microRNA沉默SMYD3基因对乳腺癌细胞Wnt/β-Catenin通路及c-Myc基因影响的研究

目的 研究沉默SMYD3基因后,乳腺癌细胞MDA-MB-231中Wnt/β-catenin通路和c-Myc基因的变化,探讨其可能机制.方法 构建携带绿色荧光蛋白基因的SMYD3-microRNA真核表达质粒载体,脂质体法稳定转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测SMYD3、Wnt10b、β-catenin、c-Myc mRNA的表达.结果 流式细胞检测转染效率达到95％以上,实验组SMYD3、Wnt10b、c-Myc mRNA水平低于空白对照组(P＜0.05),β-catenin水平高于空白对照组(P＜0.05);阴性对照组与空白对照组相比无明显变化.结论 沉默SMYD3基因可直接或通过Wnt/β-catenin通路下调c-Myc基因的表达,从而减弱肿瘤细胞的生长及侵袭转移能力,为乳腺癌的临床治疗提供了新的基因靶点.     

RNAi沉默IBP基因表达对乳腺癌细胞的抑制作用

目的 构建IRF-4结合蛋白(IBP)基因RNA干扰 (RNAi) 的真核表达载体,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞内IBP基因表达及细胞增殖和侵袭力的影响.方法 以IBP为靶基因,以pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR质粒为载体,设计构建4对重组体,并进行DNA测序鉴定.重组载体转染MDA-MB-231细胞后,选择转染效果最好的1对重组体建立稳定转染的细胞株,经RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对IBP mRNA和蛋白表达的抑制效果;MTT法检测对各组细胞生长的影响;细胞体外侵袭实验测定对侵袭力的影响.结果 重组体测序结果与目的序列完全一致;重组体转染MDA-MB-231细胞后IBP的mRNA和蛋白表达降低约70%;IBP表达下调后乳腺癌细胞增殖减缓(P<0.05);同时体外侵袭实验显示转染后乳腺癌发生迁移细胞数明显低于未转染组和空质粒对照组[分别为(25±7)、(67±6)、(68±5),P<0.05].结论 下调IBP能有效降低乳腺癌细胞的增殖和侵袭力.     

miR-630对三阴性乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制研究

目的 研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭.方法 收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因.结果 相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P＜0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P＜0.05).在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630 mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P＜0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P＜0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P＜0.01).结论 在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭.     

UBE2T-siRNA对乳腺癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的 探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.方法 体外培养人乳腺正常细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7、MDA-M B-468、HCC1937,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各细胞系中UBE2T mRNA的表达水平.将乳腺癌MDA-MB-231细胞系进行UBE2T-siRNA转染,并分为对照组、阴性转染组、UBE2T-siRNA组.qRT-PCR检测各组细胞中UBE2T mR-NA的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率.流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况.Transwell检测各组细胞侵袭情况.Western blot检测各组细胞蛋白细胞周期素D1 (CyclinD1)、β-cate-nin、神经型钙黏蛋白(N-cad)、上皮型钙黏蛋白(E-cad)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的表达.结果 与MCF-10A比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MB-231细胞中UBE2T mRNA表达均升高,其中MDA-MB-231细胞升高最明显.与对照组和阴性转染组比较,UBE2T-siRNA组细胞UBE2T mRNA的表达明显降低(P＜0.05);细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、G2/M期细胞百分比明显升高,G0/G1期细胞百分比、细胞侵袭数目明显降低(P＜0.05);细胞蛋白CyclinD1、β-catenin、N-cad表达明显降低,E-cad、caspase-9的表达明显升高(P＜0.05).结论 沉默UBE2T能够促进乳腺癌细胞的凋亡,抑制其增殖和侵袭,UBE2T可能是乳腺癌治疗的潜在研究靶点.     

