苦参碱对人舌癌Tca-8113细胞增殖抑制及机制研究

目的 探讨分化诱导剂苦参碱(Matrine Mat)对人舌癌Tca-8113细胞系增殖抑制作用及其发生的机制.方法 体外培养舌癌TCA-8113细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的舌癌TCA-8113细胞进行干预.分别采用MTT;细胞周期检测;免疫细胞化学染色、间接免疫荧光联合流式细胞仪定量检测等方法,观察其对舌癌TCA-8113细胞的增殖抑制作用并探讨该作用发生的机制.统计学分析采用12.00统计软件包,计量资料用均数±标准差(x±s)表示,t检验做显著性比较,P<0.05为显著性检验水准.结果 经Mat处理后的舌癌TCA-8113细胞生长速度减慢,细胞周期明显阻滞;其PCNA表达明显下降.结论 Mat对舌癌TCA-8113细胞的增殖有显著的抑制作用;其增殖抑制作用发生可能是通过对细胞周期阻滞及调控增殖相关基因表达发生.     

PTEN对食管癌细胞增殖的影响及机制

目的 探讨PTEN对食管癌细胞增殖的影响及作用机制.方法 将食管鳞状细胞癌细胞株TE1和TE13分为对照组、空载体组和转染组3个处理组.对照组仅常规培养细胞,而空载体组和转染组常规培养细胞后,分别转染空载体质粒、PTEN/sh-AKT质粒后备用.采用细胞计数法检测细胞浓度,MTT方法检测细胞增殖能力,RT-PCR方法检测细胞PTEN、AKT基因的表达,Western blot方法检测细胞PTEN、p-AKT蛋白的表达.结果 转染PTEN质粒后,转染组两种细胞浓度均较其余两组明显下降(P＜0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞的增殖能力(OD值)均较其余两组明显下降(P＜0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞PTEN基因表达量均明显高于其余两组(P＜0.05),而AKT基因无明显变化(P＞0.05);转染sh-AKT质粒后,各组间两种细胞PTEN、AKT基因表达量差异均无统计学意义(P＞0.05).转染PTEN质粒后,转染组两种细胞PTEN蛋白表达量均明显高于其余两组(P＜0.05),而p-AKT蛋白表达量均明显低于其余两组(P＜0.05);转染sh-AKT质粒后,各组间两种细胞PTEN蛋白表达量差异均无统计学意义(P＞0.05),而转染组两种细胞p-AKT蛋白表达量均明显低于其余两组(P＜0.05).结论 基因水平上调PTEN的表达可抑制AKT的活化,进而达到抑制食管癌细胞增殖的作用.     

PTEN对鳞癌细胞的抑制作用及其在口腔白斑和鳞癌中的表达

目的：观察转染PTEN的鳞癌细胞的增殖情况及PTEN在口腔白斑及鳞癌中的表达,探讨PTEN基因在口腔鳞癌发展过程中的作用。方法：采用RT-PCR法从正常组织中扩增PTEN基因,构建真核表达载体pcDNA-PTEN,采用脂质体将pcDNA-PTEN转染人舌鳞癌（Tca8113）细胞系,MTT法观察转染前后细胞的增殖情况,流式细胞术检测PTEN基因转染后细胞各周期细胞所占比例。免疫组织化学技术检测口腔白斑（25例）和口腔鳞癌组织（32例）中PT
EN蛋白表达率。结果：成功构建pcDNA-PTEN载体,并获得阳性转染细胞。与空载体组相比,转染pcDNA-PTEN组的舌癌细胞系Tca8113细胞的生长抑制率具有显著性差异(P<0.01);与空载体组比较,转染PTEN基因的Tca8113细胞G0-G1期细胞数增多（P<0.01）, S期细胞减少（P<0.01）;PTEN在口腔鳞癌中表达减少或缺失,且与组织分化程度明显相关（P<0.05）。结论：PTEN的表达可抑制舌鳞癌细胞的生长;PETN在舌鳞癌发展过程中发挥抑癌作用。     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

真核表达质粒pBK-Fas的构建及转染舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑瘤效应

目的 研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础.方法 采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序.脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达.通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应.结果 PCR扩增后的产物在约1 008 bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段.经检测Fas基因转染能提高Fas mRNA 表达水平、Fas 蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数.Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01).Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径.MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组 Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性.软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低.结论 Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点.Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长.     

