无创基因检测在胎儿染色体非整倍体诊断中的应用

目的 评价无创基因检测在胎儿染色体非整倍体诊断中的临床应用价值.方法 选取253例高龄孕妇,在知情同意的原则下采集外周血血浆,对其血浆中胎儿游离DNA进行检测;并与实验孕妇的羊水染色体核型分析结果进行比对验证.结果 本试验对253例样本进行了孕妇血浆胎儿游离DNA检测,检出21-三体阳性病例3例,检出18-三体阳性病例1例,与染色体核型分析的结果一致.结论 无创基因检测可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,具有无创、灵敏度高、特异性强等优点,在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有临床实际应用的价值.     

孕妇外周血游离DNA深度测序在胎儿染色体非整倍体无创检测中的应用研究

目的:评估孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序在检测胎儿染色体非整倍体异常中的优势?方法:通过高通量测序技术检测1 000例妊娠13周以上孕妇的外周血中胎儿游离DNA,判断胎儿非整倍体异常,通过传统染色体核型分析及胎儿出生后的临床随访对检测结果进行验证?结果:1 000例标本中1例检测失败,其余999例中共检出18例异常,其中12例21三体,2例18三体,1例13三体,1例X单体,1例X三体,1例XXY?12例21三体阳性病例中,有1例为双胎妊娠,核型分析显示一胎正常,一胎为21三体;1例X三体经核型分析诊断为正常女性,其余检测结果均与染色体核型分析结果相符,对于21三体?18三体?13三体和性染色体非整倍体异常的总阳性检测率94.44%?所有检测结果为阴性者,均进行产后随访新生儿面容?体格发育等情况,未发现有21三体?18三体?13三体等常见染色体非整倍体异常征象,无假阴性病例?结论:孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序对于检测胎儿21三体?18三体和13三体准确度高,对性染色体非整倍体的检测,本技术检测指标有待进一步提高?     

血清学筛查联合胎儿非整倍体产前无创基因检测临床应用价值的研究

目的探讨孕期血清学筛查联合无创性产前胎儿染色体非整倍体基因检测的临床应用,提高染色体疾病的检出率,降低出生缺陷。方法孕期适时机会血清学筛查23039例。采用时间分辨免疫荧光法检测,血清学联合二联筛查早孕9-13＋6周,妊娠相关蛋白PAPP-A和游离β-HCG,中孕15-20＋6周三联筛查甲胎蛋白AFP、游离β-HCG、游离E3检测激素水平,应用Multicalc软件评估风险值,21-三体风险分割值1：270,≥1：270为高风险,1：270~1：500临界风险。18三体风险分割值1：350,≥1：350为高风险,1：350-1：800为临界风险值。结果筛查出高风险1546例,占6.71%,临界风险值3257例,占14.17%,无创产前诊断2842例占59.17%,介入性产前诊断550例占11.54%。产前诊断确诊胎儿染色体异常共27例,其中非整倍体19例,占0.39%,其他染色体异常8例,占0.16%,知情告知签字不落实产前诊断发生出生缺陷7例,调查表明临界风险选择无创样本例数占59.17%,羊水样本例数占11.54%,无创检测高风险数经羊水再次核型分析一致性达100%。结论血清学产前筛查联合无创产前胎儿非整倍体DNA检测可提高产前诊断效率,特别对临界风险值瓶颈线的突破起关键性作用,降低胎儿染色体非整倍体病率快捷、安全,较介入性产前诊断易于接受、推广,是今后发展的必然趋势。     

大规模平行测序无创基因检测用于胎儿染色体非整倍体异常产前诊断的临床价值

目的探讨大规模平行测序无创基因检测在胎儿染色体非整倍体异常产前诊断中的临床应用价值。方法选择预约做产前诊断的高危孕妇914例,按危险因素分为唐氏综合征筛查高危组563例,高龄妊娠组245例和其他原因组106例。抽取孕妇外周血,提取血浆DNA,制备测序文库,用高通量测序仪器检测,结果与人类的参考基因组比对;同时采集胎儿羊水,经细胞培养后行羊水细胞染色体核型分析。结果914例孕妇经大规模平行测序技术检出21-三体综合征高风险8例,18-三体综合征高风险3例,13-三体综合征高风险1例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征的阳性预测值均为100%,而假阳性率均为0。914例样本中,检出45,X高风险3例、47,XXX和47,XXY高风险各2例;与染色体核型分析相比,产前无创基因检测45,X的假阳性率为0.11%,阳性预测值为66.7%,47,XXY和47,XXX的假阳性率均为0.22%,阳性预测值均为50%。结论大规模平行测序技术对胎儿常染色体非整倍体疾病的诊断,具有极高的阳性预测值,但对胎儿性染色体非整倍体异常的阳性预测值较低;只能作为一种高级筛查性检测而不是确诊方法。     

