细胞间粘附分子-1反义DNA体外对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的抑制作用

目的：研究细胞间粘附分子-1（ICAM-1）反义DNA对内皮细胞ICAM-1表达的抑制作用。方法：构建ICAM-1反义DNA载体,用脂质体转染内皮细胞,TNFα刺激后,流式细胞术检测转染细胞表面ICAM-1蛋白的表达。结果：酶切鉴定证明,1.4kb的ICAM-1DNA片段反向连接到pcDNA3表达载体;流式细胞术检测显示,正常细胞加TNFα刺激后,表面ICAM-1表达明显升高（P<0.01）,转染细胞加TNFα刺激后表面ICAM-1表达无明显升高(P>0.05),转染细胞表面ICAM-1表达低于正常细胞（P<0.05）。结论：ICAM-1反义DNA体外可抑制细胞ICAM-1表达。     

细胞因子对人肾小球系膜细胞表达细胞粘附分子的调控

研究白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）及肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα），对体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）和血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）的调节作用。方法用ｒｈＩＬ－１β（２５ｎｇ／ｍｌ）或ｒｈＴＮＦα（１００ｎｇ／ｍｌ）与系膜细胞共同孵育４、８、１６及３２小时，然后用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测该细胞ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ表达，并用细胞ＥＬＩＳＡ检测它们的蛋白质表达。结果未予任何刺激的对照组，系膜细胞仅低水平表达ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１ｍＲＮＡ和蛋白质。ｒｈＩＬ－１β或ｒｈＴＮＦα刺激后，系膜细胞上这两种细胞粘附分子ｍＲＮＡ的表达，均迅速上调（仅ＴＮＦα刺激ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达高峰在８小时，其余均在４小时），蛋白质表达也显著增加（Ｐ＜０．００１））。结论细胞因子ＩＬ－１β及ＴＮＦα可能通过刺激肾小球系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ－１而参与肾小球肾炎发病。     

体外循环前后血中可溶性细胞间粘附分子—1,肿瘤坏死因 …

目的 观察先天性心脏病患者体外循环下心脏直视手术前后血中可溶性细胞间粘附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）、肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）及尿微量白蛋白（Ｕ－Ｍａｌ）的变化，探讨体外循环对血管内皮细胞损伤或激活及血管通透性的影响。方法 于诱导麻醉期间、体外循环结果、停机２、４ｈ、术后第１天清晨取血及尿标本，分别用酶联免疫吸附法测定ｓＩＣＡＭ－１和放射免疫法测定ＴＮＦ－α及Ｕ－Ｍａｌ的浓度。结果 体外循环结     

细胞因子和泌乳素对体外培养的人球后成纤维细胞表面ICAM—1表 …

目的;通过研究细胞因子和泌乳素对球后成纤维细胞表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响,进一步了解甲状腺相关眼病的发病机理,以探索新的防治途径。方法：将体外培养的正常人ＲＦｓ与ＩＦＮ－γ,ＩＬ－４,ＩＦＮ－α和ＰＲＬ孵育７２ｈ,利用直接免疫荧光技术和流式细胞仪检测其表面ＩＣＡＭ－１表达的情况。     

细胞间粘附分子-1在创伤性急性肺损伤中的作用

目的：探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在急性肺损伤（ＡＬＩ）中的作用。方法：运用兔胸部撞击法自制创伤性急性肺损伤模型,动态检测血浆中可溶性ＩＣＡＭ－１浓度变化,观察抗ＩＣＡＭ－１抗体对创伤后兔肺顺应性、呼吸指数及氧合指数的影响及病理变化。结果：在兔胸部撞击后１ｈ肺顺应性即显著降低,４ｈ后血浆中ＩＣＡＭ－１上升到（３９００±１４）μｇ·Ｌ１,并在２４ｈ内维持在较高水平。抗ＩＣＡＭ－１抗体能显著降低血浆中ＩＣＡＭ－１含量,改善肺顺应性,降低呼吸指数,提高氧合指数,减少肺泡内炎症细胞渗出,从而改善肺功能。结论：急性肺损伤时ＩＣＡＭ－１表达增加,抑制或阻断ＩＣＡＭ－１表达有助于减轻急性肺损伤。     

3种干扰因子对人肺癌细胞株A549体外增殖,侵袭力入ICAM— …

目的：研究全反维甲酸（ＡＴＲＡ）等干扰因子对肺癌细胞株Ａ５４９侵袭、无殖及ＩＣＡＭ－１分子表达的调节作用。方法：根据细胞穿过铺有Ｍａｔｒｉｇｅｌ胶多孔膜数量检测细胞侵袭力,用改良龙胆紫吸收比色计数法检测细胞增殖,以流式细胞分析和酶联免疫吸附试验检测ＩＣＡＭ－１、ｓＩＣＡＭ－１表达水平。结果：Ａ５４９经ＡＴＲＡ处理生,细胞表面ＩＣＡＭ－１表达降低,体外侵袭力明显降低,体外增殖明显抑制;ＩＦＮα不增加     