Notch 1 对舌麟状细胞癌Tca8113细胞表皮生长因子受体表达的影响及其意义

目的：将编码Notch 1胞內域（NICD）转染人舌麟状细胞癌（舌麟癌）Tca8113细胞,探讨Notch 1在Tca8113细胞中的作用及其对表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响。方法：采用脂质体法将编码NICD的pRAMIC-IRES2-EGFP目的质粒和pIRES2-EGFP对照质粒分别转染人舌麟癌Tca8113细胞,实验分为目的质粒pRAMIC-IRES2-EGFP转染组、对照质粒pIRES2-EGFP转染组和非转染组。采用RT-PCR法、Western blotting法和免疫细胞化学法观察细胞中Notch 1mRNA及蛋白和EGFR mRNA及蛋白表达水平,MTT法检测Tca8113细胞的增殖活性并计算细胞存活率。结果：转染后,与非转染组和对照质粒pIRES2-EGFP转染组比较,pRAMIC-IRES2-EGFP目的质粒转染组Notch 1 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而EGFR mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,细胞存活率明显降低（P<0.05）。与非转染组比较,对照质粒pIRES2-EGFR转染组Notch 1 mRNA和蛋白表达水平、EGFR mRNA和蛋白表达水平及细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：Notch 1对舌麟癌Tca8113细胞增殖的影响可能与EGFR的表达下调有关。     

抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响

目的研究抑癌PTEN基因联合p53基因转染对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。方法构建表达载体：空质粒pEGFP—N1、pEGFP—N1-PTEN质粒、pEGFP—N1-p53质粒及pEGFP—N1-PTEN—p53质粒,体外分别转染到前列腺癌Pc-3m细胞中,观察它们转染后的荧光表达情况;采用RT—PCR法检测目的基因表达;Westernblotting法检测目的PTEN蛋白和P53蛋白的表达;用MTT法观察细胞增殖抑制情况并绘制生长抑制曲线;AnnexinV—FITC／PI双染流式细胞术检测PTEN基因和p53基因对前列腺癌PC-3m细胞凋亡的影响。结果荧光显微镜下观察到PTEN、p53及两个基因同时在PC-3m细胞系中成功表达;RT—PCR检测结果显示,与PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组相比联合转染组mRNA在PC-3m细胞系中表达明显增加俨〈0．05）;Westernblotting法检测同样发现,联合转染组PTEN蛋白及P53蛋白表达明显高于PTEN基因单转染组、p53基因单转染组和空载体转染组俨〈0．05）;联合转染组细胞凋亡率明显高于空载体转染组、PTEN基因单转染组和p53基因单转染组（P〈0．05）。结论PTEN基因与p53基因联合转染能诱导前列腺癌PC-3m细胞凋亡．这种联合转染可能对前列腺癌的基因治疗具有潜在的应用价值。     

抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及对人卵巢癌细胞系SW626增殖的影响

目的 构建抑癌基因PTEN的真核表达载体,研究外源性PTEN基因稳定表达对人卵巢癌细胞系SW626体外增殖的影响.方法 构建PTEN基因的真核表达载体pcDNA3.1/PTEN,转染重组质粒pcDNA3.1/PTEN于体外培养的人卵巢癌细胞系SW626,筛选并获得稳定表达PTEN基因的细胞克隆,应用RT-PCR和western blot分析PTEN基因的mRNA及蛋白质表达,MTT实验分析细胞增殖能力.结果 稳定转染PTEN基因的细胞系有外源目的 基因的mRNA及其蛋白表达.MTT实验表明,pcDNA3.1/PTEN 转染组细胞增殖能力低于pcDNA3.1(-)转染组和对照组 (P＜0.05).结论 外源性抑癌基因PTEN的稳定表达可抑制人卵巢癌细胞系SW626的增殖.     

