雷帕霉素对肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 分析不同浓度的雷帕霉素体外处理人肺癌SPC-A-1细胞后，对细胞的增殖及凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 采用CCK-8法测定雷帕霉素(5 ng/mL,10 ng/mL,15 ng/mL)处理人肺癌SPC-A-1细胞48 h后对细胞增殖的影响。运用FITC-Annexin V/PI双染色法，测定雷帕霉素处理SPC-A-1细胞48 h后对细胞凋亡的影响。使用Western Blot技术测定雷帕霉素作用SPC-A-1细胞48h后的p53、Bcl-2和Bax等凋亡蛋白表达情况。结果 雷帕霉素可以抑制SPC-A-1细胞增殖并可诱导其发生凋亡，其增殖抑制率与凋亡率变化存在剂量依赖性关系(P<0.05)。与对照组(雷帕霉素，0 ng/mL)比较，各浓度(5 ng/mL,10ng/mL,15 ng/mL)雷帕霉素处理对SPC-A-1细胞的凋亡率上升(P<0.05),且p53与Bax蛋白水平增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05)。15 ng/mL雷帕霉素处理组细胞p53、Bax蛋白表达水平均与细胞凋亡率呈正相关(r=0.906,P<0...     

27nt-miRNA通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究

目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27ntmiRNA)组、阴性对照组。27nt-miRNA组:转染27nt-miRNA正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA组:转染27ntmiRNA反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组细胞给予100 ng/ml雷帕霉素诱导培养2 h诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况;CCK-8法、流式细胞术、qRT-PCR法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。结果:慢病毒转染VSMC后,27nt-miRNA稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC的mTOR mRNA与p-mTOR蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P均<0.05),细胞周期G1期向S期分裂进程阻滞减弱(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白表达量显著减少,Bcl-2蛋白表达量显著增加(P均<0.05);mTOR基因转录水平与p-mTOR蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:27nt-miRNA通过负调控m TOR基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC凋亡,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

剪切修复基因D通过下调mTOR/LOX-1抑制ox-LDL诱导的人脐静脉平滑肌细胞增殖

[目的]探讨剪切修复基因D(XPD)在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)促血管平滑肌细胞增殖中的作用及分子机制。[方法]将重组质粒pEGFP-N2/XPD利用脂质体转染人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC),沉默哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因,用MTT、EdU法测定各组细胞的增殖;流式细胞仪检测各组凋亡率;利用Western blot检测XPD、血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、mTOR、p-mTOR、Bcl-2及Bax的表达。[结果]与对照组比较,ox-LDL组XPD表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2蛋白、Bcl-2/Bax、mTOR磷酸化活性及LOX-1蛋白表达升高(P<0.05);MTT、BdU结果显示,ox-LDL组细胞增殖较对照组上调(P<0.05)。转染pEGFP-N2/XPD重组质粒能上调Bax蛋白表达(P<0.05)并抑制Bcl-2蛋白、mTOR磷酸化活性及LOX-1蛋白表达(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下调(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,转染pEG...     

糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用

目的观察糖尿病大鼠主动脉自噬水平的变化及雷帕霉素的干预作用,探讨雷帕霉素是否通过调节自噬、内质网应激和细胞凋亡对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。方法雄性SD大鼠用随机数字表法分为正常对照组、糖尿病组和雷帕霉素干预组。采用链脲佐菌素制备1型糖尿病大鼠模型。雷帕霉素干预组给予雷帕霉素2mg/(kg·d)灌胃。于实验第8周留取血标本,用于血生物化学指标和脂联素水平检测,然后处死动物并迅速取出胸主动脉和腹主动脉,测定主动脉Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血清脂联素水平显著降低(P0.05),主动脉壁增厚,内皮严重受损,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P 0. 05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与糖尿病组比较,雷帕霉素干预组大鼠血清脂联素水平显著升高(P0.05),主动脉组织病理改变显著减轻,主动脉Beclin1、LC3的mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05),主动脉p62、CHOP、Caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达水平及Bax mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论糖尿病大鼠主动脉组织自噬水平降低,雷帕霉素可能通过激活自噬和减轻内质网应激和细胞凋亡水平对糖尿病大鼠主动脉产生保护作用。     

