重症急性胰腺炎小鼠IL-37的动态变化及其意义研究

[目的]探讨IL-37在重症急性胰腺炎小鼠模型中的动态变化及意义。[方法]采用牛磺胆酸钠注射诱导小鼠重症急性胰腺炎,再用乌司他丁（UTI）给予治疗,分别于6h、12h、24h时处死小鼠,留取血清和胰腺组织。ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-37表达水平,利用Western blot和Real-Time PCR方法检测小鼠胰腺组织IL-37蛋白及IL-37 mRNA表达水平。[结果]重症急性胰腺炎组（SAP组）小鼠血清细胞因子TNF-α和IL-6水平均随着时间延长而显著增加（P〈0.01）;TGF-β1和IL-37的表达水平在12h后明显降低（P〈0.01）。胰腺组织中IL-37蛋白及IL-37 mRNA表达也在12h后显著降低（P〈0.01）。而经UTI治疗后,小鼠血清TNF-α和IL-6水平均随时间延长而降低,而TGF-β1和IL-37的表达水平则随时间延长而增高,并且胰腺组织中IL-37蛋白和IL-37 mRNA的表达水平也相应增高（P〈0.01）。[结论]SAP小鼠中IL-37可能作为抑炎性细胞因子参与机体的病理变化。     

比阿培南在治疗支气管扩张铜绿假单胞菌感染中的应用

目的 探讨比阿培南在治疗支气管扩张铜绿假单胞菌感染时的疗效.方法 回顾性分析过去5年经比阿培南治疗的支气管扩张（154例）患者治疗前后症状、ESR、CRP、外周血WBC、中性粒细胞百分比和体温的变化.按病原体分为A组（痰培养为铜绿假单胞菌,亚胺培南敏感）73例、B组（痰培养为铜绿假单胞菌,亚胺培南耐药）19例、C组（痰培养为阴性）62例.结果 3组患者治疗后咳嗽总评分（6.8±2.7）分、症状总评分（8.1±3.4）分、ESR（27.5±20.7）mm/1 h、CRP（6.6±8.8） mg/L、中性粒细胞百分比（63.0±11.4）％均低于治疗前[分别为（14.7±3.6）分、（19.8±4.7）分、（53.8±32.0） mm/1 h、（32.1±40.2）mg/L、（68.1±12.4）％],均P＜0.01.A、B组患者治疗前咳嗽总评分分别为（15.2±3.2）和（16.1±3.6）分、ESR分别为（58.0±30.3）和（66.7±33.0）mm/1 h,高于C组的（13.8±3.8）分和（44.9 ±31.9）mm/1 h,均P＜0.05.B组患者治疗后CRP[（12.7±13.5）mg/L]高于A组[（6.0±7.8）mg/L]和C组[（5.5±7.4） mg/L,均P＜0.05].3组患者治疗3d后、治疗结束时体温[（36.85 ±0.35）和（36.79±0.37）℃]均较治疗前降低（均P＜0.05）.结论 咳嗽、咳痰症状、ESR可以作为评估支气管扩张铜绿假单胞菌感染严重程度的指标;使用比阿培南单用治疗支气管扩张合并铜绿假单胞菌感染具有显著的疗效,可以作为治疗支气管扩张铜绿假单胞菌感染的药物.     

铜绿假单胞菌肺部感染对小鼠 Toll 样受体 2、4 的影响

目的探讨Toll样受体（TLR）2、4mRNA在铜绿假单胞菌慢性感染小鼠肺内的动态改变及其作用。方法56只雄性Balb／c小鼠随机气道接种含有铜绿假单胞菌（PA）琼脂糖珠（感染组,34只）和无菌琼脂糖珠（对照组,22只）。于第1、3、5、7、10天处死小鼠,取肺组织细菌培养,行肺组织病理观察,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）中自介素（IL）-6和IL-17的含量,采用Real—timePCR检测TLR2mRNA及TLR4mRNA表达。结果感染组在接种后第3天IL-6和IL-17水平均达高峰,分别为（154．83±12．51）ng／L和（601．05±25．53）ng／L,均显著高于对照组（40．05±2．98）ng／L和（213．75±9．25）ng／L,差异有统计学意义（P〈0．05）,且两者在接种后第10天仍处于高水平。感染组中TLR4mRNA的相对表达量第7天达高峰（4．09±0．25）,与对照组第7天（0．97±0．05）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;而TLR2mRNA在感染组和对照组各时间相比变化均不明显（P〉0．05）。结论TLR4与小鼠肺部慢性感染PA的发生发展密切相关,其机制可能与TLR4在肺的免疫损伤中起到重要作用有关。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

