胆汁淤积性肝硬化大鼠模型改良的研究

目的：构建肝纤维化大鼠模型,并对经典结扎胆总管(BDL)复制模型方法进行适当改进。方法：80只SD雄性成熟大鼠,按随机数字表法分为A组40只、B组40只,分别运用胆总管结扎法和肝门部肝总管缝扎法先后两次造模,各取其中10只为假手术组进行对照,术后1周眼眶取血采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL、GGT、A/G)检测,术后4周HE染色观察大鼠肝组织病理学变化,采用免疫组化染色分析肝脏组织α-SMA和CK-19表达水平。结果：两种方法均可均明显肝功能损害表现;部分标本胆小管增生明显,肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝脏α-SMA和CK-19表达水平明显升高,胆总管结扎组死亡率为66.7%,肝门部肝总管缝扎组死亡率为26.7%。结论：肝门缝扎法可成功建立胆汁淤积性肝硬化大鼠模型,能够明显降低模型动物死亡率,提高模型质量及实验效率。     

姜黄素对阻塞性黄疸模型大鼠肝损伤的保护作用及其机制

[目的]探讨姜黄素对阻塞性黄疸大鼠肝损伤的保护作用及其机制.[方法]利用胆总管结扎法制作大鼠阻塞性黄疸模型,随机分组.姜黄素给药组每日灌胃给予姜黄素400mg/kg,于第14d采集各组血液及肝组织,用ELISA法检测血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)及总胆红素(TBIL)的水平,并利用HE染色和Western blot法观察肝组织形态学变化及α-SMA表达水平.[结果]阻塞性黄疸模型组大鼠血清中ALT,AST及TBIL水平均明显增高(P<0.05);HE染色结果显示,阻塞性黄疸模型组大鼠肝脏组织结构受损,发生肝纤维化,肝组织中α-SMA表达水平增高.姜黄素给药组ALT,AST及TBIL水平均明显低于阻塞性黄疸模型组(P<0.05),姜黄素给药组肝纤维化程度有所减轻,肝组织中α-SMA表达水平明显低于阻塞性黄疸模型组(P<0.05).[结论]姜黄素可改善阻塞性黄疸大鼠受损肝脏纤维化程度,减轻肝损伤,对肝脏有一定的保护作用.     

BMP-7/Smads信号通路在胆总管结扎大鼠肝纤维化组织中的表达及意义

目的 探讨BMP-7/Smads信号通路在胆总管结扎大鼠肝纤维化组织中的表达及意义。方法 将雄性Wistar大鼠简单随机化分组成假手术组,胆总管结扎7天组、14天组、28天组、42天组,采用胆总管结扎方法制备大鼠胆汁淤积肝纤维化模型。苏木精-伊红染色、Msaaon染色观察各组大鼠肝组织形态及胶原沉积情况,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)测各组大鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin, FN)等肝纤维化指标mRNA的表达变化,免疫组化法明确肝脏胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)沉积情况,Western blot法检测各组肝组织内FN、collagenⅠ、胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)、α-SMA和金属基质蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase, TIMP1)等蛋白的表达,同时用免疫组化法及Western blot法检测各组肝组织...     

小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型的建立与评价

目的:建立小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型,并对其进行初步评价.方法:随机给予小鼠胆总管结扎和假手术,进行血清学指标(AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL)检测;HE染色和天狼猩红染色进行形态学观察;采用免疫组化染色分析α-SMA和CK-19表达;实时荧光定量PCR检测α一SMA、Collagen-1 mRNA的表达.结果:小鼠胆总管结扎后2周可见CK-19阳性的棕褐色细胞明显增生,模型组血清AST、ALT、ALP、TBIL、DBIL明显增高,α-sMA、Collagen-1表达明显增强.结论:成功构建小鼠胆总管结扎致肝纤维化模型.     

