衰老大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的变化及缬沙坦的调控作用

为观察老年肾脏肾素-血管紧张素系统（RAS）随增龄的改变及长期应用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂（AT1RA）后的影响，将雄性Wistar大鼠分为青年组、老年组及缬沙坦治疗组，测定肾素、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平、AngⅡ受体AT1αRmRNA、AT1bRmRNA及AT2RmRNA的表达。结果发现，与青年组比较，老年大鼠血浆肾素、AngⅡ水平明显下降，肾组织AngⅡ则明显升高，应用缬沙坦后肾组织AngⅡ水平进一步升高；老年大鼠肾脏AT1αRmRNA、AT1bRmRNA表达下调，AT2RmRNA表达则上调，应用缬沙坦可上调AT1αRmRNA，但对AT1bRmRNA及AT2RmRNA表达无影响。研究表明，老年大鼠肾脏局部AngⅡ水平升高，两型ATR的基因表达与青年鼠相比则发生了不同改变；缬纱坦使老年大鼠肾组织AngⅡ水平升高，同时阻断了AT1R的作用，而AT2RmRNA水平未发生改变，有利于加强AT2R的作用。     

肾上腺素β受体在大鼠逼尿肌中的表达及功能

为研究β肾上腺素能受体（β-AR）亚型在大鼠膀胱逼尿肌中的表达及介导逼尿肌舒张功能的情况，采用离体逼尿肌条拉力实验观察β-AR亚型特异性激动剂和拮抗剂对逼尿肌舒张功能的影响，以RT-PCR方法观察逼尿肌β受体亚型的分布。结果发现，选择性β1、β2、β3-AR激动剂T-0509、沙丁胺醇与BRL37344A均呈浓度依赖性地抑制KCl诱导的逼尿肌条收缩；低浓度β3-AR拮抗剂和较高浓度的β1、β2-AR拮抗剂能抑制异丙肾上腺素的舒张作用；采用RT-PCR在大鼠逼尿肌可以检测到β1、β2、β3-ARmRNA表达，其中β3-ARmRNA的密度约占总β-AR密度的70％。提示大鼠膀胱逼尿肌上有β1、β2、β3-AR三种亚型存在，可介导大鼠逼尿肌舒张，其中β3-AR起主要作用。     

高功率微波辐射后大鼠心脏β1肾上腺素能受体表达及其意义

目的探讨高功率微波（HPM）辐射后心脏β1肾上腺素能受体（β1-AR）表达的变化及其意义.方法采用平均功率密度为50 mW/cm^2的S波段HPM模拟源辐射45只二级Wistar雄性大鼠,应用光镜、免疫组织化学、RT-PCR和图像分析技术,定量研究HPM辐照后大鼠心脏组织结构改变及β1-AR蛋白及mRNA变化规律.结果50 mW/cm^2 HPM辐射后大鼠心肌纤维排列紊乱,颗粒变性甚至肌浆凝聚,7 d内进行性加重,14 d后减轻;辐射后1 d,β1-AR蛋白于心内膜下及肌层心肌细胞膜及胞浆表达增强,3 d达高峰（P＜0.05）,7 d仍有较强的表达（P＜0.05）,14 d恢复至正常水平;β1-AR mRNA于6 h～28 d均见升高（P＜0.01）,除7 d外,随时间延长,增强更加明显.结论50 mW/cm^2的HPM辐射可造成心脏组织结构的损伤,心肌β1-AR表达增强,参与了HPM辐射致心脏损伤的病理生理过程.     

腺病毒介导的AT2R基因转染对大鼠颈动脉新生内膜增生的抑制作用

目的构建AngⅡ2型受体(AT2R)重组腺病毒载体,并研究AT2R基因转染对大鼠颈动脉新生内膜增生的影响。方法用细菌内同源重组方法构建带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的AT2R重组腺病毒载体pAdCMV/AT2R。大鼠颈动脉球囊损伤后,将pAdCMV/AT2R或空病毒pAdGFP局部导入,分别用RTPCR、免疫荧光染色、激光共聚焦技术检测目的基因AT2RmRNA及蛋白在血管中的表达,利用图像分析仪进行组织形态学分析。结果重组腺病毒载体pAdCMV/AT2R经PCR鉴定正确,其滴度为1.5×1012pfu/ml。pAdCMV/AT2R局部转染后14天,大鼠颈动脉新生内膜、外膜、中层有绿色荧光,阳性面积约40%;转染后7、14、21天大鼠颈动脉AT2RmRNA及蛋白表达显著高于pAdGFP转染组,21天时其内膜与中层的面积比显著低于pAdGFP组(0.78±0.06vs1.36±0.21,P<0.01)。结论pAdCMV/AT2R在体转染能上调血管中AT2R的表达,显著抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜增生。     