α—双炔失碳酯诱导阿霉素抗药的MCF—7乳癌细胞凋亡

目的 研究α－双炔失碳酯（α－ａｎｏｒｄｒｉｎ,ＡＮＯ）对阿霉素抗药的ＭＣＦ－７乳癌细胞（ＭＣＦ－７＾ａｄｒ细胞）的凋亡诱导作用。方法 采用形态学、ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法。结果：ＡＮＯ１０～５０μｍｏｌ／Ｌ作用４８ｈ明显抑制７＾ａｄｒ细胞的生长,诱导ＭＣＦ－７＾ａｄｒ细胞核碎裂,染色质凝缩,电泳显示核小体之间ＤＮＡ裂断。流式细胞术检测发现经ＡＮＯ作用后约有２６％的细胞出现在“亚Ｇ１     

Fas基因在卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的：检测Ｆａｓ基因表达并观察转染Ｆａｓ基因对卵巢癌细胞凋亡的影响,探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用。方法：经流式细胞术、ＲＴ－ＰＣＲ方法检测６种卵巢癌细胞Ｆａｓ的表达水平。构建ｐｃＤＮＡ３－Ｆａｓ真核表达载体。经脂质体转染细胞,通过流式细胞仪检测Ｆａｓ基因表达变化。应用ＰＩ染色经流式细胞术检测观察转染Ｆａｓ基因对３ＡＯ细胞凋亡的影响。结果：６种卵巢癌细胞均表达Ｆａｓ均属中低表达,经ｐｃＤＮＡ３－     

细胞间粘附分子—1在局部缺血再灌注脑损伤中作用的研究

目的 探讨局部脑缺血再灌注后脑微血管内皮细胞表面表达的ＩＣＡＭ－１参与的缺血性炎症反应。方法 用免疫组织化学的方法观察参大鼠左侧大脑中动脉栓堵２小时再灌注０、３、１２、２４、７２、１２０小时脑微血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１的表达。结果 大鼠左侧大脑中动脉栓堵２小时未见Ｉ－ＣＡＭ－１的表达,栓堵２小时再灌注３小时病变侧脑组织微血管内皮细胞开始出现ＩＣＡＭ－１的表达,１２￣２４小时达高峰,并持续至７２小时     

细胞因子和泌乳素对体外培养的人球后成纤维细胞表面ICAM-1表达的影响

目的：通过研究细胞因子和泌乳素（ＰＲＬ）对球后成纤维细胞（ＲＦｓ）表面细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）表达的影响,进一步了解甲状腺相关眼病（ＴＡＯ）的发病机理,以探索新的防治途径。方法：将体外培养的正常人ＲＦｓ与ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α和ＰＲＬ孵育７２ｈ,利用直接免疫荧光技术和流式细胞仪检测其表面ＩＣＡＭ－１表达的情况。结果：正常人ＲＦｓ中只有极少数细胞自发并较弱地表达ＩＣＡＭ－１,基础状态下的阳性百分数为（３．４９±１．９９）,平均荧光强度为（４４．８４±２０．５９）;而ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－α能以剂量依赖方式显著增强ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）。ＰＲＬ不仅可以直接刺激ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达（Ｐ＜０．０５）,其剂量相关曲线呈双相型,还能拮抗或协同ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）、ＩＦＮ－α（１０００ｕ／ｍｌ）或ＩＬ－４（２．５ｎｇ／ｍｌ）的诱导作用。结论：ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＦ－α和ＰＲＬ对正常人ＲＦｓ表面ＩＣＡＭ－１的表达有明显的调节作用,它们可能是启动或加重ＴＡＯ自身免疫反应的重要因素。     

