低氧与白血病细胞分化、凋亡

造血是一个精细的调控过程，骨髓中不成熟的祖细胞最终分化成熟进入外周血。大多数外周成熟的血细胞如中性粒细胞的生存期较短，以严格地调控其在外周血的正常数量。这就需要造血祖细胞适度的增殖、分化成熟或发生凋亡。造血祖细胞上造血基因精细的协调的相互作用构成了这一复杂的造血过程。白血病是由于基因突变所致的一组恶性造血性疾病，基因突变解除了增殖抑制，使细胞分化受损，造血祖细胞存活。如急性髓细胞白血病（AML）是髓系祖细胞完全或部分阻滞于分化／成熟的不同阶段，细胞在这些阶段发生基因突变，特别是不同类型的特异性的染色体易位，常导致异常的融合蛋白的产生。     

小蘖胺对小鼠升白细胞作用机理的研究

本文采用小鼠体内扩散盒及脾结节法,结合骨髓有核细胞计数,探讨了小蘖胺对小鼠骨髓白细胞系造血功能的影响.该药能显著提高小鼠骨髓有核细胞数,量效关系显著,促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的集落生成率.认为其作用机理与促进骨髓造血干细胞及粒系祖细胞的增殖、分化有关.     

RunX3对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的研究RunX3基因对造血干细胞自我更新和分化能力的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测RunX3转基因小鼠骨髓干细胞的功能。结果移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血细胞占总外周血细胞的比例与野生对照鼠相比无明显差异,移植后来源于RunX3-/-小鼠骨髓干细胞供体的外周血中髓系细胞占总外周血髓系细胞的比例较野生型对照鼠高。结论RunX3基因缺失对骨髓造血干细胞的自我更新没有影响,但其可能参与了骨髓造血干细胞的分化过程。     

融合蛋白IL6/IL2在髓系-NK起始细胞(ML-IC)分析体系中对 NK细胞分化、增殖的影响

目的建立完善的造血干细胞体外培养及分析体系,用来研究比长期培养起始细胞(LTC-IC)更为原始的造血干祖细胞.在此基础上,研究更适合于NK细胞的分化、培养介质.方法构建并表达FPIL6/IL2,采用髓系-NK起始细胞体外培养、分析体系,通过观察培养后单细胞是否能同时向髓系及NK细胞分化,来判断此单细胞是否为髓系-NK起始细胞,即髓系-淋系起始细胞(myeloid-lvmphoid initiating cell,ML-IC).髓系检测指标是以祖细胞造血集落形成(CFC)法检测LTC-IC.NK细胞的检测指标是以FACS法检测CD56+NK细胞集落.通过观察培养后NK细胞集落数目的变化,研究FPIL6/IL2对NK-IC分化、增殖的影响.结果经过起始4周的培养后,实验组中(25.75±5.68)%的细胞能够在一个或更多的二级培养体系中产生功能性NK-IC细胞,而对照组为(6.81±1.97)%,经过6～7周的培养后,实验组共检测出102个NK-IC细胞,而对照组为33个,实验组较对照组明显扩增.结论髓系-NK起始细胞体外培养、分析体系能同时定量及定性研究造血干细胞的分化及增殖.FPIL6/IL2能明显促进ML-IC向NK祖细胞分化并在较长时间内维持其祖细胞的自我保留作用并能促进其进一步增殖.     

小鼠颌下腺组织培养上清液影响红系造血的实验研究

为了研究颌下腺是否合成造血因子以及合成的造血因子的可能种类 ,进一步研究颌下腺对血发生的调控 ,采用造血祖细胞体外培养和流式细胞术检测细胞表面标记物。结果显示 ,小鼠颌下腺组织培养上清液(SGCM)在体外培养中 ,对早期和晚期红系造血祖细胞有促进增殖和分化的作用 ,实验组集落数远远高于阴性对照组 (P<0 .0 5 ) ;晚期红系祖细胞 (CFU- E)培养体系雄性小鼠颌下腺组织培养上清液组集落数明显高于雌性组 (P<0 .0 5 ) ,早期红系祖细胞 (BFU- E)培养体系没有明显差异 (P>0 .0 5 ) ,贫血模型小鼠颌下腺促进 BFU- E和 CFU- E增殖和分化的活性高于正常小鼠 (P<0 .0 5 ) ,IL- 3与 SGCM有协同刺激作用 ,说明小鼠颌下腺确能合成和分泌促进红系造血的细胞因子 ,雄性小鼠颌下腺促进 CFU- E增殖和分化细胞因子的活性高于雌性小鼠。本实验为进一步研究小鼠颌下腺合成造血因子和其与造血调控的关系提供了实验依据。     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