下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响

目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照。通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05)。结论应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路。     

CacyBP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 观察干扰小RNA(siRNA)介导的Cacy BP/SIP基因沉默对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法 化学合成Cacy BP/SIP基因序列特异性siRNA(Cacy BP/SIP siRNA),采用脂质体法转染siRNA至MDA-MB-231细胞(Cacy BP/SIP siRNA组),MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率。Realtime PCR和Western blotting检测MDA-MB-231细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达。另设阴性对照组和空白对照组。结果 与阴性对照组和空白对照组比较,Cacy BP/SIP siRNA组MDA-MB-231细胞增殖能力显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。Caspase-3和Bax mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论 靶向沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞中Cacy BP/SIP基因表达后,可以抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡,其作用可能通过下调Bcl-2表达,上调Caspase-3和Bax表达发挥诱导细胞凋亡的作用。     

抑制NBS1表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的 探讨siRNA抑制NBS1基因表达对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。方法通过构建NBS1干扰质粒和阴性空载质粒,并通过腺病毒载体感染MDA-MB-231细胞,Western印迹法明确NBS1基因受干扰情况;CCK-8法检测转染质粒后对MDA-MB-231细胞体外增殖能力的影响;流式细胞法检测感染后实验组和阴性对照组MDA-MB-231细胞的凋亡情况。结果 Western印迹法检测结果表明实验组NBS1蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);CCK-8实验结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞增殖能力受到抑制(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,实验组较阴性对照组凋亡率上升(P<0.05)。结论抑制NBS1基因的表达可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,并促进癌细胞的凋亡。     

RSRC2影响三阴性乳腺癌细胞增殖迁移及侵袭的初步研究

目的:探究富含精氨酸/丝氨酸卷曲螺旋2（RSRC2）对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:将RSRC2过表达、降表达和空载体质粒通过慢病毒包装转染至三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中,通过Western blot检测转染效果,通过Transwell 迁移实验、侵袭实验、划痕实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的影响,通过平板克隆形成实验检测RSRC2对MDA-MB-231细胞增殖能力的影响。结果:Western blot结果显示RSRC2过表达和降表达质粒成功转染至MDA-MB-231细胞中,Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕实验、平板克隆实验显示,RSRC2过表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力减弱,RSRC2降表达的MDA-MB-231细胞其迁移、侵袭及增殖能力增强（均P<0.05）。结论:RSRC2在三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭过程中起着重要的负调控作用。     

FoxM1通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌细胞5-8F增殖、迁移的影响

目的 探讨FoxM1对鼻咽癌细胞5-8F恶性生物学行为的影响及其可能机制.方法 将化学合成的靶向FoxM1的siRNA转染鼻咽癌细胞5-8F(FoxM1-siRNA组),并设立空白对照组、阴性对照组,采用RT-PCR及Western blot检测FoxM1表达变化.采用MTT法、FCM法、Transwell法分别检测下调FoxM1表达对细胞增殖、周期、凋亡、迁移的影响.Western blot检测下调FoxM1表达后β-catenin、C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 转染FoxM1-siRNA的5-8F细胞FoxM1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.05).下调FoxM1表达可抑制5-8F细胞增殖(P＜0.05),FoxM1-siRNA组的凋亡率为(22.68±0.67)％,较阴性对照组[(1 1.74±1.36)％]和空白对照组[(10.94±1.52)％]显著增加(P＜0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期.FoxM1-siRNA组细胞穿膜数(100.00±10.97)明显低于阴性对照组(246.00±6.66)和空白对照组(233.70±12.41),细胞迁移能力降低(P＜0.05).下调FoxM1的表达可抑制β-catenin细胞核表达,抑制C-Myc、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9总蛋白表达(P＜0.001).结论 FoxM1表达下调抑制鼻咽癌细胞5-8F的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力,使细胞周期阻滞于G0/G1期.其机制可能是通过抑制Wnt通路关键蛋白β-catenin细胞核表达从而抑制Wnt 通路活性实现的.     

