应用多重PCR方法快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌

目的 探讨应用多重PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的可靠性.方法 根据结核分枝杆菌种的MTP40基因序列(396bp),分枝杆菌属的32kD基因序列(506bp),结核分枝杆菌复合体群的IS6110序列(984bp),采用3对特异性引物(PT1,T2;MT1,T2;IS5,S6)在同一反应体系和条件下对92株结核杆菌临床分离株和5株非结核分枝杆菌临床分离株进行扩增,并与标准菌株进行比较.结果 92株结核分枝杆菌临床分离株中,0株扩增出与结核分枝杆菌H37RV标准株相同的396bp、506bp、984bp 3条DNA片段,敏感性达97.8%,特异性为100%;5株非结核分枝杆菌临床分离株均扩增出506bp DNA片段,敏感性达100%,特异性为100%.结论 应用多重PCR方法,对结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌进行鉴定,结果快速、准确、可靠,为临床结核病与非结核分枝杆菌病的快速诊断提供了有效的手段,具有很好的临床应用价值.     

结核抗体检测在结核病诊断中的价值

结核抗体的检测，给结核病的诊断提供了血清学依据，为了探讨其诊断价值，我们将肺结核、肺外结核和健康人群，作进一步诊断研究，并探讨其诊断价值。1对象和方法1．1病例选择肺结核病组82例，男60例．女22例。年龄9～72岁。其中巨型4例，巨型58例，只型10例，V型IO例。肺外结核组24例，男19例，女5例。年龄4～32岁。其中淋巴结结核12例，结核性脑膜炎6例，骨和关节结核4例，结核性心包炎五例。担卵管结核1例。对照组30例，均为男性健康献血员．年自20～38岁。互．2方法采用ELISA法，检测标本为血清，其操作步骤及阴、阳性判定按试剂盒…     

非结核分枝杆菌肺病的 MSCT 表现及诊断

目的：探讨非结核分枝杆菌（NTM）肺病的CT表现特点。方法回顾性分析在本院经MSCT扫描,并经双相培养基菌群鉴定明确诊断为NTM肺病的患者42例（NTM肺病组）,与随机抽取的同期结核菌培养阳性并经菌群鉴定为肺结核的初治患者60例（肺结核组）的资料进行对照,并对9种C T征象检出及病灶分布特点进行分析、总结。对结果进行统计学分析,P＜0．05为差异有统计学意义。结果 NTM肺病组女性多见（χ2＝5．500,P＝0．019）,平均年龄高于肺结核组,差异有统计学意义（ t＝3．456, P＝0．001）。NTM肺病组在中叶、舌段检出率明显高于肺结核组（χ2＝8．361,P＝0．004）。 Logistic回归分析结果显示支气管扩张和支气管狭窄或闭塞是NTM肺病的独立危险因素,是与肺结核区分的重要征象。结论 NTM 肺病CT表现有一定的特点,对临床诊断有提示作用。     

ELISA血清结核抗体对肺结核的诊断价值

目的 探讨血清结核抗体对肺结核的诊断价值。方法 对３８１份血清标本采用ＥＬＩＳＡ方法检测结核抗体水平。结果 活动性肺结核、非活动性肺结核、非结核病的阳性率分别为６９．２３％、２６．７１％、２５．５４％。结论 此法敏感性较高,但特异性不强,对结核病筛查有辅助诊断价值,但无法判定受试受为既往感染者、卡介苗（ＢＣＧ）接种者抑或非结核菌感染者。     

结核分枝杆菌Rv3873抗原表位预测及其蛋白片段抗原性研究

目的对结核分枝杆菌Rv3873进行生物信息学分析及抗原表位预测,原核表达Rv3873基因21～235位氨基酸蛋白片段,命名为Rv387321～235重组蛋白,初步分析其抗原性。方法 PCR扩增结核分枝杆菌Rv3873 21～235位氨基酸的基因片段,构建其原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）,获得重组蛋白并纯化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对Rv387321～235重组蛋白进行抗原性检测。结果具有优势抗原表位的Rv3873蛋白片段在大肠杆菌中高效表达;ELISA结果显示,Rv387321～235重组蛋白在结核病检测中的敏感性为28%,特异性94.6%。结论生物信息学预测Rv3873基因抗原表位,为寻找有价值的抗原靶点提供了参考;具有优势抗原表位的重组蛋白片段在结核病诊断中具有潜在应用价值,可作为联合诊断的备选抗原之一。     

