环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡作用及对PCA3基因表达的影响

目的:探讨环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的作用及对PCA3基因表达的影响。方法:不同浓度环巴胺(1、5、10、15μmol/L)干预LNCaP细胞,以只加入RPMI 1640培养液为空白对照组,分别在不同作用时间(24、48、72h),用MTT法检测其对细胞增殖的抑制、流式细胞术观察细胞凋亡率变化、Hoechst染色观察凋亡细胞形态变化、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)观察对PCA3基因表达的影响。结果:5、10、15μmol/L环巴胺对LNCaP细胞增殖均有显著抑制作用,与空白对照组相比差异有显著性(P0.01),10μmol/L组于48h达到半数抑制量(IC50);10、15μmol/L组24、48、72hLNCaP细胞的凋亡率分别为37.21%、57.38%、57.98%和21.16%、71.31%、72.90%,与空白对照组相比差异均有显著性(P0.01)。随着环巴胺浓度增大和作用时间的延长,LNCaP细胞凋亡显著增加。PCA3基因的表达随着环巴胺浓度的上升呈现明显的递减趋势,较空白对照组显著降低(P0.01)。浓度为10μmol/L时,不同作用时间PCA3基因的表达均极低。结论:环巴胺浓度为10、15μmol/L作用48、72h时能够明显抑制LNCaP细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并显著下调LNCaP细胞PCA3基因的表达。     

环巴胺对DU145细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对DU145细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度(1、10、50、100μmol/L)环巴胺干预DU145细胞,分别在24、48、72h后采用噻唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测环巴胺对细胞周期的影响;RT-PCR检测50μmol/L环巴胺作用48h后实验组和对照组细胞周期蛋白E(cyclinE)mRNA表达水平的差异。结果:环巴胺对DU145细胞的抑制作用呈时效和量效依赖关系,当浓度>10μmol/L作用24h后会显著抑制细胞增殖,10、50、100μmol/L浓度组对细胞的抑制率分别为7.42%、12.70%和59.15%,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测发现,当环巴胺浓度达10μmol/L以上,干预48h后G1期细胞比例明显升高。对照组、10、50μmol/L浓度组的G1期细胞百分比分别为:(52.17±2.21)%、(60.13±2.75)%和(74.30±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01);凋亡峰也随环巴胺浓度增加而逐渐增高。50μmol/L环巴胺作用48h后DU145细胞cyclinEmRNA表达显著降低,与空白对照组相比降低61.90%(P<0.01)。结论:环巴胺可以抑制DU145细胞的增殖能力,其机制可能与下调DU145细胞cyc-linEmRNA表达水平,从而将DU145细胞阻滞于G1期有关。环巴胺亦可以诱导DU145细胞凋亡。     

腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应

目的 评价腺病毒介导白细胞介素24基因转染对胫骨癌痛大鼠的镇痛效应.方法 将已构建好的含IL-24基因的腺病毒(Ad-IL-24)和空白腺病毒载体(Ad-GFP)转入QBI-293A细胞,多次扩增后获得高效价病毒.雌性SD大鼠32只,体重180～200 g,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、PBS阴性对照组(PBS组)、Ad-GFP组和Ad-IL-24组.C组不做任何处理,其余3组均于左侧胫骨骨髓腔内接种Walker 256乳腺癌细胞建立胫骨癌痛模型,建模后第9天分别在术侧后肢局部皮下注射PBS70μl、Ad-GFP70 μl和Ad-IL-24 70 μl,隔天给药,共3次.于接种前(基础状态)、接种后3、6、8、10、12、14d时测定机械痛阚;于接种后14 d时,取术侧胫骨组织,观察肿瘤细胞生长情况和骨小梁破坏情况;取股动脉血样测定血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、β-内啡肽、干扰素γ(IFN-γ)的浓度.结果 C组胫骨骨髓腔内未见异常,PBS组和Ad-GFP组肿瘤向外生长,骨小梁和骨皮质破坏;Ad-IL-24组骨小梁破坏程度较轻;骨皮质完整.与C组和基础值比较,PBS组、Ad-GFP组和Ad-IL-24组其余各时点机械痛阈降低(P<0.05);与PBS组和Ad-GFP组比较,Ad-IL-24组机械痛阈升高,血浆IFN-γ、β-内啡肽、TNF-α的浓度升高,IL-6浓度降低(P<0.05);PBS组和Ad-GFP组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 腺病毒介导-IL-24基因转染对胫骨癌痛大鼠可产生一定程度的镇痛效应,其机制与其可抑制肿瘤细胞生长和调节细胞因子分泌有关.     