pcDNA3．0-PTEN质粒转染15dPGJ2对乳腺癌MCF-7细胞体外培养的影响

目的:探讨15dPGJ2和PTEN质粒转染对人乳腺癌细胞株MCF-7体外培养的抑制作用,为临床靶向和基因治疗提供基础试验依据.方法:取生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按5.0×106/L接种96孔板,按析因试验设置试验组.分别给予过氧化物酶体增殖物受体d然激动剂15dPGJ2,用野生型抑癌基因PTEN真核表达载体pcDNA3.0-PTEN质粒转染(脂质体转染法)MCF-7乳腺癌细胞株.采用MTT比色法观察15dPGJ2和野生型PTEN质粒转染对体外培养的MCF-7细胞系生长的抑制作用;用倒置光学显微镜观察MCF-7细胞用药前后的形态学变化;取生长良好对数生长期的MCF-7乳腺癌细胞株,调整细胞浓度至2.0×107/L接种于6孔板,设置3个复孔.连续培养3 d;待细胞生长超过40%时.用15dPGJ2 40 μmol/L,pcDNA3.0-PTEN质粒2μg/ml转染后连续培养3 d常规消化收集细胞,离心,70%酒精固定,应用流式细胞仪检测凋亡细胞和细胞周期变化.结果:15dPGJ2和PTEN质粒转染能有效的抑制体外培养的乳腺癌细胞株MCF-7的生长(P<0.05),两者联合使用抑制效果更好(P<0.05).pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ2 40μmol/L和两者联合干预在MCF-7乳腺癌细胞株连续72 h时即达到有效抑制率,联合处理组处理MCF-7乳腺癌细胞株细胞生长抑制率最大(P<0.05).pcD-NA3.0-PTEN质粒转染72 h能将60.6%的MCF-7乳腺癌细胞阻滞在G0-1期(DNA合成前期)周期阻滞效果最为明显(P<0.05).与对照组相比pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15d-PGJ2干预及联合用药均不能有效的诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡(P<0.05)).联合用药细胞凋亡率低于单用15d-PGJ2(P<0.05),pcDNA3.0-PTEN质粒转染可降低MCF-7乳腺癌细胞的凋亡率(P<0.05).结论:体外培养抑制试验证明pcDNA3.0-PTEN质粒转染、15dPGJ2 40μmol/L能有效的抑制乳腺癌细胞株MCF-7的生长,pcDNA3.0-PTEN质粒转染能抑制MCF-7乳腺癌细胞的恶性表型,pcDNA3.0-PTEN质粒转染抑制MCF-7乳腺癌生长的机制是周期阻滞,联合15d-PGJ2不增加周期阻滞作用.     

erbB-3结合蛋白ebp1对Tca 8113细胞生长增殖的影响

目的探讨erbB-3结合蛋白ebp1对口腔鳞状细胞癌Tca 8113细胞生长增殖的影响.方法免疫组化筛选erbB-2/erbB-3双阳性的口腔鳞状细胞癌Tca 8113细胞系;转染pcDNA3.1-ebp1质粒至Tca 8113细胞,G418筛选阳性细胞;RT-PCR检测转染后细胞中ebp1的转录水平;通过细胞生长曲线、3H-TdR摄入量以及集落形成率观察转染前后细胞生长增殖能力的改变.结果 Tca 8113细胞同时表达erbB-2/erbB-3;RT-PCR显示转染后细胞中ebp1转录水平明显升高;Tca 8113-ebp1细胞生长曲线平缓,生长减慢;3H-TdR摄入量明显减少,细胞增殖能力减弱.结论 ebp1在体外能显著抑制Tca 8113肿瘤细胞的生长增殖.     

Akt抑制剂MK2206对舌鳞癌TCA-8113细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的：探讨Akt抑制剂MK2206对舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)TCA-8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：取处于对数生长期舌鳞癌TCA-8113细胞株随机分为对照组和1、5、25、125及250 nmol/L MK2206实验组。在不同剂量及时间处理因素下,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,蛋白质印迹分析检测细胞中caspase-9、Bad 、GSK-3β、p-Akt和T-Akt蛋白表达水平。 结果：舌鳞癌TCA-8113细胞在MK2206
作用12、24和36 h的半数抑制浓度（ＩＣ５０）分别为（112.54±1.67）、（79.67±2.01）和(33.33±1.98） nmol/L。FCM法检测,1、5、25、125和250 nmol?L-1 MK2206作用舌鳞癌TCA-8113细胞12 h后,细胞凋亡率分别为（14.2±0.74）%、（19.3±0.45）%、（35.1±0.45）%、（39.6±0.48）%和（52.1±0.19）%,与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。蛋白质印迹分析,随着MK2206药物剂量和作用时间的增加,p-Akt、Bad 和GSK-3β蛋白表达水平下降,与对照组β-actin比较其条带的颜色变暗;caspase-9蛋白表达水平升高,与对照组β-actin比较其条带的颜色变深。T-Akt蛋白表达变化不明显,与对照组β-actin比较条带的颜色无明显不同。结论：Akt抑制剂MK2206可抑制舌鳞癌TCA-8113细胞增殖并诱导凋亡。     