基于SIRT1/ROR-γt通路探讨白藜芦醇对铜绿假单胞菌诱导的免疫抑制肺炎小鼠的治疗作用

目的 基于沉默信息调节蛋白1（SIRT1）/核孤儿受体-γt（ROR-γt）通路探讨白藜芦醇对铜绿假单胞菌肺炎免疫抑制小鼠的治疗作用。方法 将小鼠随机分成空白组、铜绿假单胞菌肺炎（PA）组、免疫抑制组、免疫抑制＋PA组及免疫抑制＋PA＋白藜芦醇组,每组18只。各组小鼠于造模成功后的4、8、24h处死,苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肺组织病理变化,进行肺组织病理学评分,酶联免疫吸附（ELISA）法检测外周血中IL-17表达水平,实时荧光定量PCR技术检测肺组织SIRT1、ROR-γt mRNA表达,蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测肺组织SIRT1、ROR-γt蛋白水平。结果 与空白组相比,PA组、免疫抑制组和免疫抑制＋PA组肺泡结构严重破坏,肺泡内可见大量中性粒细胞和炎性细胞浸润,小鼠肺组织病理学评分、IL-17的含量、ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P＜0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与免疫抑制＋PA组相比,免疫抑制＋PA＋白藜芦醇组小鼠肺组织的病理症状减轻,炎性细胞浸润减少,小鼠肺组织病理学评分、IL-17的含量、ROR-γt mRNA和蛋白表达水平均显著降低（均P＜0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平显著升高（均P＜0.05）。结论 白藜芦醇可能通过上调SIRT1表达,下调ROR-γt表达,抑制炎症反应,从而减轻铜绿假单胞菌诱导的免疫抑制肺炎小鼠的肺组织损伤。     

鞘内注射丹参酮ⅡA对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓水平炎症因子的影响

目的探讨鞘内注射丹参酮ⅡA对骨癌痛小鼠热痛觉过敏及脊髓水平白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-理（TNF-仅）表达的影响。方法C3H／HeNCrlVr雄性小鼠84只,应用随机数字表法分为：（1）丹参酮IIA10μg组;（2）丹参酮IIA20μg组;（3）丹参酮IIA40μg组;（4）正常组;（5）DMSO＋Sham组;（6）丹参酮IIA＋Sham组;（7）DMSO＋Tumor组。用热辐射刺激仪测定缩足潜伏期（PWTL）。应用Real．timePCR技术检测mRNA表达。结果各组小鼠基础PⅥ吼差异无统计学意义（P〉0．05）。术后14d,与正常组相比,假手术组PwTL差异无统计学意义（P〉0．05）,而骨癌痛组PWTL明显降低（P〈0．05）。术后21d,和正常组相比,丹参酮IIA＋Sham组、DMSO＋Sham组PwTL和脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达差异均无统计学意义（P〉0．05）;DMSO＋Tumor组PWTL[（6．19±1．26）s]明显低于正常组[（16．01±1．59）s]（P〈0．05）,脊髓IL—1β、IL-6、TNF—α表达则高于正常组;丹参酮IIA20μg组[（9．83±1．26）s]、丹参酮IIA40μg组[（10．29±2．95）s]PWTL高于DMSO＋Tumor组,脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达则低于DMSO＋Tumor组（P〈0．05）;丹参酮IIA10μg组PwTL[（6．67±0．96）S]、脊髓IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平与DMSO＋Tumor组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论鞘内注射丹参酮ⅡA具有剂量依赖性抗癌痛作用,抑制脊髓水平表达释放炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α可能是其机制之一。     

RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α的影响

[目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图像TNF-α/β-actin灰度值比可以看出干扰组TNF-αmRNA的水平0.18±0.03较阳性对照组0.91±0.05及阴性对照组0.85±0.10明显降低（P〈0.05）。干扰组TNF-α分泌量（21.87±1.20）pg/mL较阳性对照组（28.02±1.03）pg/mL及阴性对照组（27.64±1.92）pg/mL均明显降低（P〈0.05）。[结论]RNA干扰可以有效地抑制原代培养小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA水平及其蛋白分泌。     

肿瘤坏死因子-α在铜绿假单胞菌肺炎中的变化及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在铜绿假单胞菌肺部感染发病中的作用。方法：90只小鼠随机分成对照组、模型组与抗体组,每组30只。通过气管插管,在气管内注入铜绿假单胞菌建立小鼠肺部感染模型,抗体组手术前6h静脉内注入0．2mL／kgTNF-α抗体,对照组注入相同剂量的PBS液,分别在0、3、6、12、24h不同时间点收集支气管肺泡灌洗液,用ELISA法检测各组不同时间点支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量,并观察小鼠1周后的死亡率。结果：模型组和抗体组支气管肺泡灌洗液中TNF-α含量在3h时已开始升高,6h达到高峰,12、24h逐渐降低,模型组明显高于抗体组（P〈0．05—0．01）,而两组均显著高于对照组（P〈0．01）。1周后模型组小鼠死亡率（73．3％）明显高于抗体组（43．3％）（P〈0．01）,两组死亡率均显著高于对照组（3．3％）（P〈0．01）。结论：TNF-α在铜绿假单胞菌肺炎发病过程中起着非常重要作用,抑制其过度释放可减缓病情。     

四逆散对实验性溃疡性结肠炎细胞因子mRNA表达的影响

目的：研究四逆散对实验性溃疡性结肠炎（UC）大鼠细胞因子mRNA表达的影响。方法：将实验动物分为5组,免疫法造模,采用Q-PCR技术检测实验大鼠结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-4和IL-10 mRNA的表达。结果：模型组IL-1β（7.84±1.18）、TNF-α（2.45±0.19）mRNA的表达均明显高于正常组,而IL-4（0.34±0.09）、IL-10（0.59±0.08）mRNA表达明显低于正常组,P〈0.01;与模型组比较,四逆散组、柴芍枳组和柴芍组IL-1β、TNF-αmRNA表达均显著降低,IL-4、IL-10 mRNA表达则显著升高,P〈0.01;与四逆散组比较,柴芍枳组TNF-α（1.37±0.12）mRNA表达明显高于四逆散组（1.08±0.03）（P〈0.05）,柴芍组（0.79±0.03）明显低于四逆散组（P〈0.05）,柴芍枳组（1.09±0.05）（P〈0.05）和柴芍组（1.33±0.15）（P〈0.01）IL-4 mRNA表达均显著升高。结论：四逆散干预实验性UC的作用机理可能为抑制促炎因子IL-1β的移行和TNF-α的分泌,促进抗炎因子IL-4和IL-10的分泌,调节促炎因子和抗炎因子之间的平衡,方中君臣配伍作用尤为突出,占有重要地位。     

siRNA表达框架对TNF-α和IL-1的特异性抑制

[目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL—1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF—α和IL-1的siRNA表达框架,转染细胞,用ELISA方法检测TNF-α和IL-1分泌情况。[结果]TNF-α干扰组TNF-α分泌量（21．87±1．20）pg／mL较IL-1干扰组（28．02±1．03）pg／mL及对照组（27．64±1．92）pg／mL均明显降低,差异有显著性意义（P〈0．05）。IL-1干扰组IL-1分泌量（40．37±4．02）pg／mL较TNF—α干扰组（57．86±3．91）pg／mL及对照组（59．55±3．57）pg／mL均明显降低,差异有显著性意义（P〈0．05）。[结论]构建的针对TNF-α和IL-1的siRNA表达框架能够明显抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1,且干扰作用具有序列特异性。     

