胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 A(Cag A)抗体的胶体金免疫层析法(GICA) .方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体颗粒 ,标记葡萄球菌 A蛋白 (SPA) ,将重组的 Cag A抗原划线固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫层析检测试条 .血清中 Ig G与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动 ,与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条 .结果　用 GICA与 EL ISA试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗 Cag A抗体 ,本方法的特异性为95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两法符合率为 96 .6 % .结论　 GICA检测…     

金标渗滤法测定囊虫特异性抗体试剂盒的研制

目的 研制简易、快速、准确的囊虫病诊断试剂盒,并对其诊断价值进行考核评价。方法 以猪囊尾蚴的囊液粗提液为检测用抗原,以胶体金标记的金黄色葡萄球菌蛋白A（SPA）为探针,采用自行设计的渗滤装置制备金标渗滤法（DIGFA）检测试剂盒。检测不同病人血清中囊虫特异性IgG抗体,并以囊虫IgG抗体ELISA检测试剂盒考核其敏感性和特异性。结果 用金标试剂盒检测58人份囊虫病患者血清和100人份健康者血清,其敏感性为98.3％（57/58）;特异性为100％（100/100）。用该试剂盒检测25人份包虫病患者血清,6份呈弱阳性,交叉反应率为24％;检测30人份血吸虫病人血清,10人份肺吸虫病人血清,10人份肠道线虫病人血清,均无交叉反应。与ELISA试剂盒检测结果比较,符合率为98．7％,无显著性差异（χ^2=0．0545,P〉0．05）。结论 金标渗滤法快速检测囊虫特异性抗体试剂盒敏感性高、特异性强,可与ELISA法相媲美,且操作更为简便、快速,结果判读容易,特别适合临床检测和现场查病。     

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白的血清学诊断

目的 评价结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白为抗原进行结核病血清学诊断的价值.方法 以重组Ag85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测健康体检者147例和结核患者143例血清中的抗结核抗体;同时以结核杆菌特异性抗体快速检测试剂盒为对照.结果...     

重组乙脑抗原对乙型脑炎病毒IgG抗体反应活性的研究

目的对克隆表达的乙脑重组抗原反应原性、特异性以及稳定性等进行评价优化,用于乙脑血清Ig G抗体ELISA诊断试剂盒的研制。方法基于乙脑病毒(JEV)SA14-14-2株的抗原蛋白经克隆表达,灭活纯化后作为包被抗原,利用ELISA方法对其最佳包被浓度,稳定性,反应活性以及特异性进行一系列的评价。结果重组抗原在1∶500的稀释条件下,阳性血清/阴性血清值最大为6.647,具有最佳反应原性,因此此稀释度为最佳;在1∶500稀释条件下,能准确地反映出乙脑病人血清IgG的变化。重组抗原37℃保存6 d活性仍保持75%以上,具有较好的稳定性;与市售同类型试剂盒比较,符合率达到95%。重组乙脑抗原与27份人正常血清和31份登革热病毒IgG抗体阳性而乙脑病毒IgG抗体阴性的血清均无交叉反应,表明具有良好的特异性。结论重组乙脑抗原蛋白稳定性好,特异性强,具有良好的血清学检测价值。     

CMV抗体免疫金快速检测试剂盒的开发与初步应用

目的: 开发一种低成本、简单易用的基于免疫金渗滤法的试剂盒,以用于检测分析血清中的巨细胞病毒抗体. 方法: 将用人工合成的人巨细胞病毒(HCMV)抗原表位的线性肽和分支多抗原肽分别划线固定于硝酸素纤维膜上,制成免疫层析检测试纸条,血清中IgG与测试条上金标记物结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色带条并用GICA和ELISA试剂盒对比检测120份血清标本中抗HCMV抗体. 结果: 分支多抗原肽制成的免疫层析检测试纸条的灵敏度为97.9%,特异度为87.5%,两法符合率为95.8%. 结论: GICA检测血清中的抗HCMV抗体特异性强,灵敏度高,简便快速,有广泛应用价值.     

