VP—16对HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ＨＬ 6 0细胞分化与凋亡的关系 ,我们在诱导ＨＬ 6 0细胞凋亡[1 ] 的基础上 ,仍以鬼臼乙叉甙 (ＶＰ 16 )为凋亡诱导剂 ,选择全反式维甲酸 (ａｌｌ ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ ,ＡＴＲＡ)等作为分化诱导剂 ,对经不同分化诱导剂诱导分化的ＨＬ 6 0细胞的凋亡情况进行了初步研究。1　材料和方法1 1　细胞培养 :ＨＬ 6 0细胞培养按参考文献 1的方法。1 2　药物处理 :1 2 1　诱导分化组 :调整细胞浓度至 5× 10 5 ｍＬ ,分别加入0 1ｍｇ ＬＶＰ 16 (Ｓｉｇｍａ产品 ,ＤＭＳＯ配制 )、5× 10 - 7ｍｏｌ ＬＡＴＲＡ(上海第六制药…     

PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制

细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯 (ＰＭＡ)是蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)的特异性激动剂 ,ＰＭＡ具有促进Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞分化的作用 ,能使Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞膜上的整合素 β2 亚族ＣＤ1 8蛋白增多。但ＰＭＡ诱导作用的机制尚未明了。目的 :进一步阐明ＰＭＡ促进ＣＤ1 8表达的信号传导通路及机制。方法 :定量ＲＴ -ＰＣＲ法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂ＰＭＡ对人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 60ＣＤ1 8表达的作用及有关的信号传导通路。结果 :Ｕ937细胞经不同浓度的ＰＭＡ( 5ｎ…     

亚硒酸钠对人白血病HL-60细胞作用机制的研究

目的和方法：实验观察亚硒酸钠对人急性髓性白血病细胞系ＨＬ－ ６０ 细胞生长增殖、诱导分化、细胞内自由基产生和清除系统以及胞内环核苷酸累积的影响,探索亚硒酸钠对人白血病ＨＬ－ ６０ 细胞作用机制。结果：８ ×１０６ｍｏｌＬ 或更高浓度的亚硒酸钠均可显著抑制ＨＬ－ ６０ 细胞的生长增殖,作用５ ｄ 可在一定程度上诱导ＨＬ－ ６０ 细胞向成熟粒细胞方向分化。８ ×１０６ ｍｏｌＬ 亚硒酸钠作用一段时间,可增强自由基清除系统酶活性,减低胞内自由基水平,降低细胞内ｃＧＭＰ 累积而对ｃＡＭＰ 累积无明显影响。结论：硒的抗白血病作用可能与亚硒酸钠的这些作用相关     

逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用

目的和方法 :Ｌ6565白血病是我国特有的Ｔ -Ｓ -Ｚ淋巴瘤 /白血病系统中的实验系统的瘤株之一 ,经检测ｃ -ｍｙｃ基因高表达。本文针对ｃ-ｍｙｃ基因构建一个含有小鼠反义ｃ -ｍｙｃ基因片段的逆转录表达载体ｐＧＡＭ ,用磷酸钙沉淀法将ｐＧＡＭ导入表达包装细胞ＰＡ31 7,经筛选获得病毒效价 5× 1 0 5ｃｆｕ/ｍＬ的病毒包装细胞 ,利用ｐＧＡＭ病毒成功的感染了Ｌ6565细胞 ,得到了Ｇ41 8抗性细胞Ｌ6565-ａｓ ,经ＰＣＲ分析病毒载体序列稳定地整合到ＰＡ31 7和Ｌ6565-ａｓ中 ,能够长期表达。结果 :Ｌ6565-ａｓ和对照细胞光镜下形态均为圆形或…     