多重连接探针扩增技术检测胎儿非整倍体异常

目的:探讨多重连接探针扩增技术(MLPA)在常见染色体非整倍体异常及其在产前诊断中的应用价值。方法:选择200份羊水标本,提取标本DNA,采用MLPA技术对样本染色体进行分析,并与传统染色体核型分析结果进行比较。结果:在200例样本中,除1例因羊水污染应用传统染色体核型分析失败外,其余检测结果与传统染色体核型分析方法的结果一致(21三体4例,18三体3例,13三体1例,X单体1例,X三体1例,其余190例正常)。结论:MLPA技术分析胎儿染色体非整倍体异常是一种简单、快速且有效的方法。     

应用母血中胎儿游离DNA进行无创产前诊断的研究进展

有创性产前诊断是诊断染色体病的金标准,但是不能广泛应用于所有孕妇;孕妇血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断提供了广阔前景,借助大规模并行基因组测序技术,建立起无创产前诊断染色体非整倍体的新方法。就胎儿游离DNA的来源、应用胎儿游离DNA进行非整倍体和基因产前诊断进行综述。     

无创DNA产前检测在筛查胎儿非整倍体染色体病的应用

近年来,随着社会模式和观念的改变,女性在社会上拥有事业的发展和经济独立的能力,因此,女性婚育年龄有上升的趋势,妇女生育年龄的上升除增加妊娠并发症的风险外,也提高了出生缺陷的风险,以21-三体综合征为例,怀有染色体异常胎儿的风险随孕妇年龄的增长而提高,数据显示,在20-24岁之间,患病率为1/1 400,-35岁为1/350,-40岁为1/100,-45岁或以上为1/25。     

122例胎儿肾盂扩张与染色体非整倍体的关联性分析

【目的】探讨胎儿肾盂扩张在染色体非整倍体产前诊断中的价值,为临床咨询提供指导。【方法】对入选的122例超声诊断为肾盂扩张且行产前介入性诊断(羊膜腔穿刺或脐静脉穿刺)的胎儿,回顾其染色体核型分析结果,了解妊娠结局。【结果】1)122例胎儿染色体核型中,87.7%(107/122)核型正常,4.9%(6/122)核型异常,7.4%(9/122)染色体核型多态性。2)Ⅰ组:孤立性肾盂扩张(67例);Ⅱ组:合并一个其他超声软指标(34例);Ⅲ组:合并两个或两个以上其他超声软指标(7例);Ⅳ组:合并胎儿结构畸形(14例)。4组中,染色体核型正常者分别为63例(94%)、28例(82.4%)、7例(100%)、9例(64.3%);染色体核型多态性分别为3例(4.5%)、6例(17.6%)、0例、0例;染色体核型异常分别为1例(1.5%)、0例、0例、5例(35.7%,唐氏综合征3例,其他异常2例)。3)成功随访胎儿107例,其中男孩87例,女孩20例,男:女=4.35∶1。11例终止妊娠,96例活产新生儿,早产4例,足月产92例,顺产35例,剖宫产61例,平均出生孕周为39.1周。10例新生儿出生后因肾积水无缓解或进行性加重行手术治疗。【结论】孤立性肾盂扩张不应直接作为产前诊断指征,但肾盂扩张合并其他超声软指标或者合并胎儿结构畸形,应建议行产前诊断,排除染色体非整倍体,胎儿生后应密切随访泌尿系统功能,绝大多数肾盂扩张胎儿预后良好。     

产前无创基因检测在胎儿性染色体非整倍体疾病筛查中的临床价值

目的：探讨产前无创基因检测（NIPT）在胎儿性染色体非整倍体疾病（SCAs）筛查中的应用价值。方法：选取2018年1月至2019年12月在温州市中心医院行NIPT普通三项或NIPT PLUS的单活胎孕妇27 116例为研究对象,其中NIPT普通三项有15 218例,NIPT PLUS有11 948例。利用高通量基因组测序平台及生物信息分析技术,对孕妇外周血中胎儿游离DNA进行深度测序,获取胎儿染色体信息。对检测结果高风险者进行遗传咨询,知情同意后行羊膜腔穿刺及羊水染色体核型分析。结果：NIPT普通三项共检测出SCAs 125例,阳性率为0.82%(125/15 218),70例经羊水产前诊断证实阳性17例,阳性预测值24.29%(17/70)。NIPT PLUS共检测出SCAs 97例,阳性率为0.81%(97/11 948),70例经羊水产前诊断证实阳性29例,阳性预测值41.43%(29/70)。结论：NIPT可作为胎儿SCAs的筛查方法,具有较高的临床应用价值。与NIPT普通三项相比,NIPT PLUS显著提高胎儿SCAs的检测效能。对于NIPT或NIPT PLUS结果高风险者必...     

