槲皮素对宫颈癌细胞侵袭能力的作用机制

目的 探讨槲皮素对宫颈癌侵袭和转移的作用机制及其与乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的相关性.方法 构建宫颈癌Hela细胞组、Hela+槲皮素组、HPA-SiRNA-Hela组、HPA SiRNA-Hela+槲皮素组4组细胞模型,应用Transwell小室基质划痕损伤实验方法,测定不同时间点各组宫颈癌Hela细胞侵袭能力的变化.结果 在6,12,24 h时,Hela+槲皮素组及HPA-SiRNA-Hela组与Hela细胞组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力明显下降(P＜0.01);HPA-SiRNA-Hela组与Hela+槲皮素组比较差异无统计学意义(P＞0.05);HPA-SiRNA-Hela+槲皮素组与其他3组比较,宫颈癌Hela细胞迁移能力均下降(P均＜0.01).结论 槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力有明显抑制作用,HPA与宫颈癌Hela细胞的侵袭过程相关,而槲皮素对宫颈癌Hela细胞的侵袭能力的抑制作用可能与HPA相关.     

DLC-3表达对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的探讨外源性过表达DLC-3对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及凋亡活动的影响。方法对数生长期乳腺癌MCF-7细胞分为实验组、阴性对照组和空白对照组,实验组细胞转染DLC-3基因过表达质粒,阴性对照组细胞转染空白质粒,空白对照组细胞仅进行换液处理。3组采用实时PCR法检测细胞DLC-3 mRNA相对表达量;转染12、24 h后,采用细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率;转染48 h后,采用CCK-8实验检测细胞增殖率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果实验组DLC-3 mRNA相对表达量(17 563.57±2 880.85)高于空白对照组(0.56±0.43)和阴性对照组(1.00±0.00)(P0.05),空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48 h后,实验组细胞增殖率[(31.47±5.57)%]低于阴性对照组[(36.27±3.71)%]和空白对照组[(37.90±5.70)%],但差异无统计学意义(P0.05);转染12、24 h后,实验组划痕愈合率[(32.769±4.349)%、(38.237±4.286)%]低于空白对照组[(37.506±1.836)%、(49.052±4.090)%](P0.05),阴性对照组[(35.659±3.970)%、(48.724±5.092)%]与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48 h后,实验组细胞凋亡率[(15.893±1.597)%]高于阴性对照组[(10.277±1.947)%]和空白对照组[(11.973±1.564)%](P0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论提高MCF-7细胞中DLC-3表达可降低细胞增殖水平,抑制其迁移能力,并促进细胞凋亡。     

shRNA-FAM-38A基因对宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移的影响

目的探讨shRNA-FAM-38A基因在宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移中的作用。方法宫颈癌CS1213细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。空白对照组细胞不转染慢病毒载体,阴性对照组细胞转染无序序列慢病毒载体,实验组细胞转染沉默shRNA FAM-38A慢病毒载体。采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞FAM-38A、caspase-3和caspase-9 mRNA相对表达量,采用Transwell小室实验检测3组CS1213细胞迁移细胞数,采用CCK-8实验检测3组细胞增殖率。结果实验组细胞FAM-38A mRNA相对表达量(0.32±0.07)、迁移细胞数[(44.38±5.32)个]、细胞增殖率[(47.54±7.63)%]低于空白对照组[0.95±0.13、(99.72±19.63)个、(144.63±21.75)%]和阴性对照组[1.14±0.23、(119.63±21.87)个、(145.62±11.97)%](P0.05),caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量(5.11±1.21、12.64±2.87)高于空白对照组(0.84±0.09、0.22±0.03)和阴性对照组(0.89±0.12、0.21±0.04)(P0.05),空白对照组FAM-38A、caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量及迁移细胞数、细胞增殖率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 shRNA-FAM-38A基因可抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,可作为宫颈癌的潜在治疗靶点。     

