超高效液相色谱-三重四级杆质谱法用于阿胶糕类食品中阿胶的鉴别及马、牛、羊、猪皮源成分的检测

目的:建立以特征肽为检测指标的阿胶糕中阿胶的鉴别方法与马皮、牛皮、羊皮、猪皮源成分的检测方法。方法:采用三氯乙酸沉淀法提取阿胶糕中的蛋白质,胰蛋白酶进行酶解处理,利用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(UHPLCQQQ MS),电喷雾离子源(ESI),正离子模式下扫描,采用多重反应监测模式,对特征肽目标离子进行检测。结果:经验证,鉴别方法和检查方法均均有良好的专属性,灵敏度高。市售样品测定结果显示,部分样品中检出阿胶成分,有的样品中检出牛皮源成分,有的样品中未检出任何皮源性成分。结论:所建立方法操作简便,专属性强,可用于阿胶糕中阿胶的鉴别和掺假杂皮胶的检测。     

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法用于含阿胶中成药中胶类皮源检测研究

目的 建立含阿胶中成药阿胶补血口服液、阿归养血颗粒中阿胶类皮源检测方法，包括阿胶的专属性检测方法，以及猪皮源、马皮源、牛皮源掺伪检查研究。方法 采用胰蛋白酶对用0.01 g·mL^-1NH₄HCO₃溶解的阿归养血颗粒及阿胶补血口服液中阿胶进行酶解，利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)对样品进行检测。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3-C₁₈(2.1 mm×100 mm, 1.8μm),流动相为体积分数0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～25 min, 95%A→80%A;25～40 min, 80%A→50%A),流速0.3 mL·min^-1,柱温30℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测，选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8;马源寡肽A特征分子离子峰m/z 386.4(双电荷)→322.3和m/z 386.4(双电荷)→377.3;...     

UPLC-QQQ-MS法检测孕康口服液中驴皮源和牛皮源成分

目的:建立孕康口服液中驴皮源及牛皮源成分的专属性检测方法。方法:选用胰蛋白酶技术对孕康口服液中胶类成分进行处理,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS)对驴皮源及牛皮源成分的专属性特征分子离子峰进行检测。结果:10批样品均检出驴皮源成分的特征离子峰,并且均未检出牛皮源成分的特征离子峰。结论:该方法操作简便、准确、快速,灵敏度高,可用于孕康口服液中驴皮源的鉴别及牛皮源的检查。     

超高效液相色谱-质谱联用技术评价当归养血丸中阿胶投料情况

目的 建立当归养血丸中阿胶的检测方法,为投料阿胶质量控制提供技术支持。方法 采用胰蛋白酶对当归养血丸进行酶解,利用超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS),在电喷雾离子化(ESI⁺)模式下,进行多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM),进行阿胶专属鉴别、马皮源成分检查及阿胶特征多肽含量测定。结果 建立方法线性、专属性、稳定性、重复性、耐用性良好。以此方法,11批当归养血丸中均检出阿胶,其中9批检出马皮源成分,7批低于阿胶特征多肽含量拟定限度。结论 所建立的方法准确可靠、专属性强,可用于当归养血丸中阿胶的质量评价。     

