培土生金法对COPD大鼠肺组织线粒体功能影响的实验研究

目的:探讨培土生金法对COPD大鼠肺组织线粒体功能的影响。方法:选用Wistar雄性大鼠120只,随机分为6组:即COPD模型组、空白对照组、黄芪建中汤组(高、中、低剂量组)、金水宝胶囊组,气管内滴入LPS加烟熏制成COPD模型。COPD模型制备完毕后,各治疗组每天灌胃1次,共8周。实验结束后检测大鼠肺组织线粒体NADH氧化酶、细胞色素氧化酶(CCO)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性以及细胞色素(a、b、c、c1)含量。结果:与空白组相比,模型组NADH氧化酶、CCO、SDH活性、细胞色素含量明显下降(P<0.05);与模型组相比,各治疗组NADH氧化酶、CCO、SDH活性以及Cyta、Cytb、Cytc、Cytc1含量明显升高(P<0.05),其中以黄芪建中汤高剂量组升高最显著(P<0.05)。结论:培土生金法的治疗作用明显优于补益肺肾组,能明显提高COPD大鼠肺组织线粒体功能酶的活性,调节COPD能量代谢从而延缓COPD的进程。     

四君子汤对脾虚大鼠线粒体氧化损伤及能量代谢的影响

目的:研究四君子汤对脾虚模型大鼠骨骼肌线粒体氧化损伤及能量代谢的影响。方法:采用皮下注射利血平方法建立脾虚模型,观察四君子汤对脾虚大鼠线粒体氧化损伤及能量代谢的影响。灌胃给药3周结束后,检测尿D-木糖排泄率,提取骨骼肌线粒体,检测线粒体SOD、GSH-Px、Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性及MDA含量变化;制备肝脏、脾脏组织单细胞悬液,流式细胞仪检测大鼠肝、脾组织线粒体膜电位水平,观察四君子汤对上述指标的影响。结果:与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌线粒体SOD、GSH-Px活性降低(P0.05),MDA含量上升(P0.05),Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性显著降低(P0.01或P0.05);与脾虚组相比,四君子汤组大鼠骨骼肌线粒体SOD、GSH-Px、Na~+-K~+-ATPase、Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATPase活性升高,MDA含量降低,均有统计学意义(P0.05);脾虚组大鼠肝、脾组织线粒体膜电位水平显著低于正常组(P0.01);四君子汤组较脾虚组明显升高(P0.05),但仍明显低于正常组(P0.01或P0.05)。结论:脾虚模型大鼠体内存在脂质过氧化损伤,细胞能量代谢障碍;健脾益气中药可减轻线粒体氧化损伤,调节机体能量代谢。     

香砂六君子汤对脾气虚证浅表性胃炎大鼠线粒体能量代谢影响研究

目的:探讨香砂六君子汤对脾气虚证浅表性胃炎模型大鼠体内的琥珀酸脱氢酶活性与细胞色素氧化酶C含量的作用。方法:采用劳倦过度与饥饱失常加强酸刺激等复合因素塑造脾气虚证模型,在此基础上运用强酸刺激加感染幽门螺旋杆菌法复制大鼠脾虚浅表性胃炎模型,观察香砂六君子汤对脾气虚证浅表性胃炎大鼠胃窦组织琥珀酸脱氢酶活性和细胞色素氧化酶C含量的影响。结果:模型组大鼠胃窦细胞琥珀酸脱氢酶活性显著低于正常组和治疗组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组琥珀酸脱氢酶活性显著高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05); 正常组大鼠胃窦组织细胞色素氧化酶C含量明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组胃窦细胞色素氧化酶C含量高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),治疗组与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:香砂六君子汤治疗脾气虚证浅表性胃炎的效果确切,作用机制可能与其提高胃窦线粒体琥珀酸脱氢酶活性与细胞色素氧化酶C含量相关。     

