交链孢酚和交链孢酚单甲醚对大鼠不同器官细胞DNA损伤的器官亲和性研究

近几年来,大量较为系统深入的研究已证实了严重污染食管癌高发区粮食的互隔交链孢霉(Alternaria alternata)的主要代谢产物交链孢酚(AOH)及交链孢酚单甲醚(AME)的诱变作用。本文用新鲜分离的大鼠不同器管细胞UDS试验,研究了该两种毒素对Wistar大鼠不同器管细胞DNA损伤作用,藉以探讨该两种毒素对大鼠不同器管细胞DNA损伤的器管亲和作用。     

铁过量对大鼠淋巴细胞DNA损伤的影响

目的： 探讨不同剂量铁补充对大鼠淋巴细胞DNA损伤的影响。方法：SPF级6~7周龄雄性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为4组,每组10只大鼠,即对照组、缺铁组、10倍铁剂量补充组、20倍铁剂量补充组,4组均采用隔日腹腔注射右旋糖酐铁,每次注射0.72 mL,每次注射含Fe2+分别为0.9、0.3、9和18 mg,连续注射6周。4组大鼠自由饮用去离子水,喂饲无铁饲料,于第6周末眼眶取血,使用血清铁试剂盒测定血清铁浓度,采用碱性单细胞凝胶电泳法测定大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤状况。结果：缺铁组大鼠血清铁含量为53.54 μmol/L,明显低于正常对照组的77.62 μmol/L(P<0.01),10倍和20倍铁剂量补充组大鼠血清平均铁含量分别达到104.77 μmol/L和205.30 μmol/L,显著高于对照组(P<0.01)。外周血淋巴细胞DNA本底损伤分析显示,缺铁组和正常对照组淋巴细胞DNA损伤总体水平分别为25.30 AU和21.13 AU,两组间差异无统计学意义(P>0.05),10倍和20倍铁剂量补充组DNA自发损伤水平分别为对照组的3.9倍和8.0倍(82.80 AU和169.50 AU),显著高于对照组(P<0.01);然而H2O2与铁过量联合损伤分析显示,大鼠外周血淋巴细胞在10 μmol/L H2O2处理后,缺铁组大鼠DNA氧化损伤水平达到260.40 AU,与对照组(259.00 AU)相比差异无统计学意义(P>0.05),而10倍和20倍铁剂量补充组分别为对照组的1.1倍和1.2倍(293.80 AU和308.88 AU),均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论：10倍、20倍铁剂量补充均可提高机体铁的营养状况或增加铁负荷水平;与正常铁摄入水平相比,铁缺乏未见DNA本底及H2O2联合损伤增加,而铁补充过量可引发机体外周血淋巴细胞DNA本底损伤增加及H2O2联合损伤加剧。     

绞股蓝提取物对衰老大鼠DNA损伤的影响

背景与目的探讨绞股蓝提取物对衰老大鼠DNA氧化及烷化损伤的影响。材料与方法成年大鼠颈背部皮下注射D-半乳糖100mg/kg构建衰老动物模型,同时设注射等量生理盐水的正常对照组。已建模的大鼠分为人工合成饲料中添加不同剂量的绞股蓝提取物(200、800、4000mg/kg饲料)及维生素E、C(VE C)各组,8周后采血获取淋巴细胞,用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA自发损伤及H2O2诱导的氧化损伤;实验结束前1周留取大鼠24h尿液,通过毛细管电泳法检测大鼠尿中O6-甲基鸟嘌呤(O6-MeG)的含量。结果各组大鼠淋巴细胞DNA自发损伤无明显差异(P>0.05)。分别采用5、10和25μmol/LH2O2氧化时,绞股蓝各组及维生素E、C(VE C)组DNA氧化损伤均明显低于衰老对照组(P<0.05),且绞股蓝800、4000mg/kg组DNA氧化损伤与正常对照组及VE C组无显著性差别。衰老对照组尿中DNA烷化损伤代谢产物O-6MeG含量较其他各组偏高,但差别无统计学意义。结论D-半乳糖诱导衰老的大鼠模型DNA抗氧化损伤的能力降低,而DNA烷化损伤无明显改变;在本实验条件下,绞股蓝提取物可有效降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,对DNA烷化损伤没有明显作用。     

