芒柄花黄素通过TLR4/NF-κB通路抑制肝癌荷瘤小鼠肿瘤免疫逃逸北大核心CSCD

目的:揭示芒柄花黄素对肝癌免疫逃逸的作用机制。方法:采用不同浓度(50、100、200μg/ml)芒柄花黄素处理人肝癌细胞系HepG2 24 h,CCK-8检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。雄性C57BL/6小鼠皮下接种HepG2细胞(4×105个)建立荷瘤小鼠模型,10/50 mg(/kg·d)芒柄花黄素治疗28 d,计算抑瘤率。qRT-PCR、Western blot检测小鼠肝癌组织和HepG2细胞TLR4和NF-κB p65表达,ELISA检测小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平。结果:芒柄花黄素可提高HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率(P<0.05),降低荷瘤小鼠血清和HepG2细胞TNF-α、IL-1β和IL-10水平(P<0.05),提高荷瘤小鼠抑瘤率(P<0.05),降低荷瘤小鼠肿瘤组织和HepG2细胞TLR4和细胞核NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:芒柄花黄素通过抑制TLR4/NF-κB通路介导的肿瘤免疫逃逸抑制肝癌发生发展。     

芪玉三龙汤降低肺癌荷瘤小鼠程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)的水平

目的研究芪玉三龙汤在Lewis肺癌小鼠体内的抑瘤效应及对共刺激分子程序性死亡蛋白1及配体(PD-1/PD-L1)表达的影响。方法采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组、化疗组、中药高、中、低剂量组、联合组,每组8只;实验第11天开始中药低、中、高剂量组小鼠分别按(20.12、40.24、80.48)g/(kg·d)灌胃给药,化疗组按照0.4 m L顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量生理盐水给药,1次/d,连续给药10 d;检测各组荷瘤小鼠肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;称取瘤质量,计算抑瘤率;实时定量PCR和Western blot法分别检测荷瘤小鼠脾脏PD-1及肿瘤组织PD-L1的mRNA和蛋白水平。结果与模型组比较,中药高剂量组能够抑制肺癌移植瘤生长,抑瘤率为23.86%,联合组与化疗组抑瘤率相当;中药高剂量组能明显降低脾脏组织PD-1 mRNA及PD-1蛋白表达,抑制肿瘤组织PD-L1 mRNA及蛋白表达。联合组PD-1、PD-L1蛋白水平明显低于化疗组,但对其他指标的交互作用无统计学意义。结论芪玉三龙汤能通过降低PD-1/PD-L1水平温和抑制肺癌移植瘤生长。     

PD-L1阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响北大核心CSCD

目的:探讨程序性死亡受体-1配体(PD-L1)阻断对脓毒症小鼠T淋巴细胞凋亡及单核细胞功能的影响。方法:30只8~10周龄清洁级C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:sham组、模型组、PD-L1拮抗组,每组10只,模型组、PD-L1拮抗组小鼠采用盲肠结扎穿孔手术(CLP)构建脓毒症小鼠模型,sham组小鼠暴露盲肠后即进行伤口缝合,不结扎。PD-L1拮抗组小鼠术后腹腔注射抗PD-L1抗体(50μg/只),每6 h注射1次,连续4次,sham组和模型组小鼠腹腔注射等剂量生理盐水。流式标记法检测各组小鼠CD3+T细胞表面PD-1和单核细胞CD11b+表面PD-L1表达,HE染色观察组织病理学改变,电镜下观察脾脏和胸腺超微病理结构改变,TUNEL染色检测脾脏和胸腺组织细胞凋亡、流式细胞术检测胸腺组织T淋巴细胞凋亡,ELISA检测Caspase-3和TNF-α、IL-6及IL-10表达。结果:与sham组相比,模型组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-10蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,PD-L1拮抗组小鼠CD3^(+)、CD11b^(+)表面PD-1和PD-L1表达、脾脏和胸腺组织细胞凋亡率、T淋巴细胞凋亡率、Caspase-3、TNF-α、IL-6蛋白表达明显降低,IL-10表达明显升高(P<0.05)。结论:PD-L1阻断可有效降低脓毒症小鼠T细胞凋亡率,改善其单核细胞功能。     

