1,25-（OH）2D3免疫调节作用的研究进展

1,25(OH)2D3是维生素D3的生物活性代谢产物,不仅可以调节骨钙代谢,还发挥其他广泛的生物活性。临床上主要应用于绝经后骨质疏松症和肾性营养不良症等的治疗。近年来发现,免疫细胞可以表达维生素D受体,且能够自身代谢维生素D,因而其免疫调节作用以及对免疫相关疾病的治疗作用也越来越受到重视。现就1,25(OH)2D3相关的免疫调节作用方面的研究进展予以综述。     

反义端粒酶RNA与1,25-（OH）2D3抑制肝癌细胞增殖的协同作用

【目的】观察1,25-(OH2)D3对转染反义端粒酶RNA的肝癌细胞增殖的作用。【方法】经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导入维生素D3受体(VDR)阳性的肝癌细胞株SMMC7721细胞中培养。细胞克隆转移扩大培养,添加1,25-(OH)2D3分别作用于各实验组细胞后,采用四唑蓝比色实验(MTT)和平板克隆形成实验,检测细胞的存活和生长;TUNEL法检测细胞凋亡。【结果】转染组细胞和对照组细胞的端粒酶活性分别为0.686和1.685,说明反义端粒酶RNA可显著降低肝癌细胞端粒酶活性。10 nmol/L浓度的1,25-(OH2)D3对肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;且较之于单独的1,25-(OH2)D3或转染反义端粒酶RNA对肝癌细胞增殖的抑制作用,在转染反义端粒酶RNA,降低肝癌细胞端粒酶活性后,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖的作用显著得到增强。各组细胞的凋亡率分别为3.4%、12.2%、8.8%、23.6%。经统计学处理,上述实验结果证实均存在显著的差异(P<0.01)。【结论】在转染反义端粒酶RNA、降低细胞端粒酶活性的基础上,1,25-(OH2)D3抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用进一步得到增强。     

1,25（OH）2维生素D3和塞莱昔布协同对5-FU化疗的增敏作用

目的 研究塞来昔布(特异性环氧合酶-2抑制剂)联合1,25(OH)2维生素D3增强5-FU对结肠癌化疗增敏作用及其机制.方法 3种药物用单药、两药和3药联合干预结肠癌细胞株HT29 48h,用ELSA法观察干预后结肠癌细胞抑制率和基质金属蛋白酶-7(MMP-7)表达变化及联用5-FU后溶解型Fas受体(s-FasL)表达的变化.结果 单药、两药和3药联合干预结肠癌细胞株HT29后抑制率增加,MMP-7表达减少及s-Fas表达减少(P<0.05或P<0.01).结论 塞莱昔布和1,25(OH)2维生素D3协同对5-FU的增敏作用,其机制可能通过抑制MMP-7表达,降低其对细胞表面Fas的酶解作用,促进结肠癌细胞凋亡.     

1，25—（OH）2D3对糖尿病肾病大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨1，25～（OH）。D3对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织VEGFmRNA及蛋白质表达的影响。方法SD大鼠分为3组，对照组，糖尿病肾病（DN）组，1，25—（OH）2D3组。链脲菌素腹腔注射诱导DM大鼠模型，尿蛋白定量≥30mg／24h为DN大鼠，诱导成功后1，25—（OH）2D3组给予3ng／（100g·d）皮下注射。实验12周末检测大鼠体重、血糖、血肌酐、24h尿白蛋白。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测VEGFmRNA及蛋白质的表达。结果DN组大鼠体重、血糖、尿白蛋白，肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达，肾小球细胞数，细胞外基质（ECM）均高于对照组（P〈0．01）。与DN组相比，1，25—（OH）2D3组大鼠体重、血糖、尿白蛋白，肾脏VEGFmRNA及蛋白质的表达，肾小球细胞数，ECM聚积显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。尿VEGF与尿白蛋白呈正相关（rs=0．41，P=0．037），与体重、血糖、血肌酐无相关性（rs分别为0．18，0．13，0．21，P〉0．05）。结论1，25-（OH）2D3可减轻DN大鼠尿白蛋白的排泄，抑制肾小球系膜增殖，降低VEGFmRNA及蛋白质的表达。     