Cramp过表达对小鼠骨髓造血干细胞功能的影响

目的 研究Cramp蛋白过表达对小鼠骨髓造血干细胞自我更新和分化能力的影响.方法 应用流式细胞仪分析Cramp过表达转基因小鼠及同龄野生型小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例;分选 骨髓造血干细胞,体外培养,观察其克隆形成能力.结果 与野生型小鼠相比,Cramp过表达转基因小鼠的骨髓、脾脏、胸腺等组织器官中各种细胞的比例、骨髓造血干细胞的克隆形成能力等均无明显变化.结论 本研究中,Cramp过表达转基因小鼠骨髓造血干细胞的分化能力、克隆形成能力无明显变化.     

无细胞胎肝液对大剂量化疗后小鼠骨髓造血细胞的影响

采用小鼠体内液体扩散盒及脾结节法观察了胎鼠和成年小鼠肝脏无细胞液对大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓造血细胞增殖与分化的影响。发现无细胞胎肝液能明显促进受抑制骨髓中多能造血干细胞(CFU—S)的集落形成率,但对扩散盒内粒系祖细胞(CFU—D)的增殖分化无促进作用。成年鼠肝无细胞液则对造血细胞的增殖无刺激活性,不能促进化疗后小鼠骨髓中造血干细胞恢复。认为无细胞胎肝液中存在的造血刺激因子能有效缓解细胞毒剂对骨髓多能造血干细胞的抑制。     

小鼠骨髓基质细胞形态及其对造血的调控

应用体外骨髓基质细胞贴壁培养的方法,观察了小鼠骨髓贴壁细胞的形态及其对造血的调控作用。结果表明,两类大小、形态、吞噬功能及组化染色有所差异的基质细胞群体分别具有巨噬细胞和成纤维细胞样特征。贴壁细胞对粒—单系祖细胞的增殖表现为明显的刺激作用,而对多能造血干细胞无明显调控。提示骨髓基质细胞在造血祖细胞阶段的分化增殖过程中具有一定作用。     

用胚胎干细胞诱导的造血干/祖细胞重建小鼠造血功能研究

目的 胚胎干细胞体外诱导分化出现CD34^ 造血干/祖细胞，然后将其注射入致死量照射小鼠体内，以研究其重建造血功能。方法 胚胎干细胞自由分化形成胚胎体后，加入造血刺激因子混合液以诱导产生CD34^ 造血干／祖细胞，将这些造血干／祖细胞注射入经致死剂量照射的小鼠，观察小鼠存活率的改变，并取存活2个月的小鼠骨髓和脾脏，PCR检测嵌合体形成。结果 体外分化第13日CD34^ 造血干／祖细胞比例可高达17．36％，将这些细胞注射入致死量照射小鼠后，可提高存活率达86．67％，存活小鼠的骨髓和脾脏均检测到供体来源的细胞。结论 胚胎干细胞体外分化获得CD34^ 造血干/祖细胞，且后者具有其相应的正常生物学功能。     

罗汉果和熟地增加小鼠造血干细胞的数量和功能

目的罗汉果和熟地具有增强机体免疫力,延年益寿的作用。本文研究罗汉果和熟地对造血干细胞的影响。方法各组小鼠连续喂养罗汉果或熟地3个月,流式细胞仪测量小鼠的外周血、脾脏和骨髓中免疫细胞和造血干细胞的变化;小鼠用半致死剂量的放射线照射后,连续喂养罗汉果或熟地1个月后,流式细胞仪测量罗汉果或熟地对于免疫细胞和造血干细胞损伤修复的作用。结果分析检测结果发现,与对照组相比,长期喂养罗汉果或熟地的小鼠骨髓和外周血中B细胞的比例降低,粒细胞的比例增加,T细胞没有明显变化;骨髓中造血干细胞的数量增加,尤其是长期造血干细胞数量增加显著。半致死剂量的放射线照射后,罗汉果或熟地喂养1个月,小鼠的粒细胞和T细胞都有明显的改善,造血干细胞的数量明显增加。结论罗汉果或熟地长期服用会增加小鼠造血干细胞的数量和功能,促进了辐射所致的骨髓抑制小鼠的造血干细胞的恢复。     