缬草对小鼠巨噬细胞IL-1β和TNF-α基因表达的影响

目的：探讨缬草水提物对小鼠腹腔巨噬细胞的白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达的影响。方法：小鼠经缬草水提物灌胃给药1周后,采用逆转录PCR（RT-PCR）方法检测巨噬细胞中的IL-1β和TNF-αmRNA的表达情况。结果：缬草小、中、大剂量组给药后,小鼠腹腔巨噬细胞IL-1βmRNA表达均增高,与空白对照组比较差异显著（P〈0.01）。缬草大剂量组给药后,TNF-αmRNA表达增高,与空白对照组比较差异显著（P〈0.01）。结论：缬草镇静催眠的机制可能是其增加了小鼠体内IL-1β和TNF-α的含量。     

Krupple样因子6调控诱导型一氧化氮合酶介导铜绿假单胞菌感染小鼠肺组织细胞凋亡的研究

目的 通过研究Krupple样因子6(KLF6)在铜绿假单胞菌感染肺组织中表达水平的变化,探讨KLF6调控诱导型一氧化氮合酶（iNOS）介导铜绿假单胞菌感染小鼠肺组织细胞凋亡的机制。方法 于2014年10-12月,30只小鼠随机分为对照组和低感染组,每组15只,低感染组注射铜绿假单胞菌1.0×107 CFU制作动物模型,感染后3、9、24 h,分别随机取各组5只小鼠留取标本。另10只小鼠随机分为中感染组和高感染组,每组5只,分别注射铜绿假单胞菌5.0×107、1.0×108 CFU,均在感染后9 h留取标本。在各时间点处死动物后无菌分离肺组织,左肺结扎后测定湿干重之比。采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡指数,采用硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）水平,化学比色法测定iNOS活性,采用Western blotting法检测肺组织KLF6水平。结果 光镜下可见低感染组小鼠肺组织大量炎性细胞浸润,肺泡隔增厚,肺泡壁结构破坏,局部有肺泡膨胀不全或肺泡塌陷,并扩散到肺间质内,24 h时炎症改变最为严重。3 h时,对照组和低感染组肺组织湿干重之比比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;9、24 h时,低感染组肺组织湿干重之比大于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。低感染组不同时间肺组织凋亡指数比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同剂量铜绿假单胞菌感染9 h后肺组织凋亡指数比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。3、9、24 h时,低感染组肺组织NO水平、iNOS活性均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同剂量铜绿假单胞菌感染9 h后肺组织NO水平、iNOS活性比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。低感染组不同时间肺组织KLF6表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。不同剂量铜绿假单胞菌感染9 h后肺组织KLF6表达水平比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 铜绿假单胞菌感染能诱导KLF6的表达,并有可能通过iNOS调控介导细胞凋亡。     

老年烧伤患者继发感染的特征及炎症因子的变化简

目的 研究老年烧伤患者继发感染的特征及炎症因子的变化.方法 选择2010年1月～2012年12月浙江省台州医院烧伤科收治的60例老年烧伤患者为研究对象,将其分为发生继发性感染的观察组（21例）和未发生继发性感染的对照组（39例）.分析两组患者感染发生途径、病原菌种类以及炎症因子水平.结果 感染途径中创面感染占17.0％,肠源性感染占27.7％,肺部感染占34.0％;病原菌种类中金黄色葡萄球菌占34.5％,铜绿假单胞菌占24.1％,表皮葡萄球菌占10.3％;观察组患者的白细胞介素1、6、8（IL-1、6、8）以及肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平[（172.8±32.4）pg/mL、（593.1±79.3） pg/mL、（41.9±7.3）ng/mL、（3.2±0.8）ng/mL]均高于对照组[（61.3±11.2）pg/mL、（214.6±44.2）pg/mL、（13.8±4.2）ng/mL、（1.3±0.2）ng/mL],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 创面、肠源性以及肺部感染是最常见的感染途径,金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌是最常见的病原体,且白细胞介素和肿瘤坏死因子与感染的发生密切相关.     

