外源性硫化氢减轻小鼠阻塞性肾损伤

目的:探讨外源性硫化氢(H2S)在小鼠阻塞性肾损伤中的保护作用及可能机制。方法:将8周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、手术组和H2S组,每组5只,单侧输尿管结扎(UUO)构建肾阻塞模型,H_2S组小鼠腹腔注射H_2S供体硫氢化钠(Na HS),手术组和假手术组小鼠注射等体积的生理盐水,每天1次。7 d后处死小鼠,取出肾脏,提取RNA行RT-PCR检测3组小鼠肾脏内源性H_2S催化酶mRNA表达的差异;组织HE染色观察3组小鼠肾脏的组织结构的变化;Masson染色检测3组小鼠肾脏纤维化的差异;检测血浆胱抑素C含量来反映肾小球滤过能力;Western blot检测LC3、beclin-1和纤连蛋白(FN)蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中胱硫醚β-合成酶(CBS)、胱硫醚γ-裂解酶(CSE)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)的mRNA表达显著降低,胶原纤维显著增多,而H_2S组小鼠肾组织胶原纤维又比模型组显著减少。与假手术组相比,手术组小鼠肾脏中FN的蛋白表达显著升高,而H_2S组小鼠的FN表达量比手术组小鼠显著降低;与假手术组相比,手术组和H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达均显著增高,而H_2S组小鼠肾组织细胞中LC3-II和beclin-1蛋白表达又显著高于手术组。结论:外源性H_2S可能通过上调细胞自噬而减轻UUO小鼠的肾纤维化。     

芒见赛保总萜对H_(22)肝癌细胞移植瘤小鼠Th1/Th2漂移及Bax/Bcl-2表达的影响

目的探讨芒见赛保总萜对H_(22)肝癌细胞移植瘤小鼠Th1/Th2漂移及Bax/Bcl-2表达的影响。方法昆明种小鼠皮下接种H_(22)肝癌腹水建立荷瘤动物模型,观测小鼠的一般状况、体质量变化、抑瘤率及脏器指数,ELISA法检测血清及脾脏组织中Th1(IL-2、IFN-γ)及Th2(IL-4、IL-10)型细胞因子水平,免疫组化法检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达水平,HE染色观察肿瘤组织及肝脏的病理变化。结果 100~400 mg/kg芒见赛保总萜可明显改善H_(22)肝癌移植瘤小鼠一般状况,抑制肿瘤生长,升高血清及脾脏IL-2水平,降低IFN-γ、IL-4、IL-10、IFN-γ/IL-4比值,改善Th1/Th2漂移状态,增强肿瘤组织中Bax表达,并抑制Bcl-2表达从而升高Bax/Bcl-2比值,缓解肿瘤及肝脏组织的病理学变化。结论芒见赛保总萜可明显抑制小鼠H_(22)肝癌的生长,改善小鼠血清及脾脏Th1/Th2漂移,提高肿瘤组织Bax/Bcl-2比值可能是其抗肿瘤的作用机制之一。     

制备抗线粒体单克隆抗体的初步结果

83年初自大鼠肝经蔗糖密度梯度差速离心法分离到形态典型的线粒体,聚丙烯酰胺电泳证明无杂蛋白及核酸,以此线粒体为抗原免疫Balb/c小鼠,腹腔及皮下共免疫4次,末次注射3天后取脾,制成7.6×10~6/ml细胞悬液,与SP2/0骨髓瘤细胞按1:4在50％PEG(分子量4000)溶液中进行融合,融合率为39％,由于后来霉菌污染,仅选了未污染并克隆好的孔上清液进行检测,从151孔中用ELISA法检出特异性抗体的6孔(弱阳性的2孔)计有2H_4,2H_5,2H_6,5C_5,2B_(11),6B_9,有9孔为分泌小鼠Ig的杂交瘤细胞,计有2H_4,     

抗人卵巢癌单克抗隆体的研制

用病理证实为卵巢浆液性囊性腺癌病人腹水在体外传代培养生长的细胞(第15代左右)免疫BALB/c小鼠.取其脾脏与骨髓瘤NS-1细胞融合,用间接免疫荧光法筛选抗卵巢癌细胞阳性克隆,经多次克隆化培养,得到五株杂交瘤细胞:G_4,H_1-B_7,H_1-B_8,E_(10)和     

