维生素E、硒对急性肝损伤期肝细胞凋亡影响的研究

目的: 了解饲料维生素E (VE) 和硒 (Se) 对大鼠急性损伤期肝细胞凋亡的调节作用。方法: 采用腹腔内注射50%CCl4制备大鼠急性肝损伤模型,在饲料中添加适量VE(250 mg/kg)和Se(0.2 mg/kg)进行营养干预,用ALT、AST等肝功能指标及病理组织学观察的方法检测抗氧化剂对肝细胞的保护作用;用原位凋亡(TUNEL)技术结合组织学形态观察的方法检测抗氧化营养素对肝细胞凋亡的影响。结果: 注射CCl4后大鼠ALT和AST值均显著增高;肝细胞凋亡数少于正常对照组; 饲料补充VE和Se后肝损伤程度减轻;肝细胞凋亡数增高。结论: 饲料中添加适量VE和Se可减轻CCl4对大鼠肝细胞的损伤并促进其凋亡。     

膳食硒、维生素E对克山病大鼠心肌胶原代谢及金属基质蛋白酶Ⅱ活力的影响

目的探讨低Se、低VE是否在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用,观察适时适量补充Se和VE,是否可减轻和逆转过度的心肌胶原蓄积。方法 Wistar大鼠30只,随机取6只大鼠做正常对照组,采用混合饲料喂养。其他大鼠均采用低Se、低VE半合成饲料喂养。81 d后,除正常对照组外,其余大鼠注射异丙基肾上腺素制备偏食大鼠心肌纤维化模型。制模成功大鼠分为4组,半合成饲料组(EG)继续采用半合成饲料喂养。其余各组膳食中施加干预如下:半合成饲料加Se组、半合成饲料加VE组、半合成饲料加硒加VE组。喂养21d后,乙醚麻醉,眼球采血,取大鼠心脏,观察大鼠氧化应激指标和心肌胶原代谢情况。结果偏食心肌纤维化模型组大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶活力下降,脂质过氧化物含量升高。心肌胶原蓄积,并伴有金属基质蛋白酶-2、金属基质蛋白酶抑制剂-2表达上调、两者比值降低。膳食中补充Se、联合补充Se和VE均可一定程度的缓解这些改变。结论低Se、低VE在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用,适时适量的补充Se和VE有利于减轻和逆转过度的心肌胶原蓄积。     

氢醌诱导L-02肝细胞凋亡的研究

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞凋亡(apoptosis)的影响和HQ毒性作用的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HQ(0,5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后L-02肝细胞的相对存活率;采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测HQ染毒后的细胞凋亡状况。结果HQ在0~80μmol/L的染毒剂量范围内,对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0.05),当HQ染毒剂量超过160μmol/L时,L-02肝细胞的存活率则明显地下降(P<0.01)。10,20,40,80,160和320μmol/L组L-02肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带,并且随着HQ染毒剂量增加而渐趋明显。流式细胞术检测显示,HQ各染毒剂量组(5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后均可引起L-02肝细胞的调亡,并呈现出一定的剂量—反应关系;此外,还可出现明显的亚二倍体峰。结论HQ在体外能够诱导L-02肝细胞发生凋亡。     

镉对大鼠肝细胞凋亡的影响

采用体内染毒方式 ,用末端标记法 (TUNEL)、DNA梯状电泳、流式细胞术研究了CdCl2 对大鼠肝细胞凋亡作用的影响。结果表明 ,5、10和 2 0 μmol kg的CdCl2 均可引起大鼠肝细胞TUNEL阳性细胞并产生大鼠肝细胞DNA电泳的梯状条带。用流式细胞术检测细胞凋亡率 ,该三种浓度的CdCl2 引起的大鼠肝细胞凋亡率均较对照组显著增高 ,P <0 0 1。结果提示CdCl2 对大鼠肝细胞凋亡具有一定的诱导作用。     