塞来昔布抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移效应的研究

目的观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)抑制宫颈癌细胞株Hela体外迁移的效应。方法选用宫颈癌细胞株Hela作为研究对象。选择适当浓度的Celecoxib,设置对照组(C)、药物组(D)、单纯照射组(R)和药物+照射组(R+D),细胞划痕试验观察Hela细胞的体外迁移力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2的含量。结果 D组较C组,D+R组较R组的细胞迁移力均明显下降,且随药物浓度增加,抑制细胞迁移力增强,R组较C组的细胞迁移力无明显改变;ELISA检测发现细胞培养上清液中MMP-2的含量D组较C组、R+D组较R组均明显下降(P<0.05),但R组与C组对细胞分泌MMP-2的抑制效应并无明显统计学差异。结论塞来昔布可能通过抑制宫颈癌细胞株Hela分泌MMP-2,从而抑制细胞体外迁移力。     

hsa_circ_0000417表达水平对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨hsa_circ_0000417表达水平对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测hsa_circ_0000417在正常人星形胶质细胞HA1800和人源神经胶质瘤细胞U87MG和U251中相对表达量;选择hsa_circ_0000417相对高表达的人源神经胶质瘤细胞U251随机分为siRNA-circ抑制剂组和siRNA-NC对照组,分别转染靶向hsa_circ_0000417接头序列的抑制剂siRNA-circ和阴性对照siRNA-NC,采用实时荧光定量PCR法检测2组U251细胞hsa_circ_0000417相对表达量;转染1、2、3、4 d时,采用CCK-8法测转染后2组细胞增殖率;转染24 h时,采用划痕试验检测2组细胞划痕愈合面积,采用Transwell小室试验检测2组侵袭细胞数。结果人正常星形胶质细胞HA1800 hsa_circ_0000417相对表达量(1.00±0.06)高于人源神经胶质瘤细胞U251(0.85±0.03)和U87MG(0.36±0.02)(P0.05),人源神经胶质瘤细胞U251高于U87MG(P0.05)。转染后siRNA-circ抑制剂组hsa_circ_0000417相对表达量(0.04±0.01)低于siRNA-NC对照组(1.00±0.09)(P0.05);转染1、2、3、4 d时,siRNA-circ抑制剂组细胞增殖率[(90.55±6.30)%、(90.88±2.87)%、(72.42±7.83)%、(65.51±4.28)%]均低于siRNA-NC对照组[(100.00±5.24)%、(100.00±7.86)%、(100.00±4.51)%、(100.00±7.57)%](P0.05)。转染24 h时,siRNA-circ抑制剂组划痕愈合面积百分比[(12.26±2.06)%]和侵袭细胞数[(207±95)个]少于siRNA-NC对照组[(19.01±3.89)%、(814±102)个](P0.05)。结论 Hsa_circ_0000417可提高神经胶质瘤细胞U251的增殖、迁移和侵袭能力,hsa_circ_0000417有可能成为神经胶质瘤新的治疗靶点。     

罗米地辛对肺癌多倍体肿瘤巨细胞生物学行为的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)生物学行为的影响。方法人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299购自中国科学院上海细胞库。用100 nmol/L多西他赛处理NCI-H1299细胞24 h, 建立肺癌PGCC模型, 作为PGCC组;用100 nmol/L罗米地辛处理PGCC组细胞48 h, 记为PGCC+罗米地辛组;将二甲基亚砜(DMSO)处理组细胞记为DMSO组。采用流式细胞术检测细胞DNA含量;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞中存活素蛋白(Survivin)、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物蛋白(c-Myc)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-x基因长片段蛋白(Bcl-xl)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果流式细胞术检测细胞DNA含量结果显示, PGCC组PGCC亚群(DNA含量>4 N)百分比[(60.53±9.92)%]明显高于DMSO组[(2.08±0.62)%], 差异有统计学意义(...     

