低硒条件下T-2毒素对大鼠体重、骨生长的影响

目的研究低硒条件下T-2毒素对大鼠体重、骨生长的影响,探讨低硒、T-2毒素在大骨节病发病中的作用。方法断乳SD大鼠随机分为常规组和低硒组两组饲养1个月,确定大鼠处于低硒状态后,再将大鼠随机分为六组,T-2毒素灌胃饲养1个月,每周末用自动体重称测量大鼠体重,大鼠处死后采用游标卡尺测量大鼠右胫骨长度、中段额状横径进行测量。结果低硒、T-2毒素及其联合作用对大鼠体重、骨生长增长均有影响作用,在低Se饲养干预过程中,第2周末始低硒组大鼠体重增长缓慢,与常规组相比有显著性差异（P〈0.05）;T-2毒素灌胃后第2周末始,各干预组大鼠体重与常规组相比均有显著性差异（P〈0.05）,尤其是低硒＋高T-2组大鼠体重增长缓慢;大鼠右胫骨和中段额状横径在低硒＋高T-2组增长缓慢,与常规组和低硒组比较均有显著性差异（P〈0.05）。结论长期硒缺乏或硒缺乏同T-2毒素的联合作用可影响大鼠体重及骨的生长。     

低硒条件下T-2毒素对大鼠血液中细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平的影响

目的建立以低硒饲料、T-2毒素染毒大鼠大骨节病（KBD）动物模型,检测低硒及T-2毒素对各组大鼠血清中白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）及肿瘤死亡因子-α（TNF-α）水平的影响,探讨这些细胞因子在KBD发病机制中的作用。方法断乳SD大鼠随机分为常规组和低硒组2组饲养一个月,确定大鼠处于低硒状态后,再将大鼠随机分为6组,T-2毒素灌胃饲养一个月后处死,依实验设计留取大鼠血清,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）技术检测IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。结果低硒或高/低T-2干预各组大鼠血清IL-6、IL-1β、TNF-α浓度水平与常规组相比均有显著性升高,低硒和T-2毒素干预各组大鼠血清IL-6浓度水平与常规组比较增高3～5倍,IL-1β和TNF-α浓度水平与常规组比较也增高1～2倍,且与常规组相比有显著性差异（P〈0.05）; IL-6、IL-1β、TNF-α的水平常规加低T-2组与低硒组比较没有显著性差异（P〉0.05）; 常规加高/低T-2组2组比较没有显著性差异（P〉0.05）,低硒加高/低T-2 2组相比有显著性差异（P〈0.01）,低硒加高/低T-2 2组与其他干预组比较均有显著性差异（P〈0.01）。结论细胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α在KBD发病、发展中起着重要作用,在低硒条件下,高T-2毒素的毒性作用更强,低硒是IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高的重要条件,病情严重程度与T-2毒素存在剂量依赖关系。在常规加高/低T-2组,硒有一定的保护作用但并不能抑制T-2毒素对病情发展的作用。本结果为低硒条件下T-2毒素在KBD病因中的作用提供了实验依据。     

T-2毒素致大鼠心肌损伤的实验研究

目的 对低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制进行实验研究,探讨克山病的发病原因。方法 采用低硒饲料喂养大鼠,用T-2毒素亚急性损伤心肌的动物模型,应用原位末端标记法和免疫组化技术检测大鼠心肌细胞凋亡和检测心肌中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果 低硒加T-2毒素组大鼠心肌损伤较重,凋亡细胞检出较多,常硒饲料加T-2毒素与低硒饲料加T-2毒素组均可见心肌坏死;这2个组心肌组织GSH-Px活性降低,心肌中可检出凋亡细胞;而后者损伤严重。结论 T-2毒素可使大鼠心肌损伤,在低硒条件下,这种损伤加重。低硒条件下,T-2毒素损伤大鼠心肌的机制与脂质过氧化和细胞凋亡有关。     

