桔梗试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

目的为桔梗Platycodongrandiflorum种质资源的保存提供一条新途径。方法采用玻璃化法研究了桔梗试管苗茎尖超低温保存及植株再生。结果桔梗嫩梢在培养基(MS 5%DMSO 103g/L蔗糖)上培养3d,切取2~3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡20min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理90min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,含410g/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于含0.6mg/LKT、0.2mg/LBA、0.05mg/LNAA的MS培养基表面的滤纸上,暗处理1d后转移到新鲜的上述再生培养基中,暗培养1周后转到正常光下,80%以上成活,植株生长正常。结论桔梗种质资源的玻璃化法超低温保存操作简单、成活率高、再生植株正常,可用于生产实践。     

皖贝母茎尖玻璃化法超低温保存研究

目的:建立皖贝母茎尖超低温保存体系.方法:采用玻璃化法超低温保存技术,4℃低温预处理1周,2～3mm的茎尖经0.4 mol·L-1蔗糖MS液体培养液预处理3d,60％ PVS2装载20 min,100％ PVS2冰浴脱水60 min,换入新鲜的0℃PVS2溶液后迅速投入液氮保存,40C水浴解冻1 min后用1.2 mol·L-1蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,接种在恢复培养基上,20℃暗培养2周,转入正常光下培养,1个月后统计再生率.利用PCR技术检测再生植株的遗传稳定性.结果与结论:TTC法检测茎尖冻存后存活率为79.9％,在恢复培养基上茎尖再生率为52.3％.从基因组DNA检测结果表明,再生植株其遗传稳定性未发生改变.     

罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

目的 为罗汉果Siraitia grosvenorii种质资源的保存提供一条新途径.方法 以继代15d生长健壮的罗汉果试管苗0.8～1cm长嫩梢进行预培养,剥取2～3 mm茎尖,25℃下60%PVS_2装载,再用100%PVS_2在0℃脱水处理,更换新鲜100%PVS_2后投入液氮保存24 h,化冻,用MS+1.2 mol/L蔗糖的液体培养基洗涤,滤纸吸干后接种于MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.1mg/L GA_3+0.8%琼脂粉+45 g/L蔗糖的恢复培养基上,25℃暗培养7 d,转入正常光下培养.再生苗生根培养基为1/2 MS+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖.结果 嫩梢于MS+0.7 mol/L蔗糖的培养基上预培养3 d,茎尖装载40 min,脱水50 min,液氮保存后于40℃水浴中快速化冻,洗涤40 min,恢复培养1周时存活率最高可达100%,30 d时再生率最高可达78.33%.再生苗转入生根培养基可形成完整植株.结论 罗汉果种质资源的玻璃化法超低温保存操作简单、成活率高、再生植株正常.     

玻璃化法超低温保存怀山药种质的技术研究

目的研究怀山药种质资源的玻璃化超低温保存技术。方法以B号怀山药带芽茎段为材料进行玻璃化超低温保存,并采用培养法检测保存后材料的成活率,从而筛选出最佳的玻璃化超低温保存技术体系。结果B号怀山药带芽茎段玻璃化超低温保存较佳的技术体系是继代生长60d的怀山药无菌苗置4℃冰箱低温锻炼7d;在无菌条件下切取1~1.5cm的带芽茎段,转至含5%蔗糖 3%甘露糖的培养基内,置4℃冰箱预培养2d;用60%的PVS1(22%甘油 13%乙二醇 13%聚乙二醇 10%二甲基亚砜)在0℃处理60min,再用100%的PVS1在0℃条件下处理60min,随即迅速投入液氮;保存24h后,在37℃水浴中快速化冻,用含7%蔗糖的MS培养液洗涤4次,每次停留10min;转至再生培养基(MS KT2mg/L NAA0.02mg/L)再培养,成活率可达75%以上,再生苗与常温苗形态指标差异不大。结论本试验成功地建立了怀山药种质资源玻璃化法超低温保存的技术体系,为怀山药种质资源的长期保存提供了一条有效途径。     

