坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元内神经生长因子的时程变化

以坐骨神经损伤的豚鼠为动物模型，采用免疫细胞化学方法，研究脊髓前角运动细胞神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）的变化。结果表明，ＮＧＦ－ｉｒ免疫阳性产物见于前角运动核背外侧群（ＤＬ）、腹外侧群（ＶＬ）、中间群（Ｃ）、后背外侧群（ＲＤＬ），损伤侧ＮＧＦ免疫反应染色明显深于对照侧，第４ｄ染色达到高峰。提示ＮＧＦ在坐骨神经损伤后，可能具有营养、保护及促进损伤神经再生作用     

神经生长因子和前列腺素E_1对周围神经损伤后运动功能恢复的作用

目的研究神经生长因子（ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）和前列腺素Ｅ１（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＥ１）对周围神经损伤后运动功能恢复的促进作用。方法清洁级ＳＤ大鼠，制备坐骨神经夹毁模型，术后每日分别局部给予一定剂量的ＮＧＦ、ＰＧＥ１和等渗盐水共１４天。术后２０天制备再生坐骨神经－胫前肌在体标本，用三导记录仪记录肌肉收缩张力曲线（ＣＴＣＭ），术后每日或隔日测夹毁侧和正常侧后足足印长度（ＰＬ）和足趾伸张距离（ＴＳＤ），以夹毁侧的ＰＬ值和ＴＳＤ值接近正常侧ＰＬ值和ＴＳＤ值作为该项运动功能恢复正常的标志。结果ＮＧＦ和ＰＧＥ１均有效地增进肌肉收缩张力，加快肌肉收缩峰值速度和减轻肌肉萎缩率，明显缩短ＰＬ和ＴＳＤ恢复正常的时间。结论外源性ＮＧＦ能明显促进周围神经损伤后运动功能恢复，ＰＧＥ１能部分模拟ＮＧＦ促进运动功能恢复的作用     

神经生长因子对糖尿病大鼠背根神经节坐骨神经P物质变化的影响

采用免疫组织化学染色结合电子计算机图像分析，观察了糖尿病大鼠背根神经节、有神经Ｐ物质（Ｐ）的变化及使用神经生长因子ＮＧＦ）对其的影响。结果显示：糖尿病成模后３个月，背根神经节ＳＰ的平均灰度值，糖尿病（ＤＭ）组明显低于正常对照（ＮＣ）组，ＮＧＦ组「ＮＧＦ２００μｇ／（ｋｇ．ｄ）肌肉注射３０天」则明显高于ＮＣ组，坐骨神经ＳＰ改变与背根神经节相似。提示ＮＧＦ可促进感觉神经ＳＰ的表达，对糖尿 病周围神经病     

胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓（ＦＳＣ）移植是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和伤后大鼠后肢功能的恢复情况。方法 将６０只大鼠分为脊髓半脊髓半切洞损伤＿胚胎脊髓移植组（Ａ组）和单纯脊髓半切洞损伤组（Ｂ组）。伤后１,３,,７,１４,２８天,应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂我和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 大鼠脊髓     

周围神经损伤对脊髓运动神经元睫状神经营养因子表达的影响

目的 探讨周围神经损伤后脊髓运动神经元素达睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）水平的变化规律及其与神经元病理变化的相关性。方法 选用出生后３ｄ和成年大鼠各３０只,均分为对照组、伤后３,７,１４,２１,２８ｄ６组。切断不同鼠龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,行免疫组织化学染色ＣＮＴＦ阳性脊髓运动神经元,利用图像分析系统计算脊髓ＣＮＴＦ阳性运动神经元的吸光度值,从而间接反映脊髓运动神经元ＣＮＴＦ     

