高脂血症长爪沙鼠转录组的初步检测及代谢性炎症通路的研究

目的　为了弄清饮食诱发的高脂血症长爪沙鼠模型的关键基因及代谢性炎症通路调控网络。方法 利用RNA-Seq测序技术及生物信息学技术对正常组与模型组两个RNA池进行测序和分析。结果　De novo拼接后获得有效长爪沙鼠基因47522个（即>=100bp的unigene）,大小26.9Mb,与GenBank上现在的基因比对结果表明,约82.53%的序列与基因组上的外显子序列同源;诱发高脂血症与正常动物之间共获得21,125 差异基因,其中16087个下调 ,5038个上调,总体上模型组相对于正常组存在较显著的趋势性下调关系（p<0.01）。其中与长爪沙鼠高脂血症代谢性炎症密切相关的通路有8个（p<0.01）,这8个通路所表达的基因中有15个与免疫和炎症相关的基因均显著下调（p<0.01）。结论　RNA-Seq测序和生物信息技术可以作为研究高脂血症动物模型的整体基因转录情况的有力工具,本实验筛选出的关键基因和通路可作为下一步研究的候选基因或操作靶点。     

长爪沙鼠高脂血症的初步研究

目的 初步建立长爪沙鼠自发型高脂血症模型的血清脂蛋白琼脂糖电泳检测方法和肠菌PCR-DGGE检测方法,用于今后评价沙鼠高脂血症模型.方法 选取444只长爪沙鼠,按性别年龄分组后CO2麻醉,取血液及肝脏标本,用于血清转氨酶、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）等指标的检测以及肝脏病理学的观察,血清脂蛋白电泳（琼脂糖电泳）进行高脂分类;取小肠、盲肠内容物用PCR-DGGE技术进行肠道微生物多样性检查,同时参照人类的高脂血症分类标准,对高龄组（平均12.81月龄）个体进行了高脂血症的分型.结果 约有10％～30％高龄组沙鼠其血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、TG、TC、血糖（GLU）等指标明显高于低龄组（平均4.72月龄）沙鼠.病理学检查发现,高龄组肝脏出现较为明显的脂肪变性,而低龄组鼠肝脏无异常发现.DGGE结果表明,高龄组与低龄组沙鼠呈现出不同的带谱,后者条带数明显多于前者.高龄鼠从血脂指标上可分为五种类型,以对应于人的Ⅱ a、Ⅱ b、ⅢⅡ、Ⅳ、Ⅴ.结论 高沙鼠的自发性高脂血症或可以作为一个潜在的模型研究,琼脂糖电泳法和PCR-DGGE法或可作为评价高脂血症沙鼠模型的补充方法.     

长爪沙鼠的高脂血症与动脉粥样硬化相关性分析

目的探讨沙鼠高脂血症与动脉粥样硬化的相关性。方法用含l％胆固醇＋10％猪油＋10％蛋黄粉的高脂饲料饲养沙鼠120d，检测血清总胆固醇（Tc），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c），血清甘油三酯（TG）的变化，在120d时处死动物，取各组织作形态学观察。结果高脂组沙鼠的TC、HDL-c、LDL-c的值一直都明显高于对照组，以LDL-c升高为主，且出现了严重的脂肪肝，肝硬化，脾脏肿大和主动脉根部粥样硬化。结论加重高脂血症的程度能导致长爪沙鼠形成动脉粥样硬化的病理改变，沙鼠可能是一种适合研究脂肪肝的实验动物。     

长爪沙鼠ApoE基因SNPs遗传多态性的研究

目的　为了评价ApoE基因在Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群中的遗传多样性。方法 利用PCR-SSCP技术对前期已筛选到的三个SNP（single nucleotide polymorphism）位点在普通级和清洁级两个封闭群共444只动物中进行了ApoE等位基因的基因频率,基因型频率,杂合度、多态信息量等参数进行了检测与计算。结果　检测结果表明97、781和1774三个SNP位点平均等位基因为2个,遗传方式基本符合孟德尔定律;期望杂合度分别是0.063,0.501,0.499,全群平均为0.354;PIC分别是0.061,0375,0.374,全群平均0.270。　结论　ApoE基因频率和基因型分布可能与长爪沙鼠的长期封闭和选种方式造成一定程度的遗传漂变相关。     