结核分枝杆菌抗原蛋白38×10~3抗原表位预测及其蛋白片段抗原性研究

目的筛选出一种结核分枝杆菌（MTB）特异性诊断标志物。方法对MTB重组蛋白抗原38×103的基因组序列进行生物信息学分析及抗原表位预测,原核表达38×103基因序列121～182和238～374位氨基酸蛋白片段,分别命名为T38和P38重组蛋白;采用蛋白芯片对T38和P38重组蛋白进行抗原性检测。结果经蛋白芯片检测94例阳性和128例阴性样本,结果显示,P38重组蛋白在结核病检测中的敏感性为81.9%,特异性为80.5%,但是T38重组蛋白特异性不佳。结论生物信息学预测38×103基因抗原表位,为寻找有价值的抗原靶点提供了参考;重组蛋白片段P38在结核病诊断中具有潜在应用价值,可作为联合诊断的备选抗原之一。     

结核分枝杆菌耐药机制研究进展

结核病是严重危害人民身体健康的传染性疾病。耐药结核杆菌尤其是耐多药结核杆菌（MDR—TB）的出现和传播是导致结核病发病率升高的重要原因。结核杆菌无法通过质粒的介导从其他细菌获得耐药性,因此染色体介导的耐药是结核杆菌产生耐药的分子基础。目前对结核杆菌耐药机制的研究主要集中在药物作用靶位及相关基因的突变上。     

结核分枝杆菌Rv0309抗原的重组表达、纯化和鉴定

目的重组表达结核分枝杆菌Rv0309蛋白,以进一步探讨其免疫效应。方法将结核分枝杆菌抗原Rv0309的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0309重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0309重组子,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达重组Rv0309蛋白,其条带大小约23000,与预期结果相符。结论成功地进行了结核分枝杆菌抗原Rv0309的基因克隆与重组表达,为进一步研制新型结核病疫苗打下了基础。     

结核分枝杆菌潜伏感染现状及防控对策

结核潜伏感染(LTBI)是结核病发病的蓄水池,也是持续不断的新发患者的来源。5%～10%的LTBI者一生中会发展为活动性结核病,在LTBI高危人群中发病风险更高。LTBI是结核病疫情难以控制的主要原因之一。2018年,第一次联合国大会结核病高级别会议呼吁重点关注LTBI的管理,控制和减少LTBI者由于重新激活而导致结核病的发病。本文就LTBI的疾病负担、流行现状、发病风险、患者管理及防治策略等进行系统论述,为制定我国LTBI的防治策略提供参考。     

两种培养基对结核分枝杆菌分离鉴定的比较

与世界总体水平相比 ,目前我国的结核病发病率仍然较高。为了选择检测效果好、成本低的培养基对结核分枝杆菌进行分离与鉴定 ,我们采用匡铁吉[1] 琼脂培养基与Ｌ ｗｅｎｓｔｅｉｎ[2 ] 培养基对痰标本中的结核分枝杆菌进行分离、鉴定 ,结果显示匡铁吉琼脂培养基临床效果较优。1　材料和方法1 1　痰标本与前处理　从我院住院肺结核患者中留取 12 7份痰标本 ,每份大约 10ｍｌ,收集在一个10 0ｍｌ的干净厂口玻璃瓶内。按痰标本量的 2 5倍体积加入 2 %氢氧化钠 (ＮａＯＨ)溶液 ,用玻璃棒反复搅拌 ,以使浓痰液化均匀 ;作用 2 0ｍｉｎ后即可用于…     

实时荧光定量PCR检测痰中结核分枝杆菌临床评价

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床痰标本中结核分枝杆菌诊断肺结核的意义。方法收集我院2011年9月-2013年8月期间收治的126例确诊为肺结核的患者和80例非结核性呼吸道疾病患者的痰液标本,分别采用漂浮集菌涂片镜检、BACT／ALERT3D快速培养法和FQ-PCR法检测痰中结核杆菌,分析检出结果。结果126例确诊为肺结核患者的痰标本中对结核分枝菌杆的检验以FQ-PCR检出率最高达到53．2％,高于快速培养法的46．8％（P〈0．05）和痰漂浮集菌涂片镜检法的32．5％（P〈0．01）。FQ-PCR与痰培养法总体一致性为95．1％,K=0．88。对痰涂片阳性标本,两者敏感性差异无统计学意义（P〉0．05）;对痰涂片阴性标本,FQ-PCR敏感性明显高于快速培养法（P〈0．01）。结论FQ-PCR具有快速、敏感、特异、可定量和自动化的优点,值得应用于痰中结核杆菌的检测及肺结核的诊断。     

