庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na^＋—K^＋—ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素２－１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，降低其     

Na~＋－K~＋－ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶电镜细胞化学技术，观察了反映Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密连接水平，内淋巴腔面胞膜未见反应产物。提示丰富的Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性特征性地分布在内淋巴囊上皮细胞底侧面胞膜，表明Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在内淋巴囊上皮Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子交换过程中的重要地位。     

豚鼠内淋巴囊Na—K—ATP酶亚基异构体的表达

目的 研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、 β亚基各个异构体的表达及其意义。方法 分别采用免疫组化汉和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织 Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果 Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体,且β2表达较β1表达更强,上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体,且α1表达较α2表达强,而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3 异构体表达。结论 内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成,它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na^＋,K^＋—ATP酶不同？…

目的 进一步研究同肉淋巴囊上皮细胞Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基的表达。方法 采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基ｍＲＮＡ在淋巴囊上皮细胞中的表达。结果 在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Ｎａ＾＋,Ｋ＾－ＡＴＰ酶不同β亚基的阳性颗粒,β１亚基表达较弱,β２亚基表达较强。结论 结合其他报道,内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶     

庆大霉素对豚鼠血管纹Na，K-ATP酶α亚单位异构体表达的影响

目的 观察正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体的表达及庆大霉素对其表达的影响。方法 用鼠抗大鼠Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体特异性单克隆抗体,采用免疫组化ＳＰ法观察正常豚鼠血管纹中Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体的表达及庆大霉素作用后表达的变化。结果 正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体表达呈阳性,而α２和α３异构体表达呈阴性。庆大霉素作用后α１异构体表达显著减弱。结论 庆大霉素显著     

豚鼠耳蜗血管纹Na^＋—K＋—ATP酶组织化学一步检查法介绍

介绍一种豚鼠耳蜗血管纹Na~+-K~+-ATP酶的组织化学一步检查法,即:采用多聚甲醛豚鼠耳蜗活体局部灌注固定,肾脏组织夹持螺旋韧带(含血管纹),明胶包埋,冰冻切片,光镜观察,组化反应采用对硝基苯磷酸钠(P-NPP)为底物,柠檬酸铅为捕捉剂的一步法。本法不需复杂实验条件,结果稳定,操作简便,适宜于一般实验室开展。     

Na^＋—D^＋—ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶电细胞化学技术，观察了反映Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｄ＾＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密     

庆大霉素对豚鼠血管纹黑色素的影响及其机制

OBJECTIVE: To investigate the effect and its mechanism of gentamicin(GM) on melanin in stria vascularis of guinea pig. METHODS: The differences of auditory thresholds between pigmented and albino guinea pigs, given GM of 150 mg/kg for 7 days, were studied. Moreover, the content of melanosomes, activity of tyrosinase and expression of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) in intermediate cells of stria vascularis in gentamicin-treated pigmented guinea pigs were compared with those in control animals by electron microscope and immunohistochemistry, respectively. RESULTS: After gentamicin exposure, the auditory thresholds of all animals increased significantly (P < 0.001), whereas threshold shifts averaged across all frequencies of pigmented animals were much less than those of the albinos(P < 0.001). The number of melanosomes of each examined area (300 microns 2) in intermediate cells was obviously increased from 19.83 +/- 2.74 to 58.33 +/- 16.22. The ratio of tyrosinase reaction products area to the total measured area was significantly increased from 1.65% +/- 0.40% to 3.45% +/- 0.41% after gentamicin exposure. However, the numbers of positive intermediate cells expressing PCNA were 14.08 +/- 2.76 and 13.58 +/- 2.09 before and after gentamicin treatment, respectively. But there was no statistically significant difference between them (P > 0.05). CONCLUSION: The increase of content of melanin in stria vascularis after GM exposure does not result from the change of proliferating activity of melanocytes, but from the enhanced tyrosinase activity. Melanins in stria vascularis may possess the ability to protect the inner ear from ototoxicity of gentamicin.     