1,25-（OH）2D3对1型糖尿病小鼠主要脏器的保护作用

目的研究1,25-（OH）2D3对1型糖尿病（T1DM）小鼠的作用及可能机制。方法 40 mg/kg STZ腹腔注射C57BL/6小鼠连续5 d建立T1DM模型,5μg/kg 1,25-（OH）2D3隔日腹腔注射,监测血糖、体质量、饮水及饲料消耗,分析各脏器的病理及超微结构。结果 1,25-（OH）2D3治疗14 d后,T1DM小鼠的血糖、饮食、饮水量显著下降（均P〈0.05）;1,25-（OH）2D3可减轻胰岛炎症状及各脏器的超微结构病变,诱导淋巴细胞的凋亡,并在胰腺中可见典型自噬现象。结论 1,25-（OH）2D3可诱导胰腺细胞的自噬,同时诱导淋巴细胞凋亡,从而减轻T1DM症状。     

1,25（OH）2D3对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小管上皮细胞转化的抑制作用

目的探讨1,25(OH)2D3对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小管上皮细胞转化起始过程的抑制作用,为临床肾间质纤维化的防治提供理论依据。方法分离SD大鼠肾小管上皮细胞,将其分为对照组、AngⅡ诱导组(AngⅡ终浓度10-8mol/L)以及AngⅡ(10-8mol/L)+1,25(OH)2D3干预组[1,25(OH)2D3终浓度分别为10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L],培养48 h后收集各组细胞。利用酶联免疫吸附实验检测ColⅠ和FN;Real-time RT-PCR检测肾小管上皮细胞TGF-β1mRNA表达;Western Blot检测肾小管上皮细胞TGF-β1蛋白表达。结果实验48 h后,AngⅡ组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达及培养上清中ColⅠ和FN浓度均较对照组显著增高,AngⅡ+10-6mol/L1,25(OH)2D3组TGF-β1mRNA表达、蛋白表达较对照组明显增高,但细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度仅略有增高,差异无显著性,随着1,25(OH)2D3浓度的降低(10-7mol/L,10-8mol/L),TGF-β1mRNA表达、蛋白表达,细胞培养上清中ColⅠ和FN浓度也随之显著增高(P<0.05)。结论 1,25(OH)2VD3可以部分抑制AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞EMT,其机制可能是通过抑制肾小管上皮细胞TGF-β1基因与蛋白表达、减少肾小管上皮细胞ColⅠ和FN分泌实现的。     

维生素D受体基因多态性与2型糖尿病及血清1,25-二羟基维生素D3的相关性研究

目的探讨维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)基因ApaI酶切位点多态性与2型糖尿病及血清1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]的相关性。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测105例2型糖尿病患者和105例正常者的VDR基因型,用酶联免疫吸附(Elisa)法测定血清1,25(OH)2D3水平,并检测相关临床及生化指标,比较VDR基因型和等位基因频率的分布差异及不同基因型血清1,25(OH)2D3等相关指标的差异。结果维生素D受体基因ApaⅠ位点基因型和等位基因频率在两组中的分布差异明显(P<0.01)。糖尿病组等位基因a和基因型aa频率明显高于对照组。基因型AA组及Aa组血清1,25(OH)2D3高于基因型aa组,而收缩压、舒张压及空腹血糖低于基因型aa组,且差别有显著性意义(P<0.05或0.01)。结论 Apa I位点的VDR基因多态性与2型糖尿病存在相关性。血清1,25(OH)2D3水平、空腹血糖及血压与VDR基因多态性密切相关。     