赖氨大黄酸对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用及其分子机制

目的: 探讨赖氨大黄酸(RHL)对胆汁淤积性肝纤维化模型大鼠的治疗作用,阐明RHL治疗大鼠胆汁淤积性肝纤维化的分子机制。方法:将35只大鼠分为对照组、模型组、35和70 mg·kg^-1RHL治疗组及赖氨酸组,每组7只大鼠。通过胆总管结扎(BDL)方法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型。使用全自动生化分析仪检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及总胆汁酸(TBA)和总胆红素(TBIL)水平;HE染色对肝脏组织行病理学检查;Masson三色染色观察肝组织纤维数量;使用试剂盒通过酶标仪测定肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)水平;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布;Western blotting法检测α-SMA表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平升高(P<0.05);肝组织肝小叶结构被破坏,纤维异常增生,Hyp水平亦升高(P<0.05)。免疫组织化学染色,α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多;Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠α-SMA表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏质量与体质量比值、血清中AST和ALT活性以及TBA和TBIL水平明显降低(P<0.05)。肝脏病理组织学,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1RHL治疗组大鼠肝脏组织中纤维成分数量减少,Hyp水平降低(P<0.05);免疫组织化学和Western blotting法,与模型组比较,35和70 mg·kg^-1 RHL治疗组大鼠肝脏组织中α-SMA表达减少(P<0.05)。结论:RHL能抑制肝星形细胞激活、肝脏纤维变性和蓄积以发挥对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝脏的保护作用,RHL有望成为治疗胆汁淤积性肝纤维化的药物。     

表儿茶素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用

目的 研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法 将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组（0.1 mg/kg）、表儿茶素高剂量组（100 mg/kg）、表儿茶素低剂量组（25 mg/kg）。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组均腹腔注射四氯化碳（CCl4） 建立肝纤维化模型。复制模型的同时开始给药,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常对照组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,每日1次,连续6周。末次给药后,称取肝湿质量,计算肝脏指数;采用微板法检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT)水平;苏木精-伊红染色和Masson胶原染色观察肝脏病理学变化;Western blot法检测肝脏中平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,collα1)蛋白的表达水平。结果 与模型组相比,表儿茶素能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST的含量;显著降低肝组织中α-SMA、collα1蛋白的表达;肝组织病理学指标明显改善。结论 表儿茶素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有一定的保护作用,其机制可能与抑制α-SMA、collα1的表达有关。     

壮方柔肝化纤颗粒对CCl4复合因素诱导肝纤维化大鼠模型的干预效应及其对α-SMA、E-Cadherin表达的影响

目的：研究壮方柔肝化纤颗粒对CCl₄复合因素诱导肝纤维化大鼠模型的干预效应及其对α-SMA、E-Cadherin蛋白表达的影响。方法：选取48只雄性Wistar大鼠随机分成空白组、病理模型组与柔肝化纤颗粒组，每组均为16只。病理模型组与柔肝化纤颗粒组大鼠皮下注射40%四氯化碳(CCl₄)油剂联合花生油复合因素建立大鼠肝纤维化动物模型，第5周起给予柔肝化纤颗粒灌胃给药，每周灌胃3次，连续8周，8周后检测肝功能转氨酶指标(ALT、AST)，通过HE染色、Masson染色、免疫组化等方法，对比分析各组大鼠肝组织的病理学形态改变，采用酶联免疫分析(ELISA)检测大鼠氧化应激氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)的表达，并采用RT-PCR、Western Blot等方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-Cadherin)的表达。结果：与空白组比较，病理模型组大鼠血清的ALT、AST水平明显升高，柔肝化纤颗粒组大鼠血清ALT、AST水平均明显下降(P均<0.001)。病理模型组大鼠肝组织内的小叶结构已残缺，出现众多肝脏纤维...     

三种术式大鼠肝外型胆汁淤积模型的对比研究

目的利用血清学、影像学及病理学评价3种术式大鼠肝外型胆汁淤积模型造模方式的优缺点。方法将15只雌性SD大鼠随机分为传统组、改良组及电刀组,分别采用胆总管结扎法(n=5)、肝门区肝总管缝扎法(n=5)及胆总管高频电刀电凝法(n=5)进行胆汁淤积手术造模,术前及术后进行CT平扫及体重测量,比较肝密度、胆管直径;术后7 d 3组大鼠进行采血,测量谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL);采血结束后麻醉过量法处死大鼠,取部分肝组织使用4.2%～5.2%福尔马林溶液固定,石蜡切片HE染色观察病理学变化。结果 3组大鼠造模后7 d均出现不同程度的肝损伤及胆汁淤积。传统组较电刀组AST、TBIL、DBIL高(P0.05),传统组较改良组AST、ALT、TBIL、DBIL高(P0.05);传统组及电刀组ALT、改良组及电刀组AST、ALT、TBIL、DBIL之间比较均无统计学差异(P0.05);病理学可见传统组在三组中胆管增生、胆管壁增厚程度最严重,改良组程度最轻,电刀组居于两者之间; CT扫描传统组扩张肝外胆管内径大于改良组和电刀组(P0.05),改良组及电刀组两组之间胆管直径无统计学差异(P0.05);传统组肝CT值与术前比较明显减低(P0.01),改良组和电刀组肝CT值较术前均无统计学差异(P0.05)。结论电刀法及改良法均较有效的延长大鼠胆汁淤积的病程,可以更好的模拟人部分肝外胆汁淤积类疾病,为动态观察胆汁淤积病理过程提供了可能。     