Krüppel样因子4对HeLa细胞生物学行为的影响

目的探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4, KLF4)对HeLa细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 HeLa细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞采用Western blot法检测KLF4蛋白相对表达量。对数生长期人HeLa细胞分为对照组、HeLa/KLF4组和阴性对照组,其中对照组细胞正常培养,不进行转染;HeLa/KLF4组和阴性对照组细胞分别转染人KLF4表达质粒和KLF4空载质粒;采用CCK-8增殖实验检测转染24、48、72 h后3组细胞生长抑制率,采用CCK-8黏附实验检测细胞黏附能力,采用Transwell侵袭和迁移实验检测3组细胞侵袭细胞数和迁移细胞数。结果 HeLa细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.22±0.03)低于正常宫颈上皮Ect1/E6E细胞(0.78±0.10)(P0.05),HeLa/KLF4组细胞中KLF4蛋白相对表达量(0.75±0.09)高于阴性对照组(0.32±0.04)和对照组(0.34±0.05)(P0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染24、48、72 h,HeLa/KLF4组细胞生长抑制率均高于阴性对照组和对照组(P0.05),阴性对照组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);培养1、2 h后,HeLa/KLF4组细胞黏附能力低于阴性对照组和对照组(P0.05),培养3、4 h后3组细胞黏附能力比较差异无统计学意义(P0.05);培养24 h后,HeLa/KLF4组侵袭细胞数[(28.48±4.33)个]和迁移细胞数[(97.73±17.88)个]明显低于对照组[(69.34±8.58)、(220.68±34.25)个]和阴性对照组[(62.25±6.78)、(208.14±25.83)个](P0.05),对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 KLF4在宫颈癌中可能起抑癌基因的作用,对宫颈癌细胞增殖、生长有抑制效果,并可降低癌细胞的黏附能力、侵袭和迁移能力,KLF4有可能成为宫颈癌发生、发展研究的新靶点。     

特异性嵌合抗原受体-T细胞对不同表皮生长因子受体表达肿瘤的杀伤效应研究

目的探讨特异性嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对不同表皮生长因子受体(EGFR)表达肿瘤的杀伤效应。方法北部战区总医院呼吸与危重症医学科已制备所需CAR-T细胞, 将其分为UTD对照组、EGFR CAR-T组和CD19 CAR-T组。选取H23非小细胞肺癌细胞系、SKOV3卵巢癌细胞系、Hela宫颈癌细胞系及人胃癌细胞系(HGC)27胃癌细胞系, 采用流式细胞术检测肿瘤细胞表面EGFR表达情况, 通过免疫磁珠分选技术分选SKOV3和Hela细胞, 分选得到EGFR阳性率更高的肿瘤细胞, 采用流式细胞术检测其表达EGFR阳性率。将UTD对照组、EGFR CAR-T组和分化抗原簇(CD)19 CAR-T组分别与不同EGFR阳性率肿瘤细胞共培养, 通过实时无标记细胞功能分析仪(RTCA)检测其对多种EGFR表达率肿瘤细胞的杀伤曲线。结果流式细胞术检测H23、SKOV3、Hela及HGC27细胞系的EGFR阳性率分别为83.7%、73.8%、48.3%和6.1%。免疫磁珠法分选后SKOV3及Hela细胞系EGFR表达率为81.1%和64.2%。RTCA法证实EGFR CAR-T组能够杀伤EGFR...     

RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响。方法构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interfering,siRNA)真核表达干扰质粒pRNAT-siRNA-survivin转染食管癌Eca-109细胞为干扰组,构建阴性对照质粒pRNAT-siRNA-control转染Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组,3组采用Western blot检测survivin蛋白表达水平。取对数生长期干扰组Eca-109/si-survivin细胞和空白对照组Eca-109细胞,在直线加速器下分别给予6Gy的X线照射,分别为干扰+X线照射组和单纯X线照射组(X线照射组),采用流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,采用MTT法分析细胞存活分数。结果干扰组细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组(44.17±3.15)和空白对照组(46.20±2.62)明显下调(P0.05);干扰+X线照射组细胞凋亡指数[(29.56±0.74)%]明显高于空白对照组[(4.35±0.15)%]、阴性对照组[(4.32±0.32)%]、干扰组[(9.24±0.35)%]和X线照射组[(22.17±0.75)%],差异均有统计学意义(P0.05),干扰组和X线照射组明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰+X线照射组细胞存活分数[(19.54±1.12)%]明显低于空白对照组[(95.35±1.40)%]、阴性对照组[(93.45±1.38)%]、干扰组[(70.96±0.85)%]和X线照射组[(35.84±0.52)%](P0.05),干扰组和X线照射组明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,进而增强人食管癌Eca-109细胞的放射敏感性。     