1,25-二羟基维生素D3干预前后糖尿病肾病患者外周血单核细胞促炎细胞因子的表达情况

目的 探讨1,25-二羟基维生素D3(VD3)干预前后糖尿病肾病患者外周血单核细胞促炎细胞因子的表达情况.方法 纳入2型糖尿病合并糖尿病肾病(DN)患者(DN组)及健康对照者(对照组)各15例,分别检测两组外周血单核细胞培养上清液在VD3干预和非干预条件下白介素(IL)-17A、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)及IL-2水平.结果 VD3干预前,两组IL-17A水平比较差异无统计学意义(P>0.05),DN组IFN-γ、TNF和IL-2水平均高于对照组(P<0.05);VD3干预后,两组IL-17A、IFN-γ、TNF和IL-2水平均低于干预前,且DN组IL-17A、IFN-γ和IL-2水平仍高于对照组,但TNF水平低于对照组(均P<0.05).结论 相关促炎细胞因子可能在DN发生中起促进作用,VD3对DN患者外周血单核细胞相关促炎因子具有抑制作用.     

1,25（OH）2D3对脂多糖诱导的小鼠蛋白尿的影响

目的观察1,25(OH)2D3对脂多糖诱导的小鼠蛋白尿和uPAR表达的影响。方法 24只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组(Sham组)、脂多糖(LPS)处理组(LPS组)、LPS与1,25(OH)2D3共同处理组[LPS+1,25(OH)2D3)组]。LPS组及LPS+1,25(OH)2D3组腹腔注射LPS 300μg(第1天200μg,第2天100μg),Sham组给予等量生理盐水腹腔注射,LPS+1,25(OH)2D3组提前2 d给予1,25(OH)2D32.5μg/(kg·d)灌胃,Sham组及LPS组每天给予等量橄榄油灌胃。第3天留取尿液后处死小鼠。结果 (1)Sham组、LPS组、LPS+1,25(OH)2D3组的尿蛋白分别为(72.0±35.6)、(732.9±233.2)、(412.3±82.7)μg/mg,LPS组尿蛋白比Sham组明显升高(P=0.000);LPS+1,25(OH)2D3组与LPS组相比,尿蛋白明显减少(P=0.001)。(2)LPS组足细胞uPAR蛋白及PLAUR mRNA的表达均高于Sham组和LPS+1,25(OH)2D3组(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可能通过抑制uPAR的表达,减少蛋白尿。     

2型糖尿病患者血清1,25-二羟维生素D3与糖尿病肾病的相关性

目的 探讨2型糖尿病患者血清1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]水平与糖尿病肾病(DN)的关系.方法 选择2018年3月至2019年9月新乡医学院第三附属医院收治的300例2型糖尿病患者为研究对象,采用免疫比浊法及苦味酸法分别测定尿白蛋白和尿肌酐,计算尿白蛋白/肌酐比值(UACR),根据UACR将患者分...     

1,25-(OH)2D3在调节RAS中的作用研究

目的：探讨1,25-（OH）2D3对心血管方面的影响机制。方法：建立缺乏维生素D大鼠的动物模型,观察实验组和对照组的血压、心脏组织结构、肾素-血管紧张素系统（RAS）的改变。结果：与对照组比较,实验组大鼠的血压显著升高,心室壁显著增厚,血浆肾素活性、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平和醛固酮（ALD）水平显著升高,肾脏肾素蛋白表达水平显著增高。结论：1,25-（OH）2D3缺乏可激活RAS,导致大鼠高血压。     

肺心病急性加重期患者1,25-(OH)2D3改变及其原因的研究

目的探讨肺心病急性加重期1,25-(0H)2D3改变及其改变的原因.方法测定了48例患者血1,25-(OH)2D3、25-(OH)D3、甲状旁腺素(PTH)和血钙磷镁(SCa、SP、SMg).结果与对照组相比,病人组l,25-(OH)2D3、25-(OH)D3、PTH、SCa和SMg显著降低(P均＜0.01).25-(OH)D3低于均值组的1,25-(OH)2D3值显著低于25-(OH)D3高于均值组者(P＜0.05);PTH低于均值组的1,25-(OH)2D3值显著低于PTH高于均值组者(P＜0.01).结论肺心病急性加重期时1,25-(OH)2D3显著降低;25-(OH)D3和PTH的降低是1,25-(OH)2D3降低的原因.应予该病患者适量补充药物性维生素D.     

