Th17细胞在严重全身性感染患者外周血中的表达及临床意义

目的:检测严重全身性感染患者外周血Th17/CD4+T细胞的比例及单个核细胞(PBMC)中RORγtmRNA和IL-17 mRNA的表达水平,探讨Th17细胞在严重全身性感染患者外周血中的临床意义。方法:采用流式细胞分析法检测20例严重全身性感染患者、20例感染性休克患者及20例健康体检者外周血Th17/CD4+T细胞比例,RT-PCR法检测PBMC中RORγt mRNA及IL-17 mRNA的水平。结果:严重全身性感染组及感染性休克组外周血Th17/CD4+T细胞比例、RORγtmRNA及IL-17 mRNA水平均高于健康对照组,且严重全身性感染组高于感染性休克组(均P0.05)。结论:严重全身性感染及感染性休克患者外周血Th17/CD4+细胞比例增加,RORγt及IL-17蛋白表达水平升高,Th17细胞参与了炎症的发生、发展。     

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ^Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。     

强直性脊柱炎CD4+T细胞白细胞介素-17核孤儿受体的表达及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+T细胞白细胞介素(IL)-17蛋白水平和IL-17、核孤儿受体(RORγt)mRNA水平及意义.方法 取AS患者和健康人外周血单个核细胞(PBMCs),免疫磁珠分选CD4+T细胞,加佛波脂(PMA)腐子霉素(Ion)作用,经固定/透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4+T细胞IL-17蛋白水平;用或不用非特异性刺激剂[抗CD3单抗(A-CD3)、抗CD28单抗(A-CD28)]刺激CIM+T细胞12 h和24 h后,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17、RORγt mRNA水平.组间比较采用方差分析,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 CD4+T细胞IL-17蛋白水平AS活动组(1.26±0.44)较稳定组(0.56±0.21)和对照组(0.45±0.13)显著增高(P<0.01),同时IL-17、RORγt mRNA水平活动组较稳定组和对照组显著增高(P<0.01). 用A-CD3/A-CD28刺激后,AS患者CD4+T细胞IL-17、RORγtmRNA水平显著高于未刺激组(P<0.05),12 h刺激组又高于24 h刺激组(P<0.01).结论 AS患者外周血CD4+T细胞IL-17、RORγt表达水平显著增高,IL-17、RORγt表达水平可能与AS病情活动相关.     

美托洛尔对慢性心力衰竭患者外周血Th17细胞及其相关因子表达水平的影响研究

目的探讨美托洛尔对慢性心力衰竭(CHF)患者外周血Th17细胞及其相关因子表达水平的影响。方法选择2014年1—6月在福建省晋江市医院心血管内科住院的CHF患者60例,随机分成常规治疗组和美托洛尔组,各30例;另选取30例体检健康者作为健康对照组。常规治疗组患者给予常规治疗;美托洛尔组患者在常规治疗组基础上加用美托洛尔,两组患者均治疗6个月。采用流式细胞术检测各组受试者治疗前后外周血单核细胞(PBMC)中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率,采用实时荧光定量PCR技术检测PBMC中正调控Th17细胞分化的核转录因子视黄酸相关核孤独受体γt(RORγt)、负调控Th17细胞分化的细胞因子信号传送阻抑蛋白3(SOCS3)和Th17细胞相关炎性因子白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)及CX型趋化因子配体1(CXCL1)、CXCL5、CXCL8的mRNA表达,采用心脏彩超仪检测CHF患者左心室功能,包括左心室射血分数(LVEF)和左心室舒张末期直径(LVEDD)。结果治疗前常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率高于健康对照组(P0.05);常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗后美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率低于常规治疗组(P0.05)。治疗前常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中RORγt、IL-6、IL-17、IL-23及趋化因子CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平高于健康对照组,SOCS3 mRNA表达水平低于健康对照组(P0.05);而常规治疗组和美托洛尔组患者RORγt、IL-6、IL-17、IL-23及趋化因子CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。治疗后美托洛尔组患者PBMC中RORγt、IL-6、IL-17、IL-23、CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平均低于常规治疗组,SOCS3 mRNA表达水平高于常规治疗组(P0.05)。CXCL1、CXCL5、CXCL8与IL-17 mRNA表达水平均呈正相关(r值分别为0.438、0.345、0.423,P0.01)。两组CHF患者治疗前LVEF和LVEDD比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后美托洛尔组患者LVEF高于常规治疗组,LVEDD小于常规治疗组(P0.05)。结论 CHF患者存在强烈的Th17细胞免疫反应,而美托洛尔能降低PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率及RORγt、IL-6、IL-17、IL-23、CXCL1、CXCL5、CXCL8的表达,升高SOCS3的表达,具有抑制Th17细胞分化、下调Th17细胞功能、改善慢性炎症的作用,这可能是美托洛尔从机体免疫方面改善CHF患者心功能的作用机制之一。     