T-2毒素在正常和低营养状态下对大鼠膝关节骺板及干骺端骨组织生长发育的影响

目的 观察T-2毒素在正常与低营养状态下对大鼠膝关节骺板及股骨、胫骨干骺端骨组织生长发育的影响,为探讨大骨节病的可能致病因素及早期干预治疗提供实验依据.方法 3周龄Wistar大鼠90只,雌雄各半,体质量60～70 g,将大鼠按体质量、性别随机分为3组:对照组(普通饲料喂养)、T-2毒素+普通饲料组、T-2毒素+低营养饲料组,每组30只.T-2毒素1.0 mg/kg,每周5次,灌胃给药,连续4周.观察大鼠毛发、活动度、体质量变化.在第1、2、4周后,取左侧膝关节骺软骨和股骨、胫骨干骺端(股骨远端、胫骨近端),HE和Masson染色后,光镜下观察大鼠骺板软骨细胞形态和骺板基质中胶原的含量;应用Image-Pro Plus 6.0软件,分析胫骨干骺端骨小梁体积分数.结果 对照组大鼠毛发色泽光亮,活动良好,T-2毒素+普通饲料组及T-2毒素+低营养饲料组大鼠毛发色泽暗,活动减少.对照组、T-2毒+普通饲料组、T-2毒素+低营养饲料组大鼠在第1、2、4周的体质量分别为[(81.0±6.2)、(79.0±5.1)、(77.0±7.5)g],[(101.8±6.7)、(97.0±6.8)、(93.0±53)g],[(151.1±15.7)、(126.5±11.9)、(106.5±11.5)g];体质量在第2、4周组间比较差异有统计学意义(F值分别为9.72、41.65,P均＜0.05),其中第4周组间两两比较差异有统计学意义(P均＜0.01).光镜下,在第2周,T-2毒素+普通饲料组、T-2毒素+低营养饲料组大鼠骺板肥大带软骨细胞出现骺软骨细胞坏死;在第4周,细胞坏死程度加重,其中T-2毒素+低营养饲料组细胞坏死较为明显.T-2毒素+低营养饲料组大鼠骺板基质中胶原着色明显变淡,表明基质中胶原含量明显减少.图像分析显示,大鼠胫骨干骺端骨小梁体积分数在第2、4周,组间比较差异有统计学意义(F值分别为5.4、29.6,P＜0.05);其中T-2毒素+低营养饲料组[(0.55±0.12)%、(0.21±0.08)%]与对照组[(0.67±0.09)%、(0.51±0.14)%]比较差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 在正常营养状态下,T-2毒素可导致大鼠骺板软骨肥大层细胞坏死,骺板胶原含量降低,干骺端骨小梁形成障碍;在低营养状态下,T-2毒素可导致大鼠骺板细胞坏死和于骺端成骨障碍更为显著,但这种表现是否与大骨节病的发生有关,还有待研究.     

T-2毒素致低硒低蛋白大鼠心肌损伤实验观察

目的 探讨低硒低蛋白条件下T-2毒素对大鼠心肌的损伤作用以及补硒对该损伤的保护作用。方法 应用人工合成的低硒低蛋白饲料喂养Wistar大鼠，达到低硒状态后(6周)给予T-2毒素，按0．2mg／kg体重隔日灌胃24周，取大鼠心肌组织进行常规HE染色和电镜观察．并利用免疫组化技术检测心肌中的T-2毒素的含量。利用末端标记法检测心肌细胞凋亡发生情况。结果 T-2毒素灌胃组大鼠心肌T-2毒素表达明显，但灌胃各组之间差异不明显；低硒低蛋白组心肌损伤明显重于常硒常蛋白组．补硒保护作用明显。结论 T-2毒素能够在心肌组织中残留。低硒低蛋白能够加重T-2毒素对心肌的损伤作用．补硒能够起到一定的保护作用。     

克山病区低硒粮饲养大鼠心脏收缩功能与舒张功能的变化

将Sprague-Dawley大鼠随机分为三组,分别用克山病区低硒粮饲料、病区粮加Na_2SeO_3饲料和本校常规饲料喂养,用以研究克山病区低硒粮对心脏收缩功能与舒张功能的影响。实验结果发现,动物饲养两月时,与补硒组及常规饲料组相比,低硒组大鼠的T值显著延长(P<0.05);动物饲养三月时,低硒组大鼠的dp/dt max、-dp/dt max显著减小(P<0.05),T值继续延长(P<0.05)。实行冠状动脉结扎术后,三组动物的各项心功能指标均发生严重损害,但常规饲料组的损害较轻,与低硒组相比,dp/dt max和T值有显著性差别(P<0.05)。实验结果说明,克山病区低硒粮能造成心脏收缩功能与舒张功能的损害,补硒则有保护作用。     