丙烯腈致大鼠体细胞DNA断裂损伤的研究

目的：观测丙烯腈染毒对大鼠体细胞ＤＮＡ断裂损伤水平,为进一步阐明丙烯腈的致癌机制提供依据。方法：成年ＳＤ大鼠３２只,随机分成１组对照组和３组染毒组,染毒剂量为１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ和５０ｍｇ／ｋｇ。一次经口染毒后２ｈ立即取外周血抗凝备用。取小块肝脏、肺脏和胃脏组织于预冷的生理盐水中洗净,放入１－２ｍｌ含２０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ的冷ＨＢＳＳ中,切碎,静置数分钟后取上层细胞悬液备用。参照Ｓｉｎｇｈ和秦椿华等介绍的方法并略作改进,对外周血和组织细胞进行单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）。结果：随着…     

三苯氧胺对乙烯雌酚促发大鼠肝肿瘤的作用

三苯氧胺(TAH)为抗雌激素药物,用于妇科晚期肿瘤的内分泌治疗已取得明显的疗效。近年来,性激素与肝脏肿瘤的关系逐步引起大家的关注。一些作者用TAM等药物治疗临床肝癌病人和动物实验性肝肿瘤,也取得了一定的效果。有关肝肿瘤的内分泌治疗,国内还未见有报道。本实验用乙烯雌酚(DES)促发二乙基亚硝胺(DEN)引起大鼠肝肿瘤,同时TAM作为拮抗处理,最后通过测定肝胞浆内雌激素受体(ER),观察TAM对实验性肝肿瘤的影响,旨在评价肝肿瘤内分泌治疗的价值。     

苯并（a）芘对人血淋巴细胞的遗传损伤作用研究Ⅱ、苯并（a）芘DNA损伤作用研究

本研究第2部分，应用DNA共价结合试验．非程序DNA合成(UDS)试验、DNA解螺旋荧光分析(FADU)试验和DNA复制合成抑制(DRSI)试验，综合检测了苯并(a)芘(BaP)对人血淋巴细胞的DNA损伤作用．人血淋巴细胞来源和分离方法，UDS，FADU、DRSI试验的细胞染毒浓度和条件均与本研究第1部分相同．     

香烟烟雾冷凝物诱发大鼠肺细胞DNA损伤的研究

用市售香烟的烟雾冷凝物(CSC)诱发新鲜分离的大鼠肺细胞的程序外DNA合成(UDS),结果表明:CSC在一定浓度范围内,可诱发大鼠肺细胞UDS,与溶剂对照相比(PV<0.01),差异有显著性意义并有剂量效应关系。提示,吸烟与肺癌可能有直接关系。     

用SCGE分析甲氨蝶呤对小鼠体内多个组织器官DNA损伤作用

背景与目的:为进一步了解甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)的作用机制,探测其对不同组织器官作用的敏感性。材料与方法:用单细胞凝胶电泳技术(Singlecellgelelectrophoresisassay,SCGE)检测小鼠腹腔注射MTX染毒1、3、6、12、24h后对肝、脾、骨髓、胸腺、肾、睾丸、胃和外周血淋巴细胞的DNA损伤作用及其与MTX剂量间的关系。结果:腹腔注射1.25~5mg/kgMTX可诱发小鼠脾细胞、骨髓细胞、胸腺细胞和外周血淋巴细胞的DNA单链断裂;核DNA损伤程度与用药剂量呈正相关。结论:MTX可致小鼠体内多脏器细胞的DNA单链断裂,不同脏器细胞对MTX的易感性不同,脾、骨髓、胸腺、外周血淋巴细胞可考虑为MTX的遗传毒性靶细胞。     

大剂量维生素E和C抗氧化活性及对DNA损伤影响的研究

背景与目的:观察大剂量维生素E(VitaminE,VE)和C(VitaminC,VC)的抗氧化活性及对大鼠DNA氧化损伤、烷化损伤的影响。材料与方法:将72只Wistar大鼠(雌雄各半)随机分为6组,每组12只,即对照组(基础饲料,VE、VC摄入量分别为5、0mg/kg·d),VC组(VE5mg/kg·d、VC1000mg/kg·d),VE1组(VE33mg/kg·d、VC0mg/kg·d),VE2组(VE500mg/kg·d、VC0mg/kg·d),VE1 VC组(VE33mg/kg·d、VC1000mg/kg·d)和VE2 VC组(VE500mg/kg·d、VC1000mg/kg·d),实验期为8周。实验结束前收集动物24h尿液,实验结束后处死动物,留取血液,分离血浆并收集淋巴细胞,测定超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,分析DNA损伤。结果:VE1组的抗氧化活性显著提高:血浆SOD、GSH-Px活力明显高于对照组(P<0.05)、MDA含量低于对照组;而VE1 VC组SOD、GSH-Px则较VE1组显著下降(P<0.05)。VE1组10μmol/LH2O2诱导的淋巴细胞DNA氧化损伤为150.42AU,显著低于其它组(P<0.05);该组DNA烷化损伤产物尿O6-甲基鸟嘌呤(O6-methylguanine,O-6meG)含量为0.89mg/g肌酐,比对照组、VE2组分别下降了50.28%、50.00%(P<0.05)。结论:较大剂量VE能提高大鼠抗氧化活性,降低DNA氧化损伤及烷化损伤,但联合补充大剂量VC时可能对其影响产生拮抗作用;过大剂量VE和VC补充时均未观察到有利作用,并且可能降低机体的遗传稳定性。     