TGFβ1 诱导 THP-1 细胞分化为巨噬细胞时原癌基因表达的变化

对重组转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）诱导前单核白血病细胞系ＴＨＰ－１细胞向巨噬细胞分化过程中核内原癌基因表达的动态变化进行了研究。结果发现，在诱导分化过程中不同的原癌基因表达变化不仅具有时序性，调节方式也呈多样性。ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎｍＲＮＡ表达变化在时间上有一致性，诱导分化早期（２４小时）贴壁细胞的表达量明显增加，延长ｒｈＴＧＰ－β１作用时间至４８～７２小时时，这种上调作用消失，回复到对照组ＴＨＰ－１细胞原有的或低于原有的表达水平。ｃ－ｍｙｃ在细胞分化过程中表达逐渐降低，作用７２小时时表达量不足对照组细胞的１０％。而ｃ－ｓｉｓ在ｒｈＴＧＰ－β１作用７２小时内未发现其表达被调节。提示ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ基因在分化早期的表达上调，以及ｃ－ｍｙｃ基因在分化中期的表达被强烈抑制可能分别在分化进程中发挥重要作用。     

嵌合性硫代磷酸修饰的反义c-myc寡脱氧核苷酸对动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨ｃ－ｍｙｃ基因表达在血管平滑肌细胞增殖信号传导通路中的作用和采用反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸抑制血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的作用。方法：采用针对大鼠ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ包括ＡＵＧ在内的翻译起始区的前５个密码子的嵌合性硫代修饰的反义ｃ－ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）,以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入ＳＭＣ后,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入观察其对ＳＭＣ增殖的抑制作用。结果：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ不仅对从静止状态刺激的ＳＭＣ增殖有抑制作用,而且对处于增殖状态的ＳＭＣ的增殖也有显著抑制作用,这种抑制作用可因加入正义ｃ－ｍｙｃＯＤＮ而减弱甚至消除,而且随着剂量的增加,抑制作用越来越明显。一次性应用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ可达到较持久的作用。而正义ＯＤＮ和错配ＯＤＮ对ＳＭＣ增殖无影响。结论：ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ以剂量依赖和序列特异方式抑制ＳＭＣ增殖。ｃ－ｍｙｃ基因表达在ＳＭＣ增殖的信号传导通路中起重要作用。为采用ｃ－ｍｙｃＡＳ－ＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖的反义战略防治再狭窄研究奠定了基础。     

骨髓基质细胞分泌抑制白血病细胞增殖的细胞因子

在研究骨髓基质细胞对造血调控的作用中 ,我们从人骨髓成纤维细胞克隆亚系 (ＨＦＣＬ - 1 )条件培养液中发现新的能抑制ＨＬ - 60细胞增殖的活性组分。 1 .采用ＭＴＴ实验监测活性组分对ＨＬ - 60细胞增殖的抑制能力。采用ＮＢＴ还原实验和酸性磷酸酶测定观察活性组分对ＨＬ - 60细胞的诱导分化能力。 2 .采用中空纤维柱超滤浓缩、ＤＥＡＥｃｅｌｌｕｌｏｓｅ - 52、ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ、ｃｈｒｏｍａｔｏｆｏｃｕｓｉｎｇ、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ - 1 0 0、Ｐｒｅｐ -ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ等程序 ,从ＨＦＣＬ - 1细胞条件培养液中…     

腺苷三磷酸对人横纹肌肉瘤细胞系P21和c-myc蛋白表达的影响

为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ＡＴＰ作用于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系ＲＤＬ６细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ＡＴＰ作用后的ＲＤＬ６细胞核内Ｐ＾２１蛋白表达增强，ｃ－ｍｙｃ蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束－应力纤维组改善，粘着斑内的主要粘附蛋白－纽蛋白（ｖｉｎｃｕｌｉｎ）表达增强，正常小鼠成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞核内Ｐ＾２１蛋白高表达，ｃ－ｍｙｃ蛋白不表达。结果表明：ＲＤＬ６     

视黄酸对CDK2组成性表达HL—60细胞增殖的影响

探讨细胞周期素依赖性激酶在视黄酸对急性早幼粒细胞白血病ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和分化调控过程中的作用。方法应用真核细胞基因转染技术将外源ＣＤＫ２基因转入人ＨＬ－６０早幼粒细胞白血病细胞中,进而以视黄酸处理１－４ｄ。结论ＣＤＫ２在视黄酸诱导的增殖抑制和分化过程中起重要作用,由于ＣＤＫ２的组成性超过表达,导致视黄酸对ＨＬ－６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用下降。     

bcl—2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响。方法：应用细胞培养，免疫标记及流式细胞仪技术，检测了ｂｃ１－２基因反义寡脱氧核糖核苷酸（ＡＳＯＤＮ）和阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对白血病Ｋ５６２和ＨＬ－６０细胞作用和ｂｃｌ－２基因表达。结果：Ａｒａ－Ｃ（１０μｍｏｌ／Ｌ）与ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ同时作用比单独用Ａｒａ－Ｃ或Ａｒａ－Ｃ与正义寡脱氧核糖核苷酸（ＳＯＤＮ）细胞存活率显著减少（Ｐ＜０００１），并且流式细胞仪检测显示ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ使ｂｃｌ－２蛋白阳性率降低。结论：ｂｃｌ－２基因反义寡核苷酸能抑制该基因表达，提高白血病细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性     