麻花秦艽休眠芽的玻璃化超低温保存及植株再生

目的:采用玻璃化超低温技术保存濒危药用植物麻花秦艽的休眠芽。方法:以休眠芽作试材,研究休眠芽大小、不同的预处理方法、装载时间和玻璃化保护液等因素对休眠芽超低温保存效果的影响。结果:10～11 mm大小的休眠芽在含有0.3 mol/L、0.5 mol/L、0.7 mol/L蔗糖的MS培养基中暗培养各1 d,在装载液(2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中20℃处理20 min,于玻璃化保护液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4mol/L蔗糖)中0℃处理40 min,换新鲜PVS2保护液并迅速投入液氮,液氮中保存24 h后,在40℃水浴中解冻2～3 min,用含1.2 mol/L蔗糖的1/2MS无机盐液体培养基洗涤2次,每次10 min,无菌滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在22℃条件下暗培养1周后转入正常条件培养,再生率高达83.3%。结论:建立了高效的麻花秦艽休眠芽玻璃化超低温保存技术体系。     

野葛种质的玻璃化法超低温保存

野葛的玻璃化法超低温保存技术实验结果表明:采用无菌苗置4℃冰箱低温锻炼5 d;在无菌条件下切取1.5 cm的带芽茎段,转至含5%二甲基亚砜 5%蔗糖的培养基内,置4℃冰箱预培养1 d;用60%的PVS2(30%甘油 15%乙二醇 15%二甲基亚砜 0.4 mol/L蔗糖)和100%的PVS2分别在0℃条件下过渡和脱水各30 min,随即投入液氮;保存24 h后,在40℃水浴中快速化冻90 s,用含1.2 mol/L蔗糖的MS培养液洗涤2次,每次停留10min;转至再生培养基MS BA2 mg/L NAA1 mg/L暗处培养7 d后再置于光下培养,成活率可达57%-58%。所获再生苗与常温苗形态差异不大。     

蛇足石杉茎尖组织培养研究

目的：研究蛇足石杉茎尖组织培养条件,建立组织快繁体系。方法：通过添加不同浓度的蔗糖及植物激素改良基础培养基,考察其对蛇足石杉茎尖诱导丛生芽和GGB（绿色小体）,GGB的分化以及丛生芽生根的影响。结果：诱导茎尖发生丛生芽和GGB的最适宜培养基分别为MS+2%蔗糖和MS+4%蔗糖;将GGB转接在MS+2%蔗糖培养基中,平均每团GGB可分化出16株丛生芽;在改良MS+10 μmol·L-1IBA生根培养基中,全部丛生芽再生健壮的根系,再生植株的移栽成活率可达80%。HPLC检测表明,组织快繁的蛇足石杉植株具有石杉碱甲合成能力,其含量为60740±3075 μg·g-1,与野生植株相当。结论：初步建立蛇足石杉组织快繁体系,扩大了蛇足石杉种质资源,并为石杉碱甲的合成途径提供了研究基础。     

茎尖微嫁接技术脱除佛手病原体的研究

目的采用茎尖微嫁接技术脱除佛手病原体,为无病苗木的培育奠定基础。方法采用茎尖微嫁接技术获得了佛手微嫁接成活苗,应用PCR技术对其进行黄龙病病原进行检测,同时考察了茎尖大小对嫁接成活率和脱病原体率的影响。结果经PCR检测,微嫁接苗脱除了黄龙病病原;茎尖大小对嫁接成活率和脱病原体率的影响较大,带4个叶原基的茎尖嫁接成活率最高,达60.00%,脱病原体率为85.71%,带2个叶原基的茎尖,脱病原体率达100%,但嫁接成活率低。结论茎尖微嫁接技术可以脱除佛手病原体,综合考虑嫁接成活率和脱病原体的效果,宜选用带3～4个叶原基的茎尖进行脱病原体苗的生产。     

黄独的茎尖培养和病毒检测

目的 以黄独为试材,研究不同因素对黄独茎尖培养的影响,以期找到适合黄独茎尖分化成苗的培养基和脱毒检测方法 .方法 采用植物组织培养的方法 进行茎尖培养,采用症状学法、指示植物法和RT-PCR法对茎尖脱毒植株进行病毒检测.结果 黄独茎尖的最佳消毒方式是先用70%酒精消毒30 s,再用0.1%HgCl_2消毒12 min;在37℃中热处理7 d后再切离0.5 mm茎尖效果较佳.茎尖再生芽增殖的最佳培养基是MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5mg/L;黄独茎尖再生芽的最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.5 mg/L;黄独脱毒苗最好的移栽基质为珍珠岩-蛭石(2∶1);RT-PCR法是检测黄独马铃薯Y病毒(PVY)感染的主要方法 ,通过病毒学检测,其平均脱毒率为86.5%.结论 首次建立了黄独茎尖脱毒培养的体系,为黄独脱毒苗的快速繁殖及工厂化生产奠定了技术基础.     