鱼藤素对胃癌细胞MKN-45增殖及凋亡的影响

目的:研究鱼藤素对胃癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用CCK8检测不同浓度(0、1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于胃癌细胞MKN-45 24、48、72和96 h后对其增殖的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期;利用倒置相差显微镜观察鱼藤素作用后细胞形态的变化;DAPI及Hoechst染色观察细胞核变化。结果:1μmol/L鱼藤素作用于MKN-45细胞24 h后抑制率为(28.82±0.002)%。随着鱼藤素浓度(10、25μmol/L)增加,作用时间(48、72、96 h)延长,其抑制作用增加,表明其抑制作用呈时间-剂量依赖关系。不同浓度(1、10和25μmol/L)鱼藤素作用于细胞48 h后,早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率显示鱼藤素显著促进细胞凋亡。细胞周期检测发现,与对照组比较,1μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,S期细胞比例升高,G_0/G_1期及G_2/M期细胞比例下降;10μmol/L鱼藤素作用于细胞48 h后,G_2/M期细胞比例升高,G_0/G_1期细胞比例下降(P     

17-AAG联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡影响的研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)联合紫杉醇对人未分化甲状腺癌FRO细胞增殖和凋亡的影响。方法 1采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT比色法)测定不同浓度(17-AAG:0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0及5.000 0μmol/L;紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)、不同时间(24、48及72 h)17-AAG、紫杉醇单药和联合处理(17-AAG:0.625 0μmol/L,紫杉醇:0.001 0、0.010 0、0.100 0及1.000 0μmol/L)后FRO细胞的增殖抑制率。2采用流式细胞仪检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)FRO细胞的细胞周期变化及凋亡率。3采用胱天蛋白酶-3(Caspase-3)和Caspase-9检测试剂盒检测17-AAG、紫杉醇单药及联合处理24 h后(17-AAG:0.625 0μmol/L、紫杉醇:0.100 0μmol/L;联合用药:17-AAG的浓度为0.625 0μmol/L,紫杉醇的浓度为0.100 0μmol/L)后FRO细胞中的Caspase-3和Caspase-9活性。空白对照组均不加任何药物,只加培养液。结果 1同时点空白对照组、各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率随浓度升高而逐渐升高,任2组比较差异均有统计学意义(P0.05);各剂量17-AAG组/紫杉醇组/17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率在24、28及72 h逐渐增高,任2组比较差异均有统计学意义(P0.05);同时点同浓度情况下,17-AAG联合紫杉醇组的增殖抑制率均高于单独用药组(P0.05)。各时点17-AAG与紫杉醇联合的q值均大于1.15,两者之间呈协同作用。2 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率均明显高于空白对照组(P0.05),且17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的凋亡率高于17-AAG组和紫杉醇组(P0.05)。3 17-AAG组、紫杉醇组及17-AAG联合紫杉醇组FRO细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于空白对照组(P0.05);且17-AAG联合紫杉醇组细胞的Caspase-3和Caspase-9活性均高于17-AAG组和紫杉醇组相应指标(P0.05)。结论 17-AAG和紫杉醇均可明显抑制FRO细胞的增殖并诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系。     

干扰X连锁凋亡抑制蛋白基因对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的作用

目的 观察反义寡核苷酸(ASODN)对人胆管癌QBC939细胞株X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因的抑制作用及对癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 脂质体法将ASODN转染入QBC939细胞中,转染12、24、48 h后荧光显微镜观察转染后细胞状态及转染率,应用噻唑蓝(MTT)比色法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和流式细胞仪法测定1.11μmol/L时细胞生长抑制率、XIAP mRNA表达和细胞周期及凋亡率.结果 转染效率可达95%;与对照组比较,1.11μumol/L细胞抑制率为(27.63±1.15)%(24 h),(42.95±1.07)%(48 h);mRNA下调23%(P<0.05);G_0/G_1期细胞、凋亡率高于对照组约27.34%、9.94%(P<0.05).结论 ASODN能有效下调QBC939细胞XIAP基因表达,抑制细胞增殖并诱导凋亡.     