雷帕霉素对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

将不同浓度雷帕霉素作用于肺腺癌A549细胞。用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果雷帕霉素对肺腺癌细胞有显著的抑制作用,呈剂量-效应和时间-效应关系;流式细胞仪检测示雷帕霉素可将肺腺癌细胞阻滞于G1期,S期合成减少;同时细胞凋亡率随着雷帕霉素浓度增加而增加。认为雷帕霉素能有效地抑制肺腺癌细胞A549增殖,阻滞细胞周期并诱导其发生凋亡。     

PKC对雷帕霉素抑制内皮生长晕细胞作用的影响及机制

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)在雷帕霉素干预内皮生长晕细胞(EOCs)后所引起的EOCs功能抑制中的作用.方法 采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,培养并扩增EOCs,采用免疫细胞法、荧光染色法鉴定EOCs特性.将培养的EOCs分别给予10 μmol/L的雷帕霉素(雷帕霉素组)、1μmol/L的PKC抑制剂Go6976预处理30 rmin后再加10 μmoL/L的雷帕霉素(Go6976+雷帕霉素组)、1μmoL/L的Go6976(Go6976组)组及配制雷帕霉素的溶剂(对照组),作用24 h后CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,倒置显微镜下检测细胞的黏附能力.结果 雷帕霉素组EOCs的增殖、迁移、黏附能力均低于对照组(P均＜0.01).Go6976+雷帕霉素组EOCs的增殖、迁移、黏附能力均高于雷帕霉素组(P均＜0.01).结论 雷帕霉素能够抑制EOCs的增殖、迁移、黏附能力.Go6976可以改善雷帕霉素对EOCs增殖、迁移、黏附的抑制作用.PKC可能参与了雷帕霉素对EOCs功能的抑制作用.     

葛根素对雷帕霉素造成人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨葛根素对雷帕霉素造成人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响及其可能机制。方法:培养HUVEC并分组:对照组,葛根素组,雷帕霉素组,葛根素干预组。各组培养48h后,检测各组HUVEC的增殖,NO浓度及凋亡率的情况。结果:与对照组比较,葛根素组NO浓度明显升高(P0.05),HUVEC凋亡率明显降低(P0.01);葛根素干预组NO浓度明显降低(P0.01);雷帕霉素组可抑制HUVEC增殖,NO浓度明显降低,HUVEC凋亡率明显升高(P0.01)。与雷帕霉素比较,葛根素组NO浓度明显升高,HUVEC凋亡率明显降低(P0.01);葛根素干预组促进HUVEC增殖,NO浓度明显升高,HUVEC凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。结论:葛根素对雷帕霉素造成HUVEC损伤具有一定的拮抗作用。     

RG-14260与雷帕霉素联合给药对两株子宫内膜癌细胞的作用

目的观察体外EGFR信号通路抑制剂RG-14260单独及RG-14260联合mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素对两株子宫内膜癌细胞(PTEN缺失的Ishikawa细胞和PTEN表达完整的HEC-1A细胞)增殖、凋亡、细胞周期及信号通路的影响。方法 MTT法检测抑制剂对细胞增殖的影响,金氏公式评价两抑制剂的协同效果;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布;Western印迹检测细胞信号蛋白的表达。结果 RG-14260与雷帕霉素可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、减少S期细胞数量、降低pAKT含量,二者联合应用呈协同效应;RG-14260与Rapamycin对HEC-1A细胞上述作用不明显。结论 PTEN基因缺失使相应信号通路抑制剂作用的子宫内膜癌细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G1期,细胞凋亡增加,对相关信号通路抑制剂的敏感性增加。     

雷帕霉素抗神经胶质瘤的活性及其机制

目的探讨雷帕霉素抗神经胶质瘤的肿瘤活性及其相关作用机制。方法 MTT细胞毒实验检测雷帕霉素对神经胶质瘤细胞C6的生长抑制活性,Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,PI单染流式细胞仪检测细胞周期的变化,提取细胞总RNA,RT-PCR检测survivin mRNA的表达变化,提取细胞总蛋白Western印迹检测survivin蛋白的表达变化。结果雷帕霉素对神经胶质瘤细胞C6显示了高效的抗肿瘤活性,IC50值为(8.34±0.62)μmol/L。流式细胞仪凋亡分析显示0、5、10、20μmol/L雷帕霉素作用C6细胞48 h后,细胞的凋亡率分别为(3.56%±1.04%)、(13.34%±3.86%)、(22.84%±4.53%)、(51.91%±6.29%),各组间有统计学差异(P<0.01)。细胞周期分析显示0、5、10、20μmol/L雷帕霉素处理C6细胞48h后,细胞增殖指数分别为(64.54%±6.04%)、(50.24%±4.86%)、(39.26%±5.61%)、(30.08%±6.42%)。RT-PCR和Western印迹检测显示雷帕霉素可以下调survivin mRNA和蛋白的表达。结论雷帕霉素具有高效的抗神经胶质瘤活性,其作用机制可能与其抑制了m TOR信号通路下调survivin靶蛋白的表达有关。     