黄独微型块茎胚性愈伤组织超低温保存及遗传稳定性研究

目的 对影响黄独Dioscorea bulbifera微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的多种因素进行探讨,并从形态学、生理学、DNA量以及光合特性参数和叶绿素荧光参数等方面对其冻后再生苗的遗传稳定性进行检测。方法 采用微型块茎及其胚性愈伤组织进行诱导,小滴玻璃化法超低温保存,通过检测包括总叶绿素量、可溶性蛋白量、可溶性总糖量以及超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性等植物生理指标,并采用流式细胞术的方法对遗传稳定性进行考察。结果 最佳的黄独微型块茎胚性愈伤组织超低温保存条件:室温下将黄独微型块茎胚性愈伤组织块转入MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D+0.3 mol/L蔗糖的培养基中预培养1 d。预培养后的胚性愈伤组织块在(25±1)℃下转入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖,pH 5.8)中处理20 min,再用100% PVS2于0 ℃脱水40 min。脱水后将材料转入铝箔条上的PVS2小滴中,液氮冰冻后迅速将材料转入冷冻管中(装满液氮)。投入液氮罐保持1 d后,取出铝箔条,浸入37 ℃洗涤液(MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 2,4-D+1.2 mol/L蔗糖,pH 5.8)中,胚性愈伤组织块脱落后,室温下再用新鲜洗涤液对其洗涤3次,每次10 min。洗涤后的材料接入分化培养基(MS+2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5 g/L琼脂粉)中,暗培养2 d后转到12 h/d的光周期中培养,细胞存活率达89%以上。黄独微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存后的再生苗与胚性愈伤组织常温再生苗在形态指标和生理指标等方面均无显著性差异(P> 0.05),两者的DNA量也未发生显著变化(P> 0.05)。结论 建立了黄独微型块茎胚性愈伤组织小滴玻璃化法超低温保存的技术体系,其再生植株经检测无遗传变异,为薯蓣属植物种质资源的长期保存提供了理论依据和技术基础。     

三角叶黄连ISSR反应体系的建立与优化

目的 针对三角叶黄连ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系,为进一步研究三角叶黄连的种质资源遗传多样性奠定基础.方法 通过筛选引物并设定影响三角叶黄连ISSR-PCR反应诸因子的不同梯度,检测其不同反应体系的扩增效果,分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立三角叶黄连ISSR-PCR稳定可靠的反应体系.结果 建立了可用于三角叶黄连ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系:25 μLPCR反应体系中,内含10×PCR Buffer 2.5 μL,1.5 mmol/L Mg~(2+),200 μmol/L dNTP,0.3 μmol/L 引物,40 ng模板,1.0 U Taq DNA聚合酶.扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行35个循环:94℃变性30 s,(据不同引物的退火温度)复性60 s,72℃延伸90 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存.结论 所建立的三角叶黄连ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力强、重复性好等特点,可以较好地应用于三角叶黄连的种质资源遗传多样性及居群鉴别的研究.     

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??OBJECTIVE To investigate the contents of oligosaccharides in 37 batches of Morinda officinalis How samples from different habitats and germplasm resources at various ages. METHODS HPLC-ELSD method was used to determine the contents of four oligosaccharides, i.e sucrose, 1-kestose, nystose and 1^F-fructofuranosylnystose in Morinda officinalis How at different ages from different habitats and germplasm resources. The relationships among the several factors were analyzed. RESULTS The samples from Guangdong Province had larger amounts of sucrose, 1-kestose and 1^F-fructofuranosylnystose than those from Fujian, Guangxi and Hainan Provinces. The content of nystose in the samples from Guangdong Province was similar with those from Fujian Province. The contents of sucrose and 1-kestose were the highest in the samples of 2.5 years old, while the contents of nystose and 1^F-fructofuranosylnystose were the highest in the samples of 4 years old. The germplasm resources of small leaf had higher content of oligosaccharides than the large leaf germplasm in Guangdong Province, and different germplasm resources of Morinda officinalis How also had different morphological characteristics. CONCLUSION The contents of four Morinda officinalis How oligosaccharides vary with habitat, germplasm and age. This research may provide references for the quality control of Morinda officinalis How.     