全反式维甲酸对人结肠癌细胞亚株SW480/M5增殖和凋亡的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌细胞亚株SW480/M5增殖和凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测1、2、4、8μmol/L ATRA作用24、48、72 h对SW480/M5细胞的抑制率.流式细胞仪检测8 μmol/L ATRA作用24、48、72 h及2、4μmol/L ATRA作用48 h的肿瘤细胞周期和凋亡率.结果 ATRA抑制SW480/M5细胞增殖作用呈一定时效和量效依赖性;8μmol/LATRA作用72 h明显抑制肿瘤细胞增殖,抑制率接近30％.2、4μmol/L ATRA作用SW480/M5细胞48 h或8μmol/L作用24 h,肿瘤细胞G1期比例开始降低,S期比例增加(P＜0.05).8umol/L ATRA作用48 h后,S期比例进一步增高,G2/M期细胞比例不增加;作用72 h后,G1期细胞比例进一步下降,伴G2/M期细胞比例增加(P＜0.05).8μmol/L ATRA作用24 h无明显诱导SW480/M5细胞凋亡作用,作用48 h或72 h可诱导肿瘤细胞凋亡,但凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 8μmoL/LATRA作用48 h或72 h通过阻滞SW480/M5细胞在S期或(和G2/M)期,并诱导肿瘤细胞凋亡,可明显抑制肿瘤细胞增殖.     

Rab23基因的siRNA干扰诱导肝癌Huh7细胞凋亡

目的 观察信号通路Sonic bedgehog(Shh)抑制因子Rab23的RNA干扰对人肝癌细胞株Huh7增殖和凋亡的影响.方法 实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组.设计针对Rab23基因的siRNA,通过Liperfectemin 2000将其转染进Huh7细胞株,噻唑蓝(MTT)比色法试验检测沉默Rab23基因后第0、8、16、24和48 h的细胞数和MTr的D(λ)值;流式细胞术检测沉默Rab23基因48 h细胞凋亡情况.结果 转染组与空白对照组比较,加入siRNA后,8 h时细胞增殖数无明显减少,16、24和48 h时细胞数明显减少(P＜0.01),24、48 h时细胞存活率差异有统计学意义.隐性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Huh7细胞经siRNA作用48 h后,可见亚二倍体核型峰-凋亡峰.其中,转染组凋亡率为28%,隐性对照组及空白对照组未见凋亡峰.结论 Rab23对肝细胞癌的增殖起维持作用;通过沉默该基因可以抑制肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡.     

特异性阻断Shh信号通路对肝细胞癌细胞系Hep-3B增殖和凋亡的影响

目的 观察阻抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog(Shh)对人肝癌细胞系Hep-3B增殖和凋亡的影响.方法 将实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组.设计针对Shh信号通路中Smo基因的siRNA,通过Lipedectemin2000将其转染进Hep-3B细胞株,噻唑蓝(Mar)比色法检测沉默Smo基因后第0、8、16、24和48 h的细胞数和MTr的D(入)值;流式细胞术检测沉默Smo基因48 h细胞凋亡.结果 转染组与空白对照组比较,加入siRNA后,8 h时细胞增殖数无明显减少,16、24和48 h时细胞数明显减少(P<0.01),24和48 h时细胞存活率差异有统计学意义.阴性对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Hep-3B细胞经siRNA作用48 h后,可见亚二倍体核型峰-凋亡峰.其中,转染组凋亡率为30%,阴性对照组与空白对照组未见凋亡峰.结论 Shh信号分子对肝细胞癌的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制肝癌细胞增殖,并促进细胞凋亡.     

橄榄苦苷对破骨细胞增殖影响的实验研究

目的探讨橄榄苦苷不同药物浓度及不同作用时间对破骨细胞增殖的影响。方法破骨细胞的制备,采用sRANKL与M-CSF诱导小鼠单核细胞RAW264.7细胞获得破骨细胞。设置实验组:4组分别加入400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL橄榄苦苷,另设空白对照组。运用抗酒石酸酸性磷酸酶染液试剂盒进行破骨细胞TRAP染色鉴定,并采用Cell Counting Kit法(CCK法)检测应用不同浓度橄榄苦苷及不同作用时间抑制破骨细胞增殖的情况。结果与空白对照组比较,400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞的增殖均具有明显抑制作用。当药物作用时间为24 h及72 h时,400μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞增殖的抑制作用最强,当药物作用时间为48 h时,200μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞增殖的抑制作用最强,差异有统计学意义(P0.05);50μg/mL橄榄苦苷对破骨细胞的增殖无明显抑制作用,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论橄榄苦苷可能通过破坏破骨细胞细胞膜的完整性抑制破骨细胞的增殖。     