雷帕霉素通过下调微小RNA-27a介导的雷帕霉素靶分子信号通路调控糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞自噬的影响研究

目的 探讨微小RNA-27a(miR-27a)介导的雷帕霉素靶分子（mTOR）信号通路调控DKD大鼠足细胞自噬的作用。方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组（NC,n=10）、糖尿病模型组（DKD,n=10）和雷帕霉素治疗组（Rap,n=10）。检测各组肾功能相关指标和细胞凋亡率，HE染色及免疫组化评估肾组织形态学变化。Western blot法检测各组肾组织中自噬相关指标Beclin1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)及mTOC蛋白表达，qRT-PCR检测足细胞特异性蛋白miR-27a、Podocalyxin、Nephrin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bax、Beclinl mRNA表达量。结果 与NC组比较，DKD组第6、12周FPG、24 hUAlb、BUN、血肌酐（Scr）、肾脏指数（KI）表达升高（P<0.05）。与NC组比较，DKD组细胞凋亡、mTOC蛋白、miR-27a、mTOR、Bax mRNA表达升高（P<0.05）,Beclinl、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Podocalyxin、Nephrin mRNA...     

自体凋亡细胞静脉回输联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞的影响

目的观察凋亡细胞联合雷帕霉素对恒河猴体内调节性T细胞(Treg)的影响,探讨减少雷帕霉素用量,降低免疫抑制剂副作用的方法。材料及方法以CD4+FOXP3+调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,4只雄性恒河猴8～10岁龄,体重7～8kg,随机分成实验组和对照组,每组2只。实验组采用低剂量雷帕霉素加凋亡细胞输注的方法,每天给予口服0.4mg雷帕霉素,同时静脉输注凋亡细胞一次;对照组每天给予同样剂量的雷帕霉素,同时静脉注射PBS。定期检测各组恒河猴外周血中CD4+Foxp3+Treg,并计算Treg占CD4+T细胞的比例。对比两组恒河猴Treg变化曲线的异同。结果单纯口服雷帕霉素的恒河猴,Treg/CD4+T比例在1只猴未见明显增加,在第38天为6.92%,另1只仅在4周后明显增加,在第38d为13.7%;而注射凋亡细胞联合雷帕霉素组的恒河猴,其Treg/CD4+T的比例在输注凋亡细胞后2～3周即有明显增加,2只猴在第38d Treg/CD4+T细胞比例升至16.67%和21.56%。结论凋亡细胞联合雷帕霉素有可能升高恒河猴体内Treg的比例。     

参麦方对心肌细胞糖脂毒性损伤的保护作用

目的 探究参麦方对大鼠心肌细胞糖脂毒性损伤的影响。方法 建立体外糖脂毒性对心肌细胞损伤模型,CCK8法检测细胞存活率;Western印迹检测心肌细胞的磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化(p)-蛋白激酶B(AKT)/AKT、p-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/mTOR蛋白表达;Hoechst33258观察凋亡染色;Western印迹检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶(Cleaved-Caspase)3表达。结果 0.40 mmol/L棕榈酸和30 mmol/L葡萄糖条件下损伤程度可缓解,实验重复性稳定,证明心肌细胞糖脂毒性模型造模成功;与模型组比较,各给药组PI3K、p-AKT/AKT蛋白显著上调,p-mTOR/mTOR蛋白显著下调;模型组玻珠样病变增多,核质发生皱缩,给药后与模型组比较,玻珠样病变减少。与模型组比较,各给药组促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase3显著下调,抗凋亡蛋白Bcl-2显著上调(P<0.05,P<0.01)。结论 初步验证参麦方对糖脂毒性损伤的心肌细胞具有保护作用,参麦方可能激活了PI...     