1,25-(OH)2D3在促进大鼠外周血间充质干细胞扩增中的作用

目的:探讨大鼠外周血中是否存在非黏附间充质干细胞(MSCs)以及1,25-(OH)2D3能否刺激它们形成成纤维细胞集落形成单位(CFU-f).方法:从大鼠外周血中分离单核粒细胞(PBMGC)组份,在缺乏和添加10-8 moL/L 1,25-(OH)2D3条件下进行贴壁培养.培养至4天和8天时,将未贴壁细胞转移到新的培养皿中继续培养,即:"pour-off"培养,培养16天形成的细胞进行亚甲基蓝染色.计数CFU-f数目,并对4天"pour-off"培养形成的细胞进行免疫细胞化学染色.结果:PBMGC培养及4天和8天非黏附PBMGC培养都能形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3能够明显地促进它们形成CFU-f.非黏附细胞形成的克隆表达波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原,而不表达Ⅰ型胶原.结论:大鼠外周血中存在非黏附MSCs,在体外培养能够形成CFU-fs,而1,25-(OH)2D3具有促进外周血MSC扩增的作用.     

1,25(OH)2D3在不同水平的继发性甲状旁腺功能亢进中的治疗

慢性肾功能不全的患者,有活性的1,25(ＯＨ)2Ｄ3合成大大减少。肌酐清除率降低,易出现低钙血症及高磷血症,从而引起继发性甲旁腺激素(ＰＴＨ)分泌亢进及肾性骨病,但不同水平的ＰＴＨ对骨代谢影响不同,因而1,25(ＯＨ)2Ｄ3(商品名罗钙全)的使用亦应有所不同,我们对37例不同血...     

全反式维甲酸、1,25二羟维生素D3对白血病细胞株SHI-1中几种糖基转移酶mRNA表达的影响

目的探讨在全反式维甲酸（ATRA）、1,25二羟维生素D3[1,25-（OH）2D3]的作用下,白血病细胞株SHI-1中多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶（ppGalNAcTs）和某些N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（GnTs）表达的变化。方法应用RT-PCR法研究在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3作用下,白血病细胞株SHI-1中ppGalNAcTs、GnTs表达的变化。结果在SHI-1细胞株中,随着1,25-（OH）2D3浓度（10^-8～10-^6mol/L）的增加,ppGalNAcT1和T2表达增加,T3表达没有变化,T4表达减少;加入ATRA（10^-8～10^-6mol/L）后,细胞株中ppGalNAcT2、β6GnTV、O-GnT表达量升高。结论白血病细胞株SHI-1ppGalNAcTs各型表达水平不同;在不同浓度ATRA、1,25-（OH）2D3的作用下,白血病细胞株SHI-1中各型ppGalNAcTs表达变化也不同。在SHI-1细胞株加入ATRA后细胞中β2GnTI、β6GnTV发生显著变化。ppGal-NAcT1、ppGalNAcT2、GnTs与白血病细胞株的分化可能有一定关系。     

地塞米松和1,25-(OH)2D3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响

目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌ECl细胞增殖及周期的影响.方法:分别用10-7 mol/L DEX与10-7 mol/L 1,25-(0H)2D3以及同种浓度2药联合处理ECl细胞48、72和96h,并设溶剂对照组.采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变...     

血清1，25-（OH）2VitD3与钙磷水平在COPD中的临床意义

目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平变化及其与肺功能、体重指数（BMI）的相关性,探讨其与病情严重程度及预后的关系。方法：随机选取COPD患者、健康对照者各30例,分别测定COPD急性加重期、稳定期及对照组的血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平,并测定肺功能（FEV1、FEV1／FVC）及BMI等指标。结果：COPD患者急性加重期、稳定期血清1,25-（OH）2VitD3及钙磷水平较对照组明显降低,其中各组血清1,25-（OH）2VitD3、钙水平差别有统计学意义（P〈0．01）,而血清磷水平于急性加重期和稳定期、急性加重期和对照组比较差别有统计学意义（P〈0．01）;急性加重期和对照组中,血清1,25-（OH）2VitD3水平与BMI、肺功能指标成正相关,血清钙水平与BMI成正相关。结论：COPD患者不论急性加重期还是稳定期血清1,25-（OH）2VitD3与钙磷水平均较对照组明显降低,并和病情严重程度相关,影响预后,对临床治疗有一定指导意义。     

