去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法：用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞GFAP基因的表达水平。结果：NDGA处理后,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高（P＜0.01）。结论：NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用,推测GFAP基因表达上调可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用机制之一。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖和分化的影响

观察去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞增殖和分化的影响。方法细胞培养、免疫组化、光镜和电镜观察及流式细胞仪检测。结论：ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,且这种作用有周期特异性。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

探讨去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用,方法采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化,用流式细胞仪进行细胞周期分析;用免疫组化检测肿瘤细胞中ＧＦＡＰ、ＰＣＮＡ的蛋白表达情况。结果（１）ＮＤＧＡ可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率;（２）ＮＤＧＡ能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化,使细胞增殖受阻于Ｇ１→Ｓ期。结论：ＮＤＧＡ在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。     

去甲二氢愈创木酸与氨甲喋呤、长春新碱配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

目的：观察体外应用去甲二氢愈创木酸（NDGA）、氨甲喋呤（MTX）、长春新碱（VCR）3种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞株SHG－44细胞的作用,并探讨其作用的可能机制。方法：用MTT法检测药物作用效应,用免疫组化染色法检测细胞CyclinD1基因的蛋白表达情况。结果：①3种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加,且两药合用药物的效应增强;②先给NDGA24h后再给MTX或VCR,与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应差异无显著性（P＞0.05）,而先给MTX或VCR24h后再给NDGA,与同时给药对细胞的抗肿瘤效应差异有显著性（P＜0.05）;③免疫组化染色结果显示,与对照组相比,NDGA处理后该细胞Cyclin D1基因的蛋白表达明显降低。结论：NDGA与MTX或VCR间有 协同作用,且这种作用可能与NDGA降低细胞cyclin D1基因的蛋白表达有关。     

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的：观察bcl-2、c-myc在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞凋亡中的变化及意义。方法：利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2、c-myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②经NDGA处理细胞后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞调亡的发生密切相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA诱导SHG－44细胞的凋亡可能与其下调bcl-2、c-myc基因的表达有关,但其确切机制有待进一步深入研究。     

CDK4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）在去甲二氢愈创木酸（NDGA）抑制人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞增殖中的作用。方法：采用细胞培养、细胞计数、流式细胞仪检测、免疫沉淀、免疫组化及图像分析等技术方法。结果：①在10－200μmol/L浓度范围内,NDGA可使SHG－44细胞增殖受阻,且NDGA液浓度越高,这种作用越明显,即呈明显的剂量依赖性;②NDGA对细胞周期抑制作用主要表现于G1→期;③NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4蛋白激酶的活性降低,且这种作用与NDGA的处理浓度呈正相关,与NDGA对SHG－44细胞的增殖抑制作用相一致;④NDGA处理后,SHG－44细胞CDK4基因的蛋白表达明显减弱。结论：CDK4蛋白激酶活性降低在NDGA抑制SHG－44细胞增殖中起着十分重要的作用。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞基因组甲基化水平的影响及其意义

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变及其意义。方法：合成甲基化敏感性AP－PCR引物,用AP－PCR方法检测SHG－44细胞基因组甲基化状态,观察NDGA诱导该细胞分化过程中甲基化水平的变化。结果：对照组基因组DNA经MspI酶解后AP－PCR扩增片段比HpaII酶解后的扩增片段小,几乎未见存留大片段,至少有3个片段与HpaII酶解片段不同。同一时相点HpaII酶解后扩增产物相比,NDGA处理后基因组DNA Msp I酶解后的扩增产物量较少、条带较多,且随时相点延长产物量逐渐增加,条带增多。结论：NDGA诱导人恶性胶质瘤细胞SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态增高,推测基因组甲基化状态可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用靶点之一。     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

NDGA诱导人胶质瘤细胞株分化过程中基因组甲基化及甲基转移酶的变化及意义

目的 了解去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic acid,NDGA)处理前后两种人胶质瘤细胞系CHC-5、SHC-44甲基转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)活性、DBNT mRNA表达和基因组甲基化程度的改变。方法 以NDAG处理人恶性胶质瘤细胞系CHC-5及SHC-44，观察两种细胞增殖和分化状态；采用同位素微量示踪法测定甲基转移酶活性和基因组DNA甲基化程度；应用RT-PCR法测定洲DNMT mRNA表达水平。结果 NDMT处理后两种细胞增殖速度明显减缓，分化水平升高；DNMT活性显著降低、基因组甲基化程度明显升高；而DNMT mRNA改变不明显。结论 NDGA能抑制甲基转移酶的活性，升高基因组甲基化水平，这些作用可能与其诱导恶性胶质细胞瘤分化的机制有关。     

SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因的表达变化

目的观察SHG-44神经胶质瘤干细胞分化为胶质瘤细胞前、后miR-92b基因表达的变化。方法从人胶质瘤SHG-44细胞中筛选出肿瘤干细胞并进行荧光免疫鉴定;将肿瘤干细胞诱导分化为胶质瘤细胞;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法和实时荧光定量PCR法测定分化前、后miR-92b基因前体的转录水平。结果 RT-PCR产物的电泳结果显示,在干细胞及分化后的胶质瘤细胞中均出现miR-92b基因前体的目标条带。运用实时荧光定量PCR法对目的基因进行表达相对定量的2-ΔΔt法,以干细胞miR-92b前体基因为参照,分化后的胶质瘤细胞miR-92b基因前体表达量为2.95,约为干细胞表达量的3倍。结论 miR-92b基因可能在神经胶质瘤干细胞的分化过程中发挥了重要作用。     