超高效液相色谱-串联四极杆质谱法同时检测鹿角胶饮片中牛皮源、驴皮源及鹿角胶成分

目的建立鹿角胶饮片中牛皮源、驴皮源及鹿角胶成分同时检测方法。方法精密称定鹿角胶饮片粉末0.1 g,加1%碳酸氢铵溶液超声溶解、稀释、过滤,用胰蛋白酶酶解12小时,利用超高效液相色谱-串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS)和多反应监测模式(MRM)分别检测黄明胶特征肽段离子对(m/z)641.3→726.2,783.3,阿胶特征肽段离子对(m/z)539.8→612.4,924.0,鹿角胶特征肽段离子对(m/z)765.4→554.0,733.0。色谱柱为BEH-C18,以乙腈—0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱。分别考察上述三种特征肽段离子对的专属性,并用逐级稀释法确定方法检出限。用所建方法检测10批市售鹿角胶饮片。结果黄明胶、阿胶、鹿角胶三种对照药材在所建方法下保留时间分别为3.6分钟、6.2分钟和10.9分钟,无基质干扰,检测限分别为0.1,2.0,1.0 mg/L,对照药材混合溶液进样6次,鹿角胶峰面积RSD为2.1%,黄明胶峰面积RSD为3.7%,阿胶峰面积RSD为2.8%,方法重复性良好。将所建方法应用于10批市售鹿角胶饮片的检测分析,1批结果为不合格(检出牛皮源成分)。结论所建方法专属性强、灵敏度高,实现了鹿角胶饮片中主成分鉴别与非法添加成分检查的同时检测,进一步提高检验效率,可有效控制鹿角胶质量。     

基于UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术检测龟甲胶中新阿胶成分

目的：检测龟甲胶中新阿胶特征肽成分。方法：采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法（UPLC-ESI-QTOF-MS/MS）对龟甲胶样品进行测定,选定新阿胶特征肽离子m/z 925.4作为检测离子。结果：龟甲胶特征成分含量偏低的样品（但不含有牛皮元和驴皮元特征肽成分）中检测出新阿胶特征肽离子m/z 925.4信号,其MS/MS裂解规律与文献报道一致,而龟甲胶标准品中未检测出该特征肽信号。结论：该方法专属性强、灵敏度高,可检测出龟甲胶中是否掺杂新阿胶成分,可用于龟甲胶的质量控制。     

阿胶的凝胶电泳鉴别

采用两种常用的连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对不同厂家生产的阿胶及两种伪品杂皮胶进行了鉴别研究,为阿胶的鉴别提供了新的方法。     

阿胶的炮制研究近况

近年来,随着广大医药工作者的不断探索,以及先进仪器设备的运用,阿胶的炮制在方法、工艺、辅料等技术方面都有了很大的改进和创新,现综述如下。 1 阿胶的制备原料和规格 1.1 制备原料 《中国药典》[1]明确阿胶为用驴皮熬制,但在历史上驴皮并非制作阿胶的唯一原料,如明代李时珍谓:“大抵古方所用多是牛皮,后世乃贵驴皮,若伪者皆杂以马皮、旧革、鞍、靴之类,其气浊臭,不堪入药。”张氏[2]经过研究认为,隋唐以前有用鹿、马、牛、驴等皮制作阿胶原料的多样性,到唐代才逐渐认识到驴皮胶药用比牛皮胶要好,从而占据主导地位。近年有学者[3]从…     

基于生物信息学和质谱技术的阿胶特异性肽段筛选与鉴定

目的:建立基于生物信息技术和液质联用技术识别特征肽鉴别阿胶的新方法。方法:利用生物信息技术对驴皮、牛皮和猪皮I型胶原蛋白α1链氨基酸序列进行同源性比对发现3种皮类胶原蛋白氨基酸序列存在差异,通过生物学软件模拟胰酶酶解,分析比对驴皮、牛皮、猪皮来源I型胶原蛋白α1链酶解肽段,然后通过实验对样品前处理条件进行系统摸索,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF-MS)进行验证。结果:筛选出12个驴皮的特异性肽段,鉴定出1个与预测结果一致的驴皮特异性肽段,其质荷比(m/z)为766.4,分子量为1 530.802 2,对应的多肽序列为GEAGPAGPAGPIGPVGAR,利用特征肽段对10组阿胶样品进行鉴定。结论:生物信息技术结合UPLC/Q-TOF-MS检测出的驴皮特征肽可有效、特异、准确地对阿胶药材进行专属性鉴定。     

阿胶强骨口服液含药血清对大鼠成骨细胞的影响

目的:探讨喂饲阿胶强骨口服液大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法:在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的阿胶强骨口服液血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果:阿胶强骨口服液血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论:阿胶强骨口服液血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

