浅蓝菌素对人结肠癌细胞LoVo在裸鼠体内生长的抑制作用

目的 研究脂肪酸合酶抑制剂－浅蓝菌素对人结肠癌细胞ＬｏＶｏ在裸鼠体内生长的抑制作用。方法 建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,浅蓝菌素每次８０ｍｇ／ｋｇ体重、１６０ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射１０次,动态观察肿瘤体积及抑瘤率,治疗后１７ｄ处死并解剖动物,瘤组织做形态学观察和免疫组织化学ＳＰ法检测。结果 不同浓度浅蓝菌素处理人结肠癌细胞ＬｏＶｏ裸鼠移植瘤模型,低剂量和高剂量浅蓝菌素的体积抑瘤率分别为３７．７％和６３．８％,后者接近常规化疗药物５－Ｆｕ治疗对照组（６５．８％）。瘤体组织学显示为人未分化结肠腺瘤,浅蓝菌素处理的移植瘤组织内瘤细胞出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,免疫组织化学显示ｂｃ１－２蛋白表达率低于对照组,ｂａｘ基因蛋白的表达结果则相反。结论 浅蓝菌素能够选择性地抑制人结肠癌细胞ＬｏＶｏ细胞在裸鼠体内的生长,这种     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2~M期细胞所占比例组明显增高。结论三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

浅蓝菌素诱发人结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨脂肪酸合酶抑制剂———浅蓝菌素能否阻遏人结肠癌细胞增殖与诱发凋亡。方法　采用人结肠癌细胞系LoVo ,应用细胞形态学观察 ,噻唑蓝法 (MTT法 ) ,片断DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪等方法进行检测和观察。结果　LoVo细胞在浅蓝菌素作用下 ,细胞增殖被阻遏 ,并呈现剂量效应关系 ,浅蓝菌素浓度 10 -9～ 10 -5mol/L增殖抑制率由 ( 2 1.0± 15 .9) %到 ( 96 .3± 2 7) %(P <0 .0 5或 0 .0 1)。同时诱发细胞发生凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚、边集或断裂。细胞DNA裂解片段呈典型的“阶梯状”排列的条带 ,流式细胞仪显示“凋亡”峰 ,细胞周期分析浅蓝菌素能阻滞肿瘤细胞从S期进入G2 M期 ,并诱导其细胞凋亡。浅蓝菌素对人成纤维细胞增殖无明显影响。结论　脂肪酸合酶抑制剂可能通过抑制LoVo细胞内源性脂肪酸合成 ,诱发细胞凋亡来阻遏LoVo细胞的增殖     

三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化

目的： 研究三氧化二砷（As₂O₃）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法: 以As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡为模型，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死，DiOC₆(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），壬基酚丫啶橙(NAO)/PI染色流式细胞术检测线粒体质量，利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。 结果: 在4×10^-6mol/L As₂O₃诱导下，Jurkat细胞在48 h凋亡比率为(18.98±1.40)%， 对照组为(5.17±0.80)%，组间差异显著（P<0.01）；As₂O₃组坏死比率为(8.56±0.70)%，对照组为(1.53±0.55)%，组间差异显著（P<0.01）。As₂O₃组在48 h时点的线粒体膜电势低于对照组（P<0.05）， 线粒体膜电势下降的Jurkat细胞比率分别为（23.07±3.62)%和（6.63±1.46)%。 同时Jurkat细胞As₂O₃组线粒体质量显著低于对照组（P<0.01），线粒体质量下降的细胞比率分别为（25.90±1.80)%和（6.37±1.04)%。As₂O₃组自由基产生明显高于对照组（P<0.01）， DCFDA平均荧光强度分别为24.41±0.75和17.06±0.48。结论: As₂O₃诱导Jurkat细胞凋亡过程中，线粒体膜电势和质量均下降，细胞内氧自由基水平升高。     

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与细胞内活性氧的关系

目的： 研究23-羟基白桦酸诱导人结肠癌细胞株LoVo细胞凋亡过程中活性氧（ROS）的变化及其作用机制。方法：光学显微镜法观察23-羟基白桦酸作用LoVo细胞后细胞形态学改变，并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内ROS水平。结果：分别以浓度为25、50、100、200 μmol/L 23-羟基白桦酸作用LoVo细胞48h后，在光学显微镜下观察到明显的凋亡细胞形态学改变；经流式细胞仪检测，细胞凋亡率分别为(7.17±2.31)%、(15.60±4.02)%、(32.47±5.25)%及(52.71±5.93)%，呈现一定的浓度依赖性关系。23-羟基白桦酸可使 LoVo 细胞内ROS的水平明显高于空白对照组。细胞内ROS含量（MFI，平均荧光强度）分别为2.83±0.80、5.97±1.72、12.53±2.57及16.73±4.58。其中，浓度为100和200 μmol/L 23-羟基白桦酸的作用较明显，与对照组(2.13±0.32)比有显著差异（P<0.05）。结论：23-羟基白桦酸具有明显的诱导LoVo细胞凋亡作用，其作用机制可能与23-羟基白桦酸引起细胞内ROS水平增加有关。     