大鼠坐骨神经损伤后嗅球成鞘细胞对脊髓神经元的保护作用

目的：探讨嗅球成鞘细胞（OECs)对大鼠坐骨神经损伤引起的脊髓前角运动神经元死亡的保护作用，方法：30只SD大鼠随机分成对照（SAL）组和实验（OFCs)组，采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经，硅胶管内给予等渗盐水或培养成活的新生大鼠OECs，分别于伤后7，14，30d应用尼氏染色，酶组织化学染色方法，检测神经损伤侧的脊髓前角运动神经元死亡数目和胆碱酯酶（ChE)及酸性磷酸酶（ACP）的变化。结果：与SAL组比较，伤后7，14和30d,OECs组脊髓前角运动神经元死亡率分别降低了7．04％，6．44％，和9．72％（P＜0．01），脊髓前角运动神经元中ChE活性变化幅度分别降低了4．03％，4．25％和5．72％（P＜0．01），ACP的变化幅度分别下降了51％、64％和92％（P＜0．01），结论：OECs对周围神经损伤后引起的神经元死亡有较好的保护作用。     

碱性成纤维细胞生长因子促进周围神经功能恢复的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子对受损伤的周围神经功能恢复的影响。方法 以钳夹损伤左侧坐骨神经大鼠为模型，治疗组肌肉注射ｂＦＧＦ，对照组注射等渗盐水，隔日１次。术后２，３，４周分别对治疗组和对照组损伤侧及健侧坐骨神经，腓肠肌进行功能检测，以健侧为１００％，求出损伤侧各指标的恢复率。     

神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤后腰髓前角神经元的影响

周围神经损伤后再生能力如何 ,目前文献报道较多。多数学者认为 ,周围神经是可以再生的 ,但原因尚不清楚。笔者用硅胶管坐骨神经再生室模型探讨坐骨神经前角神经元及髓鞘碱性蛋白(ｍｙｅｌｉｎｂａｓｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＭＢＰ)的变化。一、材料与方法1.动物分组 :大鼠 3 0只 (第三军医大学实验动物中心 ) ,体重 2 0 0～ 2 5 0ｇ,随机分成 3组 ,每组 10只。Ⅰ组 :等渗盐水组 ,注射等渗盐水 2 0 μｌ;Ⅱ组 :神经营养因子 (ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＮＧＦ)组 ,硅胶管内给予ＮＧＦ 10 0ｎｇ 2 0 μｌ;Ⅲ组 :在Ⅱ组基础上每日患肢…     

骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的抗凋亡机制

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植治疗大鼠脊髓损伤的潜在抗凋亡机制。方法成年雄性SD大鼠48只，随机分为对照组、模型组、治疗组，每组16只。模型组、治疗组采用改良Allen法建立大鼠下胸段脊髓损伤模型。造模后7d，于L4～L5间隙蛛网膜下腔向对照组及治疗组注射BMSCs，模型组注射同体积Hank缓冲液。术后评估大鼠后肢运动功能。以原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡，免疫组织化学染色法检测Bax、Bcl-2的表达。结果BMSCs移植后，治疗组动物后肢运动功能持续恢复。移植后14d，模型组TUNEL阳性细胞数量高于对照组和治疗组（P〈0．01），治疗组亦高于对照组（P〈0．01）；模型组Bax阳性细胞表达多于对照组和治疗组（P〈0．01），治疗组Bax阳性细胞表达多于对照组（P〈0.01），Bcl-2阳性细胞表达各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。移植后28d，各组TUNEL阳性细胞数量均减少，模型组仍然高于对照组和治疗组，但差异无统计学意义（P〉0.05）；各组Bax阳性细胞表达减少，各组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），Bcl-2阳性细胞表达变化不明显。结论BMSCs移植可改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能，减少神经细胞凋亡，具有潜在抗凋亡作用，这一作用可能通过下调凋亡调控蛋白Bax表达而实现。     