胸腺素β4治疗脂多糖诱导小鼠内毒素休克的实验研究

目的研究胸腺素β4(thymosin β4,Tβ4)对内毒素休克小鼠72 h存活率的影响,并初步探讨Tβ4治疗内毒素休克的机制.方法选用清洁级昆明小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制备内毒素休克动物模型,(1)观察内毒素休克前后Tβ4变化情况;(2)观察注射LPS后不同时间给予Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(3)观察不同剂量Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(4)ELISA法检测Tβ4对内毒素休克小鼠血浆TNF-α及IL-1β变化情况的影响;(5)用RT-PCR的方法检测外周血单核细胞(PBMC)的TNF-α mRNA及IL-1β mRNA表达情况.结果 Tβ4在内毒素休克小鼠的血浆中明显降低,A、B、C组内毒素休克小鼠72 h存活率均明显低于D组(P＜0.01,P＜0.05),Tβ4预处理LPS组TNF-α及IL-1β血浆水平明显低于LPS组(P＜0.01),LPS组TNF-α mRNA及IL-1α mRNA的表达明显高于Tβ4预处理LPS组(P＜0.01).结论 Tβ4治疗内毒素休克应在LPS腹腔注射后0 h、2 h、4 h连续注射Tβ4(5 mg/kg),Tβ4可降低PBMC表达TNF-α mRNA及IL-1β mRNA.实验提示Tβ4可能是通过下调炎症介质的基因表达来治疗内毒素休克的.     

三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制作用研究

目的 探讨三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制效果,为其临床应用提供依据.方法 首先制备中药含药血清用于体外最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定.然后建立烫伤大鼠感染多重耐药铜绿假单胞菌模型,分别给予西药硫酸庆大霉素和中药三黄地榆散灌胃,正常组和模型组灌胃等容量的无菌生理盐水;在给药后的第3、7、10天检测血液中炎性细胞和炎性因子的水平.结果 体外抑菌实验显示,三黄地榆散含药血清与庆大霉素对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC、MBC均为512μg/mL.体内实验结果显示,与模型组比较均能显著下调大鼠血清WBC、IL-1β、TNF-α的水平(P<0.05).结论 三黄地榆散能抑制多重耐药铜绿假单胞菌的生长,对多重耐药铜绿假单胞菌感染烫伤大鼠治疗具有较好的疗效,机制可能与调节IL-1β、TNF-α水平有关.     

γδT细胞在铜绿假单胞菌肺炎患者外周血和痰液中的分布变化的探讨

目的：了解铜绿假单胞菌肺炎患者痰、外周血中γδT细胞的变化,探索γδT细胞在铜绿假单胞菌肺炎中的作用。方法：铜绿假单胞菌肺炎患者8例（A组）,正常对照者8例（B组）,采集受试者的外周血和下呼吸道痰液,运用手工计数方法计数各种细胞数量并计算各种细胞占总细胞中的比例。运用流式细胞技术检测淋巴细胞占总细胞中的百分比及γδT细胞占淋巴细胞中的百分比。结果：A组外周血和痰液中γδT细胞数量占淋巴细胞的百分比均明显高于B组（P〈0.01）;A组外周血γδT细胞占淋巴细胞中的百分比低于痰液中γδT细胞占淋巴细胞中的百分比（P〈0.01）,而B组外周血和痰液中γδT细胞占淋巴细胞中的百分比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：γδT细胞可能通过重新分布在铜绿假单胞菌肺炎发病过程中发挥作用。     

病毒性脑炎患儿血清及脑脊液TNF-α、IL-6、NSE的变化及其临床意义

目的探讨病毒性脑炎儿童血清及脑脊液TNF—α、IL-6、NSE的动态变化及其临床意义。方法66例病毒性脑炎患儿进行血清及脑脊液TNF-α、IL-6、NSE的测定,另有10名临床排除中枢神经系统感染的儿童作为对照组,也进行血清及脑脊液TNF—α、IL-6、NSE测定。TNF-α、IL45应用ELISA法检测。NSE用放射免疫法进行测定。结果病毒性脑炎组血清及脑脊液TNF—α、IL45、NSE水平均明显增高,较对照组有显著统计学差异（P〈0．01）;脑脊液中TNF—α、IL-6、NSE水平与血清中TNF—d、IL-6、NSE水平呈正相关[r（TNF—α）=0．338,P〈0.01;r（IL-6）=0．256,P〈0．01;r（NSE）=0．374,P〈0．01];病繇性脑炎组血清及脑脊液中IL-6与NSE水平之间无相关性[r（s）=0．108,P〉0．05;r（csf）=0．145,P〉0．05],TNF—α与NSE水平有直线相关性[r（s）=0．387,P〈0．01;r（csf）=0．401。P〈0．01]。结论脑脊液和血清中NSE可作为判断病毒性脑炎患儿脑组织损伤的客观指标之一,TNF—α、IL-6参与了儿童病毒性脑炎的病理过程,血清及脑脊液中TNF-α、IL-6水平检测对儿童病毒性脑炎的诊断有一定临床意义.     