荜茇提取物对CCl4诱导大鼠肝纤维化的影响

目的 探究荜茇提取物对四氯化碳(CCl₄)诱导大鼠肝纤维化的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分成空白组、模型组、荜茇提取物低剂量组(16.6mg/kg)、荜茇提取物中剂量组(33.3mg/kg)和荜茇提取物高剂量组(66.7mg/kg),每组各12只。除空白组外,其余各组均给予皮下注射50% CCl₄-菜籽油溶液干预8周,建立肝纤维化模型。造模的同时给予模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,荜茇提取物低、中、高剂量组连续灌胃治疗8周。实验结束后,测定大鼠血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、谷氨酰基转移酶(γ-glutamyltransferase, γ-GT),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6);苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)、Masson染色观察大鼠肝组织病理变化。提取RNA并采用qPCR技术检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、TNF-α mRNA表达水平;提取蛋白采用Western blot法检测大鼠肝组织中Collagen Ⅰ、α-SMA、TNF-α蛋白表达水平。结果 HE染色和Masson染色结果可观察到模型组大鼠肝脏纤维增生明显,大鼠血清中ALT、AST、γ-GT升高,血清中炎性介质TNF-α和IL-6分泌增多,Collagen Ⅰ、α-SMA和TNF-α mRNA和蛋白表达增高,荜茇提取物可明显改善肝纤维化程度,血清中ALT、AST、γ-GT下降,血清中炎性介质TNF-α和IL-6下降,肝组织中Collagen Ⅰ、α-SMA、TNF-α mRNA和蛋白水平明显下降。结论 荜茇提取物对CCl₄诱导的大鼠肝纤维化有明显治疗作用,可通过抑制炎性细胞因子TNF-α和IL-6表达,可能通过抑制肝星状细胞激活,从而减少Collagen Ⅰ和α-SMA合成发挥抗纤维化的药效。     

卡托普利对肝纤维化大鼠肝功能及肝组织α-SMA、Ⅰ型胶原的影响

目的:观察血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)类药物卡托普利对肝纤维化大鼠肝功能的调节作用,探究其抗肝纤维化的分子机制.方法:采用四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠动物模型,并应用卡托普利进行治疗,于20周末采集大鼠肝组织及腹主动脉血.观察肝脏组织学变化,采用ELISA法检测大鼠血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)水平;分别采用RT-PCR法和免疫组化法检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)和α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的mRNA和蛋白表达变化.结果:(1)模型组大鼠血清AST、ALT与对照组相比升高(P=0.000),与模型组比较,ACEI高、中剂量组血清ALT表达水平均降低(P=0.000;P=0.010),ACEI高剂量组血清AST表达水平降低(P=0.032).(2)模型组大鼠肝组织Collagen-Ⅰ和α-SMA mRNA和蛋白表达较对照组均升高(P=0.000),与模型组比较,ACEI各治疗组上述指标表达水平均降低(P=0.000).结论:卡托普利能够改善肝纤维化大鼠的肝功能,缓解肝纤维化程度,该作用与其抑制HSC的激活并下调肝组织Collagen I和α-SMA的表达水平有关.     

胆汁淤积致肝内胆管上皮细胞间质表型转变的病理学分析

目的 探讨胆汁性肝纤维化时胆管上皮细胞发生间质表型转变的特点.方法 制作胆管结扎所致大鼠肝纤维化模型,利用HE染色、免疫组化和免疫荧光等方法,检测术后1周和2周时肝内胆管细胞的上皮和间质标志物的表达情况.结果 大鼠胆管结扎后胆汁淤积,引起肝内汇管区胆管细胞显著增生以及围胆管成纤维细胞和纤维基质增加.免疫组化结果显示,假手术组和胆管结扎组大鼠胆管细胞均表达上皮细胞标志蛋白CK19,但胆管结扎组肝内胆管细胞也表达间质细胞标志物Vimentin和FSP1/S100A4.胆管结扎1周时,汇管区内新生小胆管呈Vimentin强阳性,2周时增生胆管周围许多细胞也呈Vimentin阳性.但两组大鼠胆管细胞均不表达肌成纤维细胞标志物α-SMA,α-SMA阳性细胞主要分布于汇管区胆管细胞周围.结论 在胆汁性肝纤维化进程中胆管细胞增生并发生一定程度的上皮一间质表型转变,可能促进了肝纤维化的发生.     