耐多药结核病例不同年龄组耐药性分析

 目的 探讨耐多药结核(Multidrug resistance-TB,MDR-TB)病例不同年龄组的耐药状况,分析相关因素.方法 采用匡氏琼脂培养基法进行结核杆菌分离培养及药敏试验,筛选出107例耐多药性肺结核病例,按年龄分为青年组(20～39岁)、中年组(40～59岁)、老年组(＞60岁),分析其耐药种类及耐药形成原因.结果 原发性耐多药病例中,老年组比例最高(50.0%),其次为青年组(33.3%),中年组最低(16.7%);获得性耐多药病例中以青年组所占比例最大( 67.4%),中年组次之(24.2%),老年组占8.4%,青年组和中年组比例明显高于老年组(P＜0.01);不同年龄组耐多药种类相比差异无统计学意义(P＞0.05),且各个年龄组均以耐HRS和HRSE为主.耐药形成原因中,初治期间不规则用药和不满规定疗程自行停药共占72.6%,是MDR产生的主要原因.经统计学处理各个年龄组化疗情况比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 不同年龄组原发和获得性耐多药情况有所不同,建议重视不同年龄组的耐多药率的检测,合理化疗和贯彻全程督导治疗原则对于减少耐多药现象至关重要.     

脊柱结核单纯病灶清除术的疗效评价

目的探讨单纯结核病灶清除术治疗脊柱稳定性未完全破坏脊柱结核的疗效。方法 2007年1月至2009年12月手术治疗成人胸、腰椎脊柱稳定性未完全破坏脊柱结核患者53例,男29例,女24例;年龄22～73岁,平均36.2岁;病史3～48个月,平均17个月。按患者意愿分为两组,即实验组与对照组,其中实验组31例,对照组22例,对照组行彻底的清除病灶术,实验组行单纯结核病灶清除术,平均随访38个月,对比两组患者手术后疗效、并发症和经济费用。结果两组患者手术疗效无显著性差异（P〉0.05）,对照组患者并发症较重且费用明显增加（P均〈0.01）。结论脊柱结核单纯病灶清除术对于脊柱稳定性未完全破坏的患者,尤其是经济条件较差的患者仍不失为一种经济有效的治疗手段。     

结核分枝杆菌特异PE/PPE蛋白家族研究进展

结核分枝杆菌（Mycobacterium. tuberculosis,MTB）是结核病的病原菌。富含甘氨酸的独特蛋白质家族——PE/PPE蛋白家族编码基因约占整个MTB菌基因组的10%,该蛋白家族可能是细菌毒力和抗原变异的主要来源,对其结构和生物学功能的研究将对结核感染的血清学诊断和结核菌苗的开发具有重要意义。     

结核分枝杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫原性和治疗作用

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A DNA 疫苗的免疫原性和治疗作用.方法 40只BALB/c小鼠随机分为4组,分别用生理盐水、pVAX1载体、微卡菌苗、Ag85A DNA 疫苗免疫,每2周肌内注射1次,共3次.研究 Ag85A DNA 疫苗的免疫原性.用结核分枝杆菌H37Rv通过尾静脉注射40只BALB/c小鼠,分别用生理盐水、pVAX1载体、利福平、Ag 85A DNA 疫苗治疗.治疗结束后2周杀鼠,观察肺和脾病理改变,称取重量、做菌落计数,用ELISPOT方法检测小鼠分泌γ干扰素(IFN-γ)的T淋巴细胞斑点数.结果 与其他组比较,Ag 85A DNA疫苗能诱导产生大量Ag85A特异的分泌IFN-γ 的T淋巴细胞(S=11.832,P=0.0080).肺组织病理显示:生理盐水组肺组织病变严重、广泛;载体组比生理盐水组病变略轻,但病变仍较重、广泛;Ag 85A DNA 疫苗组肺组织病变减轻、局限,3/5区域肺泡结构完整,清晰;利福平组肺组织无病变.与生理盐水组比较,Ag85A DNA 疫苗组和利福平组肺脏菌落数分别减少0.73 log和2.11 log;肝脏菌落数分别减少0.88 log和2.11 log(P<0.01).结论 Ag85A DNA 疫苗对小鼠结核病具有较好的治疗效果.     