放射治疗对宫颈癌病人DNA损伤及hprt基因突变的初步研究

目的：评价放射治疗对宫颈癌患者造成的遗传学损伤。方法：取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为0Gy、10Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy、60Gy时的外周静脉血,以彗星实验检测淋巴细胞的DNA损伤,采用多核细胞法测hprt基因位点突变率。结果：各累积剂量组淋巴细胞DNA拖尾率比照射前显著升高（P〈0.01）,并且在0-60Gy之间,拖尾率与累积照射剂量之间成线性关系。各累积剂量组尾长比照射前均增加（P〈0.01）,在照射剂量累积30Gy时,尾长均值达最大。尾长与累积剂量间不成线性关系。hprt基因位点突变率在照射后升高,与照射前相比,在照射累积剂量为30Gy、40Gy和50Gy时,显示有统计学意义差别（P〈0.05）。hprt基因突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系。结论：宫颈癌患者放疗后造成外周血淋巴细胞DNA损伤及hprt基因突变,hprt基因突变和彗星实验用于评价放疗造成的损伤,具有较高的敏感性。     

泰兴市饮用水对人淋巴细胞DNA损伤的研究

目的：研究泰兴市饮用水中有机提取物对人淋巴细胞损伤效应。方法：应用彗星实验技术。结果：泰兴市井水、河水和塘水对人淋巴细胞都具有致突变性，尤其是河水中的有机提取物对人淋巴细胞的损伤最为严重。结论：泰兴市饮用水污染是当地恶性肿瘤高发的危险因素之一。     

苯对大鼠骨髓和脾细胞的遗传毒性和血液学毒性

Sprague-Dawley雄性大鼠单次腹腔注射苯220、440和880毫克/公斤体重,24、48和72小时处死动物,取样制作标本。通过检查骨髓和脾细胞的微核与姐妹染色单体互换(SCE)的频率测定其遗传学毒性;通过观察骨髓细胞的形态并分析红系和粒系细胞的异常中期分裂相、粒系与红系的比值(M/E)和     

丝裂霉素对体外胃癌细胞DNA损伤和增殖的影响

目的探讨丝裂霉素对体外胃癌细胞DNA损伤和增殖的影响。方法选用不同浓度丝裂霉素处理体外培养的胃癌细胞SGC-7901,利用免疫荧光和Western blot技术,分别检测γH2AX的焦点形成和蛋白水平变化;使用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况。结果丝裂霉素的作用浓度和作用时间存在交互效应,除400 μg/ml外,平均γH2AX焦点数和焦点细胞率呈逐渐增加趋势（P<0.05）;400 μg/ml时,6 h组平均γH2AX焦点数和焦点细胞率低于4 h组,差异有统计学意义（P<0.05）。随丝裂霉素作用时间延长,γH2AX蛋白水平呈先升后降趋势,差异有统计学意义（P<0.05）。MTT结果显示,丝裂霉素对SGC-7901细胞的增殖有明显抑制作用（P<0.05）。结论γH2AX可敏感反应丝裂霉素对胃癌细胞DNA的损伤,丝裂霉素对体外胃癌细胞增殖抑制明显。     