老年人氧化型低密度脂蛋白与辅助性T细胞及其细胞因子的相关性

目的探讨老年人氧化型LDL(ox-LDL)与辅助性T细胞(Th)17及其细胞因子的相关性。方法选择2014年11月~2015年9月年龄≥60岁的老年人341例为老年组,年龄60岁体检者107例为中年组。再依据ox-LDL水平三分位将老年人分为低水平组112例、中水平组115例和高水平组114例。检测血浆ox-LDL水平、外周血Th17细胞频率、白细胞介素(IL)17、TNF-α、IL-6及维甲酸相关孤独受体γt(RORγt)mRNA表达水平。结果与中年组比较,老年组Th17细胞频率、IL-17、ox-LDL及RORγt mRNA表达水平明显升高[(1.0±0.5)%vs(0.9±0.4)%,(29.8±12.3)ng/Lvs(26.6±12.6)ng/L,(379.3±101.6)μg/Lvs(302.8±94.0)μg/L,14.3±5.5vs 12.5±5.8,P0.05,P0.01],服用他汀类药物比例明显降低(11.4%vs 26.2%,P=0.002)。低、中、高水平各组TC、LDL-C、空腹血糖、Th17细胞频率、IL-17、IL-6、TNF-α及RORγt mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。多元线性逐步回归分析结果显示,ox-LDL是Th17细胞频率、IL-17、IL6、TNF-α及RORγt mRNA表达水平的独立影响因素(P0.05,P0.01)。结论老年人ox-LDL水平与外周血Th17细胞频率及其相关细胞因子密切相关。     

Th17及调节性T细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化发生过程中的作用及其机制

目的探讨T辅助性17(Th17)细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化(AS)患者外周血中的表达水平及Th17细胞影响AS发病的机制。方法选取2012年7月至2014年7月来该院治疗的AS患者(60例)为研究组,选取同期来该院体检的健康人群为对照组(40例),采用流式细胞术检测AS患者及正常人外周血中Th17细胞及Treg细胞水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组人群外周血中白介素(IL)-17以及转化生长因子(TGF)-β的水平;采用RT-PCR法检测两组人群外周血中转录因子RORγT及Foxp3的mRNA水平。结果 AS患者中Th17细胞比例,血清IL-17水平及外周血RORγT mRNA水平显著高于AS对照组;Treg细胞比例、血清TGF-β水平及外周血Foxp3mRNA水平显著低于对照组(P0.01)。结论 Th17细胞及相关因子可能参与促进AS的产生,Treg细胞及相关因子可能参与抑制AS的产生,阻断AS患者体内的IL-17可能作为治疗AS的潜在手段。     

慢性乙型肝炎患者外周血中调节性T淋巴细胞、Ⅰ型调节性T淋巴细胞和辅助性T淋巴细胞17的表达特点及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+(Treg)、CD4+CD25+IL-10+(Tr1)和CD4+IL-17+(Th17)的表达特点及其与CHB病情的关系。方法选取2013年1月至2014年6月解放军第一八○医院收治的轻中度CHB患者和重度CHB患者各40例,另选取同期无肝病诊断史的健康人40例为对照。分别抽取CHB患者及对照者的外周血,以流式细胞术检测外周血中Treg、Tr1和Th17表达水平,real time-PCR检测血清中Foxp3、RORγt mRNA水平,ELISA检测患者血清中TGFβ1、IL-10、IL-17表达水平。计量资料组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果轻中度和重度CHB患者与对照组相比,Treg、Tr1和Th17的百分率,转录因子Foxp3、RORγt表达水平,细胞因子TGFβ1、IL-10、IL-17水平均明显高于健康对照组(P值均0.05);而Treg/Th17和Foxp3/RORγt值显著低于对照组(P值均0.05)。与轻中度CHB患者相比,重度CHB患者Treg、Tr1和Th17的百分率,Foxp3、RORγt表达水平,TGFβ1、IL-10、IL-17水平均显著升高(P值均0.05);Treg/Th17和Foxp3/RORγt值显著降低(P值均0.05)。结论 CHB患者中Treg(特别是Tr1)和Th17的表达失衡程度与CHB病情进展呈正相关,因此,对于CHB患者,纠正Treg(特别是Tr1)和Th17表达失衡可能是很重要的治疗措施,同时监测Treg(特别是Tr1)和Th17的表达比例改变,对于估计CHB患者病情预后、指导临床治疗有积极作用。     