腹腔持续注射血管紧张素(-1-7)对胆管结扎大鼠肝纤维化的抑制作用

目的探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]对胆管结扎(BDL)大鼠肝纤维化的抑制作用。方法 18只Wister雄性大鼠随机分为假手术(SHAME组)组,BDL组和Ang-(1-7)治疗组。假手术组:行开腹术再关腹,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;BDL组:开腹结扎胆总管建立肝纤维化模型,在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射生理盐水;Ang-(1-7)治疗组:BDL建立肝纤维化模型,同时在腹腔埋注射泵,以25μg.kg-1.h-1的速度持续注射Ang-(1-7)。4周后宰杀动物、取肝组织,行Masson胶原染色,肝纤维化评分,测定羟脯氨酸含量,免疫组织化学检测α-肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与BDL组相比,Ang-(1-7)治疗组肝纤维化评分(2.33±0.52 vs 5.17±0.75)、胶原面积(23.71±3.43 vs 89.77±9.92)、羟脯氨酸含量(0.36±0.03 vs 0.52±0.04)、α-SMA的表达(54.11±17.55 vs 191.84±31.72)均减少,有统计学意义(P<0.01)。结论Ang-(1-7)对胆总管结扎所致的肝纤维化具有抑制作用。     

Antioxidant Effect of Sepia Ink Extract on Extrahepatic Cholestasis Induced by Bile Duct Ligation in Rats

Objective The aim of our study was to assess the complications of hepatic fibrosis associated with bile duct ligation and the potential curative role of sepia ink extract in hepatic damage induced by bile duct ligation.
Methods Rattus norvegicus rats were divided into 3 groups: Sham-operated group, model rats that underwent common bile duct ligation (BDL), and BDL rats treated orally with sepia ink extract (200 mg/kg body weight) for 7, 14, and 28 d after BDL.
Results There was a significant reduction in hepatic enzymes, ALP, GGT, bilirubin levels, and oxidative stress in the BDL group after treatment with sepia ink extract. Collagen deposition reduced after sepia ink extract treatment as compared to BDL groups, suggesting that the liver was repaired. Histopathological examination of liver treated with sepia ink extract showed moderate degeneration in the hepatic architecture and mild degeneration in hepatocytes as compared to BDL groups.
Conclusion Sepia ink extract provides a curative effect and an antioxidant capacity on BDL rats and could ameliorate the complications of liver cholestasis.     

四氯化碳、酒精与四氯化碳联合、胆管结扎致SD大鼠肝纤维化病理学比较

目的 研究四氯化碳、酒精与四氯化碳联合、胆管结扎致SD大鼠肝纤维化模型肝脏的病理学改变,初步探讨肝纤维化发病机制.方法 四氯化碳组SD大鼠以3 mg/kg的剂量(首次剂量加倍)皮下注射50％四氯化碳(四氯化碳∶橄榄油=1∶1),每周2次,连续注射6周;酒精与四氯化碳联合组SD大鼠每日按照10 mL/kg剂量灌服酒精混合物(酒精∶吡唑∶玉米油=10 mL∶25 mg∶2 mL),同时每周2次按0.3 mL/kg剂量给予腹腔注射四氯化碳:橄榄油(1∶3),连续造模60 d;胆管结扎组大鼠按10 mg/kg体重腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉,腹部皮肤消毒,无菌操作沿腹部正中线剪开腹腔,分离出胆管,在胆管近端和远端2处结扎胆管,28 d后结束实验.试验结束后麻醉动物,解剖取动物肝脏组织,用10％福尔马林固定,进行病理学检查.结果 四氯化碳致SD大鼠肝纤维化模型表现为弥漫性脂肪肝、肝炎、肝纤维化;酒精与四氯化碳联合致SD大鼠肝纤维化模型表现为酒精性脂肪肝、肝炎、肝纤维化;胆管结扎致SD大鼠肝纤维化模型表现为胆管增生、肝炎、肝纤维化.结论 这3种方法都可以引起大鼠肝脏发生纤维化,其中胆管结扎致SD大鼠肝纤维化造模方法适合于临床胆汁淤积所致肝纤维化的模型建立,其它两种方法适合于化学性、病毒性肝炎引起的肝纤维化模型的建立,可根据不同的实验目的选择不同的方法构建相应的动物模型.     