活性氧促进中性粒细胞与骨髓基质细胞黏附及机制初探

目的:探讨活性氧对中性粒细胞与骨髓基质细胞(BMSCs)黏附的影响及其机制。方法:采用密度梯度离心法从小鼠胫骨和股骨分离骨髓中性粒细胞,并用DMSO诱导HL60细胞分化为成熟中性粒细胞(d HL60细胞)。利用分光光度法检测CFDA-SE标记的小鼠骨髓中性粒细胞和d HL60细胞在H_2O_2刺激下与BMSCs的黏附。利用荧光显微成像技术和Western blot检测携带去谷胱甘肽化酶谷氧还蛋白1(Grx1)表达载体的慢病毒感染的d HL60细胞中Grx1的表达。PCR检测Grx1敲除小鼠的基因型。结果:(1) Diff-Quick染色显示,分离的骨髓中性粒细胞纯度高于90%; H_2O_2处理后,中性粒细胞与BMSCs黏附率显著增加(P 0. 01)。(2)荧光显微镜观察和Western blot结果表明,Grx1稳转株d HL60细胞中Grx1的表达水平较空载体稳转株细胞显著增加;体外黏附实验表明过表达Grx1的d HL60细胞较对照组d HL60细胞,在相同H_2O_2浓度下,黏附到BMSCs程度显著下降(P 0. 01)。(3)经PCR鉴定,实验所用基因敲除小鼠在全基因水平上未见Grx1;且敲除Grx1的小鼠较野生型小鼠,在相同浓度H_2O_2刺激下,其骨髓中性粒细胞与BMSCs黏附率显著升高。(4)血管细胞黏附分子1(VCAM-1)抗体预处理BMSCs后,由H_2O_2引起的d HL60与BMSCs之间的黏附增强回复到了静息水平。结论:活性氧促进骨髓中中性粒细胞与BMSCs的黏附,其可能的机制是通过诱导VCAM-1黏附信号的S-谷胱甘肽化。     

FSP1在小鼠巨噬细胞中的表达特征及其生物学意义

目的探讨FSP1在小鼠巨噬细胞中的表达特征及其在巨噬细胞功能的意义。方法以FSP1~-GFP小鼠作为研究对象,采用流式细胞染色检测FSP1在小鼠巨噬细胞中的表达情况;应用多种细胞因子对FSP1~-巨噬细胞进行刺激,观察FSP1的表达情况;应用过氧化氢(H_2O_2)对巨噬细胞进行氧化应激诱导,并观察其FSP1的表达情况及上清中FSP1的浓度;流式检测FSP1~-和FSP1~+的巨噬细胞细胞因子分泌情况及吞噬功能。结果腹腔巨噬细胞和骨髓诱导来源的巨噬细胞均可被分为FSP1~+和FSP1~-两群。随着H_2O_2刺激腹腔巨噬细胞时间延长,FSP1~+巨噬细胞的比例下降,ELISA检测上清中的FSP1浓度增加;刺激FSP1~+和FSP1~-两群巨噬细胞对LPS诱导的IL-6、IL-12、TNF-α等促炎性细胞因子无明显差异;FSP1~-的腹腔巨噬细胞对鸡红细胞及乳胶微球的吞噬能力高于FSP1~+巨噬细胞。结论依据巨噬细胞对FSP1的表达可将巨噬细胞分为FSP1~+和FSP1~-两群。FSP1~+巨噬细胞经H_2O_2刺激分泌大量FSP1蛋白。这两群巨噬细胞对促炎性细胞因子的分泌无明显差异,但FSP1~-巨噬细胞的吞噬能力高于FSP1~+巨噬细胞。     

MUC1模拟表位肽治疗表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的实验研究

目的观察MUC1的模拟表位肽对表达人MUC1 T739荷瘤小鼠的治疗作用。方法建立稳定表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,培养T739小鼠成熟树突状细胞,荷瘤小鼠随机分为4组,用负载模拟表位肽成熟DC免疫表达人MUC1 T739荷瘤小鼠,第1组皮下注射等渗盐水,第2组注射空DC,第3组注射负载1号肽的DC,第4组注射负载2号肽的DC,测量肿瘤大小,计算肿瘤体积,称瘤重,并观察小鼠存活期。结果两组DC+肽免疫的小鼠瘤体积减小明显,与1、2组相比差异非常显著(P<0.01)。平均瘤重1、2组与3、4组相比差异非常显著(P<0.01)。第1～4组荷瘤鼠的生存期分别为(34.6±3.507)d,(35.2±3.564)d,(58.4±5.595)d,(59±6.819)d,3、4两组荷瘤小鼠生存期较1、2组明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论 MUC1模拟表位肽能明显抑制表达人MUC1 T739荷瘤小鼠肿瘤生长,显著延长T739荷瘤小鼠生存时间。     