erbB-3结合蛋白ebp1对Tca 8113细胞生长增殖的影响

目的探讨erbB-3结合蛋白ebp1对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞生长增殖的影响。方法免疫组化筛选erbB-2／erbB-3双阳性的口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞系;转染pcDNA3.1-ebp1质粒至Tca8113细胞,G418筛选阳性细胞;RT-PCR检测转染后细胞中ebp1的转录水平;通过细胞生长曲线、^3H-TdR摄入量以及集落形成率观察转染前后细胞生长增殖能力的改变。结果Tca8113细胞同时表达erbB-2／erbB-3;RT-PCR显示转染后细胞中ebp1转录水平明显升高;Tca8113-ebp1细胞生长曲线平缓,生长减慢;^3H-TdR摄入量明显减少,细胞增殖能力减弱。结论ebp1在体外能显著抑制Tca8113肿瘤细胞的生长增殖。     

虫草素对人舌癌细胞凋亡、自噬的影响及其分子机制

目的研究虫草素对人舌癌TCA-8113细胞的细胞周期、凋亡和自噬的影响并探讨虫草素抑制舌癌发生的作用机制。方 法用CCK-8法检测虫草素对TCA-8113细胞增殖的作用;用流式细胞术检测不同浓度药物对细胞周期、细胞凋亡的影响;用荧 光定量PCR和Western blot 的方法检测凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-9,Bcl-2、Bax;免疫组化方法检测自噬相关蛋白LC- 3β,P62,p-mTOR,AMPK。结果CCK-8 细胞增殖检测结果表明,虫草素能明显抑制TCA-8113 细胞的增殖,24 h 时IC50为 3.548 mg/mL;48 h时IC50为1.185 mg/mL;流式细胞结果显示,诱导细胞周期阻滞与S期,虫草素能显著的诱导TCA-8113细胞 凋亡,并且呈浓度依赖性。荧光定量PCR和Westen blot结果表明,虫草素可诱导促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达, 抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达（P<0.05）;免疫组化的结果表明,虫草素可促进LC-3β和AMPK的表达,抑制P62和p-mTOR的表 达（P<0.05）。结论虫草素对TCA-8113细胞的抑制并促进细胞凋亡,同时通过AMPK/mTOR通路诱导细胞自噬。     

YAP对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨长链非编码RNA （lncRNA） MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法：选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组（转染Scramble siRNA）、siYAP-1组（转染siYAP-1）和siYAP-2组（转染siYAP-2）。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒（pcDNA3.1-YAP组）、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2（pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组）及对照质粒（pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组）,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果：siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组（P<0.05）,siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组（P<0.05）;与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）,H1299细胞迁移能力降低（P<0.05）。结论：在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。     

VEGF-C真核表达质粒的构建及其真核表达

目的　研究人血管内皮生长因子 C(VEGF- C)基因功能片段的表达功能及表达活性。方法　以前期从人舌癌克隆得到的 VEGF- C功能片段 c DNA和真核表达质粒 pc DNA3.1( )构建重组质粒 ,以阳离子脂质体转染法将其导入舌鳞癌细胞 Tca8113,并检测其表达、分泌功能及体外激活能力。结果　通过将长度约为 110 0 bp的VEGF- C功能片段插入 pc DNA3.1( )的 Eco R 和 Xho 酶切位点之间 ,成功构建出 pc DNA3.1( ) - VEGF- C重组质粒 ,该质粒转染 Tca8113细胞后得到 VEGF- C高表达的舌癌细胞 Vc Tca,转染后的细胞可表达相对分子质量为 5 3× 10 3和 2 9× 10 3的 VEGF- C分子 ,在细胞培养液中可检测到相对分子质量为 2 9× 10 3的 VEGF- C片断。结论　构建的 VEGF- C重组质粒可在真核细胞实现表达 ,并能被分泌和激活     

上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨上调Mg²⁺/Mn²⁺依赖性蛋白磷酸酶1F（PPM1F）对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1质粒）和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组（转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低（P<0.05或P<0.01）,迁移细胞数明显减少（P<0.05）。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。     