复方苦参注射液与5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨复方苦参注射液与5-氟尿嘧啶对大肠癌LoVo细胞生长抑制及诱导凋亡的影响。方法 台盼蓝染色法测定药物对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系，用荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行检测。结果台盼蓝实验表明，经40μg／L复方苦参注射液单独处理细胞，LoVo细胞增殖的抑制率24h，12．8％；48h，25．4％；72h，42．2％。12．5mg,／L5-Fu单独处理的LoVo细胞，其增殖抑制率24h，16．3％；48h，23．1％；72h，29．3％；而当两者合用时，对LoVo细胞增殖的抑制率24h，26．8％；48h，72．3％；72h．84．6％。复方苦参注射液和．5-Fu对LoVo细胞的生长均有抑制作用，并诱导发生凋亡。实验范围内其细胞凋亡成时间与剂量依赖关系。并且复方苦参注射与低浓度的化疗药物有协同作用，可产生较强的抑制细胞增殖的作用。结论 复方苦参注射具有直接的抗肿瘤作用，并且具有增强5-Fu化疗药物作用的功效。     

槲皮素经抑制己糖激酶活性介导人肝癌Huh-7细胞的增殖、侵袭和转移

目的探讨槲皮素对人肝癌Huh-7细胞生物学行为及其己糖激酶(Hexokinase)活性的影响。方法 0 μmol/L(对照组)、100、150、200 μmol/L槲皮素处理Huh-7细胞, 24、48、72 h后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测Huh-7细胞的增殖能力, 24 h后采用Transwell法评估Huh-7细胞的迁移及侵袭能力;24 h后应用蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Huh-7细胞己糖激酶mRNA转录及蛋白水平表达变化;24 h后采用己糖激酶检测试剂盒检测细胞己糖激酶的活性改变。多组定量资料差异比较采用方差分析, 不同槲皮素浓度组的各个指标数值与空白对照组数值的均数间多重比较采用Dunnett法。结果 3种浓度的槲皮素处理Huh-7细胞增殖抑制率均高于对照组(24 h:38.438±6.787、45.776±5.463、56.376±6.457比0.000±0.000, F=102.593, P<0.001;48 h:56.395±6.503、75.124±10.216、83.943±6.297比...     

依托咪酯对HL-60细胞的毒性作用及依托咪酯预处理对其的影响

目的探讨依托咪酯对人急性髓性细胞白血病细胞（HL-60细胞）的毒性作用,及依托咪酯预处理对此毒性作用的影响。方法实验分两部分,第一部分为细胞毒性实验,HL-60细胞随机分为6组,对照组不用依托咪酯处理,其他5组分别加入50、100、250、500、1 000μmol/L依托咪酯,每组分别作用4、8、12、24、48 h,进行下述指标检测。第二部分为预处理实验,HL-60细胞随机分为3组,对照组不用依托咪酯处理,依托咪酯组加入500μmol/L依托眯酯作用24 h,预处理组先加入1μmol/L依托咪酯作用1 h,洗脱后在培养基中孵育4 h,再加入500μmol/L依托咪酯作用24 h。采用MTT实验方法检测细胞活力,采用AnnexinⅤ-PI流式细胞仪检测细胞凋亡。结果依托咪酯可抑制HL-60细胞活力,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性。1μmol/L依托咪酯预处理1 h,4 h后对500μmol/L依托咪酯作用24 h诱发的细胞凋亡具有抑制作用（P＜0．05）。结论依托咪酯通过诱发细胞凋亡,对HL-60细胞的功能产生了抑制作用,1μmol/L依托咪酯刺激1 h预处理可减轻药物自身引起的这种抑制作用。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞株作用的实验研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂MG-132阻断泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)对体外胃癌细胞增殖的抑制作用及其相关机制。方法:将不同浓度的MG-132加入胃癌细胞株SGC-7901中,观察细胞形态变化,并应用MTT法测定细胞抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组化法检测P27kip1的表达。结果:MG-132对胃癌细胞增殖具有显著的抑制作用,瑞氏染色显微镜观察MG-132作用于胃癌细胞后,可见细胞出现细胞质、核仁消失,染色质固缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割及大量凋亡小体。5.0μmol/L的MG-132作用24、48h后的凋亡率分别为(16.7±5.1)%和(72.8±16.4)%。免疫组化显示,胃癌细胞在5.0μmol/L的MG-132作用48h后明显表达P27kip-1。结论:MG-132能显著抑制胃癌细胞的增殖,诱导其凋亡。其机制可能为通过上调抑癌蛋白P27kip-1水平而起到抗肿瘤作用。     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶在前列腺癌LNCaP细胞株中的表达及意义

