HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的比较

目的 由于检测SIV p27抗原试剂盒来源困难,有时不稳定,鉴于HIV-1 p24与SIVp27有较强的交叉抗原,本研究比较HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原得出的结果是否存在一定的相关性.方法 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒定性和定量检测样品中SIV p27抗原,并对检测结果进行回归和相关分析.结果 HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150 pg/mL和62.5 pg/mL.两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致.定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P＜0.01,直线正相关程度较高;血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P＜0.05,直线正相关程度较低.结论 HIV-1 p24 ELISA试剂盒能够替代SIV p27 ELISA试剂盒定性检测病毒液和血浆中SIV p27抗原,但只能定量检测病毒液中SIV p27抗原.     

抗人半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白2(Cysteine and glycine-rich protein 2,CRP2)的单克隆抗体,探讨CRP2蛋白的生物学功能。方法利用重组CRP2蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,通过间接ELISA筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CRP2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western-blot和免疫共沉淀实验等方法对其特性进行鉴定。结果成功地建立了2株稳定分泌抗CRP2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为F001和F002。两株单克隆抗体与重组抗原有较强的特异性反应。同时,两株单克隆抗体通过Western-Blot实验都能特异性地结合真核细胞内源性的CRP2蛋白,并且,两株抗体都可以应用于免疫共沉淀实验。结论获得了效价高、特异性好的CRP2蛋白的单克隆抗体,为CRP2的生物学功能研究奠定了基础。     

EB病毒GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备EB病毒GST—Rta150融合蛋白的单克隆抗体并鉴定其特性．方法取经GST-Rta150融合蛋白免疫小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,接种杂交瘤细胞至小鼠腹腔,收集腹水并纯化。制备的单克隆抗体以琼脂双向扩散法鉴定抗体类及亚类．间接ELISA法测定抗体的效价,Western-blot检测抗体的特异性。结果获得一株稳定分泌抗GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A9,细胞培养上清效价为10^-3,腹水效价为10^-5,纯化的抗体效价为10^-6．经鉴定GST-Rta150融合蛋白单克隆抗体的亚类为IgGl。Western-blot结果显示此单克隆抗体能特异结合GST-Rta150融合蛋白．将杂交瘤细胞株在液氮中冻存3个月后复苏,其分泌的单克隆抗体效价不变。结论通过上述方法制备出来的单克隆抗体特异性强,稳定性好,为研究EB病毒立即早期基因产物Rta蛋白以及EB病毒相关疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.     

抗HLA-B27单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

目的：制备HLA－B27单克隆抗体。方法：用HLA－B27抗原免疫小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，用ELISA法筛选分泌该单抗的细胞株。结果：建立了分泌该单抗的细胞系3B3和4F2，抗体均为IgG2b,3B3细胞分泌的单抗只与B27反应，而4F2细胞分泌的单抗与B7有交叉反应。结论：建立了高特异性分泌抗B27单抗的细胞株，具有潜在的应用价值。     

肿瘤坏死因子单克隆抗体的制备和鉴定

制备、纯化肿瘤坏死因子(TNF)并用纯化TNF免疫BALB/C小鼠,采用细胞融合技术,建立TNF单克隆抗体(TNF-McAb)的方法。该方法具有免疫程序简单,免疫时间短,TNF用量少的特点。     

抗HSPC238单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的 制备抗HSPC238的单克隆抗体,为HSPC238的功能研究奠定基础.方法 以纯化的重组蛋白HSPC238为抗原,免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备HSPC238单克隆抗体,并用问接ELISA法和Westem-blot法对单克隆抗体的特性进行鉴定.结果 成功建立两株稳定分泌抗HSPC238的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为E001和E002.ELISA检测抗HSPC238单克隆抗体的腹水效价为1:12800和1:25600.两株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为Ig异G1.通过Western-blot实验证实,两株单克隆抗体均能特异性结合真核细胞内源性HSPC238蛋白.结论 成功制备了两株效价高、特异性好的抗HSPC238单克隆抗体,制备的抗HSPC238单克隆抗体可用于HSPC238蛋白的鉴定,为HSPC238蛋白的生物学功能研究奠定了基础.     

日本第53届实验动物学会年会介绍

[目的]建立SIVp27杂交瘤细胞株,并对其分泌的SIVp27单克隆抗体进行初步鉴定。[方法]使用基因重组的SIVp27蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术使用半固体培养基法建立杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。通过染色体核型对杂交瘤细胞株进行鉴定;采用Westernblot、免疫荧光法、酶联免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性、相对亲和力、抗原识别表位、免疫球蛋白的类型和亚类,对单克隆抗体进行鉴定。[结果]获得四株可稳定分泌SIVp27单克隆抗体的杂交瘤细胞,1C3、2B6为IgG1类,2E12为IgG2b类,3G3为IgG2a类。四株单抗均能识别SIV的p27蛋白,与逆转录病毒SRV、STLV无交叉反应,2B6、2E12与HIVp24有交叉反应。免疫荧光法检测腹水效价为1:10240~40960。1C3、2B6、2E12、3G3染色体平均数分别为103、97、96、101。2E12与3G3识别不同的抗原表位。[结论]成功地制备出四株SIVp27单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立免疫分析方法,进行SIV/SAIDS及其艾滋病相关研究,奠定了基础。     

抗人粒细胞单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人粒细胞单克隆抗体(McAb),并对其组织特异性及相关特性进行鉴定.方法采用分离的人全白细胞免疫Balb/c小鼠,按常规融合方法并经ELISA筛选后进行McAb特性研究.结果成功制备1株抗人粒细胞McAb,命名为SZ-102.ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.琼脂糖双扩散鉴定均为IgG1类.流式细胞仪及SP免疫组化法测定表明SZ-102McAb与外周血液中的粒细胞、单核细胞呈强阳性反应,与淋巴细胞、红细胞、血小板不反应;SZ-102抗原在正常人肝、肺、胸腺、脾、淋巴结组织中也表达.免疫沉淀测定抗原分子量为20kD左右的蛋白多肽.结论抗人粒细胞McAb的研制将有助于临床肿瘤感染病灶和隐匿性炎症的放免显像诊断研究.     