模拟失重大鼠动脉血管紧张素受体基因表达的研究

目的：探讨模拟失重下大鼠不同部位动脉血管紧张素受体mRNA表达是否发生变化。方法：大鼠被随机分为模拟失重组（SUS）与同步对照组（CON），采用尾部悬吊大鼠模型模拟失重影响。用逆转录-聚合酶链式反庆（RT-PCR）技术观察比较模拟失重下大鼠不同部位动脉血管紧张素两型受体基因表达的变化。结果：大鼠颈总动脉，腹主动脉及股动脉组织均有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的AT1a，AT1b及AT2受体mRNA的表达；而基底动脉组织则只有AT1a和AT1bmRNA的表达。模拟失重4周大鼠颈总动脉、腹主动脉、股动脉及基底动脉组织AngⅡ的AT1a、AT1b和AT2受体mRNA的表达，较对照大鼠均无显著变化。结论：模拟失重引起大鼠动脉血管结构与功能的变化可能不是通过血管紧张素受体的变化实现的。     

血管紧张素Ⅱ2型受体在心血管系统的研究进展

肾素一血管紧张素系统(RAS)是心血管活动重要的体液调节系统,在维持水、电解质平衡及调节血压中起着关键作用.血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)是该系统中最重要的介质,通过与其特异性受体结合而产生相应的生理效应.在心血管系统中Ang Ⅱ受体主要包括AT1R和AT2R两种亚型.AT1R在人体内广泛分布并介导AngⅡ绝大多数作用,如收缩血管、增强心肌收缩力、促进血管增生和心肌肥厚、参与炎症反应等,而目前对AT2R的功能则了解甚少,但是越来越多的实验研究表明AT2R激活后具有拮抗AT1R功能的作用,如AT2R参与抑制不同组织细胞的生长和增殖,促进细胞的分化、凋亡,调节水盐代谢和神经细胞的活动.     

血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染

目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP,并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection,MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05）,同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。     

δ、κ、μ受体在创伤失血性休克大鼠细胞免疫抑制中的作用

目的 探讨何种阿片受体亚型介导了血浆β-内啡肽（β－endorphin,β-EP)在创伤失血性休克后免疫抑制中的作用。方法 采用体外实验，分别以δ、κ、μ受体高选择性拮抗剂naltrindole(NTI)、nor-binaltorphimine(Nor-BNI)和小剂量纳洛酮（naloxone,NAL,相对选择性μ受体拮抗剂）为工具药，作用于休克1h血浆处理的脾细胞，观察刀豆素A诱导的脾细胞增殖、白细胞介素－2（IL－2）分泌及白细胞介素－2受体（IL－2R）表达的变化。实验分休克血浆组（I组）、受体拮抗剂治疗组（Ⅱ组）、受体拮抗剂自身对照组（Ⅲ组）及基础对照组（Ⅳ组）。结果 Ⅱ组与I组相比，10μmol/L NAL（非选择性阿片受体拮抗剂）非常显著地增强脾细胞增殖功能、IL－2分泌和IL－2R表达（P＜0．01）；小剂量NAL（1－100nmol/L)对各项观察指标均无明显影响。NTI和Nor-BNI显著降低休克血浆对脾细胞增殖功能、IL－2的分泌及IL－2R表达的抑制（P＜0．05或P＜0．01）；但各项指标都仍然未恢复到正常水平（P＜0．01）。Ⅲ组与Ⅳ组相比，NTI抑制脾细胞增殖功能、IL－2的分泌和IL－2R的表达，其中1000nmol/L的NTI抑制效果较显著（P＜0．05）。Nor-BNI和NAL自身对照组对各指标均无显著影响。结论 创伤失血性休克后外周β－EP的可能主要通过与δ、κ受体结合发挥免疫抑制作用，未观察到与μ受体有关。     