三氧化二砷诱导肿瘤细胞凋亡的氧化还原调节

三氧化二砷 (As2 O3 )治疗急性早幼粒细胞白血病及实体肿瘤的主要作用机制为诱导细胞凋亡。活性氧(ROS)被认为是细胞凋亡的信号传导分子之一。细胞内氧化还原调节可决定细胞的生存状态。肿瘤细胞对As2 O3的敏感性与其自身的ROS和谷胱甘肽水平相关。小剂量维生素C亦具有促氧化作用 ,可增加体内ROS水平 ,提高肿瘤细胞对As2 O3 的敏感性     

三氧化二砷诱导肺癌上皮细胞株凋亡

采用碘化丙啶和FITC-TUNEL标记法,经流式细胞认错和透射电镜观察As2O3对肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用和形态学变化。结果发现1及2.5μmol/L As2O3对肺癌A549细胞株24h的凋亡诱导率为22.80%及30.15%,48h的凋亡诱导率为41.75%及60.04%,72h的凋亡诱导率为56.38%及73.30%,均分别高于相应时间点的5-FU的作用;透射电镜下见细胞体积缩小,核膜完整,核染色质聚集于核膜边缘的典型凋亡细胞。结果表明,As2O3能够诱导肺癌A549细胞株的凋亡。     

氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。     

3-MA对三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对三氧化二砷(As2O3)诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞系Jurkat细胞凋亡的影响及机制。方法:XTT法检测三氧化二砷(As2O3)对急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的增殖抑制作用。电镜下观察不同浓度As2O3作用Jurkat细胞24 h后细胞形态。免疫印迹和流式细胞术检测微管相关蛋白1轻链3B(LC-3B)蛋白的表达变化。AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞术检测3-MA对AS2O3诱导急性T细胞白血病系Jurkat细胞凋亡的影响。结果:As2O3可以抑制急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的生长,这种作用呈剂量和时间依赖性。2.5、5、10μmol/L AS2O3作用Jurkat细胞24 h后在电镜下可观察到自噬、凋亡、坏死的不同形态,并且自噬体数目不断增多。5μmol/L As2O3处理Jurkat细胞0、24、48 h后,LC-3B的平均荧光强度相对倍数分别(3.1±0.2)倍、(4.6±0.31)倍、(34.2±4.5)倍,组间相比,差异有统计学意义(P<0.05),与生长抑制率一样呈现时间依赖性增强;免疫印迹也显示As2O3处理24 h和48 h后,LC-3B的蛋白表达逐渐增强;相对于As2O3组(33.4±9.1)%的生长抑制率,3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合As2O3处理细胞后,48 h的生长抑制率为(60.6±8.3)%,差异明显,而LC-3B的表达明显降低。联合应用自噬抑制剂3-MA后Jurkat细胞的凋亡率(44.96±3.60)%,与单用As2O3组(2.94±0.26)%相比明显增加,差异有统计学意义。结论:自噬抑制剂3-MA可以增加As2O3引起的急性T细胞白血病细胞系Jurkat细胞的凋亡细胞百分数,其作用机制与诱导凋亡及抑制自噬密切相关。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的在体外实验中,探讨三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用TUNEL染色法,定性、定量地研究As2O3与卵巢癌细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果As2O3在体外能诱导卵巢癌细胞发生凋亡,下调bcl-2的表达,增强bax的表达。结论诱导卵巢癌细胞发生凋亡是As2O3抗卵巢癌作用的机制之一,As2O3可能通过下调bcl-2的表达及增强bax的表达诱导卵巢癌细胞发生凋亡。     

siRNA特异性沉默septin 2基因抑制大肠癌LoVo细胞迁移

目的:检测新型骨架蛋白septin2在不同转移能力的人结直肠癌细胞株中的表达水平,探究其在结直肠癌细胞迁移中的作用。方法:采用实时荧光定量RT-PCR及Westernblotting检测septin2基因及其蛋白在高转移潜能细胞株LoVo和低转移潜能癌细胞株HT-29、SW480、HCT-116中的表达;用siRNA干扰方法沉默高表达的septin2基因,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效率,免疫荧光共聚焦实验观测干扰前后septin2蛋白表达的变化,划痕实验检测干扰前后细胞的迁移能力。结果:septin2在LoVo细胞的表达水平显著高于HT-29、SW480及HCT-116细胞(P<0.05)。沉默septin2基因后,LoVo细胞septin2mRNA表达降低(P<0.05);septin2与纤维状肌动蛋白(F-actin)存在共表达;F-actin表达减弱,应力纤维减少,片状伪足细而短;细胞迁移能力减弱。结论:septin2基因在LoVo细胞高表达,干扰其表达能导致细胞骨架重构,从而降低细胞迁移能力。     