铜绿假单胞菌生物被膜诱导肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子的研究

目的：通过研究经铜绿假单胞菌生物被膜作用后,肺泡上皮细胞分泌炎性细胞因子水平的变化,探讨铜绿假单胞菌生物被膜在感染性肺纤维化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞菌形成生物被膜,应用乙醇沉淀法提取细菌被膜并纯化;选用人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,采用ELISA法定量检测在铜绿假单胞生物被膜藻酸盐作用后上皮细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的水平。结果：铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐作用后,A549细胞分泌IL-1β和TNF-α能力在48 h内持续升高,但IL-6和IL-8则在24 h达到高峰,此后下降。结论：铜绿假单胞菌生物被膜能诱导A549细胞分泌IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α能力增强或一过性增强,可能与其诱导肺泡炎症,进而促进成纤维细胞活化、增殖及转化有关。     

三维实验法检测耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶

[目的]了解耐亚胺培南的铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶的分布及分离率。[方法]采用K-B法进行药物敏感试验,筛选耐亚胺培南的铜绿假单胞菌;再进行改良三维实验,对菌株所产β-内酰胺酶进行分析。[结果]临床分离耐亚胺培南的铜绿假单胞菌40株中,单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）9株（22.5%）,单产高产染色体头孢菌素酶（AmpC）2株（5.0%）,5株为超超广谱β-内酰胺酶（SSBL）（12.5%）,3株产酶量过高或其他原因（7.5%）,21株无酶活性（52.5%）。[结论]产β-内酰胺酶是耐亚胺培南铜绿假单胞菌的主要耐药机制之一。     

血液PEA检测在鉴别PA感染与定植中的作用

目的：探讨大鼠血液铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）外毒素（paeruginosa exotoxin A,PEA）检测在PA感染与定植鉴别中的价值。方法：8周龄雄性SD大鼠180只,经地塞米松抑制免疫预处理后,随机分为感染组（气管内注入0.4 ml铜绿假单胞菌混悬液）、定植组（经咽部滴入铜绿假单胞菌混悬液0.2 ml）、对照组（气管内注入0.4 ml生理盐水）。各组按处死时间不同,再分为3 D组、7 D组、11 D组,分别于接种后第3、7、11 d随机抽取各组20只大鼠,心脏采血法处死,无菌取出肺组织并抽取血样。左肺组织匀浆行铜绿假单胞菌培养并计数菌落;右肺组织HE染色,镜下观察肺组织结构;收集血液分别以实时荧光定量PCR法检测PEA DNA及ELISA法检测IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α。结果：定植组、对照组大鼠各时间点肺组织均未见PA菌生长及明显炎症反应,定植组各时间点咽拭子培养见PA菌生长（其菌落计数均＞105 cfu/ml）,感染组大鼠肺组织匀浆各时间点均可见PA菌生长（其菌落计数均＞104 cfu/ml）及明显炎症反应,其中以第3 d最为明显,至第7、11天有所下降。各时间点感染组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达均有升高,与定植组及对照组表达差异均有统计学意义（P＜0.05）,各时间点定植组及对照组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达差异无统计学意义（P〉0.05）,其中感染组大鼠血液PEA DNA及IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α表达检测以第3 d最为显著。结论：血液PEA DNA检测对鉴别铜绿假单胞菌感染与定植有一定价值,其表达水平高低与大鼠肺组织PA菌菌落计数及肺组织炎症反应程度正相关,推测PEA DNA可能反映肺部感染程度及其预后。