长爪沙鼠速发型高脂血症模型的初步建立

目的建立长爪沙鼠速发型高脂血症模型的方法。方法用含1%胆固醇高脂饲料分别饲养大鼠、小鼠和沙鼠,检测其血清TC、HDL-c、LDL-c、TG,比较三种动物对饲料反映的特点。结果沙鼠组的TC、HDL-c及LDL-c在第1周时明显的升高,并且平稳的保持此升高趋势到第四周。而TG数值相对平稳,没有变化。而大鼠和小鼠的TC、HDL-c、LDL-c、TG值没有变化。结论通过饲喂高脂饲料可快速诱发长爪沙鼠形成高脂血症模型。     

长爪沙鼠T淋巴细胞参考值的初步探讨

用非特异性酸性α-乙酸萘酯酶(ANAE)法测定了30只健康的成龄长爪沙鼠循环血,其T淋巴细胞值为68.3±2.02,可初步作为长瓜沙鼠免疫功能指标,并提出ANAE反应物形态数量、大小等与细胞发育阶段关系的见解。     

旋毛虫感染长爪沙鼠的实验研究

目的 探讨用蒙古长爪沙鼠建立旋毛虫动物模型及最佳感染幼虫数。方法 取含旋毛虫幼虫的沙鼠肌肉压片计数，按50、80、100、150、200、300条幼虫／只喂饲长爪沙鼠，观察其发病及死亡情况，并以同样数量喂饲小白鼠作对照组。结果 ①用长爪沙鼠建立动物模型感染所需的最适旋毛虫幼虫数为80条／只。②沙鼠感染超过150条／只，则在感染后45d内全部死亡，而小白鼠喂饲300条／只旋毛虫幼虫几乎无任何症状。结论 长爪沙鼠不仅可以作为旋毛虫病的动物模型，且症状典型，故用长爪沙鼠建立旋毛虫的动物模型进行教学及科研较为合适，小白鼠则更适合保种。     

长爪沙鼠原位肝移植模型的建立

目的建立长爪沙鼠原位肝移植模型的方法与技术。方法用改良的双套管法行100对长爪沙鼠原位肝移植手术,门静脉、肝下下腔静脉行套管吻合,而肝上上腔静脉采用缝合法,胆管内支架法完成胆道重建。结果在手术成熟后,供体手术时间为34.56±5.12 min,修肝及安置套管时间为15.43±2.75 min,受体手术时间为58.37±8.54 min,其中无肝期为23.66±4.47 min。手术成功率为86.67%(术后存活6 h以上)。结论改良的双套管法成功建立了长爪沙鼠肝移植模型,通过手术技巧训练可提高手术成功率,延长爪沙鼠存活时间。     

长爪沙鼠生物净化的研究

通过剖腹取胎,用SPF昆明小鼠代乳仔沙鼠,培育SPF沙鼠核心群,然后扩大清洁沙鼠生产群,繁殖的清洁级沙鼠,供出血热疫苗研制用。     

长爪沙鼠精子的显微结构观察

目的　观察长爪沙鼠精子的形态和结构。方法　应用光学显微镜、透射电镜和扫描电镜进行观察。结果与结论　长爪沙鼠精子由头、颈、尾三部分组成 ,全长为 ( 15 6 3 2± 6 61) μm ,头长为 ( 10 4 3± 2 12 ) μm ,颈、尾部长为 ( 14 5 89± 5 14 ) μm ,具典型的啮齿类动物的精子形态 ;长爪沙鼠精子的尾部轴丝是 9+ 2模式 ,轴丝外围有 9条大小、形态不一的外周致密纤维 ,外周致密纤维从主段到末端逐渐变细 ,并在主段的近末端处分 4批终止 ;主段的纤维鞘具有腹侧纵柱、背侧纵柱、内嵴等结构。在精子尾部的末段 ,外层仍保留有纤维鞘的结构 ,但无外周致密纤维 ,轴丝仍然为 9+ 2模式     