骨形成蛋白-7基因转染对人肾小管上皮细胞外基质分泌的影响

目的构建骨形成蛋白-7(BMP-7)全长基因表达质粒,观察BMP-7过表达对转化生长因子(TGF)-β诱导的人肾小管上皮细胞细胞外基质分泌(ECM)的作用。方法将BMP-7全长cDNA连接进入真核细胞表达质粒pcDNA3·1中,以脂质体Superfect介导的方法将重组表达质粒pcDNA3·1-BMP-7转染入人肾小管上皮细胞,挑选阳性克隆,以获得稳定转染的人肾小管上皮细胞株。采用Western印迹方法检测BMP-7在肾小管上皮细胞培养上清液中的表达。给予TGF-β(5ng/ml)进行处理,应用RT-PCR和ELISA的方法,观察BMP-7过表达对纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅰ、Ⅲ(ColⅠ、Ⅲ)等细胞外基质mRNA和蛋白质表达的作用。结果EcoR I限制性酶切鉴定以及DNA双向测序结果均说明所构建的重组质粒为BMP-7全长基因表达质粒。Western印迹方法检测稳定转染人肾小管上皮细胞蛋白表达量明显高于空载体转染组(P<0·05)。TGF-β处理24、48、72h后,5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/ml TGF-β组ColⅠ、Ⅲ、FN mRNA的表达量明显高于正常对照组,空白质粒转染组(pcDNA3·1)[ColⅠ(A值):0·897±0·100、1·054±0·090vs0·286±0·010、0·319±0·080;ColⅢ(A值):1·114±0·040、0·961±0·090vs0·354±0·020、0·403±0·040;FN(A值):1·257±0·090、1·188±0·060vs0·413±0·020、0·454±0·060,均P<0·05];Col I、FN mRNA表达量pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组明显低于TGF-β处理组(0·591±0·007、0·687±0·020,P<0·05),ColⅢmRNA表达有降低趋势(0·809±0·090),但差异无统计学意义。细胞培养上清液FN含量5ng/ml TGF-β处理组、空白质粒转染(pcDNA3·1)+5ng/mlTGF-β组明显高于正常对照组(P<0·05),而pcDNA3·1-BMP-7转染组+5ng/ml TGF-β组表达明显低于TGF-β处理组(P<0·05)。结论BMP-7过表达可以显著减少TGF-β所致的人肾小管上皮细胞FN、ColⅠ、ⅢmRNA和细胞培养上清液中的FN的表达。表明BMP-7减少小管间质炎症反应和纤维化的发生,改善肾功能的作用,部分是通过抑制肾小管上皮细胞分泌细胞外基质实现的。     

食管癌相关基因2对EC9706细胞恶性增殖的抑制作用

目的探讨食管癌相关基因2(esophageal cancer related gene2,ECRG2)对EC9706食管癌细胞恶性增殖的抑制作用及其机制。方法利用DNA重组技术,构建ECRG2真核表达质粒(pcDNA3.1ECRG2),在食管癌EC9706细胞中转染并表达ECRG2蛋白,观察细胞的生长状态,比较平板集落和软琼脂克隆形成能力的改变,分析ECRG2对EC9706恶性表型的影响。进一步采用WesternBlot检测p53、p21的改变。结果转染表达ECRG2后,EC9706细胞的生长受到干扰,细胞的增殖速度受到抑制,实验组细胞平板集落形成率为18%,而对照组为55%,两者间差异显著(P<0.05);肿瘤细胞的停泊非依赖能力降低,实验组软琼脂克隆体积小且形成个数(8±1.88)明显少于对照组(14.3±3.13),差异显著(P<0.05)。WesternBlot分析表明,EC9706细胞转染表达ECRG2后伴随着p53、p21蛋白表达上升。结论转染表达ECRG2蛋白能够部分逆转食管癌EC8706细胞的恶性表型,其过程可能与p53、p21通路密切相关。     

丙型肝炎病毒多CTL表位DNA疫苗免疫学特性的初步研究

目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)疫苗研制并为抗HCV感染提供实验依据。方法:从HCV J株基因组中,选取小鼠(H-2d)CTL表位基因序列,以pcDNA3.1(+)质粒为载体,构建相应的真核表达质粒,经肌肉免疫后,取受免疫小鼠血清和脾细胞,用ELISA及MTT法检测小鼠血清中IL-2和IFN水平及小鼠脾细胞的增殖活性。结果:实验组小鼠血清中IL-2及IFN水平明显高于对照组[IL-2:(208±8.88)比(106±6.06);IFN:(179.5±2.52)比(90.5±2.52),P<0.05];实验组淋巴细胞增殖指数明显高于对照组(1.56比1.13,P<0.05)。结论:本实验构建的pcDNA3.1(+)/HCV CTL真核表达质粒,经肌肉免疫后可以使受免疫小鼠细胞免疫应答水平提高,淋巴细胞增殖活性增高。