江西省药用植物种质资源收集 保存现状探讨

药用植物种质资源是中药材质量的物质基础,是中医药产业可持续发展的关键,是我国重要的野生生物资源和战略生物资源。基于第四次全国中药资源普查,针对性地分析了江西省药用植物种质资源收集、保存的现状,发现可收集到的药用植物种质资源有3115种,隶属于237科1218属;除对药用植物种质资源进行就地保存外,还建有12个药用植物保存机构。探讨了江西省药用植物种质资源收集、保存中存在的问题及对策,为更好地促进江西省中医药产业发展提供参考。     

佛手茎尖微嫁接技术研究

目的探讨佛手茎尖微嫁接技术,为佛手无病苗木的培育奠定基础。方法黑暗条件下培养柠檬实生苗用作砧木,以佛手茎尖为接穗,采用倒"T"字形法进行茎尖微嫁接试验,并对影响嫁接成活率的因素进行研究。结果成功获得了佛手茎尖微嫁接苗,并优化了微嫁接的条件:选取苗龄为14d的柠檬实生苗为砧木,嫁接成活率较高;以带4个叶原基的佛手茎尖为接穗,效果较好,嫁接成活率可达65.2%;茎尖微嫁接后,切口外缠parafilm膜,能明显提高成活率。结论建立了佛手茎尖微嫁接的方法,获得了嫁接成活苗。     

GC测定苗药大果木姜子中1，8-桉叶素的含量

目的：采用气相色谱法建立大果木姜子中指标性成分1,8-桉叶素的含量测定方法。方法：AgilentDB-624毛细管（30in×0．25mm,1．4μm）色谱柱,载气为高纯氮气,进样口温度为200℃,检测器温度为250℃,程序升温：50℃保持5rain,5℃·min-1升温至150℃保持1min,10℃·min-1升温至250℃,保持20min。结果：1,8-桉叶素在0．3078～3．078mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系,Y=364．28747X＋2．81698（r=0．9999）,平均加样回收率为99．14％（RSD=3．14％）。结论：本方法操作简便、灵敏准确,可用于大果木姜子的质量控制。     

青蒿花药培养研究

目的 以青蒿花药为材料,进行诱导培养,获得了胚性愈伤组织,为青蒿单倍体植株的诱导奠定了基础.方法 青蒿花药在进行不同时间的低温前处理后,置于含不同激素和蔗糖浓度的MS培养基上,再进行不同时间的高温后处理,然后转入25℃黑暗培养,统计愈伤诱导率.结果 青蒿花药培养最适培养基是6-BA 1 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L+蔗糖3%或6-BA 1 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖3%,无需低温前处理和高温后处理.结论 可通过青蒿花药培养得到单倍体胚性愈伤组织.     

HPLC法观察环丙沙星和甲硝唑的配伍稳定性

目的观察在高温（70℃）和室温（25±1℃）下乳酸环丙沙星氯化钠注射液与甲硝唑注射液配伍的稳定性。方法采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定乳酸环丙沙星和甲硝唑的含量;热分解法、留样观察法考察环丙沙星与甲硝唑配伍液的含量、PH值及外观变化。结果环丙沙星和甲硝唑分别在4～130μg·mL-1和20～400μg·mL-1范围内线型关系良好;平均回收率分别为98.12%和99.69%。高温6h的热分解试验以及室温0～24h内的留样观察结果表明,环丙沙星与甲硝唑在配伍前、后药物残存率均大于95%,PH值、外观均无明显变化。结论环丙沙星氯化钠注射液和甲硝唑注射液在室温24小时内及高温6小时稳定,二者可以配伍使用。     

SPE-HPLC-ELSD法测定三七药材中单糖和二糖的含量

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法,同时测定三七药材中单糖和二糖的含量。方法 HPLC采用Thermo Hypersil GOLDAmino氨基柱(250×4.6 mm),流动相为乙腈-水(75:25),流速0.8mL min-1,ELSD漂移管温度75℃,载气为空气,载气流速2.5 L min-1。结果在该条件下三七药材中的单糖和二糖组分能够得到较好的分离,线性关系良好(相关系数R2>0.99),回收率在98.23%~101.46%之间,且相对标准偏差小于3%。结论该方法简便、准确、灵敏、稳定,适合于三七药材中单糖和二糖的含量测定。