不同剂量T-2毒素对大鼠关节软骨损伤的形态学观察

目的 观察不同剂量T-2毒素对大鼠关节软骨的损害程度,探讨低剂量T-2毒素与大鼠关节软骨损伤的关系。方法 Wistar大鼠120只,体质量50～70 g。按体质量将大鼠随机分为4组：T-2毒素0（对照）、100、200、300 μg/kg组,每组30只。对照组食用常规颗粒料,T-2毒素组食用经T-2毒素(剂量分别为100、200、300 μg/kg)染毒的颗粒料。喂养6个月后处死大鼠,取双侧膝关节,制备切片,光镜和电镜下观察大鼠关节软骨的损伤情况。结果 光镜下,对照组大鼠关节软骨细胞群排列整齐,层次清晰,结构完好;100μg/kg 组关节软骨细胞排列紊乱;200μg/kg组关节软骨细胞出现变形、变性,细胞核固缩;300μg/kg组可见大面积的软骨细胞坏死,坏死部位细胞显著减少,呈现无细胞区,在坏死灶周围可见单个坏死软骨细胞,坏死细胞胞质红染、胞核浓缩、碎裂和溶解。扫描电镜下,对照组大鼠关节软骨细胞形态、结构良好,层次分明,排列整齐;100 μg/kg组关节软骨表面明显粗糙;200 μg/kg组软骨纤维凸起、断裂,呈片状剥脱;300μg/kg组关节面塌陷,出现大量窝状凹坑。透射电镜下,对照组大鼠软骨细胞胞质丰富,粗面内质网发达;100 μg/kg组软骨细胞核染色质块状边集,核膜增厚,内质网空泡变性;200 μg/kg组软骨细胞内质网扩张明显,蛋白潴留,细胞器溶解破裂;300μg/kg组软骨细胞细胞器大量溶解消失,膜结构破裂,基质溶解。结论 在100～300μg/kg剂量范围内,T-2毒素致大鼠关节软骨损伤与剂量有关,染毒剂量越大,关节软骨损害越严重。     

克山病区低硒粮饲养大鼠心肌α1受体的变化

将 Sprague-Dawley 大鼠随机分为三组,分别用病区低硒粮饲料、病区粮加 Na_2SeO_3饲料和本校常规饲料喂养,用以研究克山病区低硒粮饲养动物心肌α_1受体变化及补硒的影响。实验结果发现,大鼠饲养两月时,常规饲料组大鼠心肌与〔~3H〕哌唑嗪的最大结合量(Bmax)为01.90±36.97fmol/mg 蛋白;补硒组略有下降;低硒组则明显降低(P<0.05)。常规饲料组大鼠心肌α_1受体与〔~3H〕哌唑嗪结合的平衡解离常数(KD 值)为2.25±0.08nM(?)补硒组仅有下降趋势;低硒组则明显降低(P<0.05)。反映克山病区低硒粮饲养可使大鼠心肌的α_1受体数量减少,受体与配体的亲和力降低。     

克山病区低硒粮饲养大鼠的心肌细胞超微结构及膜通透性改变的实验观察

本实验用克山病区低硒粮喂养大鼠,使动物处于低硒状态,同时增设补硒组和常规饲料组作为对照。饲养二个月后,应用电镜和示踪剂分别观察其心肌细胞超微结构及膜通透性的改变。低硒组大鼠心肌细胞膜不完整,镧颗粒进入细胞内,但线粒体内罕见。质膜经钌红染色呈中等电子密度的不均匀窄带,并经质膜破损处进入心肌细胞内。实验结果表明,低硒可引起大鼠早期心肌细胞超微结构及膜通透性的改变。     

T-2毒素对软骨细胞CD44表达的影响

目的 研究T-2毒素对软骨细胞CD44表达的影响，为阐明T-2毒素损伤软骨组织的机制提供科学依据。方法 利用RT-PCR方法检测CD44 mRNA在软骨细胞中的转录情况；利用免疫组化方法检测软骨细胞表面CD44的表达情况。结果 在T-2毒素作用5d后，毒素组、毒素加硒组CD44 mRNA表达水平均低于对照和对照加硒组。同时免疫组化结果显示，毒素组体外再建软骨组织CD44表达最低，其次为毒素加硒组，对照加硒组最高。结论 T-2毒素对于软骨细胞的CD44表达具有明显的抑制作用。     

Histopathology of chondronecrosis development in knee articular cartilage in a rat model of Kashin–Beck disease using T-2 toxin and selenium deficiency conditions

