补肾活血方在兔胫骨截骨延长过程中对TGF-β2基因表达的影响

目的探讨补肾活血方在牵张骨区域对转化生长因子-β2(TGF-β2)基因表达的影响。方法取健康雄性新西兰大耳白兔随机分为假手术组、模型组、补肾活血方组,造模完成后,假手术组不予任何药物灌胃;模型组以生理盐水灌胃;补肾活血方组采用中药灌胃。牵张成骨8周后处死,取各组兔右侧胫骨标本,进行HE染色病理组织形态观察、免疫组织化学检测、RT-PCR实验、影像学观察等。结果影像学、病理组织形态观察可见补肾活血方组兔截骨断端有新生骨生成,骨小梁排列、密度及面积较模型组整齐。模型组TGF-β2生长因子几乎没有(-)或仅有微弱表达(+/-),而补肾活血方组在间质细胞、骨细胞、成骨细胞及骨基质中TGF-β2均有表达;补肾活血方组与假手术组TGF-β2基因m RNA表达量明显高于模型组(0.512±0.080、0.546±0.087比0.381±0.093,P0.05)。结论补肾活血方对兔截骨延长区TGF-β2基因表达具有明显的调控作用,通过对成骨细胞、骨基质等影响,刺激TGF-β2的分泌和合成,有利于新骨的生成。     

清肺化痰、益气活血对肺纤维化大鼠不同时间点TGF-β1mRNA表达的影响

目的 比较清肺化痰、益气活血中药对肺纤维化大鼠不同时间、不同吞噬细胞β型转化生长因子(TGF-β1)mRNA表达的影响.方法 将77只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为7组,即假手术组、模型组、清肺化痰组、益气活血组、两法联合运用组、两法分阶段运用组及氢化可的松组,建立肺泡巨噬细胞(AM)、肺间质巨噬细胞(IM)细胞模型.用原位杂交方法检测TGF-β1 mRNA表达水平,积分光密度法计算TGF-β1 mRNA阳性面积.结果 7 d时AM和28 d时IM的 TGF-β1 mRNA阳性细胞率和积分光密度显示,模型组较假手术组增加,差异具有极显著性(P<0.01);中药各治疗组较模型组降低,差异具有显著性 (P<0.05).结论 清肺化痰、益气活血中药均可通过减少AM、IM分泌TGF-β1,抑制肺泡炎和肺纤维化的进程.     

转化生长因子β1对种植体表面成骨细胞骨涎蛋白基因表达研究

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对种植体表面成骨细胞中骨涎蛋白（BSP）表达的影响.方法 体外培养成骨细胞接种于钛片表面（模拟种植体植入后的体内环境）,将其分为2个浓度刺激组和对照组.刺激组分别加入0.5、10 μg/L的TGF-β1,对照组不加TGF-β1,分别收集刺激后第2、5、7天培养的细胞,通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的BSP mRNA表达.结果 相对半量分析结果显示：浓度为0.5 μg/L的TGF-β1可增加成骨细胞中BSP的表达（P〈0.05）,而浓度为10 μg/L的TGF-β1可降低成骨细胞中BSP的表达（P〈0.05）.结论 外源性TGF-β1对接种于模拟体内种植体钛片表面的成骨细胞中BSP表达的作用与其浓度有关.     

雷洛昔芬对大鼠成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响

目的: 比较雷洛昔芬与雌二醇对成骨细胞增殖分化及TGF-β表达的影响.方法: 本实验在新生SD大鼠颅盖骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照组及空白血清对照组,对其细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原(α2)链Col-I mRNA、转化生长因子(TGF-β1)mRNA的表达进行检测分析.结果: 体外培养成骨细胞在加入不同浓度雷洛昔芬和雌二醇后,(1)细胞增殖率与空白对照组比较无统计学意义(P＞0.05).(2)ALP活性和Col-I mRNA表达与雷洛昔芬成剂量依赖性,并在高浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.01).(3)TGF-β1 mRNA的表达在雷洛昔芬10-8 mol/L浓度组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).雌二醇对ALP活性、Col-I mRNA表达及TGF-β1 mRNA表达与对照组相比较均有统计学意义.结论: 雷洛昔芬与雌二醇对体外培养成骨细胞均可上调细胞分化及骨胶原表达,对细胞增殖影响均不显著,雌二醇显著上调TGF-β1 mRNA表达,且与雷洛昔芬相比较有统计学意义.此结果提示雷洛昔芬在通过雌激素受体(ER)发挥拟雌激素作用时与雌二醇作用机制可能不同.     