克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。     

嗜酸性粒细胞可作为抗原呈递细胞

目的探讨ＨＬＡ－ＤＲ＋嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）在体外培养条件下作为抗原呈递细胞（ＡＰＣ）将破伤风类毒素抗原（ＴＴ）呈递给Ｔ淋巴细胞的能力。方法新分离的ＥＯＳ经人重组粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子刺激２４小时,以诱导ＨＬＡ－ＤＲ的表达,然后将其暴露于不同浓度的ＴＴ,检测ＨＬＡ－ＤＲ＋ＥＯＳ对自身Ｔ细胞增殖反应的影响,以评价ＥＯＳ呈递抗原的能力。结果ＨＬＡ－ＤＲ＋ＥＯＳ于ＴＴ存在时可以明显促进Ｔ细胞的增殖反应,并与ＴＴ的浓度呈剂量相关性。而抗ＨＬＡ－ＤＲ单克隆抗体则可以明显地抑制ＥＯＳ的抗原呈递过程。结论人ＥＯＳ可以摄入和处理抗原并能将其传递给自身Ｔ细胞,而ＥＯＳ呈递抗原的过程具有明显的ＨＬＡ－ＤＲ依赖性。     

糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制

国内外大量研究表明糖皮质激素 (ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ,ＧＣ)能明显抑制包括由于ＣＤ1 8在内的多种粘附分子的表达。以往研究多限于ＣＤ1 8蛋白质水平 ,无法阐明ＧＣ -ＧＲ使细胞表面ＣＤ1 8数量减少 ,是由于合成减少 ,分解增多 ,还是细胞内转位过程受到抑制 (ＣＤ1 8从胞内储存池脱落并转位至质膜有关 )。对ＧＣ在ＣＤ1 8基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少。目的 :探讨ＧＣ抑制ＣＤ1 8ｍＲＮＡ表达的作用及机制。方法 :本研究以细胞激活剂ＰＭＡ诱导下的人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 6…     

反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸对HL60细胞Bcl-2表达的抑制作用

目的探讨Ｂｃ１－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）是否抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ及其蛋白的表达,以及不同浓度ＡＳＰＯ产生抑制作用的程度、效应发生和持续时间的差异。方法应用免疫细胞化学染色、流式细胞仪和ＲＴ－ＰＣＲ半定量法对与Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ共培养后的ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２蛋白及ｍＲＮＡ表达进行检测。结果Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能在ｍＲＮＡ水平产生抑制作用,并减少Ｂｃ１－２蛋白的合成,且在培养２４小时即出现效应,同时随着ＡＳＰＯ剂量的增加和作用时间的延长其抑制作用更显著,但７２小时后出现回升现象。结论Ｂｃ１－２的ＡＳＰＯ能特异抑制ＨＬ６０细胞Ｂｃ１－２的ｍＲＮＡ和蛋白表达,且具浓度和时间的依赖性,同时又存在作用暂时性的问题。     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

黄芩苷对HL-60白血病细胞的诱导分化作用

目的： 观察中药单体黄芩苷(baicalin) 对人髓系白血病（AML）细胞株HL-60细胞的诱导分化作用。方法: 应用细胞形态学方法、细胞克隆形成试验、流式细胞术分析和NBT还原实验检测黄芩苷诱导HL-60细胞分化的能力。结果: 黄芩苷可诱导HL-60细胞向成熟阶段分化，低浓度黄芩苷可显著抑制HL-60细胞克隆的形成；HL-60细胞经黄芩苷处理后CD11b表达显著增高，CD33表达显著降低；NBT还原实验示黄芩苷处理组的分化成熟细胞阳性率明显高于未加药组。结论: 黄芩苷具有诱导HL-60白血病细胞向成熟粒细胞分化的作用。     