特征肽段检测技术用于胶类药材专属性鉴别方法研究

 目的 找出龟甲胶、鹿角胶、阿胶、黄明胶、新阿胶5种胶类药材的特征肽段,从而建立专属性的鉴别方法。方法 用胰蛋白酶针对样品进行酶解,采用液质联用多肽识别技术和数据处理软件对蛋白质酶解后的胶类样品(主含多肽混合物)进行分析处理,进行特征肽段的寻找;采用串联四级杆质谱的多反应检测(multiple reaction monitor, MRM)建立专属性鉴别方法。结果 找出了5种胶类药材的特征离子,确定阿胶的特征离子为m/z 539.8,鹿角胶的特征离子为m/z 765.4,龟甲胶的特征离子为m/z 631.3,黄明胶的特征离子为m/z 641.3,新阿胶的特征离子为m/z774.5,并建立了专属性强的鉴别方法。结论 确定的各胶类的特征肽专属性强,建立各胶类的专属性鉴别方法可以有效地区分各胶类。     

阿胶强骨口服液对骨折愈合过程VEGF和FGF-2表达的影响

目的:研究阿胶强骨口服液(DGRBOS)对SD大鼠胫骨骨折愈合过程中骨痂中血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨折的疗效机制。方法:3月龄SD大鼠90只,采用三点弯曲方法造成右胫骨中段闭合性骨折后,随机分为阿胶强骨口服液,阳性药物,及生理盐水对照组,分别在实验的第4、7、14、21、28天时,采用免疫组织化学方法检测VEGF和FGF-2表达的变化。结果:阿胶强骨口服液组和阳性对照组在骨折后14dVEGF的表达达到峰值,两者间比较无显著性差异(P相似文献   

阿胶水溶性成分HPLC指纹图谱研究

目的 采用反相高效液相色谱法对阿胶水溶性成分进行了指纹图谱研究.方法 选用SHIMADZU VP-ODS(4.6 mm I.d.×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-H2O为流动相进行梯度洗脱;柱温25℃;分析时间为95 min;检测波长205 nm.结果 以28个主要共有峰为评价指标,建立了阿胶水溶性成分的HPLC指纹图谱,同时标定了5个色谱峰.结论 该方法操作简单,精密度、稳定性和重现性良好,为阿胶鉴别和质量控制提供了一定的依据.     

阿胶药史考

阿胶的应用已有二千多年的历史,它是中医最常用的滋阴养血、补肺润燥、止血安胎良药之一,也是畅销国内外,享有盛誉的著名滋补药品。今用阿胶都以驴皮煎煮制成。由于驴皮的来源跟不上需要,因此阿胶的供应亦日趋紧张,商品市场尚有用其它畜皮:如牛皮制的黄明胶,猪皮制的新阿胶,以及用其它胶源如动物骨等制成伪品充塞市场。通过几年来对各种商品阿胶的鉴别分析研究和结合查考古代医药著作应用阿胶的历史,我们对阿胶一药获得了较系统的了解。     

龟甲胶中杂质成分驴皮源、牛皮源和重金属元素的含量分析研究＊

目的 对不同公司五批次龟甲胶样品中的杂质性成分驴皮源、牛皮源和重金属含量进行检测分析。方法 采用高效液相色谱-质谱联用法（Liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）对龟甲胶中的牛皮源和驴皮源成分进行检测，原子吸收光谱法（Atomic Absorption Spectroscopy，AAS）对重金属汞、砷、铜、镉、铬、铅进行含量检测。结果 湖南A公司的龟甲胶样品中牛皮源和驴皮源的检测结果均为阴性，其他三家公司含有驴皮源或牛皮源成分。用原子吸收法测定各公司龟甲胶样品中重金属的含量，根据进出口绿色行业标准，本实验中的结果显示各样品龟甲胶中的重金属含量均在合格范围内，未见明显超标产品。结论 本文的检测方法简便、专属性强，检测得湖南A公司的龟甲胶不含驴皮源和牛皮源成分，且重金属含量均在要求范围内，表明龟甲胶产品较为优质可靠。     