Treatment of hemangioma by transfection of antisense VEGF gene

The effect of transfection of antisense vascular endothelial growth factor （VEGF） gene on the growth of hemangioma was studied. A total of 49 cases of capillary hemangiomas of the skin were collected. Immunohistochemical method was used to detect the expression of PCNA in hemangioma tissues. According to the finding, 49 cases of hemangiomas fell into proliferating phase （27 cases） and involuting phase （22 cases） respectively. Another 5 cases of normal skin tissues adjacent to the tumor tissues served as control. Immunohistochemical staining was performed to detect the expression of VEGF in the tumor tissues and the normal tissues. The average absorbance （A） values and the average positive area rate of VEGF were measured by image analysis system （HPIAS-2000）. Endothelial cells from the tumor tissues in proliferating phase were cultured. Eukaryotic expression vector was constructed by sub-cloning, and transfected into human hemangioma endothelial cells by using cation liposome as vector. The expression of VEGF mRNA and protein was detected by RT-PCR and indirect immunofluorescence assay （IFA）, respectively, and the biological characteristics of the transfected endothelial cells were examined by MTT assay and flow cytometry （FCM） after transfection. Immunohistochemical results showed that the expression of VEGF in proliferating endothelial cells was remarkably higher than those in involuting endothelial cells and normal endothelial cells （P〈0.01）, but there was no significant difference in the expression of VEGF between involuting endothelial cells and normal ones （P〉0.01）. Electrophoresis and sequencing indicated that the eukaryotic expression vector containing antisense VEGF gene, i.e. pcDNA3.1-VEGF, was success- fully constructed. After VEGF antisense RNA recombinant was transfected into hemangioma endothelial cells, RT-PCR revealed that the expression of VEGF mRNA in pcDNA-VEGF （V） group and blank group was obviously higher than that in pcDNA-VEGF （A） group, and that the expression of endogenous VEGF mRNA in pcDNA-VEGF （A） group was significantly inhibited. Immunohistochemical result demonstrated that, compared with blank group, there was statistically significant difference between pcDNA-VEGF （A） and pcDNA-VEGF （V） groups （P〈0.01）, but there was no significant difference between pcDNA-VEGF （V） group and blank group （P〉0.05）. The activity of endothelial cell proliferation was reduced significantly after transfection, and obvious apoptosis occurred in hemangioma endothelial cells after transfection of antisense VEGF. It was suggested that VEGF plays an important role in the pathological change of hemangiomas by promoting endothelial cell proliferation and angiogenesis. Antisense VEGF gene transfection could effectively inhibit the growth of hemanioma endothelial cells.     

人气道上皮细胞内皮素转换酶-1反义RNA构建

目的　研究内皮素转换酶 -1(ECE -1)反义RNA对人气道上皮细胞ECE -1表达的抑制作用。方法　构建ECE -1反义RNA表达载体 ,用脂质体 (FuGENG 6)转染人气道上皮细胞株 (16HBE) ,G418筛选得到稳定表达反义ECE -1RNA的细胞株 (anti -16HBE)。RT -PCR检测转染细胞ECE -1mRNA的表达 ,Westernbloting检测细胞ECE蛋白表达情况。结果　①经酶切及DNA测序鉴定证明 ,0 7kb的ECE -1DNA片段反向连接到带有萤光蛋白基因为报告基因的pEGPC1表达载体 ;荧光倒置显微镜显示大量细胞分泌荧光蛋白并能反复传代稳定表达 ;②anti -16HBE细胞ECEmRNA基因表达 (ECE/actinβ 0 0 12 5± 0 0 5 8)比 16HBE细胞 (ECE/actinβ 0 13 4 7± 0 0 67)明显低 (P <0 0 5 ) ;而Westerbloting亦显示anti -16HBE细胞ECE表达量比 16HBE细胞明显低。结论　ECE反义RNA表达载体可抑制人气道上皮细胞ECE -1表达与分泌     

ICAM-1在气腹后大鼠肝组织中的表达

目的 :探讨二氧化碳 (CO2 )气腹后大鼠肝组织中细胞间粘附分子 1(ICAM 1)的表达与气腹肝损伤的关系。方法 :将雄性Wistar大鼠随机分为 3组 :A组 (非手术组 ) ;B组 (假气腹组 ) ;C组 (气腹压 12mmHg ,气腹时间 2h)。分别观察各组术后 12h肝组织和 或血清中ICAM 1、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶(AST)含量的变化。结果 :C组ICAM 1、TNF α、ALT及AST较A、B组明显升高 (P <0 .0 1) ,且ICAM 1与TNF α、ALT和AST呈正相关 (r=0 .72 4 9,0 .8783,0 .74 4 2 ) (P <0 .0 5 )。结论 :气腹后肝组织ICAM 1表达增高与气腹对肝功能的损害有关     

ICAM—1在缺氧—再氧化引起的白细胞与内皮细胞粘附中的作用

目的探讨细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ－１）是否介导缺氧－再氧化引起的中性粒细胞（ＰＭＮ）和血管内皮细胞（ＶＥＣ）的粘附反应。方法血管内皮细胞（ＶＥＣ）经缺氧再氧化（Ｈ／Ｒ）处理后,加入ＰＭＮ,用计数法检测粘附率,以细胞免疫化学及原位杂交法检测ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结果ＶＥＣ经Ｈ／Ｒ处理后,ＰＭＮ与其粘附率增高１倍（Ｐ＜０．０１）,ＩＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）与ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８ｍＡｂ可明显降低粘附率的增高,Ｈ／Ｒ能增加ＶＥＣ的ＩＣＡＭ－１及ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达。结论ＩＣＡＭ－１介导Ｈ／Ｒ后的ＰＭＮ－ＶＥＣ间粘附反应。     