The objective of this study is to observe pathogenic lesions of joint cartilages in rats fed with T-2 toxin under a selenium deficiency nutrition status in order to determine possible etiological factors causing Kashin–Beck disease (KBD). Sprague–Dawley rats were fed selenium-deficient or control diets for 4 weeks prior to their being exposed to T-2 toxin. Six dietary groups were formed and studied 4 weeks later, i.e., controls, selenium-deficient, low T-2 toxin, high T-2 toxin, selenium-deficient diet plus low T-2 toxin, and selenium-deficient diet plus high T-2 toxin. Selenium deficiencies were confirmed by the determination of glutathione peroxidase activity and selenium levels in serum. The morphology and pathology (chondronecrosis) of knee joint cartilage of experimental rats were observed using light microscopy and the expression of proteoglycans was determined by histochemical staining. Chondronecrosis in deep zone of articular cartilage of knee joints was seen in both the low and high T-2 toxin plus selenium-deficient diet groups, these chondronecrotic lesions being very similar to chondronecrosis observed in human KBD. However, the chondronecrosis observed in the rat epiphyseal growth plates of animals treated with T-2 toxin alone or T-2 toxin plus selenium-deficient diets were not similar to that found in human KBD. Our results indicate that the rat can be used as a suitable animal model for studying etiological factors contributing to the pathogenesis (chondronecrosis) observed in human KBD. However, those changes seen in epiphyseal growth plate differ from those seen in human KBD probably because of the absence of growth plate closure in the rat.     

Increased levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α in Kashin–Beck disease and rats induced by T-2 toxin and selenium deficiency

The objective of this study is to investigate the possible role of inflammatory mediators such as IL-6, IL-1β, and TNF-α in Kashin–Beck disease (KBD) children and rats fed with T-2 toxin under a selenium-deficient nutrition status in order to determine possible mechanism underlying KBD. Sprague–Dawley rats were administered a selenium-deficient diet for 4 weeks prior to their exposure to T-2 toxin for 4 weeks. The morphology of joint cartilages of KBD children and rats was examined by light microscopy, and the expression of proteoglycans was determined by histochemical staining. The serum levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. IL-6, IL-1β and TNF-α were localized by immunohistochemistry, and their mRNA levels were detected by real-time RT-PCR. The serum levels of IL-6 were significantly elevated in rats fed with selenium-deficient, T-2 toxin, and T-2 toxin plus selenium-deficient diets compared to those in the normal diet, while the serum levels of IL-1β and TNF-α were significantly increased only in the T-2 toxin plus selenium-deficient diet group. IL-6, IL-1β and TNF-α protein and mRNA levels in cartilage were significantly higher in rats with diets of T-2 toxin and T-2 toxin plus selenium deficiency than in rats fed normal or selenium-deficient diet. While staining for the cytokines in cartilages of KBD children was significantly higher than that in controls. T-2 toxin under a selenium-deficient nutritional status induces increased levels of IL-6, IL-1β, and TNF-α in serum and cartilages, which may account for the pathological mechanism underlying the cartilage damage in KBD.     

T—2毒素,MON和硒对中国小型猪罹患骨软骨病的影响

中国小型猪在低硒（３５ｎｇ／ｋｇ）饲料喂养条件下投给Ｔ－２毒素（１．５ｍｇ／ｋｇ饲料）成串珠镰刀菌素（ＭＯＮ，１ｍｇ／ｋｇ体重）１０５天，观察了动物前、后肢软骨的病理变化，首次证实所用的纯系农大Ｉ号小型猪可以发生与家猪相同的骨软骨病（ＯＣ），出现三种类型ＯＣ损害。其中第三型损害（关节软骨深层带状、片状坏死）与Ｔ－２毒素和ＭＯＮ的投给关系明显，与单纯的低硒饲养无关；给毒的同时补给亚硒酸钠（使饲料含硒     

T—2毒素致小型猪关节软骨的毒性实验研究

本研究表明Ｔ－２毒素对软骨组织具有较强的毒怀作用，能致小型猪关节软骨发生类似人类大骨节病样的深层坏死，并此起基质中蛋白聚糖代谢改变，硒能在一定程度上拮抗Ｔ－２毒素的作用。Ｔ－２毒素致小型猪关节软骨实验模型是与大骨节极类似的动物模型。Ｔ－２毒素与大骨节病的病因关节需作地一步的临充和病和实验室的验证。     