维生素E和硒缺乏促进大鼠食管肿瘤发生及氧化应激机制的研究

目的探讨维生素E(VE)和硒(Se)营养缺乏对食管肿瘤发生的影响及其氧化应激机制。方法 110只雄性F344大鼠随机分为3组:VE/Se缺乏组,VE/Se正常组和溶剂对照组。VE/Se缺乏组和VE/Se正常组动物皮下注射N-甲基苄基亚硝胺(NMBzA)染毒,染毒剂量为0.35 mg/kg BW,每周3次,连续5周。溶剂对照组动物皮下注射等体积的20%二甲基亚砜(DMSO)。VE/Se缺乏组给予低VE/Se饲料(VE 46U/kg,Se 0.05mg/kg),VE/Se正常组、溶剂对照组给予正常饲料(VE 80U/kg,Se 0.15mg/kg)。在实验第25周解剖动物,进行食管肿瘤肉眼观察及病理检查。动物血浆VE水平采用高效液相色谱法检测,Se水平采用荧光法检测。食管组织中细胞增殖和DNA氧化损伤分别采用5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)和8羟基脱氧鸟苷(8-OH-dG)免疫组织化学法检测。动物血浆、食管及肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽转移酶(GST)活性采用试剂盒法检测。结果动物血浆VE和Se水平VE/Se缺乏组显著低于VE/Se正常组,VE/Se正常组略低于溶剂对照组。VE/Se缺乏组动物食管肉眼可见肿瘤发生率、平均肿瘤数量及病理损伤数量均显著高于VE/Se正常组(P<0.05);与VE/Se正常组相比,VE/Se缺乏组动物食管组织细胞增殖水平、8-OH-dG水平显著升高(P<0.05);动物血浆、食管及肝脏GPX和GST活性显著降低(P<0.05)。结论维生素E和硒缺乏能够加快细胞增殖,显著促进NMBzA诱发的大鼠食管肿瘤的发生,机体氧化应激、DNA氧化损伤在食管癌变过程中具有重要作用。     

营养素防护同型半胱氨酸致ECV304细胞损伤和凋亡

目的: 探讨叶酸、维生素E(VE)和硒(Se)对同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导ECV304细胞损伤和凋亡的防护作用及其机制。方法: 采用倒置显微镜观察和MTT实验检测各种营养素对Hcy细胞损伤作用的防护,采用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪检测各种营养素对Hcy诱导细胞凋亡作用的防护。并通过测定细胞内脂质过氧化水平、细胞内抗氧化酶活力及对细胞内活性氧产生的改变研究其保护机制。结果: 叶酸、VE和Se都可防护Hcy的细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,并都可明显减少细胞内MDA含量。叶酸可以明显增加细胞内SOD活力,叶酸和Se可以明显增加细胞内GSH-Px活力。VE对Hcy诱导的细胞内活性氧产生具有明显抑制作用,而Se和叶酸抑制作用不明显。结论: 叶酸、VE和Se都可以防护Hcy导致的细胞增殖抑制,并可以抑制Hcy诱导的细胞凋亡,但其作用机制不同。     

光气致小鼠肺脏细胞DNA损伤和凋亡

目的研究光气致BALB/c小鼠肺水肿模型的肺脏的DNA损伤和凋亡。方法26只二级BALB/C小鼠,雄性,随机分为正常对照组和染毒组,各13只。正常对照组小鼠给予空气,染毒组小鼠给予11·9mg/L剂量的光气,时间均为5min,染毒后4h,比较2组小鼠肺脏的湿干比、病理学变化,单细胞凝胶电泳测定2组肺Ⅱ型细胞DNA损伤情况及对小鼠肺脏进行DNA琼脂糖凝胶电泳。结果11·9mg/L的光气染毒5min,小鼠肺脏湿干比(6·42±1·00)比正常对照组(4·25±0·47)显著增加(P<0·05);光镜下观察肺组织可见肺水肿发生;单细胞凝胶电泳法测定染毒组肺Ⅱ型细胞的尾长、尾部DNA、尾距均显著高于正常对照组(P<0·001);DNA琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯状样改变。结论光气染毒可造成小鼠肺水肿,引起肺Ⅱ型细胞发生DNA损伤和肺脏细胞凋亡。     

氟致人肝细胞DNA损伤与细胞凋亡关系的研究

目的 研究氟致人肝细胞DNA损伤与细胞凋亡之间的关系. 方法采用40、80、160μg/ml氟化钠对培养的人肝细胞进行染毒,12 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况. 结果各氟染毒组人肝细胞DNA损伤程度明显高于对照组,并且随着染氟剂量的增高而增大;中、高剂量氟组人肝细胞凋亡百分率均明显高于对照组.同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤程度和凋亡率的差异亦有统计学意义. 结论氟可导致人肝细胞DNA损伤,诱导细胞凋亡,一定浓度范围内的氟所导致的DNA损伤与细胞凋亡之间呈现明显的正相关关系.     