枸杞对小鼠辐射损伤后造血系统修复的促进作用

目的 探讨枸杞在小鼠辐射损伤后造血系统修复过程中的作用。方法 小鼠随机分为3组,正常对照组不做任何处理,喂饲正常饲料;另外2组,给予4.5 Gy照射后,喂饲正常饲料或添加枸杞的饲料,1个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种血细胞。结果 枸杞饲料组小鼠,外周血细胞总数及B细胞增多,骨髓细胞总数减少,骨髓前体B细胞及未成熟B细胞增多,造血干、祖细胞均显著减少。结论枸杞促进辐射损伤后造血干细胞动员及分化,加速造血系统的恢复。     

长期食用何首乌对小鼠造血系统的影响

目的探讨长期食用何首乌后,小鼠造血系统的变化。方法小鼠随机分为2组,对照组,喂饲正常饲料;何首乌饲料组,喂饲添加何首乌的饲料,10个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种细胞。结果何首乌饲料组小鼠,脾脏B细胞增多,胸腺CD4+细胞增多,CD8+细胞减少;骨髓造血干细胞显著减少,其中静止期细胞增多,增殖分裂期细胞减少。结论长期适量食用何首乌有助于减缓小鼠造血系统的衰老,维持造血系统稳定。     

ApoE基因敲除对小鼠B、T淋巴细胞的影响

目的了解Apo E基因敲除对淋巴细胞的影响。方法用不同抗体标记Apo E基因敲除及同窝野生对照小鼠的外周血、脾脏、骨髓等细胞,应用流式细胞仪进行分析,比较两组之间的差异。结果对检测结果进行统计分析发现,与野生型小鼠相比,Apo E基因敲除小鼠的外周血、脾脏淋巴细胞、短期造血干细胞均有改变,骨髓前体B淋巴细胞、胸腺T淋巴细胞、长期造血干细胞等没有显著变化。结论 Apo E基因敲除后,小鼠外周血及脾脏B淋巴细胞减少,骨髓短期造血干细胞增加,但B及T淋巴细胞发育,以及骨髓长期造血干细胞、淋系共同祖细胞都没有显著变化。     

干细胞因子与白介素-3联合对小鼠骨髓细胞体外扩增作用及其造血重建的影响

采用集落培养的方法研究了干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ） 联合白介素 ３（ Ｉ Ｌ ３） 对小鼠５ 氟尿嘧啶（５ Ｆ Ｕ ） 处理３ ｄ 的骨髓细胞（ｄ３ ５ Ｆ Ｕ Ｂ Ｍ Ｃ） 的体外扩增作用及其对致死量照射小鼠造血重建功能的影响。 Ｓ Ｃ Ｆ 单独应用使体系中粒 巨噬细胞集落形成单位（ Ｇ Ｍ Ｃ Ｆ Ｕ） 和高增殖潜能集落形成单位（ Ｈ Ｐ Ｐ Ｃ Ｆ Ｕ） 分别增加了（２４ ．２ ±６ ．１） 和（１ ．５ ±０ ．３） 倍（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。 Ｓ Ｃ Ｆ 与 Ｉ Ｌ ３ 联合应用时 Ｇ Ｍ Ｃ Ｆ Ｕ 和 Ｈ Ｐ Ｐ Ｃ Ｆ Ｕ 分别是新鲜ｄ３ ５ Ｆ Ｕ Ｂ Ｍ Ｃ 的（３０ ．５ ±９ ．５） 和（１３ ．６ ±４ ．５）倍（ 与单用 Ｓ Ｃ Ｆ 组比较 Ｐ 分别大于和小于０ ．０５） 。小鼠骨髓移植实验结果表明： Ｓ Ｃ Ｆ、 Ｓ Ｃ Ｆ＋ Ｉ Ｌ ３ 体外扩增的ｄ３ ５ Ｆ Ｕ Ｂ Ｍ Ｃ 移植给经致死量照射的受体小鼠后,外周血细胞计数恢复时间比输新鲜ｄ３ ５ Ｆ Ｕ Ｂ Ｍ Ｃ 组缩短１ ～５ ｄ , Ｓ Ｃ Ｆ＋ Ｉ Ｌ ３组不仅血细胞计数恢复最快,并使移植所需的骨髓细胞数减少９０ ％ 以上。结果提示： Ｓ Ｃ Ｆ 单用对骨髓细胞有扩增作用,并且与 Ｉ Ｌ ３ 有协同作用;体外扩增的骨髓?     