补肾解毒通络方对肾间质纤维化大鼠TGF-β1 BMP-7表达的影响

目的：观察补肾解毒通络方对肾间质纤维化大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋白-7（BMP-7）及两者mRNA表达的影响。方法：通过腺嘌呤灌胃建立大鼠肾间质纤维化模型,利用免疫组织化学方法、半定量RT-PCR分别检测大鼠肾脏TGFβ1、BMP-7及两者mRNA的表达。结果：补肾解毒通络方能下调TGF-β1和TGF-β1mRNA的表达、上调BMP-7和BMP-7mRNA的表达,治疗组与模型组比较有统计学差异（P〈0.01）。结论：补肾解毒通络方可以通过下调TGF-β1和TGF-β1mRNA表达、上调BMP-7和BMP-7mRNA的表达来减轻肾间质纤维化。     

健腰密骨片对成骨细胞增殖分化和BMP信号通路报导基因活性的影响

目的:探讨健腰密骨片对成骨细胞的影响及作用机制。方法:常规培养转染12×SBE-OC-Luc报导基因的成骨细胞株OCT-1细胞(以下简称12×SBE-OC-Luc-OCT1细胞),采用健腰密骨片含药血清进行干预48 h,并以骨形态发生蛋白(BMP)2纯化蛋白(50 ng/ml)为阳性对照。用MTT法检测成骨细胞增殖率,实时荧光定量RT-PCR法检测成骨细胞中Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨钙素(osteocalcin)和BMP2mRNA的表达以及荧光素酶活性检测法检测成骨细胞12×SBE-OC-Luc的活性。结果:与正常对照组比较,健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P0.05);显著增加成骨细胞中typeⅠcollagen、osteocalcin和BMP2的mRNA表达量(P0.05);能明显促进成骨细胞中BMP报导基因12×SBE-OC-Luc的荧光素酶活性(P0.05)。结论:健腰密骨片可通过促进BMP2、typeⅠcollagen和osteocalcin的表达及BMP信号通路报导基因12×SBE-OC-Luc的活性,从而促进成骨细胞的增殖与分化。     

微小颗粒骨复合细胞移植治疗大鼠骨缺损

目的:观察自体微小颗粒骨复合骨髓基质细胞(MSC)或成骨细胞移植修复大鼠骨缺损的治疗效果.方法:制作大鼠颅骨缺损动物模型,培养同种异体新生大鼠的MSC及成骨细胞,复合自体颗粒骨后植入骨缺损区,X线摄片观察骨愈合情况;RT-PCR检测转化生长因子β1(TGF-β1),碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达水平.结果:植入微小颗粒骨复合成骨细胞组颅骨缺损愈合最快(7.33±0.44)wk,TGF-β1,bFGF表达出现早,与其他两组比较差异显著(P＜0.05).植入微小颗粒骨复合MSC组颅骨缺损愈合时间居中(8.67±0.69)wk,TGF-β1,bFGF表达早于单纯微小颗粒骨组(P＜0.05).单纯微小颗粒骨植入组颅骨缺损愈合慢(11.67±1.52)wk,TGF-β1,bFGF表达出现晚.结论:微小颗粒骨复合细胞移植修复颅骨缺损,细胞因子表达早,缺损愈合明显加快.     