人补体成份C4的小鼠性限蛋白的抗原位点

近来不同实验室报告,人C4系统与小鼠C4及性限蛋白(sex-limitel protein,slp)之间有不少类似点.人的两型C4(C4A及及C4B),小鼠的C4及slp均由与主要组织相容性复合体(MHC)连锁的两个结构基因编码,在人为A及B座位,在小鼠为C4及slp座位.这两个座位的产物在电泳及分子量方面有所不同。人的C4B及C4A片段相当于红细胞膜的Chido及Rodgers抗原。小鼠只有C4片段可在红细胞上测出。     

丹参酮ⅡA通过AK003290减轻H_2O_2诱导的原代小鼠心肌细胞焦亡

目的:探讨丹参酮ⅡA对过氧化氢(H_2O_2)诱导的原代小鼠心肌细胞焦亡的影响及可能分子机制。方法:分离培养原代小鼠心肌细胞,制备H_2O_2诱导的心肌细胞损伤模型,给予丹参酮ⅡA处理,分为对照(control)组、H_2O_2组(H_2O_2处理12 h)及丹参酮ⅡA组(20、40和60μmolo/L的丹参酮ⅡA预处理12 h+H_2O_2处理12 h);siRNA转染原代小鼠心肌细胞,real-time PCR确认干扰效率,分为对照(control)组、H_2O_2组(H_2O_2处理12 h)、丹参酮ⅡA组(40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理12 h+H_2O_2处理12 h)和siAK003290+丹参酮ⅡA组(siAK003290转染+40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理12 h+H_2O_2处理12 h)。CKK-8法测定细胞活力,Western blot检测细胞焦亡相关蛋白GSDMD和caspase-1表达,ELISA检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量,real-time PCR检测AK003290表达。结果:与control组相比,H_2O_2组细胞活力显著降低(P0.01),焦亡相关蛋白GSDMD和caspase-1表达增高(P0.01),细胞上清IL-1β和IL-18含量显著增加(P0.01),AK003290表达显著降低(P0.01);与H_2O_2组相比,丹参酮ⅡA组细胞活力显著升高(P0.05),焦亡相关蛋白GSDMD和caspase-1表达降低(P0.05),细胞上清IL-1β和IL-18含量显著减少(P0.05),AK003290表达显著增多(P0.05);与丹参酮ⅡA组相比,siAK003290+丹参酮ⅡA组细胞活力显著降低(P0.05),焦亡相关蛋白GSDMD和caspase-1表达增高(P0.05),细胞上清IL-1β和IL-18含量显著增加(P0.05)。结论:丹参酮ⅡA可减轻H_2O_2诱导的原代小鼠心肌细胞焦亡,其机制与上调AK003290的表达有关。     

褪黑素通过AMPK通路减轻H_2O_2诱导的小鼠神经元线粒体损伤

目的:研究褪黑素对H_2O_2所致小鼠皮层神经元线粒体稳态失衡的保护作用以及分子机制。方法:将原代小鼠皮层神经元分为对照组(control)、H_2O_2处理组(H2O2)、H_2O_2+褪黑素处理组(H_2O_2+Mel)和H_2O_2+褪黑素+WZ4003处理组(H_2O_2+Mel+WZ4003)。利用商品化试剂盒检测神经元乳酸脱氢酶(LDH)释放,使用TUNEL染色和Annexin V/PI染色检测神经元凋亡,利用real time RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)和核呼吸因子1(NRF1) m RNA表达变化,利用Western Blot检测cleaved caspase-3、p-AMPK、AMPK、线粒体融合蛋白2(Mfn2)和动力蛋白相关蛋白1 (Drp1)等蛋白分子的变化,使用JC-1染色检测线粒体膜电位(MMP)变化。结果:H2O2处理能导致小鼠皮层原代神经元LDH释放增多,线粒体膜稳态失衡,并导致神经元发生凋亡;褪黑素可以显著减轻神经元损伤,恢复线粒体稳态,抑制神经元凋亡; WZ4003可以逆转褪黑素对H2O2导致神经元线粒体损伤的保护作用。结论:褪黑素可以通过激活AMPK相关信号通路,维持神经元线粒体稳态,从而减轻H_2O_2所致神经元损伤。     