长爪沙鼠ApoE基因SNPs的遗传多态性

目的评价ApoE基因在Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群中的遗传多样性。方法利用PCR-SSCP技术对前期已筛选到的三个SNP(single nucleotide polymorphism)位点在普通环境和生物净化后、屏障环境饲养的两个封闭群共444只动物中进行了ApoE等位基因的基因频率,基因型频率,杂合度、多态信息量等参数进行了检测与计算。结果检测结果表明97、781和1774三个SNP位点平均等位基因为2个,遗传方式基本符合孟德尔定律;期望杂合度分别是0.063、0.501、0.499,全群平均为0.354;PIC分别是0.061、0375、0.374,全群平均0.270。结论 ApoE基因频率和基因型分布可能与长爪沙鼠的长期封闭和选种方式造成一定程度的遗传漂变相关。     

种间转移扩增法筛选长爪沙鼠微卫星位点

目的筛选长爪沙鼠新的微卫星位点,为长爪沙鼠遗传分析提供遗传标记物。方法从GenBank中随机选取小鼠微卫星位点引物536对,用这些引物对长爪沙鼠基因组DNA扩增,将阳性目的条带进行序列分析,找出符合微卫星序列特征的短串联重复序列。结果 536对小鼠微卫星引物在长爪沙鼠基因组中扩增出了313个阳性条带,经序列分析,确定130个长爪沙鼠微卫星位点;其中完美型位点占80.77%(105/130),不完美型位点占19.23%(25/130),与小鼠同源性为24.3%(130/536)。将筛选出的微卫星位点在GenBank中注册,注册号从GU562694到GU562823。结论小鼠和沙鼠的微卫星位点具有较高的同源性,用小鼠的微卫星位点引物直接扩增长爪沙鼠基因组DNA可有效地筛选出长爪沙鼠微卫星位点。     

PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案的优化

目的：优化PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案。方法通过对动物周龄、激素剂量和间隔时间等系统研究,优化出用于长爪沙鼠超数排卵的最佳动物周龄、激素组合剂量和间隔时间。结果对6周龄长爪沙鼠使用10单位激素计量及间隔70 h可以获得最佳超数排卵效果。在合笼16 h后80％的动物得以排卵,获卵数为32.6±3.0枚／只,其中24.8±5.4枚／只可以发育至二细胞胚胎。结论本研究获得了利用PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵的优化方案,为长爪沙鼠胚胎生物技术研究奠定了基础。     

长爪沙鼠发情周期规律与判定方法

目的 研究长爪沙鼠发情周期,揭示发情规律,优化判定方法。方法 连续18 d采集50只长爪沙鼠阴道上皮脱落细胞涂片,采用角化细胞计数法研究长爪沙鼠发情周期规律。比较瑞氏染色、HE染色和直接镜检判定发情周期4个时相的优缺点。结果 长爪沙鼠的发情周期有稳定型、不稳定型、假孕三种类型。其中稳定型占68.6%,发情周期为（106.3±35.0）h,可分为4个时相。4个时相角化细胞的比例分别为发情前期（13.5±7.8）%、发情期（86.7±9.9）%、发情后期（27.9±12.8）% 和发情间期（3.3±2.8）%。结论 角化细胞计数能准确地判定长爪沙鼠的发情周期及各个时相。直接镜检法能快速反映阴道脱落细胞的形态。     

不同幽门螺杆菌临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1增殖和凋亡的影响及其致癌性的研究

目的:比较不同幽门螺杆菌(H.pylori)临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1细胞增殖、凋亡的影响,了解不同毒力菌株对胃黏膜的影响及致癌性.方法:选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各10例分别与GES-1细胞以不同浓度比例共培养,在不同时间点进行MTT和流式细胞仪检测,筛选出对GES-1细胞的增殖影响最大(A菌株)和最...     