pcDU6质粒载体介导的TGFβ1 shRNA抑制TGFβ1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的：研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）对人腹膜间皮细胞（HPMCs）转化生长因子β1（TGFβ1）表达的影响。方法：针对TGFβ1的以GGCC开始的21碱基大小的片段，分别设计2对寡核苷酸，形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体（命名为pcDU6），2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由6碱基序列间隔的反向互补序列，构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞，建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1 shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1(-)的载体质粒入4.25%D-葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果：HPMC在4.25%D-葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达（P<0.01）。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1 shRNA干扰组较pcDU6空载体组明显下调TGFβ1的表达（P<0.01）。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1 shRNA干扰组间比较，差异无显著性（P>0.05）；pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组与pcDU6空载体组比较，差异无显著性（P>0.05）。 pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1 shRNA干扰组较pcDNA3.1(-)的载体质粒介导的反义RNA组明显下调TGFβ1的表达（P<0.01）。结论： pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1 shRNA能够明显抑制在高糖（4.25%D-葡萄糖）和细菌脂多糖（LPS）的刺激下的HPMC转化生长因子β1的基因表达，为临床防治长期腹膜透析病人的腹膜纤维化提供全新、高效的方法。     

黄芪对梗阻性黄疸幼鼠肝细胞TNF-α及ICAM-1表达的影响及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子（TNF‐α）、细胞间黏附分子‐1（ICAM‐1）在梗阻性黄疸（OJ）肝细胞损伤中的作用,以及黄芪对OJ幼鼠肝细胞TNF‐α及ICAM‐1表达的影响及临床意义。方法将90只Wistar大鼠随机分为正常对照组、OJ组、OJ＋黄芪（A）三组,OJ＋A组给予黄芪注射液250 mg／100 g体质量腹腔注射,作用7 d后应用放射免疫法检测各组血清TNF‐α含量,免疫组织化学法检测肝细胞 TNF‐α、ICAM‐1的表达。结果①血清检测：ALT在OJ及OJ＋ A明显高于对照组,在OJ组明显高于OJ＋A组;DBIL在OJ组与OJ＋A无显著差别。②OJ组及OJ＋A组血清TNF‐α含量明显高于正常对照组;OJ组实验鼠血清TNF‐α高于OJ＋黄芪组;③TNF‐α及ICAM‐1在肝细胞的表达：OJ组及OJ＋A组的表达较正常对照组明显增强,OJ组表达强于OJ＋A组。结论本研究结果表明OJ大鼠出现肝功能损害,肝细胞TNF‐α、ICAM‐1表达增强;应用黄芪有助于减轻OJ所致的肝功能损害,对肝细胞有保护作用,其机制可能与降低肝细胞内TNF‐α、ICAM‐1表达有关。     

体外循环时心肌细胞上ICAM-1的变化及抑肽酶对其表达的影响

为观察心脏瓣膜置换术病人在CPB前后心肌上ICAM-1的表达,并探讨抑肽酶对其表达的影响,选择择期心脏瓣膜替换术病人20例,随机分为抑肽酶组和对照组,各10例。分别于手术开始及结束时取右心房心肌标本,采用免疫组化法检测心肌细胞及心肌血管内皮细胞上ICAM-1的表达,以测得ICAM-1积分光密度值（IOD值）进行分析。结果心脏瓣膜替换术病人CPB后心肌细胞上ICAM-1的表达较术前有明显增加（P<0.05）,而在抑肽酶组则无明显变化。组间比较,差异具有显著意义,P<0.05。在对照组,心肌血管EC上ICAM-1在CPB后表达明显增加（P<0.05）,而抑肽酶组,差异无显著性。组间比较,P<0.05。认为CPB时心肌细胞及心肌血管EC上ICAM-1的表达增高,ICAM-1可能参与CPB时心肌的炎症损伤,抑肽酶可以通过抑制ICAM-1的表达而减轻CPB所致的炎症反应。     

血管内皮生长因子165反义RNA治疗人脑胶质瘤的实验研究

目的 探讨应用血管内皮生长因子１６５（ＶＥＧＦ１６５）反义ＲＮＡ治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建和鉴定反义ＶＥＧＦ１６５真核表达载体;将其转染入人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ４４,检测其转染前、后的生物学性状;比较转染前、后ＳＨＧ４４细胞的裸鼠皮下致瘤性;分别应用免疫印迹、免疫组织化学、微血管计数、电镜和流式细胞仪检测上述改变。结果 成功构建反义ＶＥＧＦ１６５真核表达载体并在ＳＨＧ４４细胞获得表达,该细胞