miR-708对肺腺癌A549细胞增殖和迁移的影响

目的探讨miR-708对人肺腺癌A549细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人肺腺癌A549细胞株随机分为转染组和对照组,转染组通过质粒转染上调miR-708表达,对照组采用常规质粒转染。转染24h,EDU染色后荧光显微镜下观察,计算2组A549细胞增殖率;转染后24、48h,采用细胞划痕实验检测2组A549细胞迁移距离。结果转染24h,转染组A549细胞增殖率[(19.58±1.15)%]较对照组[(42.04±1.04)%]低(P0.05);转染24、48h,转染组细胞迁移距离[(0.47±0.03)、(0.90±0.02)cm]较对照组[(0.75±0.04)、(1.44±0.02)cm]短(P0.05)。结论miR-708可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移能力。     

低频超声辐照联合自噬抑制抗小鼠4T1乳腺癌的实验研究

目的探讨低频超声辐照联合自噬抑制对小鼠4T1乳腺癌生长和侵袭的影响。方法取对数生长期的4T1细胞, 分为对照组、超声组、羟氯喹组、超声联合羟氯喹组。蛋白质免疫印迹检测细胞LC3、p62、MMP-9的表达水平;透射电镜观察细胞内自噬体的形成;EdU与CCK-8测定细胞的增殖与细胞活力;Transwell法测定细胞侵袭力;流式细胞术检测对细胞凋亡的影响。构建4T1乳腺癌BALB/c小鼠移植瘤模型, 分为对照组、超声组、羟氯喹组、超声联合羟氯喹组, 每组5只, 每2 d测量肿瘤体积及小鼠体重。结果超声联合羟氯喹组LC3-Ⅱ与p62的蛋白水平表达增加, 透射电镜可见细胞内明显自噬体积累;在细胞实验中, 与其他三组相比, 超声联合羟氯喹组的生长抑制作用更强, 细胞增殖率显著下降, MMP-9的表达降低, 并能明显抑制侵袭(均P<0.050);在体内实验中, 与对照组相比, 各组小鼠肿瘤生长速度下降(均P<0.050), 超声联合羟氯喹组较超声组和羟氯喹组治疗效果更优(均P<0.001)。结论低频超声辐照联合羟氯喹能够协同抑制肿瘤细胞增殖, 促进细胞凋亡, 明显减缓4T1荷瘤小鼠...     

人脐带间充质干细胞条件培养基对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨人脐带间充质干细胞条件培养基(UCMSC-CM)对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其机制。方法体外培养肝癌细胞系HepG2和BEL-7402, 常规培养肝癌细胞系作为对照组, UCMSC-CM处理的肝癌细胞系作为UCMSC-CM组。采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕试验和Transwell侵袭试验分别检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、Bak、Bax、兔抗人大分子B淋巴细胞瘤蛋白(BCL-XL)、髓细胞白血病-1蛋白(MCL-1)、存活素蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中上皮间质转化(EMT)相关标志物mRNA的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示, UCMSC-CM处理HepG2细胞和BEL-7402肝癌细胞24、48、72 h后的光密度值与对照组比较, 差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术检测结果显示, UCMSC-CM组与对照组处理HepG2、BEL-7402细胞早期(Q4)、晚期(Q2)凋亡率比较, 差...     