PM2.5对支气管上皮细胞DNA损伤作用研究

目的：探讨大气细颗粒物（PM_2.5）染毒对人支气管上皮细胞（HBE） DNA损伤的作用。方法：分别用8、20、50 μg/mL的PM_2.5水溶液染毒HBE细胞24 h后,单细胞凝胶电泳实验（SCGE）检测DNA损伤情况。10和50 μg/L的PM_2.5水溶液染毒HBE细胞,以未染毒细胞作为阴性对照组,10 μmol/L的Cr⁶⁺水溶液为阳性对照组,实时荧光定量PCR （qPCR）检测DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1的mRNA表达水平的变化,Western blot检测hOGG1、hMTH1蛋白表达变化。结果：单细胞凝胶电泳检测8、20和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒组HBE细胞的尾部DNA含量、尾长、尾距较阴性对照组明显增加（P < 0.05或P < 0.01）。qPCR结果显示,与阴性对照组比较,HBE细胞hOGG1 mRNA表达水平在10和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒以及阳性对照Cr⁶⁺水溶液染毒后分别升高75.0%、132.0%、214.0%;hMTH1 mRNA分别升高61.0%、144.0%、75.0%。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,HBE细胞hOGG1蛋白表达水平在10和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒以及Cr⁶⁺水溶液染毒后分别升高47.6%、64.0%、47.0%;hMTH1蛋白分别升高20.5%、49.8%、20.9%。结论：PM_2.5水溶液染毒对HBE细胞DNA具有明显的损伤作用,并引起HBE细胞DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1表达水平升高。     

香烟烟雾对雄性小鼠生殖细胞DNA损伤的研究

为了研究香烟烟雾对生殖细胞的遗传毒性,本文采用目前检测ＤＮＡ损伤最敏感的方法—彗星试验,检测了香烟烟雾溶液对小鼠精原细胞的ＤＮＡ损伤作用。分别以二甲基亚枫（ＤＭＳＯ）和磷酸缓冲液（ＰＢＳ）作为吸收液,用大气收集器（Ｕ形多孔玻板吸收管）采集香烟主流烟雾,制得ＤＭＳＯ烟液和ＰＢＳ烟液。结果显示：ＤＭＳＯ烟液的原液至４倍稀释液（含烟量４×１０－３至１×１０－３支烟／ｍｌ）对精原细胞具有明显细胞毒性,孵育２ｈ后,细胞存活率小于８０％,而ＰＢＳ烟液的原液其细胞存活率也高于８０％。两种烟液的ＤＮＡ损伤作用也…     

燃煤砷污染对人体血细胞DNA合成、DNA损伤及修复的影响

目的与方法：采用液体闪烁计数法及＾１２５Ｉ后标记法检测燃煤型砷中毒人群血细胞ＤＮＡ自发合成、ＤＮＡ－蛋白质交联物（ＤＰＣ）水平及非程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）反应,以探讨燃煤砷污染以人体ＤＮＡ合成、ＤＮＡ损伤及修复的影响。结果：病区非病人及中毒病人的ＤＮＡ合成明显降低,ＤＰＣ水平随病情加重而升高;而ＵＤＳ反应则只在中毒病人体内增强,差异均有显著性。结论：燃煤砷可在早期致人体内ＤＰＣ形成,引起严重的Ｄ     

PCB153对原代培养大鼠睾丸支持细胞SOD活性、DNA损伤及凋亡的影响

目的：探讨2,2′,4,4′,5-五氯联苯（2,2′,4,4′,5-hexachlorobiphenyl,PCB153）暴露对原代培养大鼠睾丸支持细胞（Sertoli cells,SC）超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、DNA损伤、细胞凋亡的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine,NAC）的干预作用。方法：原代培养出生18～20d雄性SD大鼠的睾丸支持细胞,设PCB153不同浓度的染毒组（加入10、20、30μmol/L PCB153）,NAC组（以300μmol/L NAC预处理1h后加入30μmol/L PCB153）,和对照组（加入与PCB153最大染毒量等体积的DMSO）,各组细胞经上述处理后继续培养24h,用SOD试剂盒测定各组细胞SOD活性,彗星实验测定DNA损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞荧光标记观察凋亡形态。结果：染毒24h后,大鼠睾丸支持细胞SOD活性随着PCB153染毒剂量的升高而降低,20、30μmol/L染毒组显著低于对照组（P〈0.05）,NAC预处理可提升SOD活性（P〈0.05）。各PCB153处理组及NAC预处理组与对照组相比,DNA损伤间的差异均无统计学意义（P〉0.05）,细胞凋亡率则均显著增加（P〈0.05）,NAC预处理可降低PCB153所致的凋亡率（P〈0.05）。结论：10～30μmol/L PCB153染毒24h可诱导的原代培养大鼠SCSOD活性降低,细胞凋亡增加,但并未引起DNA损伤,NAC预处理具有保护作用。