2细胞周期与凋亡的影响。方法:采取流式细胞术检测不同浓度异莲心碱诱导Hep G2细胞24 h后对周期的影响; Hoechst33258染色观察异莲心碱诱导Hep G2细胞凋亡后细胞核形态的变化; JC-1染色检测细胞线粒体膜电位变化;蛋白免疫印记法(Western blot)检测Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果:流式结果显示,G0/G1期和G2/M期比例明显升高,而S期比例明显下降,并呈现剂量依赖性; Hoechst33258结果表明,药物诱导Hep G2细胞后,细胞数量减少,形态皱缩或改变,蓝色荧光加深; Western bolt检测可知,异莲心碱上调Bax蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达水平。结论:异莲心碱可使Hep G2细胞阻滞于G0/G1期、G2/M期,诱导Hep G2细胞发生早期凋亡,其作用可能与Bax、Bcl-2两种凋亡蛋白表达水平变化相关。