miR-645调控干扰素诱导蛋白2对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制

目的探讨miR-645对干扰素诱导蛋白2(interferon inducible protein 2, IFIT2)的表达以及对肺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用反转录PCR法检测肺癌组织和细胞以及配对的正常组织和细胞中miR-645相对表达量。对数生长期人肺癌细胞H460分为对照组和转染组,分别转染NC mimic和miR-645 mimic,采用CCK-8法检测2组细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测2组细胞侵袭率;采用荧光素酶报告基因实验检测2组细胞miR-645和IFIT2的结合活性;采用反转录PCR法检测2组细胞miR-645和IFIT2 mRNA相对表达量。结果肺癌组织(3.25±0.25)和肺癌细胞(2.85±0.22)miR-645相对表达量均高于正常肺组织(1.00±0.12)和正常肺上皮细胞(1.00±0.08)(P<0.05);转染组细胞增殖率[(220±12)%]、细胞侵袭率[(65.6±5.2)%]均高于对照组[(100±8)%、(25.9±3.2)%](P<0.05);转染组野生型3’UTR(WT-IFIT2)相对荧光素酶活性(0.48±0.06)低于对照组(1.00±0.12)(P<0.05),突变型3’UTR(MUT-IFIT2)相对荧光素酶活性(1.12±0.09)与对照组(1.00±0.08)比较差异无统计学意义(P>0.050);转染组细胞IFIT2 mRNA相对表达量(0.32±0.05)低于对照组(1.00±0.10)(P<0.05),miR-645在肺癌细胞中表达水平与IFIT2呈负相关(r=-0.743,P<0.001)。结论 miR-645可促进肺癌细胞H460的增殖和侵袭,其作用机制是通过调控IFIT2的表达而实现。     

沉默p21活化激酶1表达对人黑素瘤A375细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表达对人黑素瘤A375细胞凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法对数生长期人黑素瘤A375细胞随机分为转染组(转染PAK1特异性shRNA)、阴性对照组(转染NC-shRNA)、空白对照组(不进行转染)。转染后培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测A375细胞PAK1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测A375细胞PAK1及p-PAK1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果转染后培养72 h,转染组PAK1 mRNA相对表达量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相对表达量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相对表达量(0.21±0.03)均低于阴性对照组(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白对照组(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P0.05),细胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于阴性对照组[(5.86±0.51)%]、空白对照组[(5.43±0.03)%](P0.05),迁移细胞数[(47.00±2.23)个]、侵袭细胞数[(30.00±4.44)个]较阴性对照组[(76.00±4.85)、(54.00±3.67)个]、空白对照组[(77.90±4.97)、(56.00±4.12)个]少(P0.05),阴性对照组上述各指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论沉默PAK1基因表达可促进人黑素瘤A375细胞凋亡,降低其迁移及侵袭能力。     

微小RNA-126对卡波西肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨卡波西肉瘤细胞系转染微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)后对细胞迁移和侵袭能力影响。方法卡波西肉瘤细胞株SLK随机分为miR-126模拟物组、阴性对照组、miR-126抑制物组和抑制物阴性对照组,分别将miR-126模拟物25ng、阴性对照25ng、miR-126抑制物250ng和抑制物阴性对照250ng加入转染试剂3μL,室温孵育10min形成转染混合物,分别转染到4组细胞悬液中,孵育48h后行Transwell小室迁移实验和侵袭实验,将Transwell小室基底膜完整切除,行苏木精染色,光学显微镜下计数细胞迁移数目和细胞侵袭数目。结果 miR-126模拟物组细胞迁移数目[(77.33±7.02)个]和细胞侵袭数目[(25.67±2.52)个]较阴性对照组[(96.67±6.11)、(45.67±2.08)个]、miR-126抑制物组[(138.00±8.00)、(76.67±4.16)个]和抑制物阴性对照组[(101.33±9.29)、(47.33±1.53)个]少(P0.05);miR-126抑制物组细胞迁移和侵袭数目较阴性对照组和抑制物阴性对照组多(P0.05);阴性对照组细胞迁移和侵袭数目与抑制物阴性对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-126对卡波西肉瘤细胞侵袭和迁移起抑制作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。     