蒙古族人群炎症标志物与不同亚型高血压的关系

目的 探讨蒙古族人群血管炎症标志物水平与不同亚型高血压的关系.方法 以年龄≥20岁蒙古族居民作为研究对象,采取调查问卷方式收集人口统计学特征和生活方式危险因素资料,测量身高、体质量和血压,检测血脂、血糖、胰岛素和炎症标志物等指标水平.采用单因素方差分析和多因素协方差分析方法研究炎症标志物水平与单纯收缩期高血压 (ISH)、单纯舒张期高血压(IDH)和复合型高血压(SDH)的关系.结果 经年龄与性别调整后,各亚型组C-反应蛋白(CRP)水平显著高于正常组,ISH组和SDH组的血清可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1水平高于正常组,IDH和SDH组的可溶性E选择素(sE-selectin)水平高于正常组(均P＜0.05);经多因素调整后,ISH组[lnCRP1.99(1.86～2.12),P=0.075]和SDH组[lnCRP1.95(1.89 ～2.02),P＜0.05]的CRP水平高于血压正常组[lnCRP1.86(1.83 ～ 1.90)],IDH组的sICAM-1水平[313.21 (301.16 ～325.26) μg/L]低于血压正常组[328.65 (323.68～ 333.61) μg/L](P＜0.05),IDH组的sE-selectin水平[lnE-selectin3.03(2.98 ～ 3.08)]高于血压正常组[lnE-selectin2.96(2.94 ～2.98)] (P ＜0.05).结论 CRP与ISH关系更密切,sE-selectin与IDH关系更密切.     

鼠肝炎病毒在长爪沙鼠消化系统的分布及其组织病理学改变

目的弄清鼠肝炎病毒感染长爪沙鼠后所引起的消化道病理变化及其在消化道分布的情况。方法取4个年龄段的普通级长爪沙鼠，利用MHV（murine hepatitis vires，MHV）免疫组织化学方法，结合血清学检测（间接ELISA法）结果对其进行了全面的研究。结果全部血清学阳性的沙鼠均出现肝脏的灶性坏死，肝细胞界限不清晰，细胞核大小不一，部分细胞崩解，并可见到合胞体。MHV阳性细胞主要分布在肝血窦内皮细胞、枯否氏细胞、MHV阳性肝细胞的数量较少，呈现分散分布，阳性细胞内可见大小一致的MHV阳性颗粒，未见形成明显的包涵体结构。部分胃黏膜上皮及腺上皮脱落，MHV阳性反应呈局灶性分布于胃底腺颈部和胃底腺间的结缔组织，阳性细胞主要为胃底腺颈部的胃底腺主细胞。肠道的病变主要表现在固有层内的淋巴细胞浸润，以结肠和盲肠部分较为明显。结论普通环境饲养的实验长爪沙鼠对鼠肝炎病毒易感，该病毒感染可引起实验长爪沙鼠肝、胃、结肠和盲肠等器官的病理变化，病毒主要分布在肝血窦内皮细胞、枯否氏细胞和胃肠黏膜上皮中。利用免疫组织化学技术检测长爪沙鼠的消化系统的病理变化可作为诊断和检测长爪沙鼠鼠肝炎病毒感染的有效方法之一。     

高脂饮食对长爪沙鼠生化及主要脏器组织病理学的影响

目的研究长期高脂饮食对长爪沙鼠生化及主要脏器组织病理学的影响。方法 48只长爪沙鼠随机分为模型组和正常组,每组24只,模型组予高脂饮食喂养,正常组予基础饲料喂养,两组分别于4周、8周及16周时各处理沙鼠8只,比较两组体重、血糖(Glu)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿酸(UA)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBil)、淀粉酶(AMS)水平及主要脏器组织病理学的变化。结果和正常组比较,模型组沙鼠血脂明显升高,肝功能受损,血尿酸升高,16周时血糖明显降低,AMS升高,肾功能则无明显变化。肝组织逐渐出现脂肪变、炎症、肝纤维化及肝硬化,并伴有脾大,肺组织和心肌在后期均出现脂肪变性,损伤明显,胰岛增大伴内分泌细胞增多,小肠和肾脏无明显变化。结论高脂饮食喂养的沙鼠可复制良好的高脂血症、非酒精性脂肪性肝炎肝硬化模型,并且有可能是高脂血症相关的高尿酸血症、肺损伤及心肌损伤等疾病的良好模型。