三氧化二砷对肝癌细胞HepG2迁移、侵袭和凋亡的影响

本文旨在探究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞HepG2作用的最佳浓度,以及此浓度As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。本研究采用CCK-8法检验0、1、2、4、8、16、32μmol/L As2O3处理后HepG2细胞活力,计算半抑制浓度(IC50),并且观察IC50浓度As2O3作用12、24、48 h后HepG2细胞形态变化。通过伤口愈合实验和Transwell侵袭实验验证As2O3对细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot和qRT-PCR实验检测As2O3对细胞迁移、侵袭及凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,HepG2细胞活力随As2O3处理浓度的升高而降低,呈现剂量依懒性,其IC50为7.3μmol/L;8μmol/L As2O3处理24 h后,HepG2细胞发生明显凋亡,且其迁移和侵袭能力显著降低;此外,细胞中RhoA、Cdc42、Rac1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平下调,抑凋亡基因Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平显著下调,而促凋亡基因Bax、Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平显著上调。以上结果说明一定浓度的As2O3能够抑制肝癌细胞迁移和侵袭,促进肝癌细胞凋亡。     

藤黄酸抑制人结肠癌SW480细胞增殖过程中APC蛋白的表达变化

目的观察藤黄酸对人结肠癌SW480细胞增殖和APC蛋白表达的影响,探讨其可能抗肿瘤的作用机制。方法以不同浓度（0、0.5、1、4μg/ml）的藤黄酸干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24、36、48h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析APC蛋白的变化。结果 1μg/ml以上浓度的藤黄酸可以显著抑制人结肠癌细胞株SW480细胞增殖,且随浓度增加效果增强,随着时间增加抑制率显著增加（P〈0.01）。藤黄酸浓度达到4μg/ml时,G2/M期细胞达到54.74%;藤黄酸浓度为0、0.5、1、4μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为（0.17±0.08）%、（0.85±0.19）%、（7.12±1.21）%、（15.87±1.59）%。用不同浓度的藤黄酸处理SW480细胞株24h,APC蛋白的表达随药物浓度的升高而增加（P〈0.01）。结论藤黄酸能够抑制人结肠癌细胞株SW480增殖并诱导其凋亡,干扰SW480细胞周期使其阻断于G2/M期,高表达APC蛋白有可能是藤黄酸抗癌作用的重要机制。     

Kail/CD82基因转染对结肠癌细胞株LoVo生物学特性的影响

目的　探讨Kail/CD82对LoVo细胞株生长、黏附、分离与侵袭能力的影响。方法　转染KailcDNA ,建立稳定Kail表达克隆株。采用体外实验的方法 ,绘制转染细胞与对照细胞的生长曲线 ,并检测其黏附、聚集、分离与侵袭能力 ,对比有无差别。结果　与对照细胞相比 ,转染对LoVo细胞的生长无明显影响 ;震荡 10、2 0、3 0、40min时 ,转染细胞与空白对照细胞的黏附细胞数 (× 10 5 )分别为0 0 8、0 63、0 83、0 91和 0 0 4、0 48、0 71、0 82 ,其中震荡 2 0、3 0与 40min时二者差异有显著性 (P <0 0 5) ;震荡 5、10、15min时 ,转染细胞与空白对照细胞的脱落率分别为 13 %、2 0 %、53 %和 11%、2 8%、60 % ,其中震荡 10与 15min时二者的差异有统计学意义 (P <0 0 5) ;5h的温和震荡后 ,转染细胞的聚集体形成率较空白对照细胞为高 (64 8%和 58 6% ,P <0 0 5) ;1d共培养后 ,转染细胞穿过内皮细胞的数目较空白对照细胞的少 (6 3 3 /视野和 17 67/视野 ,P <0 0 5) ;总之 ,转染可以增强细胞的黏附与聚集能力 ,降低其分离与侵袭能力。结论　Kail/CD82对结肠癌细胞的转移力具有抑制作用     