重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

本文报道重组人γ-干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株建立的方法及结果。为获得供融合用的小鼠脾细胞,用两种不同的方案免疫了两组(每组3只)BALB/c小鼠。血清抗体效价最高的第4号小鼠,于加强免疫4天后取脾,制成脾细胞悬液。按照常规方法与小鼠骨髓瘤SP 2/0·Ag 14细胞融合。采用直接中和试验法筛选融合细胞孔的上清液,从中选出两株(A3和B3)分泌抗重组人γ-干扰素的杂交瘤细胞。交叉中和试验显示,A_3和B_3抗体只中和重组或自然的人γ-干扰素;与α-干扰素或β-干扰素无反应。此两株单克隆抗体的效价分别超过128,000和25,600。双扩散试验证明,A_3和B_3均为小鼠IgG_1型抗体;液氮中保存半年以上,仍保持原有的各种特性。     

纯化的单克隆抗体对乙酰胆碱酯酶催化反应的响影

本文研究了BALB/c小鼠杂交瘤细胞分泌的抗AchE单克隆抗体对AchE催化反应的影响及其机制。 小鼠腹水抗体经蛋白A-Sepharose CL-4B亲和层析柱分离纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一区带,ELISA试验结果11株单克隆抗体的滴度分别在1:5000～300,000。在以酰胆碱为底物的催化反应中,3F_3 2G_8、1H_(11)三株杂交瘤分泌的单克隆抗体对AchE活性有明显抑制     

rIL-2在小鼠体内抗结核菌能力的研究

用人型结核菌H_(37)RV株和耐药结核菌分别感染小鼠。5和15天后,每只小鼠以重组白细胞介素-2作肌肉注射,分5000u和10000u/只两组,连续注射10天,观察小鼠的抗菌能力。结果表明,经实验治疗后,小鼠脾脏内总菌数和活菌数明显减少。感染后于上述用药时间,剂量组之间无显著差别。     

丁苯酞减轻H2O2诱导的人脐静脉和脐动脉内皮细胞氧化损伤

目的探讨丁苯酞(NBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的血管内皮细胞(人脐静脉和脐动脉)氧化损伤的保护作用及发生机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人脐动脉内皮细胞(HUAECs)。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选合适的H_2O_2剂量建立两种细胞的氧化应激损伤模型。在加入H_2O_2前2 h,分别用两种剂量的丁苯酞(5和10μmol/L)预孵育细胞,用MTT法检测细胞活力,罗丹明123检测线粒体膜电位,Annexin V/PI双染法检测凋亡细胞,Fura-4/AM检测细胞内游离钙。结果 H_2O_2刺激可导致HUVECs和HUAECs细胞活力下降,线粒体膜电位下降,细胞内游离钙增多,细胞凋亡率上升(P0.05)。丁苯酞可改善H_2O_2诱导的上述变化。结论丁苯酞可通过减轻H_2O_2造成的氧化损伤来保护血管内皮细胞。     

H_(22)肿瘤细胞核糖核酸对正常小鼠脾淋巴细胞的细胞毒功能影响

本文报道应用细胞介导的~(51)Cr 释放细胞毒试验观察 H_(22)TuRNA 体外对正常小鼠脾淋巴细胞细胞毒功能的影响。结果表明,当以≥250μg H_(22)TuRNA/1×10~7淋巴细胞的比例将两者在37℃共育≥60分钟,H_(22)TuRNA 可显著抑制淋巴细胞的细胞毒功能,效应具有明显的剂量依赖性。牛胰核糖核酸酶处理并不能消除 H_(22)TuRNA 的抑制效应,酶处理后样品的电泳图谱表明,具有抗RNase 性质的4S 左右的小分子是其抑制作用的效应成份之一。H_(22)TuRNA 尚可抑制淋巴细胞的粘附能力,提示其可能通过影响淋巴细胞与靶细胞之间的互相接触而表现出对淋巴细胞细胞毒功能的抑制。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

以RSV(Long株)抗原液滴鼻免疫BALB/c小鼠两次后,于小鼠腹腔脾区攻击。Sp 2/0骨髓瘤细胞和小鼠免疫脾细胞1:1O混合,50％PEG(MW1000)介导融合。用免疫间接萤光法检测,测出萤光(++)以上的阳性孔46个。对其中6个孔连续克隆三次,稳定传35代,获得稳定分泌抗RSV McAb杂交瘤细胞6D_9、4C_2、6F_3、6F_7、6H_9及10F_5六株。其小鼠腹水效价达1:8000～102400(++)。Ig亚类除6F_2外均为Ig 2a,6F_3未出沉淀线。因未做IgA、IgM类型鉴定,故有待证实。经交叉实验证明该McAb与腺病毒Ⅶ型、麻疹病毒、副流感病毒Ⅲ     