PI3K-Akt信号通路及β2-AR蛋白在外源性硫化氢后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨外源性硫化氢后处理是否激活β2-AR受体减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤。方法 70只雄性Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为5组（n=14）：缺血/再灌注组（I/R）、硫化氢后处理组（N）、溶媒组（D）、LY294002组（L）、硫化氢后处理＋LY294002组（N＋L）。采用离体心脏Langendorff灌注模型,各组平衡灌注20min后,停灌40min,复灌60min。记录平衡末及灌注结束时的心率（HR）、左室内压上升最大速率（＋dp/dtmax）、左室内压下降最大速率（-dp/dtmax）、左室发展压（LVDP）、左室舒张末期压（LVEDP）、冠脉流量（CF）;灌注结束时,心肌HE染色观察心肌组织形态;Western blot测定β2-AR、Caspase-3、p-Akt和p-ERK的表达水平。结果 平衡末各组间心功能指标（基础值）差异无统计学意义（P〉0.05）。复灌60min时,与I/R组相比,N组能明显改善心功能各项指标（P〈0.05）,使心肌组织形态有改善,β2-AR、p-Akt和p-ERK表达水平升高,而活化的Caspase-3表达水平降低（P〈0.05）。LY294002逆转了硫化氢后处理改善心功能指标及升高p-Akt、pERK、β2-AR和降低Caspase-3表达水平的作用。结论 外源性硫化氢后处理通过激活PI3K-Akt信号通路和调节β2-AR受体蛋白的表达,参与离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）基因表达对血管平滑肌（VSMC）增殖,迁移和凋亡等生物学行为的影响,用同源重组方法构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R),体外转染VSMC,用流式细胞仪检测AT2R转染表达率,RT－PCR方法检测AT2RmRNA表达,VSMC增殖用MTT比色法和5－溴脲苷（BrdU)掺入法检测,迁移用改良Boyden趋化小室法检测,细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测,结果表明,AdCMV-AT2R转染后,VSMC表达率为89．51％,AT2R峰值表达时,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低61．4％和51．6％（P＜0．01）VSMC的跨膜迁移数减少62．2％（P＜0．05）。细胞凋亡增加约3．2倍,bax表达增加76．3％（P＜0．05）。提示AT2R表达可介导报制VSMC的增殖和迁移,并诱导其发生凋亡。     

荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β_1和β_2肾上腺素能受体基因mRNA表达

目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体(AR)基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ~Ⅱ级老年患者30例,分离外周静脉血淋巴细胞,采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达,并与半定量PCR检测结果进行比较。结果30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-AR mRNA表达,不同性别组同一基因表达量无显著差异(P>0.05);荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1-AR mRNA(P<0.001),而半定量PCR随着循环次数增加,β1和β2-AR mRNA表达差异减小。结论所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达,有较高的灵敏性及特异性;半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断。     

游离脂肪酸对大鼠胰岛细胞Leptin受体的影响

目的　探讨游离脂肪酸是否会影响胰岛细胞Leptin受体的基因和蛋白表达及酪氨酸磷酸化 ,进而导致胰岛素抵抗及葡萄糖代谢的异常。方法　分离、培养新生SD大鼠胰岛细胞 ,分别与软脂酸 (0 2 5mmol/L)或油酸(0 12 5mmol/L)孵育 12、2 4、36h ,提取蛋白后用Western印迹法检测Leptin受体(OB R)的蛋白水平 ,用RT PCR检测胰岛细胞内OB RRNA含量的变化 ,用免疫沉淀法检测OB R的酪氨酸磷酸化程度。结果　软脂酸和油酸孵育后大鼠胰岛细胞OB R的蛋白表达水平在孵育 2 4、36h后均下调 (P <0 0 5 ) ;Leptin受体的RNA水平和酪氨酸磷酸化程度在各个时间点均下调 (P <0 0 5 )。结论　游离脂肪酸可对OB R的基因和蛋白表达水平及磷酸化程度产生一定的抑制作用 ,这种抑制作用可能是游离脂肪酸导致胰岛素抵抗的因素之一     