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的作用研究

目的:研究骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein9,BMP9)对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及凋亡的影响.方法:半定量RT-PCR法检测高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231和低转移性乳腺癌细胞MCF-7中BMP9的表达,用人BMP9重组腺病毒(AdBMP9)感染MDA-MB-231细胞作为实验组,含GFP的空载腺病毒(AdGFP)感染MDA-MB-231细胞作为对照组,MIT法观察细胞增殖的变化,流式细胞仪分析周期及凋亡的变化.结果:半定量RT-PCR显示,乳腺癌细胞MDA-MB-231中未检测到BMP9mRNA的表达;MTT结果显示,AdBMP9处理可引起MDA-MB-231细胞增殖抑制,第5 dMDA-MB-231/BMP9组的细胞增殖率(0.8860±0.0532)显著低于MDA-MB-231/GFP组(1.2240±0.1031)(P＜0.05);流式细胞仪分析结果显示,腺病毒感染后第2d和第3d,MDA-MB-231/BMP9组细胞周期各相发生变化,G2/M期细胞明显增加,分别为MDA-MB-231/GFP组的3.2倍和2.4倍(P＜0.05);同时BMP9可诱发细胞凋亡,腺病毒感染后第3dMDA-MB-231/BMP9组细胞凋亡百分率(31.55%±8.26%)明显高于MDA-MB-231/GFP组(3.80%±0.46%)(P＜0.05).结论:提示BMP9可通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖.     

RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bmi-1基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖和侵袭能力的影响。方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建针对Bmi-1基因shRNA序列的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1,转染AGS细胞,采用Western blot检测重组质粒对Bmi-1蛋白表达的影响,MTT法检测重组质粒对AGS细胞体外生长的抑制作用,PI单染法流式细胞术检测转染重组质粒后细胞凋亡与细胞周期的变化,小室侵袭实验检测AGS细胞侵袭能力变化。结果:成功构建了vshRNA-Bmi-1重组质粒,并成功转染AGS细胞抑制Bmi-1蛋白的表达。转染重组质粒后,AGS细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡增加,S期比例上升,细胞侵袭能力弱于非特异性转染组。结论:vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1蛋白在AGS胃癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭,促进其凋亡。     

RNA干扰YAP基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的 探讨RNA干扰YAP基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法 使用阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的siRNA序列转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,采用qRT-PCR和Western印迹法分别检测转染后MDA-MB-231细胞中YAP基因及蛋白的表达水平,噻唑蓝(MTT)实验和细胞平板克隆实验检测转染前后细胞增殖的变化,Transwell小室和划痕实验观察转染对细胞侵袭及迁移的影响,流式细胞术评价转染后细胞周期及凋亡的变化情况。结果 转染siRNA后,YAP RNA和蛋白的表达量相对于空白对照及阴性对照组均明显下降(P<0.01)。MTT实验及细胞平板克隆实验显示,siRNA干扰YAP表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖活性;Transwell小室及划痕试验显示,siRNA干扰YAP的表达可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力;细胞周期实验显示,沉默YAP后,细胞周期出现G₀/G₁期阻滞,细胞凋亡检测证实沉默YAP后细胞凋亡率并未出现明显上升。结论 抑制YAP在乳腺癌细胞的表达可有效降低细胞的增殖、迁移和侵袭能力,改变细胞周期分布,但对细胞凋亡无明显影响。     

沉默BECN1对人三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231中beclin 1(BECN1)基因后其生物学特性的变化.方法:设计3组沉默BECN1基因的慢病毒(干扰组1、干扰组2和干扰组3)以及阴性对照慢病毒(NC组)分别转染MDA-MB-231维胞,空白组不做处理.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BECN1 mRNA表达,蛋白免疫印迹(WB)实验检测各组细胞BECN1蛋白与自噬标志蛋白LC3B的表达,筛选出抑制率最高的一组用于后续实验.细胞计数试剂8(CCK-8)检测各组细胞的增殖情况、Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力、流式细胞术检测各组细胞凋亡率与周期分布情况.结果:慢病毒感染细胞后,干扰组2中BECN1的信使核糖核酸(mRNA)与蛋白的表达量最低(P＜0.05),WB结果显示干扰组2的LC3B蛋白中LC3-Ⅱ/LC31-Ⅰ的比值明显低于空白组和NC组(均P＜0.05),选取干扰组2用于后续实验.沉默BECN1基因后细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P＜0.05);流式细胞术结果显示干扰组2、NC组与空白组的凋亡率没有明显差异;相比于空白组与NC组,干扰组2处于G0/G1期的比例升高(P＜0.05).结论:BECN1基因沉默可以降低细胞的自噬水平,抑制TNBC MDA-MB-231细胞增殖、迁移与侵袭能力.     