链霉素对结核分枝杆菌sRNA表达影响的研究

目的：研究链霉素对结核分枝杆菌非编码sRNA表达量的影响,探讨sRNA是否参与细菌与药物的相互作用。方法基于结核分枝杆菌标准菌株H37Rv的高通量测序结果,选出表达量估计值较高的4个sRNA作为研究对象,根据链霉素的最小抑菌浓度（MIC）对标准菌株H37Rv进行不同浓度和不同时间的链霉素诱导,提取各组菌液的总RNA,通过实时定量逆转录聚合酶链反应（ qRT－PCR）检测4种sRNA在各组中的表达量,比较不同抑菌浓度和不同时间的链霉素作用下sRNA的表达量差异。结果当链霉素浓度在1／2MIC时对结核分枝杆菌的生长产生明显抑制作用;在4种sRNA中,MTS2823表达量最高,F6表达量相对较低;MTS1338在4MIC浓度的链霉素处理18 h即出现表达上调;在4MIC浓度链霉素作用6 d后,MTS1338和mcr11表达量分别出现（4．80±1．14）倍和（2．91±0．86）倍上调,而MTS2823表达下调。在各组药物处理组中F6表达量的变化均不明显。结论链霉素对结核分枝杆菌sRNA的表达可产生促进或抑制作用,提示sRNA可对某些基因进行转录后调控,促进或拮抗链霉素对结核分枝杆菌的作用。     

检测耐利福平结核分枝杆菌寡核苷酸芯片的研制及应用

目的：探讨用寡核苷酸芯片检测结核分枝杆菌耐利福平株的rpoB基因突变的可行性。方法：制备了检测耐利福平结核分枝杆菌寡核苷酸芯片，并且通过优化引物比例和杂交温度以获得最佳结果。应用该寡核苷酸芯片检测6例结核分枝杆菌的rpoB基因突变，并与测序结果比较。结果：不同引物比例PCR产物经热变性后杂交，杂交结果无明显差异。杂交温度可以影响杂交结果的特异性和杂交信号的强度。引物比例1：1，杂交温度50℃为最佳条件。6例标本的芯片检测结果显示其中有1例野生型标本，5例突变标本：516位GAC→AAC，GTC，TAC，GAG，531位TCG→TTG。其结果与测序结果完全相符。结论：寡核苷酸芯片可以推广应用到临床作为耐药结核病快速诊断的一种有效方法。     

应用亲合层析结合液相色谱串联质谱法发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白

目的:应用刀豆素A(ConA)亲合层析结合液相色谱串联质谱法(HPLC-MS)发现结核分枝杆菌H37Rv的新的糖蛋白.方法:收集生长2周的结核菌培养液,经过滤浓缩得到培养滤液蛋白(culture filtrate protein, CFP).应用ConA亲合层析法纯化CFP中的糖蛋白,经SDS-PAGE电泳结合考马斯亮蓝染色后,对蛋白条带进行胰蛋白酶消化.应用HPLC-MS检测消化后的糖肽结构并与结核菌H37Rv蛋白质数据库进行比对,寻找新的糖蛋白.结果:CFP经ConA亲合层析纯化后的电泳结果显示有数条蛋白条带出现,经筛选相对分子质量26×103蛋白最可能为糖蛋白.酶切消化该蛋白得到的多肽在HPLC-MS上保留时间26.24 min处显示有多肽色谱峰,其对应的一级MS图提示该多肽总质量为1 467原子质量单位(AMU),二级MS图显示为多个质荷比(m/z)逐级减少为54(一个己糖的分子质量单位为162 AMU)的多肽,提示有己糖丢失.同时,MS分析肽链氨基酸序列并证实蛋白的糖基化存在.与结核菌H37Rv蛋白质数据库比对结果提示,结核菌分泌的26×103蛋白为一新的糖蛋白,即铜-锌超氧化物歧化酶.结论:应用ConA亲合层析结合HPLC-MS发现了一个新的结核分枝杆菌糖蛋白.