红芪多糖介导STAT3通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸北大核心CSCD

目的探讨红芪多糖(HPS)介导信号转导子与转录激活子3(STAT3)通路抑制卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸的作用。方法取40只Balb/c小鼠通过皮下注射卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌小鼠模型,将建模成功的小鼠随机分为模型组、米非司酮(MIF)组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组。HPS组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1)),MIF组灌胃给予MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),HPS^(+)MIF联合组灌胃给予HPS(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))和MIF(40 mg·kg^(-1)·d^(-1)),模型组灌胃给予等量无菌生理盐水,连续干预14 d。观察记录各组小鼠瘤体积、瘤质量并计算抑瘤率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠外周血白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;流式细胞术检测各组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)、CD4^(+)CD25^(+)叉头框蛋白P3(^(+)Foxp3^(+))调节性T细胞(Treg)水平;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、程序性死亡配体-1(PD-L1)、程序性死亡受体1(PD-1)信使核糖核糖酸(mRNA)表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1蛋白表达。结果与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠瘤体积和瘤质量、外周血IL-2、IL-10、TGF-β1水平以及肿瘤组织CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞水平降低,肿瘤组织中CD4^(+)细胞水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,MIF组、HPS组、HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与MIF组和HPS组比,HPS^(+)MIF联合组小鼠肿瘤组织STAT3、PD-L1、PD-1 mRNA及蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HPS对卵巢癌小鼠肿瘤细胞免疫逃逸有一定抑制作用,推测可能是通过介导STAT3信号通路抑制STAT3、PD-L1、PD-1的表达实现上述作用的。     

Clara细胞10 kD蛋白通过调控T细胞反应治疗小鼠变应性鼻炎研究北大核心CSCD

目的:探讨Clara细胞10 kD蛋白(CC10)对变应性鼻炎(AR)小鼠模型T细胞反应的作用。方法:卵清蛋白(OVA)免疫小鼠,建立AR模型,探讨CC10对AR的影响。最后1次鼻腔激发后评估小鼠鼻腔症状。收集鼻组织和鼻腔灌洗液(NLF),测定AR小鼠嗜酸性粒细胞、杯状细胞数及IL-5、IL-17、IL-10、TGF-β1、FOXP3水平。结果:激发期间给予CC10可显著减少AR小鼠搔鼻次数、嗜酸性粒细胞和杯状细胞数,降低IL-5、IL-17水平(P<0.05),但可增加IL-10、TGF-β1和FOXP3表达(P<0.05)。结论:CC10可通过调控T细胞反应减轻AR小鼠鼻腔炎症。     

健脾除痰解毒方通过PD-1/PD-L1通路平衡Th1/Th2漂移而增强Lewis肺癌小鼠免疫功能

目的：探讨健脾除痰解毒方（JCJF）增强Lewis肺癌小鼠免疫功能是否与其通过程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)通路平衡Th1/Th2细胞相关。方法：取C57BL/6J小鼠60只并建立Lewis肺癌模型，按随机数字表法分为模型（model）组，顺铂（DDP）组，低、中、高剂量JCJF(L-JCJF、M-JCJF和H-JCJF)组，以及H-JCJF+DDP组，每组10只；另取10只健康C57BL/6J小鼠作为空白组。各组小鼠均给予相应处理，连续治疗14d。处死小鼠后取小鼠瘤体和脾脏，计算抑瘤率和脾脏指数；HE染色观察小鼠肿瘤组织和肺组织的形态学变化；TUNEL法检测小鼠肿瘤细胞凋亡；免疫组化染色检测肿瘤组织PD-L1蛋白表达；ELISA法检测小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-13含量；RT-qPCR检测肿瘤组织PD-1、PD-L1、Bax和Bcl-2的mRNA表达；Western blot检测肿瘤组织PD-1、PD-L1、Bax、Bcl-2、IL-10和IL-13蛋白表达。结果：与model组相比，H-JCJF+DD...     