低浓度H_2O_2预处理增强骨髓间充质干细胞活力

目的探讨过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和抗凋亡能力的作用及机制。方法分离、培养、鉴定小鼠BMSCs。观察不同低浓度H_2O_2处理BMSCs 48 h后细胞的增殖,以及SDF-1及其受体CXCR4、CXCR7的表达;其次,观察经50μmol/L H_2O_2预处理BMSCs 12 h后,再经500μmol/L H_2O_2作用,或同时加入CXCR7抗体作用48 h,用Hoechst33342染核观察BMSCs凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CXCR4、CXCR7和信号通路Akt/m TOR关键蛋白的表达。结果 25、50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖;50、100μmol/L H_2O_2能显著上调SDF-1、CXCR4、CXCR7表达;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞能显著增强迁移能力,而CXCR7抗体能阻断此效应;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞可显著抑制500μmol/L H_2O_2引起的损伤,凋亡细胞核由30.97%±3.71%降至16.23%±2.51%(P0.01),但仍然显著高于对照组(4.67%±2.37%)(P0.01);同样,预处理能显著下调Bax、上调Bcl-2表达(P0.05),上调Akt/m TOR通路关键蛋白磷酸化,CXCR7抗体则阻断此效应。结论H_2O_2预处理通过CXCR7受体活化Akt/m TOR信号通路增强干细胞存活和抗凋亡能力。     

SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究#br#

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,pMφ）分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。 方法　(1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中pMφ表面CD31分子的表达情况;(2)用液相芯片技术检测和比较SETD4-/-和SETD4+/+小鼠pMφ在受到脂多糖（LPS）刺激后对细胞因子TNF-α、IL-6释放的影响, 流式细胞术检测SETD4基因敲除对巨噬细胞吞噬细菌能力及Transwell检测对巨噬细胞迁移能力的影响;(3)流式细胞术分析和比较两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例的差异;(4)HE染色对比两组小鼠胸腺和脾脏组织结构的差异。 结果　（1）与SETD4+/+小鼠相比,SETD4-/-小鼠pMφ受到LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠pMφ的比例及分化成熟程度无明显差异;（2）吞噬细菌能力和迁移能力两组无明显差异;（3）两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例无明显差异;（4）SETD4基因敲除对小鼠胸腺和脾脏的结构无明显影响。 结论　（1）SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对pMφ的分化成熟及细菌吞噬、迁移能力无明显影响;（2）SETD4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏组织的发育无明显影响。     

SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究

目的探讨SETD4(SET-domain containing protein 4)基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,pMφ)分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。方法 (1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中pMφ表面CD31分子的表达情况;(2)用液相芯片技术检测和比较SETD4~(-/-)和SETD4~(+/+)小鼠pMφ在受到脂多糖(LPS)刺激后对细胞因子TNF-α、IL-6释放的影响,流式细胞术检测SETD4基因敲除对巨噬细胞吞噬细菌能力及Transwell检测对巨噬细胞迁移能力的影响;(3)流式细胞术分析和比较两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例的差异;(4)HE染色对比两组小鼠胸腺和脾脏组织结构的差异。结果 (1)与SETD4~(+/+)小鼠相比,SETD4~(-/-)小鼠pMφ受到LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠pMφ的比例及分化成熟程度无明显差异;(2)吞噬细菌能力和迁移能力两组无明显差异;(3)两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例无明显差异;(4)SETD4基因敲除对小鼠胸腺和脾脏的结构无明显影响。结论 (1)SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对pMφ的分化成熟及细菌吞噬、迁移能力无明显影响;(2)SETD4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏组织的发育无明显影响。     

抗激活小鼠T细胞抗原单抗抑制同种移植物排斥反应的作用及其机理

为阐明活化 T 细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,利用本室制备的抗活化小鼠 T 细胞抗原单克隆抗体(2H_3)观察它对同种免疫反应的影响;结果表明给接受同种移植物的受者转输2H_3能显著地延长同种心肌移植物的存活时间;在 ConA 诱导的淋巴细胞增生反应、混合淋巴细胞反应和诱导同种 T 杀伤性细胞的体外实验中加入2H_3,观察到2H_3对上述反应的明显抑制作用。提示活化 T细胞主动免疫同系小鼠诱导同种移植物存活期延长的机理,可能与免疫动物体内产生了相应的抗体,抑制了同种免疫反应的进行有关。