Study of apoptosis induced by nordihydroguaiaretic acid in human ma-lignant glioma cell line SHG-44

Objective: To investigate the effect and mechanism of nordihydroguaiaretic acid (NDGA) on apop-tosis in human malignant glioma cell line SHG-44. Methods: Cell growth inhibition was measured with MTT assay. Cell apoptosis was observed with light and electron microscopy and TUNEL. Expression of bcl-2 gene was measured with immunohistochemistry, in situ hybridization and image analyses. Results: NDGA at the concentration of 100 μmol/L inhibited the proliferation of SHG-44 cells and induced apoptosis in a time-de-pendent manner. The expression of Bcl-2 protein in SHG-44 cells was decreased in the present of 100 μmol/L NDGA along with the duration of treatment in a negative correlation with the degree of cell apoptosis. The bcl-2 mRNA expressed in SHG-44 cells was reduced after treatment with 100 μmol/L NDGA, apparently consistent with the immunohistochemical results. Conclusion.- NDGA can induce apoptosis of human malig-nant glioma cells probably by down-regulating expression of bcl-2 gene, though the exact mechanism needs further study.     

芳香化酶对胶质瘤细胞系SHG-44细胞生长及分化的作用

目的 在人胶质母细胞瘤细胞系SHG－44细胞中检测到芳香化酶细胞色素P450（AROM）表达的基础上探讨AROM对胶质瘤细胞生长增殖及分化的作用。方法 通过构建反义AROM真核表达载体，转染SHG－44细胞，利用流式细胞仪、MTT法、免疫荧光染色及激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）等技术观察封闭AROM基因表达后细胞生长曲线、细胞周期及中间丝蛋白GFAP和Vimentin表达的变化。结果 成功构建了反义AROM真核表达载体PCI／as-AROM并使AROM的表达封闭达50％以上。SHG－44细胞在转 染了PCI／as-AROM和空载体PCI－neo后，生长曲线、细胞周期无明显变化，但GFAP免疫荧光强度减弱而Vimentin免疫荧光强度增强。结论 反光AROM可能对SHG－44细胞增殖无明显影响但对神经胶质瘤细胞的分化有一定的抑制作用。     

丁酸钠对人脑胶质瘤细胞系SHG-44增殖分化的影响

目的 研究丁酸钠对培养人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和分化诱导。方法 以2mmol／L丁酸钠处理SHG-44细胞，用MTT比色、核仁组成区银染观察细胞增殖抑制，用流式细胞术、电镜观察超微结构、免疫组织化学染色、凝集试验鉴定细胞分化。结果 SHG-44细胞经丁酸钠处理后：①细胞增殖受到明显抑制，并具有时间、剂量依赖性；②细胞周期受阻，S期细胞比例减少；③电镜观察发现细胞核变规则，异染色质增多，胞浆中线粒体、粗面内质网等细胞器增多并趋于正常；④胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达增强，改型蛋白(Vimentin)表达减弱；⑤细胞凝集度明显变低。结论 丁酸钠能抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖，2mmol／L丁酸钠能诱导SHG-44细胞发生明显分化。     

人恶性胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44细胞骨架的比较研究

目的：比较人恶性肿瘤胶质瘤细胞系CHG－5和SHG－44的细胞骨架系统成分,以进一步了解胶质瘤细胞骨架特征与其分化程度的关系。方法：利用免疫荧光细胞化学染色结合激光共聚焦显微镜观察两种细胞系微管、微丝、中间丝的含量及分布,并比较几种常用固定剂和缓冲液对各骨架成分检测的影响。结果：除微管和微丝均被染色外,所有细胞表达Vimentin(波形蛋白）,而只有部分细胞呈胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性。微管及中间丝在两种细胞胞质中的分布特征基本相似,但两种相细胞微丝的定位、分布及荧光强度有一定差异。Vimentin型中间丝在SHG－44细胞中表达较强,而GFAP在CHG－5细胞中表达较强。丙酮、75％酒精和4％多聚甲醛对微管的固定效果较好;用醛类固定后中间丝（尤其是Vimentin）染色极弱。结论：CHG－5分化程度较SHG－44高,两种细胞系细胞骨架状态的差异可能是二者生物学特性差异的结论基础。     

血管生成抑制剂TNP-470对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44及其移植瘤生长的影响

目的：观察TNP－470对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44体内和体外生长的影响。方法：采用MTT法、软琼脂克隆法、流式细胞仪、光镜和透射电镜技术观察SHG－44细胞体内外增殖、克隆形成、细胞周期和形态学变化及异种移植瘤生长情况。结果：20－2000ng/mlTNP－470可显著抑制SHG－44细胞体外增殖,克隆形成率显著降低,G0／G1期细胞明显增多,S、G2／M期细胞减少。彩和30mg/kg体重TNP－470隔日皮下注射后,移植瘤体积缩小、重量显著减轻,组织出现明显调亡细胞和坏死。结论：TNP－470对SHG-44细胞的生长抑制作用与其调控细胞周期和诱导细胞凋亡相关,提示TNP－470作为一种血管生成抑制剂对胶质瘤细胞生长也具有直接抑制作用。