基于PD-1/PD-L1信号通路探讨妇炎汤对慢性盆腔炎小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的 探究妇炎汤通过PD-1/PD-L1信号通路对慢性盆腔炎小鼠体内Treg/Th17免疫平衡的作用机制。方法取60只SPF级雌性ICR小鼠随机分为四组,其中三组于经阴道-宫颈口注入病原体混合液制备慢性盆腔炎模型,对照组注入等量生盐水处理。造模前后对小鼠全血细胞进行检测,并对小鼠进行脸谱疼痛评分。妇炎汤组小鼠每天灌胃给药16g/kg,阿司匹林组20g/kg,对照组和模型组灌胃等体积生理盐水。实验结束后取四组小鼠子宫组织进行H-E染色观察,流式细胞仪检测血液中Treg和Th17细胞的所占比例,ELISA检测血清中IL-17、IL-10、TGF-β1的浓度,RT-qPCR检测IL-17、IL-10 mRNA的表达,Western blotting检测PD-1和PD-L1蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠子宫出现水肿,组织发生病理结构改变,血液中Treg细胞比例、IL-10和TGF-β1表达、IL-10 mRNA、PD-1和PD-L1蛋白表达明显降低(P<0.05),Th17细胞比例、IL-17、子宫组织中IL-17 mRNA表达明显上升(P<0.05);与模型组比较...     

芒柄花黄素通过调节Bax和Bcl-2蛋白表达诱导SKOV3细胞凋亡

目的:研究芒柄花黄素诱导癌细胞凋亡的机制。方法:采用MTT法观察浓度分别为25、50和100U·ml-1的芒柄花黄素对SKOV3细胞的凋亡作用。采用Hoechst33342染色法观察浓度为100U·ml-1芒柄花黄素对细胞形态的影响。用免疫印迹试验(Western blotting)检测浓度分别为25、50和100U·ml-1芒柄花黄素作用后SKOV3细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示,芒柄花黄素对SKOV3细胞的增殖具有抑制作用(P0.05)。经浓度为100U·ml-1芒柄花黄素作用,Hoechst33342染色,SKOV3细胞呈凋亡状态。免疫印迹试验结果显示,经芒柄花黄素作用,SKOV3细胞中Bcl-2蛋白的表达降低(P0.05),而Bax蛋白的表达则增加(P0.05)。结论:芒柄花黄素通过调节细胞内Bax和Bcl-2蛋白的表达诱导SKOV3细胞的凋亡,并呈剂量依赖性。     

冬凌草甲素增强对小鼠H22肝癌细胞免疫杀伤作用的实验性研究

为阐明冬凌草甲素(ORI)抗小鼠H22肝癌中的T细胞免疫应答机制,本研究利用C57/BL6小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为荷瘤对照组(PBS组)、ORI高、中、低剂量处理组(75、50、25mg·kg~(-1)·d~(-1))、阳性对照组(5-Fu组)和空白组(NC组),连续腹腔注射给药12d后处死。以瘤重、抑瘤率观察ORI对移植瘤生长的影响;用乳酸脱氢酶释放法检测对小鼠H22细胞杀伤活性;流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中CD4~+T细胞分泌IL-17、IL-2、TNF-α、IFN-γ等细胞因子能力,并检测CD8~+T和CD4~+T细胞表面PD-1的表达。结果显示:低、中、高剂量ORI处理组和荷瘤对照组比较均有显著性缩小(P0.05);ORI能明显提高荷瘤小鼠脾脏细胞对H22细胞的杀伤活性(P0.05);抑制CD4~+T细胞中细胞因子的分泌,尤其对IL-17和IL-2的抑制最为明显,对TNF-α和IFN-γ抑制在ORI高浓度情况下发挥作用;同时,ORI处理组中CD8~+T细胞的PD-1表达降低,而CD4~+T细胞表面PD-1的表达呈现一定程度的上调。上述结果表明ORI对小鼠H22肿瘤具有明显的体内抑瘤作用,除了直接的杀伤作用外,ORI还可以通过提高CD8~+T的杀伤作用,降低CD4~+T细胞的炎症特性发挥抗肿瘤免疫应答功效,其中的可能机制是影响两种细胞表面PD-1的表达。因此,ORI还可通过协同T细胞抗肿瘤免疫应答机制促进对肿瘤的抑制作用。     