目的 探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymease,PARP]对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株增殖和凋亡的影响. 方法 将LNCaP细胞株分组培养并应用PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)处理,蛋白印迹法检测LNCaP细胞内PARP表达的变化,四甲基偶氮唑盐法检测PARP表达抑制后对LNCaP细胞增殖的影响及其时间效应和剂量效应的关系,流式细胞仪检测5-AIQ对LNCaP细胞凋亡的影响. 结果 与空白组相比,浓度为500及1000μmol/L的5-AIQ处理48 h后LNCaP细胞内PARP的表达分别降低至65.3％和22.4％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).PARP表达抑制后,LNCaP细胞增殖也受到明显抑制.随着药物浓度依次增加,细胞增殖抑制率逐渐增加,处理24 h后细胞增殖抑制率从(2.85±2.03)％升至(41.23±5.42)％,处理48 h后细胞增殖抑制率从(19.80±4.34)％升至(55.67±1.47)％,处理72 h后细胞增殖抑制率从( 25.67±0.63)％升至(65.81 ±1.62)％,组间抑制率差异均有统计学意义(P＜0.05);同样,当药物浓度维持不变时,随着作用时间延长,细胞增殖抑制率也明显升高,细胞增殖的抑制作用与5 - AIQ剂量增加和作用时间延长呈正相关关系.浓度为500及1000 μmol/L的5-AIQ处理48 h所诱导的LNCaP细胞的早期、晚期和总凋亡率分别为23.6％、4.6％、28.2％和31.8％、6.3％、38.1％,与空白组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且随着剂量增加,诱导细胞凋亡的作用增强.结论 抑制PARP的表达可以明显抑制LNCaP细胞增殖,并诱导LNCaP细胞的凋亡.PARP有望成为前列腺癌治疗的一个新靶点.     

ADAM17-shRNA通过Akt/GSK3β信号通路促进HT29结肠癌细胞的凋亡

目的探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因的表达对HT29结肠癌细胞增殖和凋亡的抑制作用及其可能机制。方法将HT29结肠癌细胞分为干扰组、阴性对照组和空白对照组,干扰组细胞转染重组慢病毒载体以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组慢病毒载体,空白对照组细胞加入等量的PBS溶液。采用实时荧光定量PCR法(real-time PCR)检测ADAM17 mRNA的表达,采用Western blot法检测ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)、磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(P-GSK3β)及糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)蛋白的表达,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin-V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况。结果与阴性对照组和空白对照组比较,干扰组细胞中ADAM17 mRNA及其蛋白的表达水平均较低,同时点(培养24、48及72 h)的吸光度值(A值)也较低,细胞凋亡率较高,caspase3蛋白的表达水平较高,P-Akt和P-GSK3β蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 ADAM17基因沉默可能通过抑制Akt/GSK3β通路的激活,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

端粒酶反义基因对紫杉醇诱导原代胃癌细胞凋亡的增敏作用

目的：探讨端粒酶反义寡核苷酸（PS－ASODN）与紫杉醇（TAXOL）联合应用对原代胃癌细胞凋亡作用的影响。方法：常规组织块培养法进行胃癌细胞原代纯化培养．取第3代对数生长期细胞进行实验。各组在培养24h及48h分别加入相同剂量的培养液；终浓度：3μM的PS-ASODN。3μM的N-ASODN，1.0μM的TAXOL。作用24h后再分别在PS-ASODN组及N-ASODN组加入终浓度为1．0μM的TAXOL；分别于培养后24，48，72，96h收集各组细胞。以台盼蓝拒染法计算各组细胞生长抑制率，观察PS-ASODN联合TAXOL对原代胃癌细胞生长的影响；流式细胞学观察细胞凋亡率及细胞周期变化。结果：终浓度为3μM的PS-ASODN作用于原代胃癌细胞24h后加入TAXOU1．0μM．能明显抑制胃癌细胞增殖，同时流式细胞学检测到凋亡峰，细胞受阻于G2／M期．作用48．72，96h的凋亡细胞百分率（34．8％，44．6％及50.6％）明显高于TAXOL组及N-ASODN＋TAXOL组，差异有统计学意义（P〈0．05），其作用呈时间依赖性及序列特异性。结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN可促进TAXOL诱导的胃癌细胞凋亡．对胃癌具有重要治疗价值。     