早早孕快速诊断微量酶免疫测定试剂盒研制完成

我室研制了一种微量酶免疫测定试剂盒,大大降低了成本。可制成小型包装,便于家庭、个人使用。试剂盒以本研究室发明的微量免疫测定塑料珠为固相,反应体系仅10μl。其测定方法如下:将抗hCG抗体包被的塑料小珠(0.8mm×1.0mm)装上一金属柄(以便手工操作),     

酶联免疫吸附试验检测人血清抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的性能评估

目的对人血清抗双链DNA(dsDNA)抗体的酶联免疫吸附检测试剂盒Anti-dsDNA-NcX ELISA行实验室检测性能评估及在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用评价。方法对Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒进行实验性能评价;并用间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)两种方法共三种试剂盒,同时检测健康体检正常者30例、非系统性红斑狼疮自身免疫病患者27例及SLE患者92例血清抗dsDNA抗体。以SLE的临床诊断为金标准,评价Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒用于SLE的诊断性能。结果 Anti-dsDNA-NcX ELISA试剂盒达到了各项实验室检测性能指标,试剂盒的最低检测限为2.7 U/m l,线性相关系数为0.998,批内精密度变异系数(CV)<6%,批间精密度CV<10%,溶血、脂血、黄疸对检测结果没有干扰,与类风湿性关节炎、干燥综合征等非SLE自身免疫病患者血清间不存在交叉反应。健康体检正常者血清抗dsDNA抗体水平P97.5为67.0 U/m。l92例狼疮性肾炎患者,两种ELISA试剂的阳性率(60.9%)均高于IIF(20.6%),差异有统计学意义(P...     

血清学实验快速诊断肾结核

1　材料和方法11　血清抗体　经临床确诊的肾炎患者血清50例,肾病患者血清50例,肾囊肿患者血清20例,肾癌症患者血清38例,健康人血清50例。均按常规采取静脉血,并在2ｈ内分离血清。血清于-20℃冻存,1周内做完有关检测。12　抗体检测　血清中抗ＬＡＭ(脂肪阿拉伯酸甘露聚糖)抗体采用美国ＤｙｍａＧｅｎ公司生产的结明试剂盒检测,操作方法依照试剂盒说明书。血清中抗38ＫＤ抗原和抗细胞质膜抗原抗体的检测,采用澳大利亚ＩＣＴ诊断试剂公司生产的ＩＣＴＴＢ卡试剂盒,操作方法参照有关说明书。2　结果　2.1　肾脏病和健康人血清检测　受试的各类…     

快速SPA-ELISA法检测姜片虫病患者血清抗体的动态学研究

用姜片虫成虫纯化抗原作快速SPA-ELISA,与常规ELISA平行检测姜片虫病人滤纸干滴血40份,二者之间阳性率无显著性差异(P>0.1)。以本法检测流行区献血员及非流行区健康体检者血清各40份,假阳性率分别为10％和5％;与日本血吸虫病和长膜壳绦虫病患者血清的交叉反应率分别为12.5％和25.0％,检测 81例姜片虫病患者治疗前后不同时间血清抗体的动态变化,提示驱虫后血清特异性抗体下降较快;治疗后3个月,血清抗体阴转率为87.65％;半年后的阴转率高达96.3％。     

新型ELISA系统检测大疱性类天疱疮患者抗-BP180 IgG和纯化自身抗体

背景:大疱性类天疱疮(BP)抗原BP180的N C16A免疫决定区已被用来开发用于BP自身抗体检测的几种酶联免疫试验(EISIA s)诊断试剂。目的:因为BP180自身抗体反应区不局限于NC16A,作者研究了针对所选表位(包括这一免疫决定区)来研发一种新型ELISA试剂的可能性。方法:先用ELISA检测78份BP血清的N C16A和64份BP血清检测到IgG反应(82%)。其余14份NC16A阴性BP血清用免疫学方法筛查针对BP180的7个特异表位。展示BP180表位的重组噬菌体长成斑块,点至硝酸纤维素滤纸并与BP血清孵育。结果:3份和5份NC16A阴性BP血清分别与BP180外结…     

小鼠肝炎病毒多价抗体ELISA试剂盒研制

作者用5株小鼠肝炎病毒(MHV-1、MHV-3、-JHM、-A_(59)和-沪_(79))研制了以多价抗原检测MHV抗体的ELISA试剂盒。该试剂盒与MHV-3抗体试剂盒对222份淘汰小鼠血清的MHV抗体检出率分别为60.81％(135/222)与49.55％(110/222),对44份普遍鼠群血清样本的检出率也表明该试剂盒较单价抗原敏感;试剂盒与Ect、LCM、EHF、Sendai和R_(eo)-3病毒的抗体无交叉反应,阻断试验结果也表明其特异性好;试剂盒在-20℃至少可保存4个月,在室温或2～8℃至少可保存5周;其重复性好,操作简便。     