实验性关节软骨损伤大鼠血清吡啶啉观察

目的 观察实验性大鼠关节软骨损伤时血清中吡啶啉水平变化,探讨吡啶啉作为软骨损伤生物标志的意义.方法 将40只Wistar大鼠按体质量分为对照组和T-2毒素组,分别喂成品颗粒饲料和经T-2毒素染毒(剂量为100 ng/g)的颗粒饲料.于第3、6个月时,光镜检测透明软骨的组织病理改变情况,并用ELISA夹心法检测大鼠血清吡啶啉.结果 T-2毒素引起的大鼠关节软骨病理改变具有时间效应,染毒3个月组大鼠关节软骨表层梭形软骨细胞消失,软骨细胞变形、变性、核固缩、排列紊乱;随时间延长,病变加重,染毒6个月组大鼠关节软骨细胞坏死明显,可见大面积无细胞区,关节表面凹陷,不光滑,有的病例软骨细胞出现反应性增生,基质纤维化.T-2毒素组3个月大鼠血清吡啶啉水平[(2.12±0.40)μg/L]较同期对照组(0μg/L)明显升高,两组比较差异有统计学意义(t=11.78,P<0.01);染毒6个月大鼠血清吡啶啉水平[(5.30±2.01)μg/L]较同期对照组[(1.95±0.07)μg/L]和同组3个月时明显升高,两两比较差异有统计学意义(t值分别为4.70、4.34,P均<0.01).结论 大鼠关节软骨病理改变越严重,血清吡啶啉水平越高,血清吡啶啉水平与关节软骨病理损伤呈明显的对应关系,血清吡啶啉可作为关节软骨损伤的生物标志.     

2008年四川省阿坝州大骨节病相对活跃病区硒及T-2毒素水平调查

目的 调查2008年四川省阿坝州大骨节病相对活跃病区儿童内、外环境含硒量及主食粮T-2毒素污染水平.方法 对阿坝州11个县48个监测点进行7～13岁儿童右手X线拍片,根据X线检出结果以及历史病情选择大骨节病相对活跃病区作为调查现场.对大骨节病相对活跃病区中7～13岁儿童进行调查采样,测定尿硒、发硒、水硒、粮硒及主食粮中T-2毒素水平.结果 共拍X线片2145张,其中阳性66张,儿童大骨节病X线检出率为3.08%(66/2145).选择马尔康县、金川县[X线检出率分别为10.98%(29/264)、8.52%(19/223)]和壤塘县[历史重病区,X线检出率为0.75%(3/400)]3个大骨节病相对活跃病区为调查现场.3个县7～13岁儿童尿硒水平[(10.41±4.67)、(10.11±3.65)、(8.42±2.68)μg/g Cr]比较,差异无统计学意义(F=0.901,P>0.05).马尔康县儿童发硒[(0.18±0.04)mg/kg]低于金川县[(0.21±0.04)mg/kg,P<0.05],金川县水硒[(0.225±0.124)μg/L}低于马尔康县和壤塘县[(0.320±0.092)、(0.339±0.105)μg/L,P均<0.05],金川县粮硒(0.0033 mg/kg)低于马尔康县和壤塘县(0.0258、0.0137 mg/kg,Z值分别为-6.146、-3.042,P均<0.017).3个县粮食粉末中T-2毒素水平(19.60、17.95、26.25 ng/g)比较,差异无统计学意义(X2=5.623,P>0.05):马尔康县粮食颗粒中T-2毒素水平(10.72 ng/g)高于金川县和壤塘县(3.74、3.30 ng/g,Z值分别为-6.315、-4.407,P均<0.017);粮食粉末中T-2毒素水平均高于粮食颗粒(Z值分别为-6.690、-5.493、-3.676.P均<0.05).结论 阿坝州3个大骨节病相对活跃病区7～13岁儿童内、外环境硒营养状态以及家庭主食粮T-2毒素水平与当地大骨节病病情分布基本一致.     

串珠镰刀菌素（MON）及硒对中国小型猪关节软骨作用的实验研究

中国实验用小型猪在低硒饲料条件下，分别饲喂串珠镰刀菌素和硒三个月，观察动物前后肢软骨的病理变化及软骨基质中胶原及蛋白聚糖三组分含量的变化。结果表明串珠镰刀菌素对软骨组织具有较强的毒性作用，能致小型猪关节软骨深层发生类似人类大骨节病样的带状或片状坏死，并使软骨基质中蛋白聚糖含量降低，而单纯低硒并不能引起类似的损害。补硒能在一定程度上拮抗串珠镰刀菌素的毒性作用，使病变严重程度减轻，改善基质的生化代谢。