梗阻性黄疸大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白和肿瘤坏死因子-α的表达

[目的]探讨梗阻性黄疸大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其意义.[方法]采用胆总管结扎法建立梗阻性黄疸大鼠模型,4周后检测大鼠肝组织羟脯氨酸、透明质酸和层黏连蛋白的含量,观察肝组织的病理变化,并采用免疫组织化学染色方法观察大鼠肝组织中TNF-α和HSC标志物-αSMA的表达情况.[结果]胆总管结扎组与假手术对照组比较,大鼠肝组织中羟脯氨酸、透明质酸和层黏连蛋白的含量均明显增高,肝组织内可见大量胆管及纤维组织增生,纤维间隔形成,多数大鼠形成胆汁性肝硬化.胆总管结扎组大鼠肝组织内-αSMA阳性细胞主要分布在增生的胆管周围、纤维组织及间隔内,TNF-α阳性表达的肝细胞呈散在分布.[结论]梗阻性黄疸大鼠肝组织中羟脯氨酸、透明质酸和层黏连蛋白含量明显升高,可见TNF-α在肝细胞中表达,而TNF-α及α-SMA阳性细胞的分布特征不相同.     

大鼠免疫性与淤胆性肝纤维化发病机制比较

目的大鼠肝脏长期暴露于猪血清后可出现免疫损伤及随后发生的肝纤维化,而胆总管结扎后亦可诱导大鼠发生胆汁淤积性肝损伤,最终发生肝纤维化。这两种损伤后肝脏纤维化的发生、发展及机制均不同。本研究比较这两种不同处理后肝脏损伤的发生发展,探讨炎症与纤维化形成之间的关系。方法(1)通过给大鼠腹腔注射猪血清(IPS)(3ml/kg,1次/周,连续12周)诱导慢性肝纤维化(IPS组)。通过结扎胆总管诱导急性淤胆性肝纤维化(BDL组);(2)采用Knodell组织学评分评价肝脏组织学改变;(3)采用抗αSMA抗体、抗ED1抗体、抗CK7抗体、抗CD45抗体对肝脏进行免疫荧光染色;(4)采用实时定量PCR技术分别检测肝脏中与炎症相关的细胞因子,包括白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板衍生生长因子A(PDGF-A);与纤维化相关的细胞因子,包括I型胶原蛋白(col-1)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属...     

CD24 通过调节肝内Ly6Clo 巨噬细胞亚群中PDGF-B 的 分泌抑制肝纤维化进程

目的:探讨CD24 分子在胆总管结扎（BDL）诱导的小鼠胆汁淤积型肝纤维化中对肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群的调节以及 分泌PDGF-B的影响。方法:建立小鼠胆总管结扎诱导的肝纤维化模型,将野生型（WT）与CD24 基因敲除（CD24-/-）雌性小鼠随 机分为造模组（BDL）与假手术组（Sham）,每组5只,造模组进行胆总管结扎,假手术组与造模组手术处理相同但不结扎胆总管。 术后7 d 应用HE 和天狼星红（Sirius Red）染色分析小鼠肝组织病理变化和肝纤维化程度,定量-PCR（Q-PCR）和Western 印迹 检测肝内α-SMA 等纤维化因子的表达,流式细胞术分析CD24 分子在肝内巨噬细胞亚群中的表达,共培养实验检测肝内星状 细胞中纤维化因子的变化。结果:两种基因背景小鼠的假手术组无病理表现,在造模组中,CD24-/-小鼠与WT 小鼠相比肝纤维化 明显加重,表现为肝汇管区炎性细胞浸润增多,α-SMA 等肝纤维化标志物的表达升高。流式分析结果显示,CD24 分子在肝内 Ly6Clo 巨噬细胞亚群上高表达,在造模组中,CD24-/-鼠造模后肝内Ly6Clo 巨噬细胞亚群比例[（65.05±0.250）%]高于WT 鼠 [（52.55±2.950）]%,差异有统计学意义（P<0.05）。进一步研究发现:PDGF-B 在肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群高表达,并且在CD24-/- 小鼠中的表达明显高于WT小鼠,差异有统计学意义（P<0.000 1）。结论:CD24分子可通过调节肝内Ly6Clo巨噬细胞亚群中PDGFB 分泌减缓肝纤维化进程。     