三氧化二砷抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖并促进细胞凋亡

目的研究三氧化二砷(As2O3)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用。方法经组织块贴壁法原代培养的大鼠VSMCs,应用MTT法、台盼蓝拒染法3、H-胸腺嘧啶胞苷掺入法测定VSMCs的细胞活力、生长及增殖;应用流式细胞仪、DNA梯带法分析细胞周期分布及凋亡;应用Western blot法检测凋亡相关基因产物P53及细胞周期蛋白激酶抑制蛋白P21waf1/cip1。结果1~16μmol/L As2O3对VSMCs细胞活力无明显影响,但可显著抑制细胞生长及DNA合成(P<0.05),并呈时间和剂量依赖性。8μmol/L As2O3可使细胞周期S期减少(P<0.05)、G0G1期增加(P<0.05),并出现sub-G1期凋亡峰。16μmol/L As2O3对VSMCs作用不同时间后出现典型的凋亡梯带样DNA片段。8μmol/L As2O3可显著上调VSMCs的P53及P21waf1/cip1蛋白产物(P<0.05),且呈时间依赖性。结论As2O3对VSMCs具有明确的抗增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用,并且与P53、P21waf1/cip1表达上调密切相关。     

雌激素减轻H2O2诱导PC12细胞凋亡

目的观察雌激素对H2O2诱导细胞凋亡的作用,探讨雌激素保护作用机制。方法在PC12细胞建立H2O2诱导细胞凋亡的实验模型。用MTT法检测细胞存活率,比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,Hoechst染色检测细胞凋亡,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定caspase-3活性。结果H2O2明显降低PC12细胞的存活率,使LDH释放增加,促进细胞凋亡,并能明显地升高caspase-3的活性。雌激素能显著地减轻上述变化。结论雌激素对抗H2O2诱导的细胞凋亡,抑制caspase-3的激活是其细胞保护机制之一。     

应用基因芯片研究As2O3诱导K562细胞前后差异表达基因

目的研究三氧化二砷(As2O3)处理K562细胞前后,基因表达的变化。方法提取As2O3作用K562细胞前后的总RNA,逆转录成cDNA并用Cy3标记对照组,Cy5标记处理组,与自制的包含162个cDNA片段的K562芯片杂交。结果K562细胞经As2O3作用后,162个基因片段的表达都有所降低,其中25个基因片段的表达降低较为显著(Cy5/Cy3<0.5)。这些表达下调的基因片段包括转导因子、代谢酶、信号通路蛋白、激酶等,有6个差异表达基因与细胞的凋亡通路密切相关。As2O3可能通过抑制胰岛素样生长因子的功能,诱导细胞凋亡。结论应用自制的基因芯片筛选到了As2O3诱导K562细胞前后差异表达的基因,主要与细胞凋亡密切相关。     

Thioredoxin-1 inhibitor PX-12 induces human acute myeloid leukemia cell apoptosis and enhances the sensitivity of cells to arsenic trioxide

Thioredoxin-1 (Trx-1), an important redox regulatory factor, plays a significant role in drug-induced apoptosis. Here we investigated the effects of the Trx-1 inhibitor 1-methylpropyl 2-imidazolyl disulfide (PX-12) on human acute myeloid leukemia cells (AML) and the sensitivity of cells to arsenic trioxide (As2O3, ATO). Treatment of cells with a different concentration of PX-12 for 48 h resulted in growth inhibition, the induction of apoptosis and increased the levels of activated caspase-3 expression in AML cell lines HL-60, NB4, U937 and primary AML cells in a dose-dependent manner. In addition, PX-12 enhanced the sensitivity of U937 cells to ATO. These results suggest the effects of Trx-1 inhibitor PX-12 to induce apoptosis in AML cells and therapeutic potential in AML by enhancing the sensitivity of cells to ATO.     

三氧化二砷持续区域肝动脉灌注治疗肝癌的临床研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）注射液单药连续区域动脉灌注化疗原发性肝癌的临床疗效。方法55例手术不能切除的非晚期原发性肝癌患者,随机分为两组：（1）As2O3治疗组26例：患者采用经股动脉肝动脉碘油栓塞后埋置皮下化疗泵,予以连续区域灌注As2O3化疗,20mg/d,每天1次,共7d,间隔4周重复,共5疗程。（2）对照组29例：采用经股动脉肝动脉栓塞化疗（TACE）,2次TACE15例,3次TACE14例。结果As2O3治疗组总有效率为34.6%（9/26）、肿瘤复发率为15.4%（4/26）、1年生存率为80.7%（21/26）;TACE组分别是31.0%（9/29）、37.9%（11/29）、51.7%（15/29）。统计学分析表明,两组的总有效率差异无统计学意义,P〉0.05;肿瘤复发率和1年生存率差异有统计学意义,P〈0.05。As2O3治疗组较对照组不良反应轻微,未见不可逆不良反应。结论经股动脉肝动脉碘油栓塞后埋置皮下化疗泵予以连续区域灌注As2O3化疗用于治疗原发性肝癌不良反应轻微、疗效确切,具有一定的临床应用前景。