小鼠B7H1-Ig融合蛋白诱导免疫抑制的机制研究

为了探讨小鼠B7H1-Ig融合蛋白诱导免疫抑制的机制,应用抗CD3抗体协同B7H1-Ig融合蛋白刺激纯化的CD4+T细胞,检测其增殖效应和培养上清细胞因子水平的变化,并观察B7H1-Ig对不同品系小鼠混合淋巴细胞反应的抑制作用。发现B7H1-Ig有引起T细胞先增殖后抑制的现象,其抑制作用通过IL-10、TGF-β和受体PD-1,并有调节性T细胞的参与。研究为B7H1-Ig进一步应用于临床疾病的免疫调控打下基础。     

木犀草素对宫颈癌大鼠外周血T细胞亚群及PD-1/PD-L1通路的影响

目的：探究木犀草素对宫颈癌(CC)大鼠程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1 (PD-L1)通路蛋白表达及外周血T细胞亚群的影响。方法：取雌性SD大鼠，在左侧腋窝处皮下注射人宫颈癌HeLa细胞悬液构建CC模型，将造模成功的40只大鼠随机分为模型组(CC)、木犀草素低(5 mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组；另取10只雌性SD大鼠，在左侧腋窝处皮下注射等量生理盐水，作为空白对照组(Control)。各组于造模成功后开始给药，木犀草素低、中、高剂量组经腹腔注射给予相应剂量药物，2次/d，共30 d,Control组和CC组经腹腔注射等量生理盐水。各组大鼠末次给药12 h后，处死大鼠，测量大鼠体质量，剥取瘤体，测量移植瘤体积及瘤重，并计算抑瘤率，取肿瘤组织，ELISA检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量及外周血中IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)含量；取大鼠外周血，采用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD4⁺T、CD8⁺T、CD4⁺CD25⁺T百分比，...     

人脑胶质瘤组织中转化生长因子β1表达与Treg浸润的关系

目的:检测胶质瘤组织中转化生长因子β1(TGF-β1)表达,并分析其与CD4+ FOXP3+ 调节性T细胞(Treg)浸润的关系,探讨Treg浸润的临床意义.方法:采用免疫组织化学双标记的方法检测135例胶质瘤组织(WHO I 18,WHO Ⅱ45,WHO Ⅲ53,WH0Ⅳ19)、15例正常脑组织中TGF-β1、Tre...     

PD-1单克隆抗体瘤内用药对小鼠肺癌疗效的影响

目的探索PD-1单克隆抗体瘤内用药对小鼠肺癌的治疗作用,旨在寻找更安全、有效的免疫治疗方案。方法将皮下荷瘤成功的C57BL/6J肺癌小鼠随机分为5组:尾静脉注射生理盐水组(intravenous injection,IV)、瘤内注射生理盐水组(intratumoral injection,IT)、尾静脉注射PD-1单抗组(IV 10 mg/kg)、瘤内注射PD-1单抗组(IT 10 mg/kg)、瘤内注射PD-1单抗剂量减半组(IT 5 mg/kg),分析各组小鼠的生存率和小鼠荷瘤生长情况;运用流式细胞术分析CD8⁺T细胞/CD4⁺T细胞比例,使用免疫组织化学分析各组小鼠荷瘤组织CD45、Ki67的表达,并对上述数据进行统计学分析。结果瘤内注射PD-1单抗可显著抑制小鼠肺癌组织的生长、延长小鼠生存时间,且瘤内组织Ki67表达下调,CD45表达、CD8⁺T细胞/CD4⁺T细胞免疫细胞比例增加。结论瘤内注射组小鼠荷瘤组织生长速度明显受抑、肿瘤细胞增殖指数和生存时间显著降低,提示瘤内注射PD-1单抗对小鼠肺癌的发展进程具有抑制作用,此创新式的治疗方法将为临床治疗肿瘤提供新的思路和策略。     