小蘗碱诱导人宫颈癌Hela细胞株凋亡的作用

目的:探讨中药黄连素对子宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以不同浓度的黄连素(10、20、40、80μmol/L),分12、24、48、72h四个时间点处理Hela细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用透射电子显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测凋亡发生情况。结果:黄连素可抑制Hela细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);黄连素可诱导Hela细胞凋亡,透射电子显微镜下可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带。结论:黄连素体外对Hela细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用。     

氟对人胚肝细胞DNA损伤及凋亡的影响

目的探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法采用40,80,160μg/ml氟化钠对培养的人胚肝细胞进行染毒,24 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况.结果氟组人胚肝细胞DNA损伤率明显高于对照组,Ridit值分别为0.582,0.815,0.892;中、高剂量氟组人胚肝细胞凋亡百分率(9.293±1.171),(11.727±1.196)均明显高于对照组(5.343±1.620).同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤率和凋亡率的差异也存在显著性差异(P＜0.05).结论氟化物具有引起人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡的作用,并呈现一定的剂量-效应关系.     

硒和维生素E对胰岛细胞保护作用的研究

目的　观察膳食硒 ( Se)、维生素 E( VE)水平对糖尿病中间性状——胰岛β细胞合成及分泌胰岛素功能的影响 ,探讨其对糖尿病 ( DM)易感性的作用。方法　用低 Se膳食造成大鼠低 Se模型 ,再应用链脲佐菌素 ( streptozotocin,STZ)诱导成 DM模型 ,结合放免技术观察胰岛功能的变化。结果　低 Se、低 VE大鼠对 DM易感性明显增强 ,表现为血清胰岛素水平明显降低 ,胰岛素分泌贮备显著减少 ,血清果糖胺水平明显升高。分别或联合补充 0 .2 mg Se及 50 0 mg VE/kg饲料可程度不同地提高血清胰岛素水平及其分泌贮备 ,降低血清果糖胺含量 ,其中联合补充 Se和VE的生物学效应最佳。结论　DM发作前 ,Se和 VE的联合生物学效应 ,可拮抗 DM致病因素引起的胰岛损害 ,具有重要的胰岛细胞保护作用     

硒在前列环素生物合成中作用机制的研究

目的　评价硒在前列环素生物合成中的作用机制。方法　用低硒饲料、补硒饲料和常规饲料饲养雄性大鼠 1 4周后 ,测定血液和某些组织中硒、前列环素 ( PGI2 )、血栓素 ( TXA2 )和脂质过氧化物 ( LPO)的含量 ,谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH- Px)活性及前列腺素内过氧化物合成酶( PGHS)的过氧化物酶活性 ,并采用 RNA折叠程序对 3个前列环素合成酶 ( PGIS)基因 3 非翻译区 ( UTR)的二级结构进行计算机预测 ,与已知的 39个真核生物硒蛋白基因的硒代半胱氨酸插入序列 ( SECIS)进行比较。结果　低硒大鼠血浆 PGI2 浓度、血和组织中硒含量及 GSH- Px活性显著下降 ,LPO水平升高 ,但三组之间血浆 TXA2 水平和组织中 PGHS-过氧化物酶活性均无显著差异 ,在 PGIS基因中未见到硒蛋白所特有的 SECIS。结论　PGIS可能不是硒酶 ,硒可能是通过 GSH-Px或其他硒蛋白抑制过氧化物的产生而影响 PGI2 的合成     

硒对大鼠胃癌的作用及对其内分泌细胞的影响

目的　探讨硒在机体自然抗肿瘤发生过程中的作用。方法　给断乳雄性 Wistar大鼠 MNNG(N甲基 - N -硝基 - N亚硝胍 2 0 mg/kg)灌胃 ,每天一次 ,连续 1 0 d,以诱导大鼠胃粘膜异倍体形成 (大鼠胃癌模型形成 )。第 2 5wk时 ,用流式细胞仪测定硒对大鼠胃幽门粘膜异倍体形成的影响 ,用免疫组织化学 ABC法观察大鼠胃粘膜异倍体形成过程中 ,其胃的胃泌素细胞 (G细胞 )、生长抑素细胞 (SS细胞 )、5-羟色胺细胞 (5- HT细胞 )的免疫组织化学变化 ,并对以上结果进行定性、定位、定量分析以及统计学处理。结果　 1 .硒能抑制 MNNG所致大鼠胃粘膜细胞异倍体的形成。 2 .实验对照组与正常对照组比较 ,大鼠胃粘膜胃泌素细胞的免疫组织化学反应明显增强 (P<0 .0 1 ) ,SS细胞、5- HT细胞也有增强的趋势 (P>0 .0 5)。 3.加硒各组与实验对照组比较 ,大鼠胃粘膜胃泌素细胞的免疫组织化学反应明显减弱 (P<0 .0 1 ) ,SS细胞、5- HT细胞也有减弱的趋势 (P>0 .0 5)。结论　内分泌细胞可能与 MNNG所致大鼠胃粘膜细胞异倍体的形成和发展有关 ;硒可能对大鼠胃内分泌细胞的功能有一定影响     