豚鼠内淋巴囊Na-K-ATP酶亚基异构体的表达

目的研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、β亚基各个异构体的表达及其意义。方法分别采用免疫组化法和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体,且β2表达较β1表达更强,上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体,且α1表达较α2表达强,而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3异构体表达。结论内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成,它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。     

庆大霉素对豚鼠血管纹黑色素的影响及其机制

目的了解庆大霉素(gentamicin,GM)对豚鼠血管纹黑色素的影响及其作用机制.方法豚鼠杂色40只和白色20只每日肌内注射庆大霉素150 mg/kg体重7 d后用脑干诱发电位仪检测两种豚鼠的听阈变化,以透射电镜观察杂色豚鼠用药前后血管纹内黑色素含量及酪氨酸酶活性的变化,并用免疫组化法观察血管纹增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的变化.结果庆大霉素作用后,杂色和白色豚鼠的听阈与用药前比较,差异有非常显著性意义(P<0.001),且两组豚鼠间的阈移差异也有非常显著性意义(P<0.001).杂色豚鼠对照组和实验组(各10只)血管纹中间细胞内平均(±s,以下同)每个观测区域(300 μm2)的黑素体含量分别为(19.83±2.74)个和(58.33±16.22)个,差异有非常显著性意义(P<0.001);酪氨酸酶活性反应产物面积与测定区域面积之比从1.65%±0.40%增加为3.45%±0.41%,差异有非常显著性意义(P<0.001);但对照组与实验组PCNA阳性中间细胞分别为(14.08±2.76)个和(13.58±2.09)个,差异无显著性意义(P>0.05).结论庆大霉素作用后血管纹内黑色素含量的增加,可能是由于药物促进了酪氨酸酶活性的增强,而不是促进黑素细胞的增殖能力增强.黑色素可保护豚鼠内耳免受庆大霉素的耳毒性作用.     

尿素对豚鼠血管纹的作用

将静注尿素的实验组与不用尿素的对照组豚鼠的血管纹取出进行电镜观察,发现实验组血管纹边缘细胞水肿,随之血管纹组织间隙肿胀,但细胞之间的紧密连接无增宽现象;而对照组无此现象发生。提示尿素引起内淋巴脱水,主要通过细胞膜渗透的途径。文中讨论了尿素和甘油对内耳脱水作用的区别以及二者在试验与临床应用中的特点。     

豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的扫描电镜观察

目的 探讨豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构特点。方法 用扫描电子显微镜观察正常豚鼠内淋巴管和内淋巴囊的表面超微结构。结果 内淋巴管的管腔面光滑、平整，上皮细胞表面的微绒毛少且短。细胞间隐窝小而少。内淋巴囊近端部上皮细胞表面的微绒毛明显增多、变长，细胞间隐窝明显．偶尔可见细胞顶部的胞饮小泡。内淋巴囊的中间部腔面上皮突起，复合折叠形成褶皱，细胞间隐窝多而大，突向囊腔的细胞多，囊腔内充满细胞和细胞碎片。根据电子密度上皮细胞可分为亮细胞和暗细胞两型，其中暗细胞较多，两型细胞表面均有大量长的微绒毛。细胞顶部可见到较多的胞饮小泡。内淋巴囊远端部的结构与内淋巴管近似，腔面光滑，上皮褶皱小，无细胞间隐窝，上皮细胞以亮细胞为主，表面微绒毛少而短，几乎没有胞饮小泡。结论 内淋巴管及内淋巴囊各部分的结构存在明显的不同，各有特点，这种结构特点可能与其在内淋巴代谢中的不同作用有关。     

豚鼠内淋巴囊的缺血病理改变

为了阐明内淋巴囊（ＥｎｄｏｌｙｍｐｈａｔｉｃＳａｃ，ＥＳ）的缺血病变，本文将１６只豚鼠ＥＳ供血动脉阻断，并在不同缺血时相对其病理损伤作光镜观察。结果：缺血早期ＥＳ上皮细胞混浊肿胀，气球样变，部分细胞崩解坏死，上皮下组织水肿出血；缺血中期上皮细胞萎缩变性，中间部皱褶带消失；缺血晚期上皮坏死区出现新生结缔组织及新骨，囊周缺血病变与Ｍｅｎｉｅｒｅ病囊周病理改变相似     