辐射诱导人骨髓间充质干细胞自噬反应的研究

目的 观察辐射条件下人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)的自噬反应。方法 应用Annexin- Ⅴ/PI双标法检测0、2、4、8、10Gy X线照射后4 h hBMMSC凋亡率和坏死率的变化;通过透射电子显微镜观察0、8、10Gy X线照射后4h的hBMMSC自噬形态学变化,以经典的自噬诱导剂雷帕霉素处理组作为阳性对照,并应用RT-PCR技术检测自噬相关基因Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAPLC3,简称为LC3)mRNA表达。结果 在低于8 Gy的剂量范围内,hBMMSC的凋亡率随照射剂量的增加而降低,坏死率和死亡(凋亡+坏死)率随照射剂量的增加而升高,但升高幅度较小。当剂量增至10 Gy时,凋亡率升至最高,而坏死率和死亡率的升高幅度增大。并且整体凋亡率变化比坏死率明显。透射电镜观察显示正常对照组中偶见自噬泡(自噬体和自噬溶酶体合称为自噬泡)出现,而照射组及阳性对照组中均可见明显自噬泡聚集,8 Gy照射组的自噬泡阳性细胞比例为(71.67 +7.64)％,高于10 Gy照射组的(56.67±7.64)％。RT-PCR检测结果显示正常对照组中Beclin1 mRNA和LC3 mRNA表达水平均很低,而照射组及阳性对照组中两个基因的表达明显升高,且8 Gy照射组(0.518±0.005、0.408±0.006)表达水平高于10 G照射组(0.441±0.002、0.360±0.019)％。结论 辐射应激可以诱导hBMMSC的自噬反应,在一定照射剂量范围内,自噬可能对hBMMSC有放射保护作用。     

汉黄芩素对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨汉黄芩素对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法肝癌细胞SMMC-7721分为5μmol/L汉黄芩素组、10μmol/L汉黄芩素组、20μmol/L汉黄芩素组和空白对照组。5、10、20μmol/L汉黄芩素组分别加入5、10、20μmol/L汉黄芩素进行处理,空白对照组不进行任何处理。处理48h后,采用MTT法检测各组细胞增殖率,采用TUNEL法检测各组细胞凋亡率,采用划痕试验检测各组细胞划痕愈合率,采用Transwell侵袭试验检测各组侵袭细胞数,并进行比较。结果处理48h后,20μmol/L汉黄芩素组细胞增殖率[(46.8±4.5)%]、划痕愈合率[(38.3±2.1)%]和侵袭细胞数[(16±7)个]明显低于5μmol/L汉黄芩素组[(93.5±2.3)%、(73.3±4.6)%、(24±2)个]、10μmol/L汉黄芩素组[(58.3±6.2)%、(47.8±3.6)%、(19±5)个]和空白对照组[100.0%、100.0%、(29±8)个],10μmol/L汉黄芩素组低于5μmol/L汉黄芩素组和空白对照组,5μmol/L汉黄芩素组低于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05);20μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率[(27.3±3.6)%]明显高于5μmol/L汉黄芩素组[(8.8±5.3)%]、10μmol/L汉黄芩素组[(16.1±3.7)%]和空白对照组[(4.6±2.1)%],10μmol/L汉黄芩素组高于5μmol/L汉黄芩素组和空白对照组,5μmol/L汉黄芩素组高于空白对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论汉黄芩素可抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,诱导其凋亡。     

MACC1对宫颈癌细胞侵袭转移能力的影响

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对宫颈癌细胞Hela侵袭转移能力的影响及机制。方法Western blot法检测我院10例宫颈癌组织标本和10例癌旁正常组织标本中MACC1的表达,通过脂质体将siRNAMACC1转入宫颈癌Hela细胞中,MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞和迁移侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMPs)及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达量。结果宫颈癌组织中的MACC1表达量高于癌旁正常组织(P0.01),通过脂质体将siRNA-MACC1及阴性对照转染到宫颈癌Hela细胞后,与对照组比较,siRNA-MACC1组中细胞活力下降,细胞迁移和侵袭能力下降(P0.01),MMP2,MMP9及波形蛋白(vimentin)表达量下调(P0.01),E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达量上调(P0.01)。结论 MACC1表达下调能抑制宫颈癌Hela细胞侵袭转移能力,与逆转MMPs,EMT相关蛋白表达有关。     