二氧化硫污染对运动大鼠心肌收缩功能的影响及AngⅡ、AT1R的调节作用

目的:观察二氧化硫(SO2)吸入对运动大鼠心肌收缩力的影响并分析其可能机制。方法:48只SD大鼠随机分为空白对照组(RG)、单纯运动组(EG)、单纯SO2污染组(SRG)和SO2污染运动组(SEG),每组12只。SRG组和SEG组置于SO2污染环境(10 mg/m3)中1 h/d,共4周;EG组和SEG组进行电动跑轮运动(8 m/min,1 h/d,连续4周)。实验结束后,称量大鼠体重、心脏重量,并利用公式计算心脏重量指数和体重增长率。采用心脏插管技术测定各组大鼠血液动力学参数;采用放射免疫技术测定各组大鼠心肌AngⅡ含量;采用免疫组织化学技术测定各组大鼠心肌AT1R含量。结果:EG组大鼠心脏重量指数、主动脉收缩压(SBP)、脉压差(PP)、左室内压峰值(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)显著高于RG组(P<0.01),舒张压(DBP)、心率(HR)、心肌AT1R蛋白表达水平显著低于RG组(P<0.01,P<0.05);SRG组和SEG组大鼠心脏重量指数、左室末期舒张压(LVEDP)、心肌AngⅡ含量、AT1R蛋白表达显著高于RG组(P<0.05,P<0.01),±dp/dtmax显著低于RG组(P<0.01);SEG组大鼠SBP、PP、LVSP显著低于RG组(P<0.01),HR显著高于RG组(P<0.01);且SEG组大鼠HR、LVEDP、心肌AngⅡ含量、AT1R蛋白表达显著高于SRG组(P<0.01),SBP、PP、LVSP、±dp/dtmax显著低于SRG组(P<0.01)。结论:SO2污染对运动大鼠心脏收缩功能产生显著负性变力性效应,AngⅡ及其受体AT1R蛋白表达水平上调引起RAS系统功能紊乱是导致运动大鼠心肌收缩力降低的原因之一。     

PCI后新生血管内膜的形成和增生及其机制——血管紧张素Ⅱ及其受体作用的实验研究

目的　本项目通过建立球囊损伤大鼠髂动脉制作内膜增生模型 ,对体外培养的VSMC生物学特性进行检测 ,采用ATR基因转染VSMC等技术 ,在器官、细胞、亚细胞、分子水平探讨RAS主要成分AngⅡ及其受体亚型在PCI后新生血管内膜形成和增生中的作用 ,重点研究AngⅡ及其受体亚型在VSMC迁移、增生和凋亡中的作用及其机制 ,为临床应用抑制RAS的方法防治RS提供确切的理论依据。方法　①在体动物实验 :用球囊损伤方法制作大鼠髂动脉损伤后内膜增生的动物模型 ,利用受体放射性配基结合分析方法、电镜、原位杂交及流式细胞术等技术 ,并以此实验平台研究比较增生内膜中RAS有关成份活性变化、AngⅡ受体表达变化、VSMC增殖和凋亡特性变化 ,以了解这些变化与内膜增生的关系。②细胞学实验 :通过体外培养VSMC研究不同AngⅡ浓度以及干预剂作用等条件下AngⅡ受体表达变化 ,了解其变化对VSMC增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响 ,特别是对近年来受到重视的VSMC迁移的影响作用。③基因转染研究 :通过构建AT2 R基因的腺病毒载体转染体外培养的大鼠主动脉VSMC ,建立表达AT2 R的细胞模型 ,研究VSMC表达AT2 R后其生...     