胶原诱导关节炎模型中髓系来源抑制细胞通过白细胞介素-1β促进Th17细胞分化的作用

目的通过胶原诱导关节炎模型探讨MDSCs对Th17细胞分化的作用及可能的机制,为阐明自身免疫性关节炎发病机制和寻找新的治疗靶点提供研究依据。方法 SPF级雄性DBA1/J小鼠20只随机分为胶原诱导关节炎(CIA)组和正常对照组,每组10只。采用CIA法制备自身免疫性关节炎小鼠模型。收集各组小鼠脾脏中骨髓来源抑制细胞(MDSCs)和Th17细胞的频率,分别采用流式细胞术和ELISA法测定小鼠血浆中炎性因子白细胞介素(IL)-β、IL-17及抑炎因子IL-10水平,采用实时荧光定量PCR技术测定细胞中Th17分化相关因子STAT3 mRNA、视黄酸相关孤儿受体(ROR)αmRNA、RORγt mRNA相对表达量。采用在Th17细胞分化培养条件下[添加IL-6+转化生长因子β(TGF-β)] MDSCs与小鼠幼稚CD4+T细胞共培养评估CIA小鼠中MDSCs对Th17细胞分化的影响,在培养过程中采用IL-1β中和抗体(IL-1βm Ab)和拮抗剂(IL-1ra)阻断IL-1β信号的方法以观察MDSCs对Th17细胞分化影响。结果与正常对照组小鼠比较,CIA组小鼠MDSCs比例明显升高[(20. 1±2. 6)%vs.(2. 6±1. 7)%],血浆炎症因子IL-17水平明显升高[(1. 3±0. 2)%vs.(0. 3±0. 1)%], CIA组血浆IL-β水平明显升高,抑炎因子IL-10水平明显降低,RORγtmRNA相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P 0. 01)。CIA组小鼠MDSCs比例及Th17细胞比例变化呈明显正相关。CIA小鼠中MDSCs抑制CD4+T细胞增生并减少细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ),但体外MDSCs和CD4+T细胞共培养结果显示MDSCs促进T17细胞分化,且使细胞上清液中IL-17A质量浓度升高,STAT3和RORγtmRNA相对表达量上调,培养液中IL-1β质量浓度升高。阻断IL-1β信号可以减少MDSCs对Th17细胞分化的作用。结论自身免疫性关节炎小鼠MDSCs具有促炎症反应的作用,MDSCs依靠IL-1β上调RORγt的作用而促进Th17细胞分化,这可能是自身免疫性关节炎发病过程中的一个关键因素。     

Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病的关系

背景:免疫功能紊乱是炎症性肠病发病的关键环节,研究发现Th1、Th2和Th17细胞比例失衡与肠道免疫失调相关。目的:探讨Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病(CD)的关系。方法:收集2013年1月—2014年12月温州医科大学附属第二医院收治的CD患者36例,同期行肠息肉摘除术患者40例作为对照组,分别取病变部位肠组织和正常肠组织,采用real-time PCR和免疫组化法检测Th1、Th2、Th17细胞相关转录因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达。结果:与对照组相比,CD组肠组织中T-bet、RORγt mRNA表达、IFN-γ、IL-17A mRNA和蛋白表达以及代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值均显著增高(P0.05),各转录因子与相应细胞因子表达呈显著正相关(P0.05)。IFN-γ和IL-17A免疫阳性物质均定位于细胞质,在CD患者中阳性细胞主要分布于上皮层和黏膜固有层。分层分析显示活动期CD的上述指标均显著高于缓解期(P0.05);活动期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦较缓解期显著增高(P0.05)。结论:肠组织中Th1、Th2和Th17细胞失衡与CD密切相关,Th1、Th17细胞极化可能在其中起重要作用,活动期CD以Th17细胞极化为著。     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。     