补肾调经方对雄激素致无排卵大鼠卵巢转化生长因子β1及其受体表达的影响

目的：观察补肾调经方对雄激素致无排卵大鼠卵巢转化生长因子β1／转化生长因子pI型受体（TGF-β1／TGF—βRⅠ）表达的影响，探讨其治疗无排卵性疾病的作用机制。方法：建立雄激素致无排卵大鼠模型，设乌鸡白风口服液为阳性对照药，分为正常组、模型组、阳性药对照组和中药治疗组，采用HE染色观察卵巢组织形态学变化，采用免疫组化法检测卵巢颗粒细胞、间质细胞TGF—β1／TGF—βRⅠ的表达强度。结果：补肾调经方可改善病理状态下模型大鼠卵巢的形态结构，使模型大鼠卵巢颗粒细胞高表达的TGF-β1、间质细胞高表达的TGF-β1／TGF-βRⅠ恢复接近正常。结论：补肾中药可通过对卵巢TGF-β1及其受体TGF—βRⅠ表达的影响，促进卵泡发育。     

补肾散结方对肺癌骨转移小鼠PTHrP及TGF-β_1表达的影响

目的:建立LL/2-Luc-M38小鼠肺癌骨转移模型,探讨补肾散结方对肺癌骨转移及PTHr P、TGF-β1表达的影响。方法:在C57小鼠骨髓腔接种LL/2-Luc-M38肺癌细胞株建立骨转移模型,并随机分为模型组、帕米膦酸钠组、补肾散结组。模型组以生理盐水灌胃,帕米膦酸钠组腹腔注射帕米膦酸钠(0.1 ml/次),补肾散结组小鼠以补肾散结方药液灌胃。观察小鼠X线股骨表现和骨转移细胞IVIS荧光信号,骨肿瘤组织病理,骨组织PTHr P、TGF-β1蛋白表达和mRNA表达情况。结果:模型组见明显溶骨性骨破损、肿瘤细胞密集,补肾散结组和帕米膦酸钠组骨皮质轻度破坏、肿瘤细胞减少;帕米膦酸钠组和补肾散结组骨组织肿瘤细胞荧光信号表达量均低于模型组(P0.05,P0.01);帕米膦酸钠组、补肾散结组骨组织PTHr P、TGF-β1mRNA表达均明显低于模型组(P0.05,P0.01)。结论:补肾散结方可能通过抑制TGF-β1、PTHr P蛋白和mRNA表达达到抗肿瘤骨转移的作用。     

TGF-β1、TNF和维拉帕米对烧伤小鼠CD14表达的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子(TNF)和维拉帕米对严重烧伤小鼠早期腹腔巨噬细胞(Mψ)CD14表达的影响.方法:BALB/c小鼠被随机地分成烧伤组和假烫组,将收集到的腹腔巨噬细胞分别加入不同浓度TGF-β1(0.02,0.20,2.00μg/ml)、TNF(0.1,1.0,10.0 μg/ml)和维拉帕米(10,100,1 000 pm01/ml)培养.用细胞原位杂交方法,观察TGF-β1、TNF和维拉帕米对小鼠MψCD14 mRNA表达的影响.结果:(1)烧伤后腹腔MψCD14 mRNA的表达明显增加.(2)0.02,0.20 μg/ml TGF-β1可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达增加,2 μg/ml则可使烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达减少.TNF、维拉帕米各浓度对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达均无明显影响.结论:TGF-β1能通过改变MψCD14 mRNA的表达,调节其功能状态.TNF、维拉帕米对烧伤小鼠MψCD14 mRNA表达无明显影响.     

转化生长因子-β1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:研究转化生长因子;GAAB2;β1;(TGF;GAAB2;β1)对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达结缔组织生长因子(CTGF) 的影响.方法:体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为对照组:无血清培养基(FSM) 培养; 实验组:分别用含1 μg /L,2 μg /L,4 μg /L TGF-β1的FSM培养,24 h后,分别用RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果:对照组CTGF mRNA和蛋白表达均为阴性;实验组CTGF mRNA和蛋白表达皆呈阳性,且随着TGF-β1质量浓度的增加,2者的表达量有增高的趋势(F=80.889和200.300,P均＜0.01).结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞中CTGF的表达.     