非小细胞肺癌患者血浆miR-451表达及对HCC827细胞生物学性质和放疗敏感性的影响

目的探讨miR-451在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达及其对NSCLC细胞生物学性质及放疗敏感性的影响。方法 NSCLC患者69例为观察组,同期体检健康者53例为对照组,采用实时荧光定量PCR法检测2组血浆miR-451 mRNA相对表达量。将人NSCLC细胞株HCC827随机分为空白对照组、miR-451组和慢病毒组,空白对照组不作处理,miR-451组和慢病毒组分别转染包含miR-451、无意义核苷酸序列慢病毒;转染24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖;转染72 h,采用Transwell小室试验检测细胞侵袭,采用划痕试验检测细胞迁移距离。再将3组细胞分为0、3、6、9 Gy 4个亚组,分别接受相应剂量的X线照射,采用MTT法检测细胞增殖和细胞存活。结果观察组血浆miR-451相对表达量(1.72±0.39)低于对照组(2.16±0.31)(P0.05)。miR-451组细胞miR-451相对表达量(4.17±0.82)高于空白对照组(1.32±0.37)和慢病毒组(1.26±0.33)(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05);转染24、48、72 h,miR-451组细胞增殖率均低于空白对照组和慢病毒组(P0.05);转染72 h,miR-451组侵袭细胞数[(123.7±26.4)个]较空白对照组[(247.6±39.7)个]和慢病毒组[(254.5±38.2)个]少,细胞迁移距离[(45.2±8.8)μm]较空白对照组[(73.2±11.7)μm]和慢病毒组[(68.9±10.4)μm]近(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05);miR-451组细胞在0、3、6、9 Gy剂量X线照射后的细胞增殖率和细胞存活率均低于空白对照组和慢病毒组(P0.05),空白对照组与慢病毒组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 miR-451在NSCLC患者血浆呈低表达;miR-451可抑制HCC827细胞增殖、侵袭与迁移,上调HCC927细胞对放疗的敏感性。     

槲皮素抑制宫颈癌Siha细胞增殖和侵袭实验研究

目的探讨槲皮素对人宫颈癌Siha细胞生长、增殖、黏附、迁移和侵袭的影响。方法对数生长期人宫颈癌Siha细胞,分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组,分别加入0、20、40、80μmol/L槲皮素进行处理;采用MTT法检测各组细胞增殖率,采用划痕试验检测各组细胞迁移距离和迁移率,采用Transwell小室检测各组侵袭细胞数和侵袭抑制率,采用实时定量PCR反应检测对照组与80μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR、miR-23b、MAPK1mRNA表达水平,采用Western blot法检测各组细胞HOTAIR、miR-23b、MAPK1蛋白表达水平。结果对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组细胞增殖率、细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数依次降低(P0.05),侵袭抑制率依次增高(P0.05);80μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR mRNA(0.723±0.089)、MAPK1 mRNA(0.786±0.166)表达水平低于对照组(1.665±0.104、1.637±0.151),miR-23bmRNA表达水平(6.671±0.093)高于对照组(1.578±0.112)(P0.05);对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组细胞HOTAIR蛋白(0.97±0.15、0.72±0.09、0.54±0.11、0.33±0.07)、MAPK1蛋白(0.74±0.07、0.42±0.08、0.21±0.05、0.13±0.03)表达水平依次降低,miR-23b蛋白表达水平(0.18±0.02、0.43±0.06、0.67±0.10、0.88±0.09)依次增高(P0.05)。结论槲皮素明显抑制Siha细胞生长、增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其下调长链非编码RNA HOTAIR并通过其靶向调控miR-23b/MAPK1轴有关。