鼠痘诊断试剂盒研制

本文报告以痘苗病毒为抗原、用以检测鼠痘和痘苗病毒抗体的间接免疫荧光试验(IFA)和酶免疫试验(EIA)试剂盒的实验室研制结果。作者通过阻断试验,与国内同类试剂的比较,以及与其它小鼠病毒免疫血清的反应结果证实试剂盒的特异性好;分别用痘苗病毒抗原和鼠痘病毒抗原进行检测,其阳性检出率无显著差别;比较了IFA、EIA和HI(血凝抑制试验)3种方法检测鼠痘抗体的敏感性,IFA与EIA的阳性血清检出率分别为58％±8.2％和48％±8.3％,均明显高于HI(13％±5.6％),测得的阳性血清滴度,IFA和EIA分别是HI的22.4倍和18.4倍。IFA和EIA检测结果的相符率为92％。试剂盒的重复性尚好,IFA和EIA检测重复率分别为93.1％和93.3％。试剂盒抗原在4℃中1个月内稳定,在-25℃中6个月仍稳定。该试剂盒操作简便、快速,适用于实验小鼠中鼠痘病的诊断和流行病学调查。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关抗原A的表达纯化及其临床研究

目的　 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道 ,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原 A (Cag A)建立检测血清中抗 Cag A抗体的方法 ,以探讨本地区 cag A+ Hp的感染与胃癌的相关性 .方法　构建表达幽门螺杆菌 Cag A抗原的表达载体 ,工程菌经 IPTG诱导 ,表达的 Cag A包含体经 Ni柱纯化 ,变性、复性、透析并经活性鉴定后 ,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被 EL ISA板 ,建立检测正常人及胃癌患者血清抗 Cag A抗体的 DIGFA(斑点金免疫渗滤试验 ,简称滴金法 )和 EL ISA法 .结果　重组克隆 p RSETcag A的工程菌可表达 Mr36 0 0 0的目的蛋白 ,表达形式为包含体 ;Cag A包含体经纯化后 SDS- PAGE显示纯度达 98%以上 ,活性经 EL ISA证实 ;正常人 6 4例及胃癌患者血清 5 0例中 ,cag A+ Hp的感染率分别为 2 9.7%和6 2 .0 % ,胃癌患者 cag A+ Hp的感染率明显高于正常人 (P<0 .0 1) .结论　我们建立的检测血清抗 Cag A抗体的 DIGFA和EL ISA均具有良好的可重复性 ;胃癌患者 cag A+ Hp的感染比例明显高于正常人 ,Cag A阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关 ,Cag A可作为制备防治 cag A+ Hp感染的疫苗的后备抗原 . Cag A可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原 ,检测患者血清幽门螺杆菌 Cag A抗体 ,有可能为胃癌的发     

A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

[摘要] 目的 制备和鉴定A型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体,建立A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法,用于A型流感病毒感染的实验室早期诊断。方 法 利用杆状病毒系统表达A型流感病毒核衣壳蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用双抗体夹心ELISA捕获法建立检测A型流感病毒核衣壳蛋白的方法。 结果 获得8株、共识别4个A型流感病毒核衣壳蛋白不同抗原位点的单克隆抗体,选择以单抗2B8A11作为捕获抗体,以C16A15作为检测抗体为最佳抗体对,建立双抗体夹心ELISA捕获法。检测流感患者的当日采集和冻存的呼吸道标本,与病毒分离培养方法的符合率分别为100%和42.9%;与B型流感病毒和其他呼吸道病毒无交叉反应。检测流感患者当日采集的呼吸道标本敏感性高于德国Serion试剂盒（P＜0.001）,与RT-PCR方法比较差异无显著性（P=0.5）。结论 成功建立了灵敏度高、特异性强的A型流感病毒核衣壳蛋白抗原的ELISA捕获法,为A型流感病毒感染的实验室早期诊断提供技术方法。     