Application of Fetal DNA in Maternal Plasma in Noninvasive Prenatal Diagnosis

To explore the application of fetal DNA in maternal plasma for noninvasive prenatal diagnosis, the DNA template was extracted by hydroxybenzene-chloroform from 44 maternal (7-41 weeks) plasma. The Fetus-derived Y sequence DYZ-1 gene (149bp) was chosen to be amplified by PCR. The fragment was identified in all the plasma of male bearing pregnant women with the diagnostic accordance rate being 100.00 %. Two of the 22 female bearing pregnant women had false positive results. Among the 44 pregnant women, the diagnostic accordance rate was 88. 89 % at early pregnant stage, 100.00% at medium pregnant stage, and 96.55 % at late stage respectively.The final accuracy of 95.45% was obtained in all cases. It was concluded that by means of hydroxybenzene-chloroform extraction the authors of this article promoted the concentration and purity of the DNA template, and diagnosed more accurately. The results showed that free fetal DNA in the maternal plasma could be regarded as the gene resource for noninvasive prenatal diagnosis.     

胎儿非整倍体产前诊断的研究进展

产前诊断(prenatal diagnosis)是指在出生前对胚胎或胎儿的发育状态、是否患有疾病等方面进行检测诊断。通过遗传咨询,应用现代分子生物学技术,结合免疫遗传学、细胞遗传学、分子遗传学等学科,通过母体检查或对胚胎(胎儿)直接检测,了解胎儿在子宫内的生长发育状况,诊断胎儿是否有遗传缺陷及先天畸形。本文就各种产前诊断方法、最新技术、存在的不足与困难及发展前景综述如下。     

高通量基因测序对血清学筛查临界风险孕妇的应用价值

目的：探讨对于血清学筛查临界风险的孕妇应用高通量基因测序价值。方法选择2012年5月至2015年5月在常州市妇幼保健院产前诊断中心就诊的1066例血清学筛查临界风险的孕妇,在知情同意的原则下抽取孕妇外周血,提取血浆中胎儿游离DNA ,制备文库,采用Illumina NextSeq500测序平台对其进行测序分析,对测序提示的染色体异常患者行羊膜腔穿刺,羊水细胞培养后染色体G显带核型分析。结果1066例样本中,高通量基因测序提示15例染色体非整倍体异常,经知情同意,13例孕妇自愿接受羊水产前诊断,其中7例羊水G带核型结果与测序结果一致,包括4例21三体,1例18三体,1例47,XXX ,1例47,XXY ,其余6例G带核型正常。结论高通量基因测序可作为血清学筛查临界风险孕妇的有效补充检测手段。     

母体血浆游离DNA分子浓度和片段完整性分析

目的应用荧光定量PCR技术研究母体血浆游离DNA分子的浓度和片段的完整性的分子生物学特性。方法提取本院2011年8月42例门诊16～20周妊娠女性和40例进行体检的非妊娠女性的血浆游离DNA,靶基因为lep-tin基因和SRY基因,用荧光定量PCR技术分别对其不同片段进行特异性扩增。leptin基因的扩增片段长度为80、202 bp,SRY基因为83、206 bp,观察其片段完整性和DNA浓度的变化。结果妊娠组和对照组leptin基因80 bp片段长度的DNA浓度平均值分别为681、439拷贝/ml(P<0.01);在片段长度为202 bp的DNA浓度平均值分别为157、91拷贝/ml,中位数为134、85拷贝/ml,表明均有显著性差异(P<0.01)。妊娠组胎儿SRY基因83 bp和206 bp的DNA浓度的平均值为94(38～369)拷贝/ml、80(71～88)拷贝/ml,与妊娠组leptin基因比较,有显著性差异。结论妊娠女性血浆DNA分子浓度明显高于非妊娠正常女性和胎儿游离DNA分子浓度。     

荧光定量PCR法从母体血浆检测胎儿RhCcE血型

目的 建立荧光定量PCR(FQ-PCR)法从母体血浆中检测胎儿RhCcE血型,用于胎儿和新生儿溶血病的产前诊断.方法 采集孕期8～20周的妇女血浆,采用QIAamp DNA Mini方法从母体外周血中提取游离胎儿DNA,用FQ-PCR法检测胎儿DNA的RhCcE基因型,预测胎儿血型.与胎儿脐带血标本检测的结果进行比较,...