大鼠脊髓缺血损伤后神经微丝及胶质纤维酸性蛋白的改变

目的神经微丝（ＮＦ）和胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）分别为神经细胞和胶质细胞特异的中间丝蛋白。着重探讨大鼠脊髓缺血损伤后ＮＦ和ＧＦＡＰ的改变及其可能的病理意义。方法利用ＮＦ和ＧＦＡＰ的单抗，借助于免疫组化、图像分析等手段，对大鼠腹主动脉再灌流缺血模型损伤脊髓神经细胞ＮＦ６８染色强度及胶质细胞数进行定性定量研究。结果伤后１天，ＮＦ的变化不明显；伤后３天，ＮＦ染色明显降低；７天达最低水平，并持续至２１天；２８天基本恢复至伤前。而胶质细胞数与正常相比，伤后１，３，７天无明显变化；至伤后１４天明显增加，并随时间而增加；至２８天达高峰。结论脊髓损伤后ＮＦ的降低与创伤性脑损伤中ＮＦ的变化相似，提示亦具有扩散性轴突损伤的存在。而胶质细胞的增生可能参与脊髓损伤的修复过程。     

睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

目的 探讨局部应用睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法 ３４只大鼠分为４组,１￣３组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入等渗盐水对照。术后１,３,４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）逆行示踪检查。结果 ＣＮＴＦ治疗组术后１,３,４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对     

蛇毒神经生长因子对大鼠坐骨神经损伤修复作用的实验研究

目的：研究外源性给予江浙蝮蛇毒提取的神经生长因子（sNGF)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法：建立大鼠坐骨神经钳夹模型，局部滴加药物和术后肌注sNGF，通过展爪反射，趾间距，自切及脊髓诱发电位（SEP），运动诱发电位（MEP）评定，观察坐骨神经修复情况。结果 sNGF治疗可使伤后SEP，MEP提早出现，减轻自切，改善后肢运动功能。结论：蛇毒提取的NGF对大鼠坐骨神经损伤修复具有促进作用。     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.     

携带胶质细胞源性神经营养因子基因的骨髓间充质干细胞移植对兔坐骨神经缺损的治疗作用

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)局部长期高表达对坐骨神经缺损的治疗作用.方法 实验组以骨髓间充质干细胞(MSCs)作为种子细胞,以慢病毒介导的GDNF转染骨髓间充质干细胞后,结合细胞外基质凝胶构建神经移植复合体共同移植入兔20 mm坐骨神经缺损处.以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因.同时设基质凝胶对照组和基质凝胶+MSCs对照组,每组10只.结果 实验组部分兔坐骨神经连续性完全恢复,而两对照组坐骨神经连续性均未完全恢复.转染GDNF基因的MSC迁移距离可达20 mm,提示该移植细胞与宿主细胞具有较好的整合作用,且实验组绿色荧光蛋白(GFP)+胶质纤维酸性蛋白抗体(GFAP)、GFP+S100双标细胞占GFP阳性细胞的百分比分别高达70%和60%,而基质凝胶+MSCs对照组以上两种阳性细胞的百分比为40%和30%.结论 移植的基因工程MSCs能够明显促进损伤坐骨神经的再生,GDNF可能促进了MSCs向雪旺细胞样细胞分化.     

大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)-雪旺细胞(Schwann cell,SC)-细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly(DLlactide-co-glycolide acid),PLGA]桥接体对大鼠坐骨神经缺损后外周靶器官及脊髓神经元的保护作用.方法 建立SD大鼠右侧坐骨神经15 mm缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管,构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植对照组.在术后1,3,6,9周行腓肠肌湿重恢复率及运动终板检测,并于术后9周行CM-Dil和霍乱毒素B亚单位-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行示踪检测.结果 术后各组动物术侧腓肠肌湿莺和运动终板数量下降,3周后除ECM-PLGA组和PLGA组外,腓肠肌湿重和运动终板数量逐渐增加.9周时OEC-SC-ECM-PLGA组腓肠肌湿重、运动终板数量及运动终板长轴长度与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).9周时CM-DiI和CB-HRP逆行示踪结果显示,OEC-SC-ECM-PLGA组标记的脊髓前角运动神经元数量与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损后的外周靶器官及脊髓神经元具有一定的保护作用.