长期脾虚模型大鼠细胞线粒体的研究

目的：研究长期脾虚模型大鼠肝、心肌、胃黏膜和骨骼肌细胞线粒体数量和结构的变化及健脾药物四君子汤的影响。方法：破气下气加饥饱失调（小承气汤隔日灌胃＋隔日喂食）制作大鼠脾虚模型。80只SD大鼠随机分成正常对照组，脾虚模型组，自然复健组，四君子汤治疗组4组。正常组予正常饮食；自然复健组：脾虚违模26周后，改为正常饮食；四君子汤治疗组：脾虚造模26周后，改为正常饮食，同时与四君子汤灌胃。第34周，断头处死大鼠后，迅速取出骨骼肌、肝脏、胃黏膜、心肌组织，检测各组织细胞线粒体含量，透射电镜观察线粒体形态。结果：脾虚组线粒体含量显著低于正常组，自然复健8周，线粒体含量与正常组无差异，四君子汤治疗8周，线粒体含量显著高于脾虚组，正常组和自然复健组。透射电镜下，脾虚大鼠心肌细胞线粒体高度肿胀，嵴突破坏及消失，心肌纤维结构不清；肝细胞线粒体致密质粒减少或消失。嵴断裂；骨骼肌细胞线粒体数量减少，线粒体变小，嵴部分或全部消失，基质透明，甚或溢出线粒体外，线粒体膜结构破坏；胃壁细胞线粒体减少，线粒体内部结构不清，脂肪滴浸润；胃主细胞粗面内质网池扩张及脱颗粒，胞浆游离核糖体增多。酶原颗粒数量减少，线粒体峭断裂。自然复健组改变较轻，四君子汤组与正常组接近。结论：长期脾虚模型大鼠细胞线粒体数量减少。线粒体结构损伤，健脾药物四君子汤具有提高细胞线粒体数量，修复线粒体损伤作用。     

四君子汤对脾虚大鼠骨骼肌SDH活性及PGC-1α基因和蛋白表达的影响

目的观察脾虚模型大鼠骨骼肌线粒体SDH活性、骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达变化及四君子汤对其影响,探讨脾虚证能量代谢障碍机制。方法采用皮下注射利血平(0.5mg·kg~(-1)·d~(-1))方法建立脾虚大鼠模型,造模成功后,将模型组大鼠分为四君子汤组和脾虚组,每组各7只,另设正常组7只。四君子汤给药组灌胃四君子汤10g·10ml~(-1)·kg~(-1),脾虚组和正常组灌胃等量的生理盐水,每日1次,持续3周,记录大鼠的一般状况,3周后检测大鼠尿D-木糖排泄率,提取骨骼肌线粒体,检测大鼠骨骼肌线粒体SDH活性、骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白的表达情况。结果与正常组相比,脾虚组大鼠骨骼肌线粒体SDH活性显著降低(P0.01);大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达显著降低(P0.01);与脾虚组相比,四君子汤组大鼠骨骼肌线粒体SDH活性升高(P0.05),大鼠骨骼肌PGC-1αmRNA及蛋白表达升高(P0.05)。结论脾虚模型大鼠骨骼肌线粒体存在功能损伤,呼吸链酶活性降低,导致线粒体氧化磷酸化下降,机体生物合成、能量代谢障碍;健脾益气中药可提高线粒体氧化磷酸化水平,改善能量代谢。     

长期脾虚模型大鼠细胞线粒体的研究

目的:研究长期脾虚模型大鼠肝、心肌、胃黏膜和骨骼肌细胞线粒体数量和结构的变化及健脾药物四君子汤的影响。方法:破气下气加饥饱失调(小承气汤隔日灌胃 隔日喂食)制作大鼠脾虚模型。80只SD大鼠随机分成正常对照组,脾虚模型组,自然复健组,四君子汤治疗组4组。正常组予正常饮食;自然复健组:脾虚造模26周后,改为正常饮食;四君子汤治疗组:脾虚造模26周后,改为正常饮食,同时与四君子汤灌胃。第34周,断头处死大鼠后,迅速取出骨骼肌、肝脏、胃黏膜、心肌组织,检测各组织细胞线粒体含量,透射电镜观察线粒体形态。结果:脾虚组线粒体含量显著低于正常组,自然复健8周,线粒体含量与正常组无差异,四君子汤治疗8周,线粒体含量显著高于脾虚组,正常组和自然复健组。透射电镜下,脾虚大鼠心肌细胞线粒体高度肿胀,嵴突破坏及消失,心肌纤维结构不清;肝细胞线粒体致密质粒减少或消失,嵴断裂;骨骼肌细胞线粒体数量减少,线粒体变小,嵴部分或全部消失,基质透明,甚或溢出线粒体外,线粒体膜结构破坏;胃壁细胞线粒体减少,线粒体内部结构不清,脂肪滴浸润;胃主细胞粗面内质网池扩张及脱颗粒,胞浆游离核糖体增多,酶原颗粒数量减少,线粒体峭断裂。自然复健组改变较轻,四君子汤组与正常组接近。结论:长期脾虚模型大鼠细胞线粒体数量减少,线粒体结构损伤,健脾药物四君子汤具有提高细胞线粒体数量,修复线粒体损伤作用。     