异质性胞核核糖核蛋白A2在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的 探讨异质性胞核核糖核蛋白A2（hnRNP A2）在类风湿关节炎（Rheumatoid Anhritis,RA）诊断中的临床意义,建立简便、快捷的ELISA检测方法,并与国外Anti—RA33Ab试剂盒的结果对比,以作为验证国内试剂盒可用性的依据。方法以高纯度的具有抗原反应性的重组hnRNPA2蛋白作为抗原．对临床上包括137例RA在内的多种结缔组织病患者的血清中的相应抗体进行ELISA检测。应用国外Anti—RA33Ab试剂盒ELISA法检测并对比检测结果。结果hnRNPA2在RA患者中的敏感性为37．23％。特异性为85．44％,抗hnRNPA2／RA33抗体在RA患者中阳性率均明显高于其他疾病组（P〈0．05）。抗hnRNPA2／RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为43．75％。与国外Anti—RA33Ab试剂盒检测结果比较,在各组患者中检测抗RA33抗体的阳性率无明显差别（P〉0．05）,且总体符合率高达86．88％。另外,该抗体与年龄、病程、晨僵时间、血沉、C反应蛋白、关节功能、X线分期、类风湿因子（RF）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗核周因子抗体（APF）及抗CCP抗体之间均无相关性（P〉0．05）。结论我们初步纯化了RA33抗原．对hnRNPA2进行了基因的克隆、重组蛋白的表达和纯化,并以其为抗原,用ELISA方法检测抗hnRNPA2／RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法。与国外Anti—RA33Ab试剂盒的检测结果对比无明显差异,自制的抗RA33抗体试剂盒可以可靠地应用于临床检验。     

人Aβ42重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测

目的 原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ₄₂)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法 化学合成Aβ₄₂基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ₄₂基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ₄₂融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ₄₂和Aβ₄₂肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果 原核表达的可溶性GST-Aβ₄₂融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ₄₂为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ₄₂和化学合成的Aβ₄₂分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论 原核表达的GST-Aβ₄₂融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ₄₂肽抗原,用于检测Aβ抗体。     

ELISA法在检测宫内膜抗原-抗体复合物中的应用

用ELISA法检测14例健康孕妇、37例宫内膜抗体阳性和25 例宫内膜抗体阴性的不孕妇女血清中的宫内膜抗原-抗体复合物(IgG型和IgM型)的结果表明,健康孕妇血清中无宫内膜抗原抗体复合物,宫内膜抗体阳性的不孕妇女血清中有较多的IgG型复合物(37/37)和较少的IgM型复合物(9/37),宫内膜抗体阴性的不孕妇女血清中只有极少IgM型复合物(1/25)。方法学的考核表明该法特异性、重复性和稳定性良好,可用于临床检测。     

干血清滤纸点免疫结合法诊断棘球蚴病

用定性滤纸吸附血清样本,保存于室温和4℃冰箱内,三个月和半年后对所保存的干血清滤纸进行点免疫结合试验,以检测血清样本中的抗棘球蚴抗原的抗体。结果说明两种条件下保存的干血清滤纸的检测结果与原血清样本检测结果基本一致(p>0.05)。证明可以用干血清滤纸法作为点免疫结合法诊断棘球蚴病时保存血清样本的方法。     

家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN) 蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

目的 表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)PRN蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法.方法 参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌prn基因序列(AY376325)设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段.将PCR扩增产物连接至原核表达载体pGEX-4T-1中,以E.coli BL21( DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白PRN作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数等,建立检测支气管败血波氏杆菌抗体的间接ELISA方法.结果 成功克隆了prn全基因序列,并在E.coli BL21( DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白PRN具有良好的抗原性.应用重组蛋白PRN为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法.试验确定重组蛋白PRN抗原的包被浓度为500ng/mL,最适血清稀释度为1:40.结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础.     

斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体的临床研究

目的建立简便可靠的检测抗-Jo-1抗体的方法。方法用丙酮沉淀兔胸腺中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,从兔胸腺丙酮粉中提取可提取性核抗原（ENA）,ENA经亲和色谱纯化出Jo-1抗原,将纯化的Jo-1抗原制备成斑点印迹（DB）试剂盒,用该试剂盒检测多种风湿免疫性疾病和正常血清中的抗-Jo-1抗体,探讨各种血清中抗-Jo-1抗体的阳性率。结果 DB试剂盒共检测92份血清中的抗-Jo-1抗体。各种风湿性疾病血清69份,其中多发性肌炎（DM）20份,阳性6份（30%）;其他风湿性疾病49份,无阳性。健康对照23份,无阳性。该试剂盒对诊断DM的敏感度为30%,特异度为100%。结论 DB试剂盒检测抗-Jo-1抗体方法简便,结果可靠,具有较大的临床开发应用价值。