干扰性小核糖核酸靶向抑制趋化因子受体4基因表达对鼻咽癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨干扰性小核糖核酸(siRNA)靶向抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法收集新乡医学院第一附属医院2014年1月至2016年12月保存的鼻咽癌及相应的癌旁组织标本各42例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达。将人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白对照组(细胞未做任何处理)、阴性对照组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4转染组(细胞转染CXCR4的靶向siRNA序列),转染48 h后采用Western blot法检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;应用细胞计数试剂盒和Transwell小室分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4 mRNA表达分别为5.526±0.143、0.953±0.091,蛋白表达分别为0.522±0.047、0.053±0.011,鼻咽癌组织中CXCR4 mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.05)。CXCR4转染组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),但空白对照组和阴性对照组细胞中CXCR4、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达及细胞存活率、细胞侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞中CXCR4基因表达可显著降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

转染INPP4B基因对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的 检测转染聚磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ(INPP4B)基因对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响。方法 采用反转录PCR法、Western blotting印迹法检测INPP4B在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达;通过慢病毒转染,使MDA-MB-231细胞表达INPP4B;实时定量PCR法检测转病毒后MDA-MB-231细胞INPP4B mRNA的相对表达量;Western blotting印迹法检测转病毒后MDA-MB-231细胞磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B (p-AKT)以及INPP4B的蛋白表达。CCK-8法、流式细胞术分别检测转病毒后MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及周期分布。结果 INPP4B在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中低表达;慢病毒转染使MDA-MB-231细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达均上调,p-AKT蛋白的表达降低;转病毒后MDA-MB-231细胞增殖受到明显抑制,并阻滞于G0/G1期。结论 INPP4B基因能明显抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖,并可通过影响PI3K/AKT信号通路发挥抗肿瘤作用。     

小干扰RNA干扰β连环素表达对肺腺癌A549细胞Wnt信号通路的作用

目的 研究小干扰RNA(siRNA)干扰β连环素(β-catenin)表达对肺腺癌A549细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将A549细胞分为转染β-catenin干扰质粒PGCsil-CTNNB1-siRNA组(干扰质粒组)、转染阴性对照质粒PGCsil-NC-siRNA组(阴性对照组)和未转染质粒组(空白对照组),对各组细胞用实时PCR法检测β-catenin及Wnt/[β-catenin信号通路靶基因细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA的表达,以噻唑蓝法检测细胞增殖能力,流式细胞术进行细胞周期分析,克隆形成试验检测克隆形成率,Millicell小室试验检测细胞迁徙能力.结果 干扰质粒组细胞β-catenin mRNA 和cyclin D1 mRNA表达均明显低于阴性对照组(0.002 ±0.001比0.023±0.002,P<0.01;0.005±0.002比0.040±0.020,P<0.05)和空白对照组(β-catenin mRNA:0.021±0.003,P<0.01;cyclin D1 mRNA:0.042±0.004,P<0.05);第5～7天细胞增殖能力明显弱于阴性对照组和空白对照组(P<0.05,P<0.01),细胞倍增时间(58.1 h)明显长于阴性对照组(37.9 h,P<0.05)和空白对照组(34.2 h,P<0.05);GO～G1期细胞(86.4%±2.6%)明显多于阴性对照组(73.8%±0.9%,P<0.01)和空白对照组(75.8%±1.5%,P<0.01);细胞克隆形成率(31.6%±7.7%)明显低于阴性对照组(46.9%±7.3%,P<0.05)和空白对照组(44.2%±2.5%,P<0.05),穿过Millicell小室底膜的细胞数(16.0±3.8)明显低于阴性对照组(32.7±3.1,P<0.01)和空白对照组(33.0±2.7,P<0.01).结论 用siRNA干扰β-catenin的表达可抑制肺腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路,降低细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁徙能力.Wnt/β-catenin信号通路可能成为肺癌分子靶向治疗的新靶点.     