成纤维滑膜细胞p53基因表达对类风湿关节炎患者CD4+T淋巴细胞的调节

目的 研究人成纤维滑膜细胞(FLS)p53基因表达对类风湿关节炎(RA)患者CD4+T淋巴细胞的调节作用.方法 采用小分子干扰RNA(siRNA)转染抑制FKS内p53基因表达,并与RA患者外周血CD4+T淋巴细胞共同培养.检测转染后FLS中骨保护素(OPG)表达及白细胞介素(IL)-6分泌.并对与之共培养的CD4+细胞膜胞质内蛋白干扰素(IFN)-γ、IL-17、IL-4和CD25以及IFN-γ孤儿核受体γt(RORγt)、IL-17、Foxp3 RNA水平进行测定.结果 p53基因被抑制后,FLS分泌IL-6减少,但OPG表达未受影响.p53基因被抑制的FLS使共培养的CD4+T淋巴细胞内IL-17及IFN-γ蛋白和RNA表达上调,但对CD4+T淋巴细胞RORγt RNA影响不大.虽可上调Foxp3表达,但CD4+CD25high细胞阳性率并无明显变化.结论 FKS内D53表达对RA外周血Th1、Th17有调节作用.     

Th17、Treg在肺纤维化小鼠外周血、肺组织中的表达及意义

目的观察CD4+IL-17+辅助性T细胞(Th17)及Th17/CD4+CD2+5Foxp3+调节性T细胞(Treg)在博来霉素皮下注射致小鼠肺纤维化模型外周血及肺组织的表达及意义。方法 20只雌性BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组各10只:模型组皮下注射博莱霉素4周,对照组相同条件下注射0.1 mL PBS。采用HE染色和Masson’s染色观察两组肺组织炎症和纤维化的病理改变;流式细胞术检测两组肺组织及外周血Th17、Treg及Th17/Treg的表达;应用酶联免疫吸附试验检测两组血清IL-17水平;免疫荧光定量PCR法检测两组肺实质组织中IL-17和维甲酸相关孤独受体(RORγt)的mRNA的表达,并分析上述各指标的相互关系。结果模型组肺部纤维化评分、肺组织炎症程度和羟脯氨酸的含量均显著高于对照组(P均<0.01);外周血和肺组织Th17、Th17/Treg及外周血IL-17含量较对照组均显著增高(P均<0.01);肺实质RORγt和IL-17 mRNA水平较对照组明显增高(P均<0.05)。相关性分析结果显示,外周血和肺组织Th17及Th17/Treg、外周血IL-17的水平与肺组织羟脯氨酸水平、肺部纤维化评分、肺组织炎症反应均呈显著正相关(P均<0.01)。结论肺纤维化模型Th17及Th17/Treg表达均增高;Th17可能通过分泌IL-17参与肺纤维化的发病,Th17/Treg失衡可能通过加重肺纤维化免疫炎症,促进肺部胶原纤维的沉积,在肺纤维化的发病发挥重要作用。     