硒、锌对梭曼诱导大鼠过氧化损伤的保护机制研究

目的 :　研究梭曼 (Soman)对大鼠急性中毒的自由基损伤作用及硒、锌的抗氧化保护作用。方法 :　雄性大鼠 40只 ,按体重随机分为阴性组 (正常对照组 )、阳性组 (损伤对照组 )、硒组 (加硒保护组 )及锌组 (加锌保护组 )。测定指标有血清、大脑、肝脏的维生素 E(VE)、总抗氧化能力 (T- AOC)及一氧化氮合成酶 (NOS)。结果 :　梭曼中毒后 ,T- AOC水平、VE含量明显下降 ,NOS活性显著提高 ;硒、锌组较阳性对照组损伤指标变化幅度较小。结果 :　梭曼中毒有明显的自由基损伤 ,硒、锌对梭曼中毒有显著的抗氧化作用。     

茶多酚对阻塞性黄疸肝脏过氧化损伤的保护作用

目的　利用茶多酚的抗氧化性能对阻塞性黄疸大白兔进行治疗 ,以观察其对肝脏的保护作用方法　实验动物 2 7只 ,分三组 :模型组、茶多酚治疗组和正常对照组。实验期 2周。阻塞性黄疸 (阻黄 )系采用胆总管结扎形成。茶多酚经胃管给予 ,1 0 0 mg/(kg·d)。结果　胆总管结扎后机体内存在严重的氧化应激 ,表现为丙二醛 (MDA)明显增加 ,与实验前相比 P<0 .0 1。超氧化歧化酶 (SOD)活性和抗氧化维生素 (VE和 VC)均减少。肝脏存在着过氧化损伤 ,表现为肝功能的损伤和肝脏病理学的变化。茶多酚治疗组 MDA与实验前相比无显著性增加 (P>0 .0 5)。血清中SOD与 VE和 VC无显著变化 ,肝功能损伤和肝脏病理变化较小。结论　茶多酚可能对阻黄肝脏有保护作用     

松花粉对缺锌幼鼠营养作用的实验研究

目的　观察松花粉对缺锌幼鼠的营养作用。方法　选用雄性 SD大鼠 70只 ,体重( 4 2± 4) g,随机分为 7组。 1组为对照组 ,饲料含锌 32 .2 mg/kg;2组为锌严重缺乏组、饲料含锌 3.4mg/kg均自由进食。 3组饲料含锌 84.9mg/kg;4与 6组饲料中分别添加 2 %与 5%的松花粉 ,5组和 7组是 4组与 6组的对照组 ,采用与松花粉能量和蛋白质含量相同的交换饲料配制 ;5组饲料含锌与 4组相等 ( 4 .4mg/kg)、7组与 6组相等 ( 5.5mg/kg)。3～ 7组均同 2组对喂。结果　摄入基础饲料组和含等量锌的松花粉的饲料组间生长情况和生化、血液学指标均未见差异 ,其营养作用是等同的 ,松花粉添加组大鼠体重增加量均稍低于其对照组。在饲料能量、锌和蛋白质含量及其它营养素都一致的情况下 ,尽管松花粉添加量已达饲料的 2 %与 5% ,但对幼鼠仍未显示刺激生长作用。结论　松花粉具有较好的安全性 ,可用于儿童作补锌食物     

甲鱼脂肪酸和微量元素含量的分析及其抗氧化作用研究

目的　研究甲鱼脂肪酸和微量元素组成及含量特点 ,揭示其抗氧化作用效果。方法　用气相色谱法和原子吸收光谱法分别测定甲鱼脂肪酸和微量元素组成及含量 ,并按 0 .8%的剂量饲喂大鼠 ,测试大鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)和超氧化歧化酶 (SOD)、肝脏中SOD、肌肉中过氧化氢酶 (CAT)活性以及血清和肝脏中丙二醛 (MDA)含量。结果　甲鱼单不饱和脂肪酸 (MUFA)、Zn含量高 ,Mn、Fe及 Cu的含量也高 ,且使试验组大鼠血液中 GSH- Px和SOD,肝脏中 SOD和肌肉中 CAT活性增高 ,而血清和肝脏中 MDA含量下降。结论　饲喂甲鱼粉可提高大鼠体内抗氧化酶系的活性 ,并能降低体内脂质过氧化物含量 ,说明甲鱼粉具有较强的抗氧化作用效果。     