内淋巴囊的脉管分布

目的：通过对豚鼠内淋巴囊表面的脉管及其粘膜下层结构的研究,了解其对内耳功能的影响,方法：用碳素黑水加１０％甲醛进行左心室灌注,将豚鼠的颞骨标本用冬青油透明并进行显微检查及透射电镜检查。结果：内淋巴囊表面有非常丰富的血管网,而且与乙状窦有很密切的联系,内淋巴囊周围被毛细血管,微静脉,静脉和个别微动脉形成的一个细密的环状血管网所包绕。毛细血管周围有丰富的淋巴窦、毛细血管与淋巴窦构成一个完整、细密的网状     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊水通道蛋白的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中水通道蛋白(aquaporin，AQP)不同亚型的定位表达及其意义。方法 用兔抗大鼠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4的多克隆抗体，采用免疫组化SP法分别检测相应AQP蛋白亚型在豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中的表达模式。结果 在耳蜗组织中，AQP1、4广泛分布于耳蜗的各个区域，如血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋缘、螺旋神经节等，AQP3除了在血管纹表达呈弱阳性外，其余区域的表达与AQP1和AQP4相似，AQP2则仅表达于Reissner膜。在内淋巴囊组织中，AQP1、AQP3和AQP4在内淋巴囊上皮细胞和上皮下纤维组织均呈强阳性表达，只是AQP3的表达强度稍弱于AQP1和AQP4，而AQP2在内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织均呈阴性表达。结论 水通道蛋白1、3、4以相似的方式广泛分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中，而AQP2则仅表达于Reissner膜，提示不同亚型的AQP可能在不同区域协同作用参与内淋巴的调节，从而保持内耳内环境的稳定。     

颈上神经节切除对豚鼠内淋巴囊血流量影响机制的研究

目的　探讨P物质 (substanceP ,SP)、降钙素基因相关肽 (calcitoningene -relatedpeptide ,CGRP)对内淋巴囊血流量及功能的影响 ,为了解某些内耳疾病的病因提供实验基础和理论依据。方法　建立颈上神经节切除模型 ,通过计算机图象分析计算SP、CGRP量的变化 ,检测内淋巴囊血流量。结果　颈上神经节切除后SP明显减少 (P <0 .0 1) ,CGRP无明显改变 ,内淋巴囊血流量明显减少 (P <0 .0 1)。结论　SP、CGRP等神经递质协同作用可能通过调节内淋巴囊血流量进而影响内淋巴囊的功能     

豚鼠耳蜗和内淋巴囊上皮钠通道的表达

目的 研究豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)α、β、γ亚基的表达及其意义.方法 用兔抗大鼠ENaC α、β和γ亚基的多克隆抗体,采用免疫组化SP法观察豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α、β、γ-ENaC的表达模式.另用α-ENaC cDNA质粒合成探针,原位杂交法检测豚鼠耳蜗和内淋巴囊组织中α-ENaC mRNA的表达.结果 免疫组化显示,在豚鼠耳蜗中,α-ENaC蛋白强烈表达于螺旋缘,而螺旋韧带、Corti器、Reissner膜等处的表达较弱;β-ENaC蛋白在螺旋韧带、螺旋缘和螺旋神经节、Corti器、Reissner膜等处的表达均呈弱阳性;γ-ENaC蛋白则在螺旋韧带的上半部、螺旋缘和螺旋神经节等处的表达呈强阳性,Corti器、Reissner膜等处也有阳性表达.三个亚基在血管纹中均呈阴性表达.在内淋巴囊中,α、β和γ亚基均较明显地表达于上皮细胞和上皮下纤维组织.原位杂交显示,α-ENaC mRNA除了表达于螺旋缘、螺旋韧带下部外,还表达于血管纹,而在内淋巴囊的上皮细胞和上皮下纤维组织也均呈阳性表达.结论 ENaC的各个亚基以不同的模式分布于豚鼠耳蜗和内淋巴囊的各个区域,形成功能性通道参与内淋巴的调节,从而保持内耳内环境的稳定.     

豚鼠内淋巴囊经颅快速取材方法的研究

目的通过建立豚鼠内淋巴囊快速取材方法,为了解其对内耳功能的影响提供活性良好的组织材料。方法将健康成年豚鼠在显微镜下经颅内进行活组织解剖,并用摄像系统记录解剖过程及结果,组织学验证结果。结果在豚鼠颅骨标本上准确定位内淋巴囊位置,并在显微镜下成功解剖出豚鼠内淋巴囊,组织学证实解剖位置为内淋巴囊。结论经颅内解剖豚鼠内淋巴囊是简单易行、准确可靠的快速取材方法。