抗猪鼻支原体单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备抗猪鼻支原体(M．hyorhinis,M.hy)的单抗隆抗体(monoclonal antibody,McAb)，为相关研究提供工具。方法：用灭活的猪鼻支原体免疫BALB／c小鼠，运用传统的细胞融合技术制备抗猪鼻支原体单克隆抗体。单抗鉴定采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法。结果：经ELISA筛选获得了一株抗猪鼻支原体的单克隆抗体，该抗体亚类为IgG2b。ELISA结果表明该单抗仅与猪鼻支原体反应而与肺炎支原体和发酵支原体不反应。用经PCR检测支原体阳性的胃癌切片做免疫组化，结果显示，该抗体能与PCR阳性的胃癌组织切片产生特异性反应。结论：获得一株抗猪鼻支原体特异性单克隆抗体，可为相关研究提供工具。     

抗血管性血友病因子单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的　研制抗人血管性血友病因子 (vWF)单克隆抗体 (McAb) ,鉴定其各种生物学特性。方法　Ⅷ因子浓缩物经Sepharose 4B凝胶柱提纯出vWF蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选 ,制备稳定分泌抗vWFMcAb的细胞株 ,并对McAb的亚型、免疫活性及组织特异性等进行鉴定 ,运用放射免疫方法等与单抗SZ - 2 9,SZ - 34进行比较。结果　分离纯化出vWF ,vWF抗原含量为 12 0IU/mg ,并成功制备了一株抗人血管性血友病因子McAb ,暂命名为 4E10。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类 ,ELISA法测定其腹水效价为 5× 10 -5。放射免疫分析证实McAb4E10能特异的与血浆中vWF蛋白结合 ,应用间接免疫荧光法显示出与人脐静脉内皮细胞内vWF所特有的颗粒型荧光反应。流式细胞仪及免疫组化法测定表明McAb4E10与人脐静脉内皮细胞反应呈阳性 ,与外周血红细胞、白细胞、未活化的血小板不反应 ,而与其他组织细胞没有反应。放射免疫测定证实McAb4E10与SZ - 2 9,SZ - 34识别vWF蛋白上不同的结构。还原条件下Westernblot法证实McAb4E10和SZ -2 9都能识别相对分子量为 2 2 5kD和 180kD左右的单链蛋白多肽。结论　制备出了抗人血管性血友病因子单克隆抗体 4E10 (McAb4E10 ) ,它能特异识别血浆及内皮细胞的vWF ,将对相关血管性疾病的     

猴免疫缺陷病毒衣壳蛋白p27在大肠杆菌中的表达及纯化

目的获得用于SIV检测的衣壳蛋白p27重组抗原。方法利用生物信息学软件选择衣壳蛋白p27抗原表位集中的区域,合成SIV p27基因;将该基因与pMAL-p5x载体连接构建pMAL-p5x-p27重组质粒,并转化大肠杆菌BL21中,诱导表达;用Amylose Resin亲和层析柱对表达产物进行纯化。结果 SDS-PAGE分析显示,pMAL-p5x-p27重组质粒可在大肠杆菌中高效表达,表达产物分子量约为70×103;经纯化获得目的蛋白p27纯度可达90%。结论本研究利用原核表达系统成功表达了SIV p27蛋白,为SIV检测方法的建立奠定了基础。     

人原发性胆囊癌单克隆抗体制备及其特异性研究

目的 制备人原发性胆囊癌单克隆抗体,对其特异性进行研究.方法 以胆囊癌细胞系SGC-996免疫Balb/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得稳定分泌抗SGC-996单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞.结果 杂交瘤细胞符合融合细胞核型特点,有较强的成瘤性.抗体亚类为IgG1.相对应的抗原主要表达在胞质和胞核中,分子量约为67kD抗体对胆囊癌有较强的免疫反应,其他癌组织、癌旁组织及间质、正常胆囊上皮和成纤维细胞均呈阴性.结论 建立一株杂交瘤细胞系,能稳定分泌单克隆抗体,该抗体具有较高特异性.     

抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的：培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株，生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法：用含有弗氏不完全佐剂和1单位IFN的猪囊虫下液皮下注射免疫7周龄小鼠3次后，无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP^2/O，在含有50％PEG（分子量4000）的HAT培养液中进行融合，在37℃，含7％CO2的培养箱中培养，随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法，单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果：用常规的有限稀释法对杂交瘤进行3次筛选和克隆化后获得3株杂交瘤细胞株2H10、5C2和5H6，分别有97、98、和106条染色体，均能稳定地分泌各自特异的单抗。2株单抗为IgG类，另1株为IgM类，滴度分别为1：1000、1：800和1：1600。结论：用杂交瘤技术，我们获得了3株杂交瘤细胞株，均能稳定地分泌高滴度的针对猪囊虫抗原的特异单抗。     

抗GSTAl单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用Western blot方法鉴定抗血清的特异性。结果:筛选到l株可稳定分泌抗人GSTAlmAb的细胞株。腹水效价为12 800。Western blot显示在相对分子量(Mr)约25KD处出现特异性条带。说明制备的mAb可特异地识别成人肝细胞中相对分子量(Mr)约25KD的GST-GSTA1。结论:获得一株能特异性识别抗人GSTAI的单克隆抗体,可用于肝损伤性疾病的诊断。