锌对仔鼠中枢神经系统胶质酸性纤维蛋白表达的影响

目的　探讨微量元素锌缺乏与胶质酸性纤维蛋白 ( GFAP)表达的关系及锌调节胶质细胞分化的机制。方法　给处于孕期及哺乳期的 ICR母鼠喂饲含不同锌水平饲料 ,采用 West-ern blot技术检测其仔代胚胎、大脑、小脑及肝组织中 GFAP的表达情况 ;同时在穿梭箱内检测成年仔鼠 ( 70日龄 )的学习能力 ;行为实验结束后 ,在仔鼠的海马脑片上进行诱导长时程增强 ( LTP)实验。结果　实验仔鼠小脑在新生期 (出生第 1天 ,P1 )开始表达 GFAP,而大脑在出生后第 5天( P5)才开始有 GFAP印迹出现 :之后至成年小脑及大脑持续表达 GFAP;实验鼠肝组织在发育全过程中均未见有 GFAP印迹。比较各实验组 GFAP表达量为 :P1至 P5期非缺锌组 ( 30 mg/kg及1 0 0 mg/kg) GFAP杂交条带明显强于缺锌组 ( 1 mg/kg及 5mg/kg) ;P1 0至成年期 ,缺锌组 ( 1 mg/kg及 5mg/kg)大脑及小脑 GFAP的杂交条带反而强于非缺锌组 ( 30 mg/kg及 1 0 0 mg/kg) ,其强度与膳食锌呈负依赖关系。行为学检测表明 ,轻度缺锌组 ( 5mg/kg)达到学会标准所需次数明显多于高锌组 ( 1 0 0 mg/kg) ;电生理检测表明 ,轻度缺锌组仔鼠海马脑片上诱导的 LTP明显低于高锌组上所诱导的。结论　补充锌在发育早期可促进神经前体细胞向神经胶质细胞分化及 GFAP表达 ;神经胶质细胞分化     

镁的不同摄入水平对生长期大鼠钙、磷、镁代谢及骨骼的影响

目的　研究饲料缺镁或高镁对生长期大鼠钙、磷、镁吸收代谢以及骨骼发育的影响。方法　 30只 SD大鼠 ,分为三组 ,每组 1 0只 ,单独喂养在有机玻璃代谢笼中 ,第一组大鼠饲喂缺镁饲料 (含镁 86mg/kg) ,第二组饲喂适量镁饲料 (含镁 548mg/kg) ,第三组为高镁饲料 (含镁540 2 mg/kg) ,三组饲料均为人工半合成制备 ,其中含钙 3.7g/kg,含磷 4g/kg。经过 2 5天对喂养方法及代谢笼的适应后 ,开始 5天期的代谢实验。每天记录大鼠的进食量 ,分别收集每个大鼠的粪、尿。代谢实验结束后 ,禁食 1 2 h,在乙醚麻醉下 ,心脏采血并处死大鼠 ,取股骨、胫骨测定重量、长度和体积后 ,与肾脏一起储存于 - 2 0℃ ,待测钙、镁和磷的含量。结果　缺镁和适量补镁对钙的表观吸收基本没有影响 (86% ) ,饲料中过量的镁使大鼠钙的表观吸收略有下降 (83% ) ,高镁使尿钙排出显著增加 ,降低了钙在体内的滞留 ;饲料高镁使磷的表观吸收显著下降。但尿磷排出减少 ,磷在体内滞留反而增加。随着饲料中镁含量的增加 ,粪和尿中镁的排泄均大幅度上升 ,可见镁的内环境稳定由肠道和肾脏共同调节。结论　低镁和高镁饲料均不利于生长期大鼠骨骼的生长发育。低镁饲料使大鼠肾钙、磷蓄积 ,可能是肾结石形成的主要原因。     

补钙对大鼠峰值骨量形成和预防骨质疏松的作用

目的 :　探讨补钙对峰值骨量的影响及对绝经后骨质疏松发生的预防作用。方法 :　选用雌性大鼠喂给不同钙含量的饲料至 1 0 mo龄 ,半数动物断头处死 ,取股骨进行相关检测 ,了解不同钙摄入量对骨峰值的影响。半数动物行卵巢切除术 ,喂饲 1 0 w后断头处死 ,取股骨进行有关检测 ,了解不同峰值骨量对骨质疏松的预防作用。结果 :　高钙摄入组峰值期大鼠股骨骨密度、骨重、骨长度、骨皮质厚度和股骨最大载荷、骨应变量等值均较低钙摄入组高 ;去卵巢后各组骨密度均降低 ,但高钙摄入量大鼠股骨骨密度比低钙摄入量大鼠的高。结论 :　钙摄入量的增加能有效提高峰值骨量 ,较高的峰值骨量能延缓骨质疏松的发生和降低骨折发生的危险性