日本血吸虫感染小鼠的脾脏CD8+PD-1+T细胞的功能特性

目的研究日本血吸虫感染后小鼠脾脏CD8+PD-1+T细胞含量及功能的变化情况。方法使用日本血吸虫感染5～6周的C57BL/6小鼠,分离脾脏,制备石蜡切片,HE染色,观察组织病变情况;分离淋巴细胞并计数,运用流式细胞术检测CD8+PD-1+T细胞的含量;使用细胞表面染色的方法观察CD8+PD-1+T细胞的CD25、CD69、CXCR5、CD40L的表达变化;经PMA和离子霉素的刺激,使用细胞内细胞因子染色的方法检测IFN-γ、IL-10和IL-12的分泌情况。结果日本血吸虫感染后,小鼠体质量下降(P0.05),而脾脏质量和体积均明显上升(P0.01);脾脏中CD8+PD-1+T细胞的比例和绝对值数目增加(P0.01);感染组CD8+PD-1+T细胞高表达CD69(P0.05),而感染组CD8+PD-1+T细胞CXCR5分子表达显著下降(P0.05);经PMA与离子霉素刺激以后,CD8+PD-1+T细胞IFN-γ分泌增加(P0.05)。结论血吸虫感染5～6周小鼠脾脏中CD8+PD-1+T细胞为一群主要的活化细胞群可大量分泌IFN-γ,在血吸虫感染疾病发挥重要的免疫调节作用。     

肝癌患者外周血CD3~+T细胞和CD19~+B细胞中程序性死亡蛋白1(PD-1)及其配体表达水平增加

目的 观察肝细胞肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中程序性死亡蛋白1(PD-1)和配体以及γ干扰素(IFN-γ)水平的变化。方法 采集15例早期HCC患者、13例进展期HCC患者和12例健康人(对照组)的外周血并分离PBMC。流式细胞术检测PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,ELISA检测血清中IFN-γ的水平,利用Pearson相关系数法和One-way ANOVA分析PD-1与IFN-γ的相关性。结果 进展期HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达水平和血清IFN-γ水平显著高于健康人群和早期HCC患者,HCC患者外周血CD3+T细胞和CD19+B细胞PD-1、PD-L1表达水平与IFN-γ呈正相关。结论 肝癌患者PBMC中PD-1、PD-L1和PD-L2分子表达增加,且PD-1、PD-L1与IFN-γ水平有关联。     

程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中的表达及临床意义

目的 通过分析程序性死亡蛋白配体-1/程序性死亡蛋白-1(programmed death ligand-1/programmed death-1,PD-L1/PD-1)在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞中表达情况,探讨其临床意义.方法 选择同一时期90例老年胃癌患者(具有不同临床分期)及90例老年健康体检者,分别采取新鲜外周血后经流式细胞仪检测血中CD8+T淋巴细胞表面PD-L1/PD-1表达情况,结合老年胃癌患者的临床分期,分析PD-L1/PD-1在不同胃癌分期中的表达意义.结果 PD-L1/PD-1在老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞呈高表达,相较于老年健康者差异具有统计学意义(t=7.043,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-L1/PD-1阳性表达均随着临床分期的增加而增加,呈明显的正相关性(r=0.883,P<0.05);外周血CD8+T淋巴细胞的PD-1阳性表达随着临床分期的增加而增加,两者之间呈正相关性(r=0.811,P<0.05);临床分期较晚的老年胃癌患者外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1表达比其他相对较早的临床分期老年胃癌患者显著上升(t=4.377,P<0.05).结论 PD-L1/PD-1信号通路异常在老年胃癌患者病变的发生发展过程中发挥了重要作用,外周血CD8+T淋巴细胞PD-L1/PD-1的表达对评判患者的预后具有指导作用.     

B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内浸润T细胞亚群的相关性研究

目的:研究共刺激分子B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内浸润的FOXP3+、CD4+T、CD8+T细胞数量和分泌细胞因子的关系。方法:采用SP免疫组织化学染色检测B7-H4在30例正常人宫颈组织、30例高级别宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ,CINⅡ-Ⅲ)和67例子宫颈癌的表达;间接免疫荧光双标(Indirect immunofluorescentdouble-staining)观察肿瘤内浸润的FOXP3+、CD4+T、CD8+T细胞数量及其TGF-β1和IFN-γ分泌情况。结果:B7-H4不表达于正常人宫颈上皮,仅在部分瘤变宫颈上皮微弱表达;子宫颈癌B7-H4的阳性表达率为46%(31/67),显著高于正常人宫颈上皮和瘤变宫颈上皮(P<0.01,P<0.05);子宫颈癌B7-H4阳性组病灶内浸润的CD8+T细胞以及分泌IFN-γ的CD8+T数量显著低于B7-H4阴性组(P<0.001,P<0.035);B7-H4的表达与肿瘤内浸润的FOXP3+细胞、CD4+T细胞以及分泌TGF-β1的CD4+T细胞数量无关(P>0.05,P>0.05)。结论:B7-H4在人子宫颈癌细胞异常高表达,并与肿瘤内浸润的CD8+T细胞数量减少以及分泌IFN-γ减少有关,提示B7-H4在抑制肿瘤微环境的细胞免疫中发挥作用。     