5-aza-2dC诱导白血病细胞分化及对Annexin A1/A2表达和甲基化状态的影响

目的：观察甲基化转移酶抑制剂5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞分化及对膜联蛋白A1/A2(Annexin A1/A2)表达和甲基化状态的影响。 方法：瑞氏染色和流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞分化的影响;RT-PCR法检测药物处理HL-60细胞前后Annexin A1和A2基因mRNA的表达水平;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测药物处理HL-60细胞前后Annexin A1和A2基因启动子区域CpG岛的甲基化水平。 结果：5-aza-2dC处理后HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,细胞向成熟分化,且在0.5 μmol/L时其促分化作用最明显;Annexin A1和A2基因在HL-60细胞中低表达,0.5 μmol/L 5-aza-2dC处理HL-60细胞72 h后,Annexin A1和A2基因mRNA表达水平明显上调,而其启动子区域CpG岛甲基化水平明显降低。结论：5-aza-2dC具有促进白血病细胞分化的作用,Annexin A1和A2基因启动子去甲基化可能与5-aza-2dC诱导白血病细胞分化有关。     

TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用及其机制的研究

活化后的细胞死亡 (ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ -ｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＡＩＣＤ)是机体调控免疫反应、防止其过度活化的一种主要机制。研究表明 ,活化后的Ｔ细胞表达ＤＲ4、ＤＲ5的水平增高 ,对ＴＲＡＩＬ诱导的凋亡敏感性增加。ＤＣ是机体内最强的抗原提呈细胞 ,能够刺激处女、记忆Ｔ细胞活化。考虑到这个过程 ,我们推测 ,ＤＣ在提呈抗原、活化Ｔ细胞的过程中 ,是否能够通过ＴＲＡＩＬ分子诱导了活化Ｔ细胞的凋亡 ,从而达到调节免疫反应的目的。因此我们利用检测小鼠ＤＣ抗原提呈功能的抗原特异性Ｔ细胞模型 ,即ＯＶＡ抗原特异性…     

脑肿瘤细胞HLA一Dr表达及肿瘤中浸润单个核细胞亚群的研究

对４４例原发性脑肿瘤的免疫组化研究发现，２９例（６７２％）的肿瘤细胞表达ＨＬＡ一Ｄｒ。ＨＬＡ一Ｄｒ阳性细胞含量和阳性率均与肿瘤的组织学类型有关，并随恶性程度增加而升高。肿瘤中浸润的单个核细胞（ＭＮＣ）主要是ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ细胞和单核巨噬细胞，前者主要包括ＣＤ４和ＣＤ８两个亚群。ＨＬＡ一Ｄｒ＋，组ＣＤ４５ＲＯ＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞密度均低十ＨＬＡ一Ｄｒ一组。ＣＤ４亚群和单核巨噬细胞密度不受ＨＬＡ一Ｄｒ表达状况的影响。这说明脑肿瘤细胞表达的ＨＬＡ一Ｄｒ对参与局部抗肿瘤免疫的ＣＤ８亚群有选择性抑制作用。     

凝集素美洲商陆对人单核细胞及白血病细胞的HLA－DR分子表达的影响

通过流式细胞仪的方法，报道了凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）对人单核细胞和白血病细胞表面的ＨＬＡ－ＤＲ分子表达的影响。实验结果显示：ＰＷＭ可以直接与单核细胞和白血病Ｕ９３７细胞及Ｒａｊｉ细胞相结合，而且这３种细胞均表达ＨＬＡ－ＤＲ分子。经ＰＷＭ处理２４ｈ后，正常人单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达不受影响，而Ｕ９３７细胞和Ｒａｊｉ细胞上的ＨＬＡ－ＤＲ分子均被下调，而且这种下调作用与ＰＷＭ的剂量有关。其他凝集素，如ＰＨＡ、ＷＧＡ和内毒素ＬＰＳ对白血病细胞ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达无影响。结果表明，通过凝集素ＰＷＭ的处理可以改变肿瘤细胞表面ＭＨＣⅡ类分子的表达，从而为肿瘤免疫治疗提供新的途径。