Calcitonin gene-related peptide induces osteoblasts proliferation by un-regulating tumor necrosis factor-β1

目的 检测外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-ralated peptide,CGRP)对体外培养兔成骨细胞转化生长因子-β1(transformation growth factor-β1,TGF-β1)表达的调控作用,探讨其对成骨细胞增殖的影响.方法 将出生5d以内新西兰大白兔头骨成骨细胞进行原代培养,用不同浓度的CGRP分别在不同时间段处理后,用MTT法检测细胞生长活力增殖情况;用Western blot检测成骨细胞TGF-β1的蛋白表达.结果 成功分离并培养兔颅骨原代成骨细胞,进行碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞.结果显示同一浓度的CGRP随着时间的增加MTT值呈增加趋势;而就同一时间点做比较,随着CGRP浓度的不断增加,MTT值也呈上升趋势,并且在48h和72h,这种趋势愈加明显(P＜0.05).另外随CGRP浓度的增加TGF-β1条带灰度显著升高,显示TGF-β1蛋白的表达逐渐增强(P＜0.05),CGRP可能促进兔成骨细胞TGF-β1的表达.结论 CGRP可能通过调节成骨细胞TGF-β1蛋白的表达促进成骨细胞的增殖分化从而影响骨代谢.     

牛蒡子苷元对高糖刺激大鼠系膜细胞转化生长因子β1表达的影响

目的 观察牛蒡子苷元（ARC-G）对高糖刺激大鼠系膜细胞（GMCs）转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响.方法 用葡萄糖（30 mmol/L）刺激大鼠GMCs,经ARC-G（30 μmol/L、3 μmol/L）培养48 h后,采用实时定量PCR方法检测TGF-β1 mRNA的表达.结果 葡萄糖刺激可使GMCs TGF-β1 mRNA的表达增加;经ARC-G处理后,TGF-β1 mRNA的表达下降.结论 ARC-G可以通过抑制GMCs TGF-β1的表达,对损伤的GMCs起保护作用.     

ＴＧＦ-β１ｍＲＮＡ在胃癌中表达及其与淋巴转移、生存率的相关性研究

目的:研究转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)在胃癌组织中的表达及其与淋巴结转移、术后生存率的关系.方法:用原位杂交法检测66例胃癌切除标本中癌组织和10例癌周组织TGF-β1mRNA表达:结合临床资料分析TGF-β1mRNA与胃癌患者术后生存率的关系.结果:胃癌患者中66.67%在术后5年内死亡.胃癌中TGF-β1mRNA阳性表达率86.36%.TGF-βmRNA表达阴性或弱阳性者47.50%术后生存5年以上,52.50%5年内死亡,TGF-β1mRNA表达呈中、强阳性者11.54%术后生存5年以上,88.46%5年内死亡(P＜0.05).无淋巴结转移者TGF-β1mRNA阳性表达率75.00%,有淋巴结转移者TGF-β1mRNA阳性表达率97.06%(P＜0.05).TGF-β1mRNA高表达与胃癌的进展呈正相关.结论:TGF-β1可促进胃癌生长,增加胃癌的侵袭能力和淋巴转移.提示对胃癌患者行TGF-β1mRNA检测.可判断胃癌的进展和预后.     

基质金属蛋白酶13和转化生长因子β1 mRNA及蛋白在骨性关节炎中的表达

目的：探讨骨性关节炎（OA）中金属蛋白酶-13（MMP-13）,转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA和蛋白表达的意义.方法：采用免疫组织化学技术,对60例OA病例及20例正常对照组进行了MMP-13及TGF-β1蛋白表达的检测;通过原位杂交技术,对30例OA及10例正常对照进行了MMP-13及TGF-β1在mRNA水平表达的检测.结果：MMP-13mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达有显著正相关性（P〈0.01）;TGF-β1mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA中两者的表达亦有显著正相关性（P〈0.01）;MMP-13mRNA,TGF-β1mRNA及相应蛋白在OA中的表达均呈负相关（P〈0.05或P〈0.01）.结论：OA中TGF-β1高表达通过下调关节软骨与滑膜细胞中MMP-13的表达,对OA关节软骨起保护作用.     