华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡作用及机制探讨

目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡作用,并探讨其机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测AKT、mTOR、Caspase3、Bax和Bcl-2 m RNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显著高于对照组(P0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显著高于对照组(P0.05),实验组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、mTOR、Bcl-2 m RNA表达量与对照组相比均显著降低(P0.05),Bax和Caspase-3 m RNA表达量均显著增加(P0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与m RNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进其凋亡,作用机制可能与通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。     

雷帕霉素对大鼠内皮祖细胞的影响及恒磁场的拮抗作用

目的 观察恒磁场对雷帕霉素作用下的大鼠内皮祖细胞(EPCs)增殖、凋亡及N0分泌的影响.方法 采 用密度梯度离心法获得雄性SD大鼠的骨髓EPCs,培养6天,随机分为5组:空白对照组、雷帕霉素(1μg/L)组及雷帕霉素 不同强度的恒磁场组(0.1 mT、0.5 mT、1.0 mT恒磁场组).各组按分组条件作用24 h后收集标本,MTT法检测EPCs增殖能力,流式细胞仪检测EPCs凋亡率,硝酸还原酶法检测NO含量.结果 与空白对照组比较,雷帕霉素组抑制EPCs增殖能力0.252±0.006%0.328±0.025,抑制NO分泌(22.8±4.3)μmol/L vs(36.9±5.6)μmol/L,促进EPCs凋亡(11.3±1.2)% vs (4.0±0.5)%,两组比较差异显著(P<0.05); 0.5 mT和1.0 mT恒磁场组EPCs增殖能力分别为0.278±0.008,0.280±0.010、NO(28.0±4.2)μmol/L,(28.7 ±4.4)μmol/L,显著高于雷帕霉素组,EPCs凋亡率(7.5±0.6)%,(7.1±0.6)%),显著低于雷帕霉素组,差 异显著(P<0.05).结论 0.5 mT和1.0 mT恒磁场可拮抗雷帕霉素的作用,促进EPCs的增殖和NO分泌,并抑制EPCs凋亡.     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞（GMC）增殖的影响及其可能涉及的途径。方法高糖培养GMC,以不同剂量雷帕霉素干预,MTT及流式细胞仪等方法观察雷帕霉素对细胞增殖和周期的影响,RT-PCR、Western印迹观察细胞Cyclin D1、CyclinE和p27^KIP1的变化。结果高糖刺激下,GMC增殖明显;雷帕霉素能抑制这一作用,且呈剂量依赖性,并下调CyclinD1、CyclinE的基因及蛋白水平,上调p27^KIP1的蛋白表达;与对照组相比,高糖组G0／G1期细胞减少,S期细胞比例增加（P均＜0．05）;雷帕霉素干预后,G0／G1期细胞升高,S期细胞比例减少（P均＜0．05）。结论雷帕霉素可抑制高糖状态下GMC的增殖,且呈剂量依赖性;其可能机制是通过下调CyclinD1、CyclinE及上调p27^KIP1,参与了G1／S期阻滞。     

雷帕霉素在甲型H1N1流感病毒感染中对糖酵解和炎性因子的调节作用

目的探讨免疫抑制剂雷帕霉素对流感病毒复制的影响及在流感病毒感染后调节糖酵解和炎性因子的作用。方法本研究为实验研究, 采用甲型H1N1流感病毒株A/PR/8分别感染人肺泡上皮细胞系A549和永生化小鼠骨髓源巨噬细胞(iBMDM), 构建流感病毒感染细胞模型。使用人非小细胞肺癌细胞系A459设置空白对照组、感染对照组、感染雷帕霉素组、感染二甲亚砜组, 在流感病毒感染及雷帕霉素处理48 h后, 使用空斑法和血凝法测定上清液病毒滴度, 定量聚合酶链反应法检测细胞内病毒基因、糖酵解相关基因(PDK3、PKM、GAPDH、LDHA、HK2、PGAM1、PGK1)和炎性因子干扰素α(IFN-α)、Caspase-1、白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、IL-8、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)]基因相对量的表达。设置巨噬细胞空白对照组, 巨噬细胞感染对照组和巨噬细胞感染雷帕霉素组, 使用小鼠永生化骨髓巨噬细胞(iBMDM)在流感病毒感染及雷帕霉素处理24 h后, 酶联免疫吸附测定法检测上清肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。进行3次平行重复实验。结果感染雷帕霉素组A549细胞上清中的病毒滴度与感...     