SD大鼠胆汁淤积性肝纤维化动物模型的建立与评价

目的通过胆管结扎法建立胆汁淤积性肝纤维化动物模型,并对模型进行评价与探讨。方法选用禁食12h、能自由饮水的SD雄性大鼠,腹腔麻醉后,分离胆管,以丝线两处剪断1cm结扎胆管,分别于0、2、4、6、8周测定大鼠体质量、肝脏质量、肝功能、肝纤维化酶谱,镜下观察肝脏组织学及超微结构的改变,并设立假手术组和对照组。结果 4～6周后,模型组大鼠体质量及肝脏质量较假手术组和对照组明显下降(P<0.05),肝脏湿质量明显下降(P<0.05),造模第2周即可见肝功能及肝纤维化酶谱较0周时明显升高(P<0.05),病理切片可见肝组织结构明显破坏,大量炎细胞浸润、胶原纤维增生及假小叶形成。结论胆汁淤积性肝纤维化模型造模方法简单,形成周期短,是一种稳定且可靠的肝纤维化研究模型。     

维生素D受体激活对小鼠胆管结扎所致肝纤维化的影响及其机制

目的：探讨维生素D受体（VDR）激活对胆总管结扎（BDL）诱导小鼠肝纤维化的保护作用,并阐明其作用机制。方法：将60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、假手术后给药组、模型组和治疗组,每组15只。假手术组小鼠开腹但不结扎胆总管,模型组小鼠双线结扎胆总管并中间离断,假手术后给药组和治疗组小鼠手术前3 d腹腔注射VDR激动剂帕立骨化醇（200ng·kg^-1,每周3次）,术后继续给药5 d。术后第5天取小鼠肝脏,采用HE染色和天狼猩红染色观察小鼠肝组织病理形态表现和肝纤维化程度。二氢乙啶（DHE）染色检测小鼠肝组织活性氧（ROS）水平。Western blotting法检测小鼠肝组织中沉默交配型信息调节3（Sirt3）、8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1（OGG1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（Col Ⅰ）表达水平。结果：HE染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝细胞形态结构完整,无炎性细胞浸润;模型组小鼠组织中出现大量浸润的炎性细胞、点状样灶状坏死区,在肝小叶之间出现条索状的胶原沉积;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织坏死灶面积明显缩小,炎症细胞浸润明显改善。天狼猩红染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝组织中仅大胆管周围存在少量的纤维化;模型组小鼠肝组织汇管区胶原沉积明显;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中胆管周围胶原沉积减少。DHE染色,假手术组和假手术后给药组小鼠肝组织中,仅在汇管区存在少量的红色荧光;模型组小鼠肝组织中,汇管区及大胆管周围呈现出明显增多的红色荧光;与模型组比较,治疗组小鼠红色荧光的强度降低。Western blotting法检测,与假手术组和假手术后给药组比较,模型组小鼠肝组织中Sirt3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,OGG1、α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中Sirt3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,OGG1、α-SMA和Col Ⅰ蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：VDR激活通过上调Sirt3蛋白降低氧化应激导致的肝星状细胞（HSC）激活,缓解胆汁淤积性肝纤维化。     

胆总管结扎引起胆汁淤积对小鼠肝脏细胞增殖的影响

目的：探讨胆总管结扎引起的胆汁淤积对小鼠肝脏增殖的影响．方法：采用胆总管结扎手术制备胆汁淤积小鼠模型；利用全自动生化分析仪检测小鼠血清肝脏生化指标水平；用免疫组织化学方法检测小鼠肝脏中增殖相关的指标的表达情况．结果：通过胆总管结扎手术成功制备了梗阻性胆汁淤积小鼠模型；小鼠血清生化指标以及病理组织学变化表明小鼠肝脏功能受损，胆总管结扎手术成功；胆总管结扎引起胆汁淤积后，肝脏细胞有丝分裂相增加，肝细胞和胆管细胞中增殖相关的标志物表达升高，表明细胞增殖活性增强．结论：胆总管结扎引起的胆汁淤积可以引起肝脏细胞以及胆管上皮细胞的增殖．