1,25-(OH)_2D_3及复方丹参对大鼠异基因骨髓移植后T细胞亚群和细胞因子的影响

目的 观察1,25-(OH)_2D_3及复方丹参对异基因骨髓移植(Allo-BMT)后大鼠T细胞亚群和细胞因子的影响.方法 以雄性SD大鼠为供鼠.雌性Wistar大鼠为受鼠,40只受鼠随机分成aGVHD组及干预组,干预组包括1,25-(OH)_2D_3组、复方丹参组、两约联合组,每组10只.观察各组T细胞亚群(CD4~+、CD8~+)和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10)的变化.结果 当aGVHD表现较明显时,CD4~+、CD8~+增高,以CD4~+增高为主,与移植前比差异有统计学意义(P<0.05);经干预方案处理后CD4~+、CD8~+增高的幅度较aGVHD组低,差异有统计学意义(P<0.05),以CD4~+更为明显;动态监测显示与Th1相关的细胞因子IL-2、IFN-γ在各干预组呈下降趋势,与Th2相关的细胞因子IL-10呈上升趋势,均在第21天变化较为明显,与第0天相比有统计学差异(P＜0.05);IL-4无显著性变化.结论 1,25-(OH)_2D_3及复方丹参能够降低CD4~+T淋巴细胞的数量,具有调节Th1/Th2平衡,抑制Th1的增殖及功能发挥,促进Th2细胞增殖,发挥免疫耐受的作用.     

活性维生素D3对糖尿病大鼠肾组织SHIP2表达及多态性的影响

目的：研究SHIP2基因多态性与糖尿病肾病（DN）的关系,观察应用活性维生素D[-1,25-（OH）2D3]干预对SHIP2表达的影响。方法：选择健康雄性Wistar大鼠30只经腹腔注射链佐脲菌素（STZ）制备糖尿病模型,在糖尿病模型制备后给予1,25-（OH）2D3 0．03ng·g^-1·d^-1皮下泵入,连用8周。于模型成功后检测大鼠血糖（Glu）、24h尿蛋白（24hUP）、血肌酐（Scr）、尿足细胞（UPC）。采用RT—PCR检测肾小球SHIP2基因多态性的表达。结果：VitD3治疗后,SHIP2基因SNP5AA／ACGlu、24hUP较CC型明显下降,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：SHIP2基因SNP5为AA／AC型者对VitD3的治疗反应优于GG型者。SHIP2基因SNP5多态性可能影响VitD3对T2DM患者的治疗效果。     

绝经后2型糖尿病女患者血清维生素D水平

目的：研究绝经后女性2型糖尿病（T2DM）患者血清25-羟基维生素D3[25（OH）D3]的水平与糖脂代谢指标的关系。方法：研究对象为44例绝经后女性T2DM患者,对照组为41例年龄、体质量指数（body mass index,BMI）及绝经年限匹配的健康绝经后女性。ELISA测定血清2S（OH）D3水平。结果：T2DM组血清2S（OH）D3水平低于对照组,但无明显统计学差异（P=0．372）;正常绝经后女性血清25（OH）D3多元线性回归分析提示,BMI与2S（OH）D,呈独立负相关关系（r=0．372,P〈0．05）;所有绝经后女性研究对象中有84．7％存在维生素D缺乏,其中对照组中有80．5％存在维生素D缺乏,T2DM组中有88．6％存在维生素D缺乏。T2DM组维生素D缺乏的发生率高于正常女性,但差异无统计学意义（P=0．372）。在所有绝经后女性研究对象中,二元Logistic回归分析发现25（OH）D。不是T2DM发病的危险因素。结论：T2DM组血清25（OH）D3水平低于对照组,血清25（OH）D,缺乏的患病率高于对照组,但在校正BMI后差异无统计学意义。在绝经后女性中,维生素D下降与肥胖及血脂代谢异常密切相关,与糖尿病的发生无明显相关性。