α1肾上腺素受体的研究进展

α1肾上腺素受体（α1－AdrenergicReceptor，α1－AR）广泛分布于哺乳类动物的组织和器官，参与机体许多重要的生理活动，对血压调节，食欲、情绪、生殖、支气管收缩等都有一定的影响，近年来，由于α1-AR进一步分型，在其生理学意义及药理学研究方面都取得了很大进展，发现和研制了很多具有选择性的α1-AR激动剂和拮抗剂，为α1-AR的进一步研究提供了有用的工具。α1－AR的药理学特性早在70年代末及80年代初，就有不少人从血管功能实验及放射配基结合实验中发现在不同组织中α1－AR与激动剂或拮抗剂的亲和性存在着明显的差异，这些…     

+Gz暴露后自发性高血压大鼠收缩压的变化及替米沙坦的影响

目的 观察正加速度(+Gz)暴露后自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)收缩压(systolic blood pressure,SBP)的变化及替米沙坦的影响.方法 28只8周龄雄性SHR及14只8周龄雄性Wistar Kyoto大鼠(WKY)随机分为6组:SHR+ Gz暴露组(SHR+ Gz)7只,SHR对照组(SHR-C)7只,替米沙坦治疗SHR+ Gz暴露组(TT-SHR+Gz)7只,替米沙坦治疗SHR对照组(TT-SHR-C)7只,WKY+ Gz暴露组(WKY+ Gz)7只,WKY对照组(WKY-C)7只.+Gz暴露采取+5 Gz持续10 s和+9Gz持续10 s交替3次进行,+Gz作用总时间94 s,Gz增长率为1 Gz/s.休息20 min后,重复暴露1次,连续进行7d暴露.对照组大鼠不进行+Gz暴露.结果 替米沙坦治疗后,两组服药大鼠SBP降低至正常水平.每日+ Gz暴露后1h,WKY+ Gz大鼠SBP与WKY-C大鼠相比无明显变化.SHR+ Gz大鼠从+ Gz暴露的第1天至第7天,暴露后1h的SBP始终高于SHR-C大鼠(P＜0.01).TT-SHR+Gz大鼠在+ Gz暴露开始后的第1,2天,暴露后1h的SBP出现了一过性下降,第3天以后该现象消失.每日+Gz暴露后6h,两组SHR的SBP均可恢复至每日+Gz暴露前水平.结论 SHR在+Gz暴露后可产生明显的SBP升高反应,替米沙坦可抑制该反应,可能具有心血管保护作用.     

自发性高血压大鼠心肌血管内皮生长因子表达水平的检测

 目的探讨血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在自发性高血压大鼠(Spontaneously hyper-tensive rat,SHR)心肌细胞中的表达情况,分析其与高血压时心肌毛细血管稀少及微小动脉"重塑"(remodeling)的关系.方法应用免疫组化SP染色法及计算机图像分析技术,对幼年(6周,n=15)和成年(12个月,n=15)SHR大鼠及幼年(6周,n=10)和成年(12个月,n=10)同系正常血压对照组京都Wistar大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)心肌VEGF蛋白的表达水平进行了定量分析.结果在4组大鼠心脏各部(心房肌、心室肌、房间隔、室间隔等)心肌细胞浆中及冠状动脉各级分支的血管平滑肌细胞中均见有阳性VEGF表达,6周龄、12个月龄WKY及6周龄SHR三组间表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),而12个月龄SHR组表达水平较其他三组均高(P＜0.05).结论随着成年SHR大鼠血压的升高,心肌及血管平滑肌细胞中VEGF蛋白的表达水平上调,可能是对高血压所致的靶器官继发性毛细血管减少的一种代偿反应,高表达的VEGF可对抗由于缺氧诱导的内皮细胞凋亡,维持其存活,并促进微血管再生.     

PPARβ激动剂对肥大心肌细胞蛋白合成及IL-1β表达的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物活化型受体β亚型（ PPARβ）激动剂对体外肥大心肌细胞蛋白合成及相关炎性因子IL-1β表达的影响。方法体外培养新生大鼠的心室肌细胞,以血管紧张素Ⅱ（ AngⅡ）诱导建立心肌细胞肥大模型,将适宜浓度PPARβ激动剂GW0742作用于心肌细胞,用3 H-亮氨酸掺入法检测心肌细胞蛋白合成速率,RT-PCR及Western印迹方法分别检测IL-1βmRNA和蛋白水平的表达变化。结果与结论 GW0742在抑制肥大心肌细胞蛋白合成速率的同时,下调其IL-1βmRNA和蛋白的表达,而作为溶剂的DMSO则无此影响,说明GW0742抑制AngⅡ介导的体外心肌细胞肥大,其机制可能与调控炎性因子IL-1β密切相关。