A20重组蛋白通过NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路抑制哮喘小鼠气道重构的初步实验研究

目的探讨A20重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道重构及NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只,分别为:生理盐水对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;A20重组蛋白治疗3 d组;A20重组蛋白治疗7 d组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色及PAS染色。取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA),RT-PCR和Western blote检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量以及肺组织中结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子-β1(trailsforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达和核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达。结果哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高,而IFN-γ水平降低;肺组织CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-κB表达水平均显著高于对照组(P<0.01)。A20重组蛋白3 d和7 d干预组小鼠与哮喘模型组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平,NF-κB表达水平均显著降低,而BALF中IFN-γ水平明显上升,具有显著差异(P<0.05),但2个不同治疗组之间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 A20重组蛋白可抑制哮喘小鼠气道重构的发生,其机制有可能是通过抑制NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路而实现的。     

PD-L1阻断改善酵母多糖致伤小鼠脾脏耐受性 DC对T淋巴细胞活性的影响

目的：探讨酵母多糖致伤小鼠脓毒症病程发展过程中脾脏耐受性树突状细胞( dendritic cell, DC)的形成对脾脏T淋巴细胞免疫活性的影响,并通过程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-L1)抗体阻断PD-L1/PD-1途径改善耐受性DC对T淋巴细胞活性的抑制作用。方法采用酵母多糖腹腔注射的方法复制小鼠脓毒症模型。用磁珠法分离致伤小鼠脾脏DC和T淋巴细胞,测定脾脏组织中DC上PD-1、PD-L1、PIR-B的表达水平和分泌IL-12、IL-10的能力;检测脾脏T淋巴细胞增殖活性和IL-2的分泌水平。进一步将致伤组小鼠脾脏DC与正常小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,并加入PD-L1抗体,检测T淋巴细胞增殖活性及混合培养上清中IL-2、IL-12和IL-10含量。结果酵母多糖致伤后5天和12天组小鼠脾脏DC上PD-1、PD-L1及PIR-B的表达大幅上调,IL-12p70分泌减少,IL-12p40和IL-10分泌增加;脾脏T淋巴细胞增殖活性降低、IL-2分泌减少。在致伤组DC与正常T淋巴细胞混合培养体系中加入PD-L1抗体可减轻致伤组DC对T淋巴细胞增殖活性和分泌IL-2的抑制作用,并改善DC上IL-12p70、IL-12p40和IL-10的分泌能力。结论酵母多糖诱导小鼠脓毒症的病程晚期,脾脏耐受性DC的形成导致T淋巴细胞活性降低;PD-L1抗体通过干预PD-1/PD-L1途径改善T淋巴细胞和DC的免疫活性。     

泡球蚴感染对Balb/c小鼠肝脏TGF-β1及其信号蛋白表达的影响

目的观察泡球蚴(Em)感染对Balb/c小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅠ/Ⅱ和信号蛋白Smad2/3表达的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,泡状棘球蚴原头蚴混悬液肉眼直视注射肝脏诱导小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组以相同方法注射生理盐水。于感染第60天处死小鼠,取肝脏组织。用RT-PCR检测肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达;Western blot和免疫组织化学技术检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ(TGFβⅠ型受体)、TβRⅡ(TGFβⅡ型受体)、Smad2/3在肝内的表达及定位;HE和Masson染色,光镜下观察肝组织病理改变和肝组织纤维化程度。结果与对照组小鼠比较,Em感染小鼠肝组织内TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高。Em感染后TGF-β1、Smad2/3蛋白表达增加。TGF-β1、TβRⅠ与Smad2/3阳性反应主要位于肝细胞浆,TβRⅡ主要在肝细胞膜表达,上述指标在两组间表达具有显著性差异。结论在Em感染的肝组织中TGF-β1、TβR及Smad2/3蛋白表达均增高。TGF-β1/Smads信号蛋白参与了Em感染致肝纤维化及肝损伤过程。Em感染可能通过TGF-β1/Smads通路介导宿主与寄生虫间的共生。