转化生长因子β1对种植体表面成骨细胞I型胶原蛋白基因表达研究

目的：通过观察特定浓度的转化生长因子β1（TGF-β1）,在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中I型胶原蛋白表达情况,探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法：体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表面,将其分为2个浓度刺激组和对照组。刺激组分别加入0.5ng/mL、10ng/mL的TGF-β1刺激细胞增殖和分化,分别收集刺激后第2d、5d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的I型胶原蛋白mRNA表达,对照组不加TGF-β1,比较各组间差异程度。结果：浓度为0.5ng/mL的外源性TGF-β1加入到接种于模拟体内种植体的钛片表面的成骨细胞中后,可显著增加成骨细胞中I型胶原蛋白表达（P〈0.05）;而浓度为10ng/mL的外源性TGF-β1可降低成骨细胞中I型胶原蛋白的表达（P〈0.05）。TGF-β1刺激后的I型胶原蛋白在不同时间培养的成骨细胞中,表达在凝胶成像系统光密度分析后可见与对照组中表达量相比,低浓度刺激组表达量略有升高,高浓度刺激组表达量略有降低。结论：浓度为0.5ng/mL的TGF-β1对I型胶原蛋白的表达有促进作用;浓度为10ng/mL外源性TGF-β1对I型胶原蛋白表达有抑制作用。     

补肾化痰方对去卵巢大鼠骨组织中BMP-2和TGF-β1表达的影响

目的:观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、转化生长因子β(1TGF-β1)表达的影响。方法:50只大鼠随机分为模型组、假手术组、西药组、中药低剂量组、中药高剂量组,除假手术组外,其他各组大鼠行双侧卵巢切除术,术后3个月治疗组开始灌胃给药,连续8 w;处死大鼠,免疫组化检测大鼠胫骨组织中BMP-2、TGF-β1的表达。结果:补肾化痰方低、高剂量组大鼠BMP-2、TGF-β1表达水平均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾化痰方能改善骨代谢,对去卵巢大鼠骨质疏松症有较好的治疗作用。     

补肾通络疏肝方对去势大鼠阴茎组织转化生长因子β基因表达的影响

目的探讨补肾通络疏肝方在阴茎勃起中发挥作用的机制。方法将40只成年雄性大鼠随机分为对照组、去势组、补肾通络疏肝方组与丙酸睾酮组。后3组分别切除双侧睾丸,其中补肾通络疏肝方组和丙酸睾酮组在切除睾丸后给予中药及丙酸睾酮替代治疗,于术后3周取阴茎组织,用PCR检测其转化生长因子β(TGF-β)的基因表达。结果去势组TGF-βmRNA的表达较其他3组增强,而表现TGF-βmRNA减弱的组,由少到多排序为对照组、丙酸睾酮组及补肾通络疏肝方组;对照组、丙酸睾酮组及补肾通络疏肝方组TGF-βmRNA内控量较少,与去势组比较有显著性差异(P0.01),而丙酸睾酮组及补肾通络疏肝方组之间无显著性差异(P0.05)。结论补肾通络疏肝方可能通过调节TGF-βmRNA表达而在阴茎勃起中发挥重要作用。     

肝纤维化大鼠TGF-β1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化.治疗组在造模4周后给予补肾柔肝方灌胃,剂量10 g·kg-1·d,共治疗4周.第8周末处死全部大鼠,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1mRNA的表达水平.结果:肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织TIMP-1和TGF-β1mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱,而正常对照组表达较少.结论:TIMP-1与TGF-β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1具有明显的抑制作用,可达到抗肝纤维化的作用.     

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人类肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用,并探讨其作用机制.方法将体外培养的HKC分为5组:(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;(3)BMP-7单独作用组;(4)BMP-7与TGF-β1共同作用组;(5)BMP-7预处理后加入TGF-β1组.间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR(RT-PCR)方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达.结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7% vs 19.8%,5.8% vs 19.8%,P＜0.05).BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7% vs 19.8%,P＜0.05).RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞,α-SMA mRNA表达分别为阳性对照组的15%和12%,而TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达水平分别为阳性对照的28%和19%及47%和36%.结论一定浓度的BMP-7与TGF-β1同时培养或预处理,都能抑制TGF-β1诱导的HKC细胞转分化;BMP-7可以预防和抑制HKC细胞TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达,这很可能是BMP-7抑制HKC细胞转分化的重要机制之一.