雷帕霉素减轻神经钙蛋白抑制剂的肾毒性

雷帕霉素(sirolimus,SRL)是从放线菌培养液中分离的一种天然大环内酯类发酵产物,其作用机制与环孢素A(CsA)和普乐可复(FK506)不同,主要是抑制细胞活化。哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)广泛存在于人体内,被激活后能促使一系列中间产物磷酸化,随即催化基因转录和蛋白合成。SRL通过作     

C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14相互作用对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖凋亡的影响

目的探讨C-Fos与丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)相互作用参与调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链式反应PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法检测RA-FLS和正常成纤维样滑膜细胞(FLS)细胞C-Fos mRNA和蛋白表达水平。将RA-FLS细胞分为C-Fos过表达组(转染pcDNA3.1-Myc-C-Fos质粒)、过表达对照组(转染pcDNA3.1-Myc空质粒)、C-Fos沉默组(转染siRNA-C-Fos)、沉默对照组(转染siRNA-NC)和空白对照组(未加任何处理)。细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞增殖能力, 流式细胞实验检测各组细胞凋亡的变化, 蛋白质印迹法检测各组细胞C-Fos、MAPK14、p-MAPK14、ki-67、Bax蛋白表达水平。间接免疫荧光实验检测C-Fos和MAPK14在细胞中的定位关系。免疫共沉淀方法检测C-Fos-MAPK14的相互作用关系。采用GraphPad Prism 5统计学软件进行数据分析, 正态分布的数据以±s表示, 2组间比较采用独立样本t检验;多组比较采用应采用方...     

雷帕霉素诱导大鼠肝星状细胞凋亡的研究

目的观察雷帕霉素(RAPA)对大鼠肝星状细胞系rHSCs-99增殖、凋亡的影响。方法将rHSCs-99分成4组:对照组(A组),RAPA 50 nmol/L组(B组),RAPA 100 nmol/L组(C组),RAPA 150 nmol/L组(D组)。RAPA作用72 h后,分别用MTT法检测rHSCs-99增殖,ELISA法检测I型胶原表达,流式细胞仪Annexin-V FICT/PI法检测细胞凋亡情况,Wright-Giemsa染色法观察细胞形态学改变,细胞免疫组化法检测Fas、P53与Bcl-2的表达变化。结果 RAPA作用后,rHSCs-99增殖受到抑制,I型胶原含量降低,凋亡率增高,Fas、P53表达增多,Bcl-2表达减少。结论 RAPA能抑制rHSCs-99的增殖及I型胶原合成。促进rHSCs-99凋亡,其机制可能是通过开启Fas/FasL凋亡途径及上调凋亡相关基因P53、下调Bcl-2的表达来实现。     

雷帕霉素与PD98059联合抑制小鼠结直肠癌雷帕霉素靶蛋白信号转导通路

目的:探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂雷帕霉索(rapamycin)与丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶的激酶(MEK)抑制剂PD98059对小鼠结直肠癌的联合作用及机制.方法:将二甲基肼注射于小鼠颈后20周,建立小鼠结直肠癌模型.从第16周起给予雷帕霉素、PD98059和雷帕霉素+PD98059腹腔注射,共8周;至24周处死实验动物,测算肿瘤体积,以HE染色判断肿瘤发生率;应用免疫组化法检测肿瘤组织mTOR、p70s6K、4E-BPl蛋白的磷酸化水平.结果:雷帕霉素、PD98059及雷帕霉素+PD98059干预组小鼠结直肠癌发生率显著低于模型组(44.44%、38.89%、6.67%比77.78%,P均<0.05);肿瘤体积显著小于模型组[分别为(6.153±2.192)、(8.85±3.983)、(2.917±0.191)比(16.136±6.855)mm3,P值均<0.05];蛋白磷酸化水平显著低于模型组,mTOR蛋白磷酸化水平分别为69.584%±3.600%、72.381%±8.561%、14.430%±2.413%比91.689%±1.994%;p70s6K分别为84.315%±3.132%、81.183%±3.980%、12.135%±2.382%比91.451%±2.160%;4E-BPl分别为65.288%±4.259%、66.641%±4.296%、19.119%±6.297%比75.999%±4.417%(P均<0.05).且在降低肿瘤发生率、缩小肿瘤体积以及抑制mTOR信号通路活性方面,雷帕霉素+PD98059干预组的效果显著优于雷帕霉素及PD98059单独用药,差异有统计学意义(P均<0.05).结论:雷帕霉素与PD98059可联合抑制小鼠结直肠癌的发生和生长,其作用机制可能涉及对mTOR信号转导通路相关蛋白磷酸化水平的抑制