依托咪酯对猪肾上腺皮质细胞的毒性作用及依托咪酯预处理对其的影响

目的 探讨依托咪酯对猪肾上腺皮质细胞的毒性作用及依托咪酯预处理对其的影响.方法 实验分两部分,第一部分为细胞毒性实验,猪肾上腺皮质细胞随机分为8组,每组3皿,对照组加入0.5%二甲基亚砜(DMSO),其他7组分别加入50、100、200、300、400、500、1000 μmol/L依托咪酯,每组分别作用6、12、24 h,进行下述指标检测.第二部分为预处理实验,猪肾上腺皮质细胞随机分为3组,每组3皿,对照组加入0.5%DMSO,损伤组加入325 μmol/L依托咪酯作用24 h,预处理组先加入0.6 μmol/L依托咪酯作用1 h,洗脱后在培养基中孵育4 h,再加入325 μmol/L依托咪酯作用24 h.采用CCK-8法检测细胞活力,计算24 h时依托咪酯半数抑制浓度(IC50),采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 依托咪酯可抑制猪肾上腺皮质细胞活力,诱导细胞凋亡,呈浓度和时间依赖性,24 h时IC50为325μmol/L.0.6 μmol/L依托咪酯预处理1 h可抑制325μmol/L依托咪酯诱发的细胞凋亡具有抑制作用.结论 依托咪酯通过诱发猪肾上腺皮质细胞凋亡对其功能产生抑制作用;依托咪酯预处理可减轻药物自身引起的这种抑制作用.     

转染血红素氧合酶—1基因减轻人肝细胞体外缺氧—复氧损伤

目的 探讨血红素氧合酶-1重组腺病毒载体(Ad-HO-1)体外转染人肝细胞的转染效果及其对肝细胞缺氧-复氧损伤的影响.方法 取人肝细胞系L-02细胞,滴加低温保存的Ad-HO-1,分别培养24 h、48 h和72 h(24 h组、48 h组和72 h组),并以加入空载体腺病毒共培养的L-02细胞为空白对照.采用逆转录聚合酶链反应法检测各组肝细胞HO-1 mRNA的表达水平;以间接免疫荧光标记法检测各组肝细胞的HO-1表达率;在倒置荧光显微镜下观察转染24 h和72 h的肝细胞中绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.取空白对照组肝细胞(培养48 h)和48 h组肝细胞,缺氧培养4 h后再有氧培养8 h,采用四甲基偶氮唑盐法测定两组肝细胞存活率.结果 24 h组、48 h组和72 h组HO-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组,且随着转染时间的延长,HO-1 mRNA的表达水平逐渐升高.空白对照组HO-1的表达率为2.0%,24 h组为29%,48 h组为85.6%,72 h组为84.6%.基因转染后24 h和72 h,可以观察到L-02细胞中EGFP的表达.经历缺氧-复氧实验后,空白对照组肝细胞的存活率为(37.7±3.5)%,48 h组肝细胞的存活率为(89.4±5.2)%,二者相比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Ad-HO-1在体外能有效的转染人肝细胞;与未转染者相比,转染肝细胞的缺氧-复氧损伤程度较轻.     

靶向survivin基因不同位点的siRNA对PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察靶向survivin基因不同位点的小干扰RNA(siRNA)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞survivin mRNA表达的抑制作用以及对细胞增殖和凋亡的影响. 方法 根据survivin mRNA的结构特点,选取2个不同的作用位点,设计和构建负载survivin shRNA片段的2种重组质粒载体.以脂质体法转染PC-3细胞株,荧光显微镜下观察转染效率.实验分为survivin 1组、survivin 2组、阴性对照组和空白对照组.转染后24、48和72 h,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中survivin mRNA的表达,MTT法检测siRNA对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞术检测凋亡率. 结果 与对照组相比,survivin 1组、survivin 2组对survivin mRNA的表达均能产生抑制效应,48 h抑制率最高,survivin 1抑制率高,达52%.实验组均能抑制PC-3细胞的增殖,survivin 1抑制细胞增殖的能力强.转染48 h后,细胞凋亡最明显,survivin 1组凋亡率高,达13.6%±1.8%. 结论 在RNAi研究中,根据特定靶基因mRNA的结构特点来进行siRNA的设计和筛选,在前列腺癌的基因治疗中具有一定的实际应用价值.