UPLC-ESI-QTOF-MS检测巴西龟龟甲胶中牛皮特征肽的研究

目的：以巴西龟为来源的龟甲胶中牛皮特征肽成分的检测。方法：采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法分别对以巴西龟为来源的龟甲胶和以中华草龟为来源的龟甲胶进行测定,选定牛皮特征肽离子m/z 604.8、m/z 641.3、m/z 790.8作为检测对象。结果：巴西龟来源的龟甲胶中只检测出牛皮特征肽离子m/z 641.3信号,其MS/MS裂解规律与黄明胶标准品酶解产物所含牛皮特征肽GEAGPSGPAGPTGAR一致,而中华草龟来源的龟甲胶中均未检测出牛皮特征肽信号。结论：该方法专属性强,灵敏度高,可区别巴西龟龟甲胶和掺杂牛皮成分的龟甲胶,可用于龟甲胶的质量控制。     

阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质比较研究

 目的：研究中药阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质，寻求各自内在特征。方法：采用红外、紫外、原子吸收光谱、氨基酸自动分析色谱及PC，TLC，HPLC，SDS-APGE电泳法进行定性鉴别。结果：3种胶的UV光谱图、HPLC指纹图及SDS-PAGE电泳分析的分子质量分布差别显著。结论：UV光谱图、HPLC指纹图及蛋白质的分子质量分布可作为鉴别3种胶真伪优劣的依据。     

HPLC法同时测定阿胶强骨口服液中4种氨基酸

目的建立HPLC法同时测定阿胶强骨口服液(阿胶、黄芪、熟地等)中4种氨基酸的含有量。方法该药物0.1 mol/L盐酸提取液的分析采用Welch XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长254 nm;柱温43℃。结果 L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸分别在0.8~80μg/mL(r=0.999 9)、1.6~160μg/mL(r=0.999 8)、0.7~70μg/mL(r=0.999 8)、1.2~120μg/mL(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为100.2%、99.7%、100.1%、100.5%,RSD分别为1.6%、1.5%、1.3%、1.5%。结论该方法灵敏准确,重复性和稳定性良好,可用于阿胶强骨口服液的质量控制。     

阿胶商品药材中氨基酸种类、含量及指纹图谱分析

目的:通过比较阿胶不同商品药材中氨基酸的种类、含量及其指纹图谱,评价各阿胶药材的质量。方法:采用HPLC柱前衍生化氨基酸自动分析仪,测定13批阿胶药材中18种氨基酸含量及指纹图谱。结果:所有阿胶样品中均检出16种氨基酸,其中人体必须氨基酸7种;16种氨基酸的线性方程r值均大于0.9953,平均回收率为98.1%¹05.0%,RSD均小于2.0%;通过中药色指纹图谱相似度评价系统,确定20个共有峰构成阿胶药材指纹图谱的特征峰。结论:此方法可用于阿胶商品药材的品质评价。     

黄连阿胶胶囊质量标准研究

目的制定黄连阿胶胶囊(黄连、黄芩、阿胶和肉桂等)质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)法对黄连、阿胶和黄芩定性鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)定量测定黄连的有效成分盐酸小檗碱,采用Waters Sun FireTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH值至3.0)(25∶75),检测波长265 nm,理论板数按盐酸小檗碱峰计应不低于5000。结果黄连、阿胶和黄芩的薄层斑点清晰,分离度好,专属性强,阴性对照无干扰;盐酸小檗碱在0.086~2.752μg·m L-1范围内,其进样量(X)与峰面积积分值(Y)有良好线性关系(r=0.9993),平均加样回收率为98.69%,RSD为2.05%。结论所建立方法可靠、准确、专属性强,可用于黄连阿胶胶囊的质量控制。