非小细胞肺癌患者外周血调节性T细胞和辅助性T细胞17的平衡表达特征

目的 通过检测辅助性T(Th)细胞17、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)相关细胞因子及特异性转录因子维A酸相关孤核受体(RORγt)和叉头转录因子3(forkhead box P3,FoxP3) mRNA的表达变化,探讨非小细胞肺癌患者外周血Treg和Th17的平衡表达特征.方法 57例非小细胞肺癌患者作为研究对象,25名健康人作为对照.通过荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞(PBMC)中RORγt和FoxP3 mRNA的表达.应用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测患者外周血转化生长因子β(transforming gowth factor-β,TGF-β)和Th17相关细胞因子白介素17 A(IL-17A)、IL-6的表达.结果 Ⅳ期非小细胞肺癌患者PBMC的RORγt mRNA水平[(11.30±4.07)×10-4]高于健康组[(7.50±2.75)×10-4]及Ⅰ～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(5.18±2.10)×10-4](q值分别为7.53、6.82,P值均＜0.01).Ⅳ期患者血浆TGF-β水平[(69.52±10.04) pg/ml]明显高于I～Ⅲ期非小细胞肺癌患者[(42.24±16.64)pg/ml]和健康对照组[(24.51±10.96)pg/ml](q值分别为3.91、3.87,P值均＜0.05).血浆IL-6、IL-17A各组间差异无统计学意义[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-17A含量分别为(25.20±4.58)pg/ml、(18.58±5.92)pg/ml、(18.93±5.24)pg/ml];[非小细胞肺癌Ⅳ期组、Ⅰ～Ⅲ期组、健康对照组血浆IL-6含量(pg/ml)分别为(39.53±11.30) pg/ml]、(42.41±12.38)pg/ml、(38.15±12.09)pg/ml(血浆IL-17A组间两两比较q值分别为1.21、1.09、1.12;血浆IL-6组间两两比较q值分别为1.19、1.76、1.06,P值均＞0.05).结论 晚期非小细胞肺癌中RORγt mRNA表达增强、外周血TGF-β表达增高,Th17以及Treg细胞可能同时参与了非小细胞肺癌的肿瘤远处转移过程,从而影响肿瘤进程.     

慢性心力衰竭病人外周Th17细胞功能检测的临床意义

目的探讨慢性心力衰竭病人外周血中CD_4~+IL-17+Th17细胞及白介素-6(IL-6)、白介素-22(IL-23)、白介素-17(IL-17)、RORγt的表达变化及其与慢性心力衰竭病程进展的关系。方法选取2013年1月—2014年6月在我院心血管内科确诊的慢性心力衰竭病人60例,同期无心脏疾病的健康人30名为对照。分别抽取不同心功能分级的慢性心力衰竭病人及对照者外周血,以流式细胞术检测外周血中CD_4~+IL-17+Th17细胞表达水平,real-time PCR检测外周血单核细胞(PBMC)中IL-6、IL-23、IL-17、RORγt基因表达变化。结果慢性心力衰竭病人CD_4~+IL-17+辅助性T细胞17(Th17)百分率、Th17细胞特异性转录因子RORγt和IL-6、IL-23、IL-17基因表达水平均明显高于健康对照组(P0.05);与心功能分级为Ⅰ级~Ⅱ级慢性心力衰竭病人相比,心功能分级为Ⅲ级~Ⅳ级慢性心力衰竭病人Th17细胞百分率以及RORγt、IL-6、IL-23、IL-17基因表达水平均显著升高(P0.01)。结论慢性心力衰竭病人中Th17细胞及其功能相关细胞因子表达情况与慢性心力衰竭病人病情的进展呈正相关,心力衰竭越严重,Th17表达率越高。因此,抑制Th17细胞及其功能相关细胞因子的表达是治疗慢性心力衰竭的重要措施。     

CD4+T淋巴细胞/Th17在原发性胆汁性胆管炎患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨CD4~+T淋巴细胞/Th17在原发性胆汁性胆管炎(PBC)病人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及意义。方法收集24例PBC患者(PBC组)和20例健康人群(HC组)的外周血和肝组织,采用流式细胞术测定CD4~+T淋巴细胞/Th17的比值,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-17、IL-22水平,比较2组间的表达情况,并分析血清IL-17、IL-22与ALP、GGT的相关性,同时对比CD4~+T淋巴细胞/Th17、IL-17在PBC不同病理学分期表达的水平。结果 PBC患者外周血、肝组织中CD4~+T淋巴细胞/Th17和血清IL-17明显高于健康对照组(P0.05),血清IL-17表达水平与ALP、GGT均呈正相关(P0.05),PBCⅢ-Ⅳ期外周血、肝组织中CD4~+T淋巴细胞/Th17水平高于PBC I-Ⅱ期(P0.05)。结论 CD4~+T淋巴细胞/Th17在PBC的发病机制中具有至关重要的作用,CD4~+T淋巴细胞/Th17的深入研究可能对于明确PBC的病因以及临床治疗具有重要意义。     