SOX15基因对Caco2结肠癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响

目的 检测SOX15在结肠癌细胞株中表达水平以及对细胞增殖、凋亡、迁移侵袭的影响.方法 应用RT-PCR检测SOX15在Cac02、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞以及正常结肠组织中的表达水平.通过脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒pEGFP-N1-SOX15及空质粒pEGFP-N1转染进Caco2细胞,应用RT-PCR及Western blot分别检测SOX15在Caco2细胞中的mRNA以及蛋白表达水平;CCK-8检测SOX15对Caco2细胞活力的影响,克隆形成实验观察细胞增殖变化,Transwell检测SOX15对细胞迁移及侵袭能力的调控,流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 SOX15在Caco2、SW480、HT29、HCT116结肠癌细胞中mRNA及蛋白质表达明显低于其在正常组织中的表达水平(P ＜0.01).pEGFP-N1-SOX15转染组细胞mRNA(1.23 ±0.10)和蛋白(1.13±0.08)表达显著高于pEGFP-N1对照组[(0.54±0.06)、(0.19±0.03),P＜0.01]及空白对照组[(0.51±0.03)、(0.14±0.02),P＜0.01];与空白对照组及pEGFP-N1对照组相比,pEGFP-N1-SOX15转染组可明显抑制细胞增殖及迁移侵袭能力(P＜0.01),并诱导细胞发生凋亡(P＜0.01).结论 SOX15在结肠癌细胞中低表达,过表达SOX15可明显抑制结肠癌细胞Caco2的增殖及迁移、侵袭能力,并促进细胞凋亡.     

miR-301a对三阴性乳腺癌细胞侵袭与增殖的调控作用

目的 探讨microRNA-301a(miR-301a)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞的侵袭、增殖的调控作用及潜在的作用机制.方法 应用real-time PCR检测miR-301a在MDA-MB-231细胞与MCF-10A细胞中的表达;转染MDA-MB-231,按转染质粒分为Mimics miR-301a组、Mimi...     

肌细胞增强因子2A基因真核表达质粒的构建及对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响

目的：构建肌细胞增强因子2A（MEF2A）基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞增殖能力的影响。方法：实时定量聚合酶链反应（RT-QPCR）检测MCF-7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中MEF2A mRNA的表达。采用全基因合成法合成MEF2A编码区序列,克隆入pcDNA3.1（＋）-HA载体,构建重组质粒pcDNA3.1-MEF2A-HA。重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot及RT-QPCR检测MEF2A的表达效率。细胞计数实验检测细胞的增殖能力。结果：3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中MEF2A mRNA表达水平较低;其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明MEF2A重组质粒构建成功。将MEF2A重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,MEF2A表达质粒组与对照组比较,其MEF2A表达升高,细胞增殖能力增强。结论：成功构建MEF2A过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达MEF2A促进细胞的增殖能力。     

转染 PDCD5质粒促进顺铂诱导 A549细胞凋亡作用的研究

目的：观察程序化死亡因子5（PDCD5）基因联合顺铂诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,探索其可能机制。方法利用脂质体瞬时转染PDCD5重组质粒入 A549细胞,RT-PCR检测其转染效率。Western blot检测转染后 PDCD5、Bcl-2和Survivin蛋白表达情况。M T T法及流式细胞仪检测PDCD5单药和联合顺铂后的细胞凋亡情况。结果 PDCD5重组质粒成功转染入A549细胞,Western bolt结果显示转染重组质粒组中PDCD5蛋白表达高于空白对照组及转染空质粒组,Bcl-2和Survivin蛋白则低于空白对照组及转染空质粒组,差异有统计学意义（P＜0．05）。MTT及流式细胞仪检测显示转染重组质粒组较空白对照组及转染空质粒组细胞凋亡率高（ P＜0．05）。结论 PDCD5基因可以促进顺铂诱导的A549细胞凋亡。