四君子汤抗脾虚动物胃肠细胞损伤的机理研究

对食醋致脾虚大鼠四君子汤具有升高胃肠中性粘液的趋势，能促进肠上皮细胞更新，提高胃肠细胞线粒体琥珀酸脱氢酶和细胞膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，降低血清ＬＰＯ含量，增强ＳＯＤ活性；对食醋致脾虚小鼠四君子汤能扩张肠系膜微动脉管径，增加毛细血管开放数，又能增加正常小鼠胃粘膜血流量；对食醋致脾虚家兔，四君子汤有升高血清胃泌素、血浆及胃液前列腺素Ｅ２的倾向。     

益气健脾法对脾虚证大鼠红细胞膜ATPase活性的影响

目的：观察益气健脾法代表方剂对实验性脾虚证大鼠模型红细胞膜腺苷三磷酸酶（ATPase）活性的影响。方法：取SD大鼠60只随机分为6组,即正常对照组、脾虚模型组、四君子汤组、当归补血汤组、黄芪四君子汤组、当归补血汤合四君子汤组,采用破气苦降加饥饱失常法复制脾虚证大鼠模型,用定磷法检测大鼠红细胞膜ATPase的活性。结果：益气健脾方药能显著升高脾虚证大鼠模型红细胞膜ATPase的活性。结论：从微观的角度验证了中医“脾主运化”的理论。     

健脾活血袪湿方对肝硬化腹水大鼠肝线粒体的影响

目的：观察健脾活血祛湿方对肝硬化腹水大鼠肝线粒体细胞色素C氧化酶活性、ATP含量、ATP酶活性表达的影响。方法：将健康SPF级雄性Wistar大鼠90只,随机分为空白组、模型组、健脾活血祛湿方高、中、低剂量组及秋水仙碱组,运用改良CCL4-酒精综合法造肝硬化腹水大鼠模型。提取肝线粒体进行细胞色素C氧化酶活性、ATP含量、ATP酶活性测定。结果：模型组肝线粒体细胞色素 C 氧化酶活性、ATP 含量、ATP 酶活性均明显低于空白组,与空白组相比有显著差异（P〈0.01）,袪经过干预后健脾活血湿方能升高肝线粒体细胞色素C氧化酶活性、ATP含量、ATP酶活性,其升高程度与中药使用剂量有关,袪其中健脾活血湿方低剂量组与模型组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;健脾活血袪湿方中剂量组及高剂量组与模型组相比具有显著差异（P〈0.01）;细胞色素C氧化酶活性检测中,秋水仙碱组与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;ATP含量、ATP酶活性检测中,秋水仙碱组与模型组比较差异无统计学意义（P〉0.05袪）。结论：健脾活血湿方能引起肝线粒体细胞色素 C 氧化酶活性、ATP含量、ATP酶活性的表达升高,缓解肝线粒体损伤,改善肝线粒体能量代谢作用,维持肝细胞功能。     

慢性浅表性胃炎不同证型大鼠琥珀酸脱氢酶活性与细胞色素C含量对比研究

目的探讨慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis,CSG)脾虚与湿热证模型大鼠胃组织琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)的活性及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的含量变化,从能量代谢的角度揭示CSG不同证候的实质。方法用水杨酸钠溶液灌胃法复制大鼠单纯CSG模型,在此基础上,用小承气汤泻下法及饥饱失常法复制脾虚CSG模型;用肥甘辛辣饮食法复制湿热CSG模型,5周后,检测大鼠胃组织琥珀酸脱氢酶活性及细胞色素C含量。结果 SDH的含量为:湿热CSG组最高,而脾虚CSG组最低。脾虚CSG组与湿热CSG组分别与其他组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);胞浆中Cyt-C含量造模组均高于正常组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),其中脾虚CSG组最高,湿热CSG组次之,两组之间比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论 CSG不同证型大鼠胃组织SDH活性及Cyt-C含量的差异,提示同一疾病不同证型之间能量代谢状态的不同,湿热证相对于脾虚证能量代谢较亢进。