华支睾吸虫成虫抗原和排泄分泌产物对T细胞的作用研究

目的观察华支睾吸虫成虫抗原(Crude antigen,CA)、排泄/分泌产物(excretory-secretory products,ESPs)对T细胞的作用。方法体外分离小鼠骨髓细胞诱导分化为未成熟骨髓树突状细胞(immature DC,iDC);磁珠分选仪分选小鼠脾脏细胞的初始CD4+T细胞;流式细胞术检测DC、CD4+T细胞的纯度;抗原刺激DC细胞,实验分为PBS阴性对照组,LPS阳性对照组,CA和ESPs刺激组;负载抗原后的DC细胞与分选的CD4+T细胞共培养72h;Real time-PCR检测T-bet、GATA3mRNA的相对表达量;ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-4细胞因子的表达量。结果与PBS组相比,ESPs刺激组Tbet、GATA3mRNA表达水平升高(P0.05),而CA刺激组T-bet、GATA3 mRNA表达水平差异不显著;与PBS组相比,ESPs刺激组细胞因子IFN-γ、IL-4的含量均升高(P0.05),CA刺激组仅IFN-γ的分泌增高(P0.05),IL-4无明显变化。结论 CA可能诱导宿主产生Th1型免疫应答,ESPs可能诱导宿主产生Th1型、Th2型免疫应答。     

急性脑梗死患者外周血Th17细胞及其相关因子的表达变化

目的探讨急性脑梗死患者外周血Th17细胞、核转录因子维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)和白细胞介素17(IL-17)的变化规律。方法连续选取60例急性脑梗死患者及50名体检健康者为对照组。对发病后6、24 h和3、7、14 d的急性脑梗死患者,均抽取3.0 ml全血,抽取对照组3.0 ml全血,分别采用流式细胞仪、实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血Th17细胞百分率、RORγt mRNA表达水平及IL-17水平。结果①急性脑梗死后6 h,Th17细胞百分率、RORγt mRNA表达水平及IL-17水平均高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。②急性脑梗死后24 h和3、7 d,患者的Th17细胞百分率分别为(0.98±0.19)%、(1.25±0.23)%、(1.09±0.21)%,高于对照组(0.84±0.16)%,差异有统计学意义(均P<0.01)。③急性脑梗死后24 h和3、7 d患者外周血RORγt mRNA表达水平分别为0.41±0.16、0.49±0.19、0.42±0.17,高于对照组0.29±0.11,差异有统计学意义(均P<0.01)。④急性脑梗死后24 h和3、7、14 d患者血清IL-17水平分别为(34±15)、(68±29)、(41±21)、(32±14)ng/L,高于对照组的(21±11)ng/L,差异均有统计学意义(均P<0.01)。⑤急性脑梗死后14 d,Th17细胞百分率、RORγtmRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论急性脑梗死患者外周血中Th17细胞及IL-17水平增高,Th17细胞可能参与了急性脑梗死发生、发展过程。     

Th17细胞、RORγt在肺纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的初步探讨Thl7细胞及其维甲酸受体相关孤儿受体(retinoid-ralated orphan receptorγt,RORγt)在肺纤维化中的作用。方法 64只雄SD大鼠随机分为对照组(N)、肺纤维化模型组(B组)、地塞米松治疗组(D)。采用气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型.苏木精-依红(HE)观察肺组织病理形态学变化并测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;PCR检测肺部RORγtmRNA的表达;流式细胞术计数肺组织CD4+IL-17+Th17细胞;ELISA测血清IL-17水平.结果 (1)B、D组肺组织病理呈现逐渐由肺泡炎至纤维化动态改变过程,B、D组肺组织内HYP含量在不同时间点均高于N组(P<0.05),28 d时数值最高;(2)与N组比较,B、D组在不同时间点肺组织中TH17细胞和RORγtmRNA、血清中IL-17表达均明显增高(P<0.05),以造模7d最为显著。结论 TH17细胞、RORγtmRNA和血清IL-17表达增高在肺纤维化形成过程中起重要作用。     