刺梨汁对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的 探讨刺梨汁对环磷酰胺合并⁶⁰Co致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,研究其促进血细胞上调的作用机制。方法 双抗体夹心法检测外周血象、骨髓基质中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）、粒细胞生长因子（GCSF）的量。结果 刺梨汁能明显改善骨髓抑制小鼠外周血象;能有效平衡微环境中TPO的量;改善EPO的表达;对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中GCSF有明显的正调控作用。结论 刺梨汁能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数;可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G₀/G₁期进入增殖周期;并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO、GCSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能,可作为一种治疗贫血的辅助保健药物。     

刺梨汁对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的 探讨刺梨汁对环磷酰胺合并⁶⁰Co致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,研究其促进血细胞上调的作用机制。方法 双抗体夹心法检测外周血象、骨髓基质中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）、粒细胞生长因子（GCSF）的量。结果 刺梨汁能明显改善骨髓抑制小鼠外周血象;能有效平衡微环境中TPO的量;改善EPO的表达;对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中GCSF有明显的正调控作用。结论 刺梨汁能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数;可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G₀/G₁期进入增殖周期;并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO、GCSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能,可作为一种治疗贫血的辅助保健药物。     

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。     

枸杞对小鼠辐射损伤后造血系统修复的影响

目的 探讨枸杞在小鼠辐射损伤后造血系统修复过程中的作用。方法 小鼠随机分为3组,正常对照组不做任何处理,喂饲正常饲料;另外2组,给予4.5Gy照射后,喂饲正常饲料或添加枸杞的饲料,1个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种血细胞。结果 枸杞饲料组小鼠,外周血B细胞增多,骨髓前体B细胞及未成熟B细胞增多,造血干、祖细胞均显著减少。结论 枸杞促进辐射损伤后造血干细胞动员,加速造血系统的恢复。     

恶性血液病患者异基因造血干细胞移植后骨髓T淋巴细胞亚群重建的动态观察

目的 研究恶性血液病患者经异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后骨髓免疫重建中T淋巴细胞的重建规律及其与外周血中T淋巴细胞重建的差异。方法 本研究采用前瞻性研究设计。收集2015年9月至2017年1月在我院血液科行allo-HSCT的41例恶性血液病患者的骨髓及外周血标本,收集同期7名健康供者的骨髓及外周血标本作为对照样本。用流式细胞术分析移植前和移植后15、30、60、90、180 d时的T淋巴细胞亚群分布,包括CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺ T淋巴细胞、辅助性T细胞（Th）1、Th2,并用Luminex技术检测Th1相关细胞因子白细胞介素2受体（IL-2R）、白细胞介素18（IL-18）水平。结果 恶性血液病患者在移植后15 d和30 d时骨髓中CD4⁺T淋巴细胞比例均低于对照组（P均<0.05）,至移植后180 d仍未见回升;CD8⁺ T淋巴细胞比例在移植后早期（15、30 d）低于对照组（P均<0.01）,60 d时恢复至正常水平;骨髓中CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞比例整体水平均低于外周血中水平（P=0.001、0.002）。恶性血液病患者在移植后15、30、60、90、180 d时骨髓中Th1比例均高于对照组（P均<0.05）,且整体水平高于外周血中水平（P=0.006）;骨髓中Th2比例在移植后90 d内均无明显变化,在180 d时高于对照组（P=0.034）,但整体水平与外周血中水平无明显差异（P>0.05）。骨髓中CD4⁺/ CD8⁺ T淋巴细胞比值在移植后逐渐下降,至移植后180 d时低于对照组（P=0.040）;而骨髓中Th1/Th2比值在移植后90 d内各时间节点（15、30、60、90 d）均高于对照组（P均<0.01）,180 d时与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。恶性血液病患者骨髓和外周血中IL-2R水平在移植后15、30、60、90 d均高于对照组（P均<0.05）;IL-18水平在移植后15、30、60 d高于对照组（P均<0.05）,但移植后90 d时仅外周血中水平与对照组差异有统计学意义（P=0.021）;骨髓与外周血中IL-2R和IL-18整体水平均无明显差异（P均>0.05）。结论 恶性血液病患者allo-HSCT后,骨髓中各T淋巴细胞亚群的重建规律不同,且与外周血中有所差异。