肺气肿小鼠肺组织CD8+ IL-17+T细胞变化及作用机制

目的 观察香烟烟雾暴露肺气肿小鼠肺组织中CD8+IL-17+T细胞(Tc17)的变化,探讨Tc17在香烟烟雾暴露肺气肿小鼠中的作用及上调的可能机制.方法 将40只雄性Balb/c小鼠按随机数字表随机分为A(12周健康对照组)、B(24周健康对照组)、C(12周香烟烟雾暴露肺气肿组)、D(24周香烟烟雾暴露肺气肿组)组,每组10只.香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型,观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔(Lm)和肺泡破坏指数(DI);流式细胞术检测小鼠肺组织中Tc17、CD8+IL-17+趋化因子受体6(CCR6)+细胞及CD8+IL-17+CCR6+细胞;荧光定量PCR法检测小鼠肺组织中维甲酸相关孤独受体(RORγt)、IL-17 mRNA表达;ELISA法检测小鼠肺组织匀浆中IL-1β、IL-6、IL-23、转化生长因子(TGF)β及趋化因子CCL20水平,并分析这些指标间的相关性.结果 (1)C、D组Lm、DI、Tc17/CD8+ T细胞比例、CD8+IL-17+CCR6+细胞/CD8+ T细胞比例、CD8+IL-17+CCR6+细胞/Tc17比例、RORγt和IL-17 mRNA相对表达量校正值、趋化因子CCL20浓度、IL-1β、IL-6、IL-23、TGFβ水平均明显高于A、B组,以D组增高更为显著,差异均有统计学意义(P值均小于0.05).(2)C、D组RORγt mRNA与IL-17 mRNA相对表达量校正值呈正相关(r=0.651,P＜0.05).C、D组Tc17/CD8+ T细胞比例与Lm、DI、趋化因子CCL20、IL-1β、IL-6、IL-23、TGFβ呈正相关(r值分别为0.734、0.884、0.899、0.531、0.643、0.799、0.637,P＜0.01).结论 香烟烟雾暴露肺气肿小鼠肺内Tc17上调;IL-1β、IL-6、IL-23、TGFβ升高及CCR6、趋化因子CCL20趋化作用促使Tc17上调.

Abstract：

Objective To evaluate the expression of Tc17 in a cigarette smoke-induced mice model of emphysema.To explore the probable mechanisms about how Tc17 cells to elevate in lungs of mice.Methods Forty male Balb/c mice were randomly divided into four groups,including control group ( 12 weeks,C12),control group (24 weeks,C24),smoke-exposure group (12 weeks,S12) and smoke-exposure group (24 weeks,S24 ),10 mice each group,Emphysema of mice was observed by HE pigmentation.Morphological changes were evaluated by mean linear intercepts (Lm) and destructive index (DI).The proportion of CD8+ IL-17 + Tc17,CD8+ IL-17 + CC chemokine receptor type 6 ( CCR6 ) + and 6CCR6 + Tc17 cells in lungs of mice was determined by flow cytometry.The mRNA expressions of retinoidrelated orphan nuclear receptor(RORγt) and IL-17 were evaluated by real-time PCR.The levels of IL-1 β,IL-6,IL-23,transforming growth factor β (TGFβ) and CC chemokine ligand 20 (CCL20) were tested by ELISA.Correlations among these indexes were analyzed.Results Lm and DI were significantly higher in S12 and S24 than in C12 and C24,S24 in particular (t value 4.378-15.188,all P ＜ 0.05).The percentages of Tc17 in S12 and S24[(9.28 ± 1.12)%,( 13.13 ±3.56)%]was significantly increased as compared with that in C12 and C24[(2.40 ±0.60 )%,(2.64 ±0.96 )%],S24 in particular.The mRNA levels of RORγt and IL-17 in S12 and S24 were higher than in C12 and C24,S12 and S24 in particular.There was significant difference (all P ＜0.05 ).The frequency of Tc17 cells had a positive correlation with Lm and DI ( r value were 0.734 and 0.884 respectively,P ＜ 0.01 ).The percentages of CD8+ IL-17 + CCR6 +T cells and CCR6 + Tc17 were significantly elevated in S12 and S24 compared to C12 and C24,S24 in particular (all P ＜ 0.05 ).There was positive correlation between Tc17 cell ratio and CCL20 levels( r =0.899,P ＜0.01 ).The levels of IL-1 β,IL-6,IL-23 and TGFβ in S12 and S24 were significantly increased as compared with that in C12 and C24.There was significant difference (all P ＜0.05).Meanwhile,the frequency of Tc17 cells had a positive correlation with IL-1β,IL-6,IL-23,and TGFβ.Conclusions An up-regulation of proportions Tc17 in lungs of cigarette smoke-induced emphysema mice were detected.The CCR6/CCL20 axis and the increased IL-1β,IL-6,IL-23 and TGFβ probably contributed to this up-regulation.